文摘
客观的。的检测幽门螺杆菌突变导致抗菌素耐药性可以作为指导的抗菌疗法,可能防止临床治疗的失败。评估潜在的桑格测序识别基因耐药因素幽门螺杆菌临床分离将是重要的。方法。180培养菌株使用琼脂稀释法进行抗生素敏感性测试。NCBI BLAST是用来测序数据进行基因型分析。桑格测序是评估作为一个替代方法来检测耐药基因型和易感性。结果。传统的电性能测试,耐左氧氟沙星,阿莫西林,甲硝唑,和克拉霉素为67.3%,15.1%,96.4%,和25.5%,分别。相比之下,四环素没有抵抗。在多个药物的耐药性菌株的8.12%。抵抗CLA的遗传因素是23 s rRNA,阿莫西林是Pbp1阻力的决定因素,甲硝哒唑阻力的决定因素是rdxA,左氧氟沙星阻力的决定因素是GyrA GyrB。然而,没有耐四环素协会。结论。我们发现甲硝哒唑抗生素耐药性的比率上升,突显替代疗法的必要性和定期评估。桑格测序已经被证明是非常有效的,并有可能实现政策迎合当地治疗。
1。介绍
广泛使用的抗生素产生了深远的影响对整个生活的细菌(1]。许多病菌菌株对抗生素产生耐药性,甚至多药耐药性(2]。已经证明耐药可以使许多现有药物的疗效,减少和消失,导致超过700000人死亡在一年内(3,4),这是最伟大的公共卫生问题之一5,6]。
根据世界卫生组织,幽门螺杆菌能导致许多胃肠道功能紊乱如胃炎、消化性溃疡、胃癌(7),这是人类健康的主要威胁8]。然而,目前的治疗方法的疗效幽门螺杆菌大幅减少,因为抗生素耐药性的增加(9]。因此,许多会议幽门螺杆菌抗生素耐药性治疗已被处理(10,11]。在发达国家,感染率幽门螺杆菌范围从25%到50%,而在发展中国家,这个比率是80%。中国的感染率也高达56.2%[编号12]。根除治疗方案的广泛使用,由至少两个抗菌药物,最近表明的阻力幽门螺杆菌等抗菌药物克拉霉素,氟喹诺酮类原料药,如左氧氟沙星和灭滴灵显示了逐年增加的趋势。
例程幽门螺杆菌在当前条件下,因为灵敏度测试非常困难幽门螺杆菌需要营养丰富,选择性培养基(13]。因此,特别重要的是要找到一个及时、精确的方法来诊断临床治疗的耐药性幽门螺杆菌。分子生物学技术可以识别各种抗菌药物的分子机制(14- - - - - -16]。和分子测试策略也可以全面评估相关的多方面的信息幽门螺杆菌治疗一个测试(17]。它不仅可以帮助临床医生发布个性化的解决方案幽门螺杆菌治疗不同的病人,但也有助于促进研究的进步分子治疗的机制幽门螺杆菌(18,19]。
基于上述,我们的电阻率特征阿莫西林,克拉霉素,甲硝哒唑、左氧氟沙星、四环素幽门螺杆菌,这是五个常用的抗生素幽门螺杆菌治疗方法。我们还利用Sanger测序,这是最常见的方法来确定突变产生抗性,检测耐药基因型,确定敏感性,并评估他们的表型和基因型之间的关系。
2。材料和方法
2.1。样品收集
这项研究包括160名幽门螺杆菌天真的门诊治疗(80年在2014 - 2015年和80年,2018 - 2019年)。他们有一个esophagogastroduodenoscopy考试在中国人民解放军总医院2014 - 2015和2018 - 2019年。在内窥镜的检查过程中,胃活检标本,然后接种他们幽门螺杆菌选择性板(20.]。后执行的一系列生化反应使用过氧化氢酶、氧化酶,脲酶,和革兰氏染色,幽门螺杆菌殖民地,圆形,清晰,凸,紫色被确定在光学显微镜下观察(21]。所有程序都在37°C和孵化在微量需氧的条件下进行(10%啊2,5%的公司2,85% N2)。
2.2。抗菌药物敏感性的表型特征
琼脂稀释法测定是用来定义抗生素敏感性表型。五抗生素如阿莫西林、甲硝哒唑,克拉霉素,四环素,左氧氟沙星在这个实验中使用。幽门螺杆菌培养了72 h,然后推断使用抗生素麦克风幽门螺杆菌26695年作为控制的压力。抗生素麦克风的最低抑制浓度是抗生素,这始终是用来定义抗生素敏感性表型。当灭滴灵的麦克风超过8 mg / L,四环素和左氧氟沙星超过1 mg / L,克拉霉素超过0.25 mg / L,和阿莫西林超过0.125 mg / L,它被定义为抗生素耐药性22,23]。
2.3。抗生素敏感性的基因型分析
傲慢的v.3.2和Gubbinsv2.3.4核心SNP对齐和预测区域重组旨在评估之间的关系幽门螺杆菌菌株。抗生素敏感性的基因型,如GyrA GyrB左氧氟沙星,23 s rRNA克拉霉素,Pbp1阿莫西林、甲硝哒唑RdxA, 16 s rRNA四环素进行评估。变体识别、总结和评估进行抗性表型的协会。此外,Phandango被用来执行表型耐药模式加热地图和抗生素耐药性。
2.4。统计分析
采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。定量数据被表示为平均值±标准偏差(平均数±标准差)。的t以及用于比较两组, 被认为是一个统计上的显著差异。
3所示。结果
160年从北京隔离的抗菌谱1,我们注意到灭滴灵的电阻率,左氧氟沙星,克拉霉素、阿莫西林、四环素的订单减少96%,67%,25%,15%,0,分别和14株容易(图1)。
3.1。幽门螺杆菌抗生素敏感性在北京
单一药物抵抗的比例是21.8%在所有耐药隔离,和所有甲硝哒唑耐药。耐多药的比例是76.4%。在所有临床分离株中,左氧氟沙星+甲硝哒唑双电阻率是40%,和甲硝唑+克拉霉素双电阻率是7.3%。三耐阿莫西林+左氧氟沙星+甲硝唑和克拉霉素+左氧氟沙星+ 9.1%灭滴灵为18.2%(图2)。
3.2。比较基因型和表型之间的关系
后相应表型和基因型的比较,我们发现左氧氟沙星阻力的决定因素是GyrA GyrB,阿莫西林是Pbp1阻力的行列式,抗甲硝哒唑的行列式rdxA,抵抗CLA的行列式是23 s rRNA(图3)。结果完全一致的基因型和表现型克拉霉素和左氧氟沙星和阿莫西林(表的一致性2)。
4所示。讨论
我们的研究表明的阻力幽门螺杆菌隔离可能是由于抗生素的广泛使用,尤其是灭滴灵、克拉霉素和阿莫西林。例如,甲硝哒唑的阻力幽门螺杆菌临床分离株可能是因为寄生虫感染的处方,盆腔炎,或口腔感染24- - - - - -26]。此外,抗耐药幽门螺杆菌左氧氟沙星是同样高,这可能是由于使用左氧氟沙星治疗泌尿和呼吸道感染27- - - - - -29日]。
麦克风高值甲硝唑和克拉霉素耐药菌株与体内耐药模式相关联,他们可能是潜在的标记预测固化率。没有发现质粒的菌株,表明幽门螺杆菌电阻是基于突变,也鼓舞了我们认为的点突变检测基因组可以用来识别幽门螺杆菌阻力。
分子敏感性测试成为理想的耐药性检测幽门螺杆菌临床分离株中,由于更大的速度以及更大的准确性(30.]。桑格测序可能没有影响应变电阻(31日- - - - - -33]。因此我们需要探索新方法像表型鉴定药敏和抗生素敏感性的基因型分析34,35]。此外,定期评估和替代疗法控制电阻状态也很重要。本研究的新颖性在于耐药性的报告模式幽门螺杆菌临床分离株,提供一个概览的抗生素耐药性的当前状态,从而指导消除幽门螺杆菌。
然而,本研究也有部分限制。首先,本研究的样本都是病人从医院,不能反映幽门螺杆菌模式在普通人群中。第二,部分抵抗抗生素的样本量在这项研究中很小,和协会的力量只有很少或根本没有耐药菌株,如阿莫西林和春节。第三,本研究的进行在体外利率水平,常用的抗生素耐药性研究揭示了数据并不是完全准确的,需要和临床试验进一步验证。
5。结论
这个发现表明幽门螺杆菌抵抗抗生素,也可能致病和毒性。此外,分子敏感性测试,检测与耐药相关基因因素可以用于检测测试幽门螺杆菌耐药性。然而,由于各种各样的限制,有必要继续扩大样本量,继续在未来临床试验。
数据可用性
使用的数据来支持本研究可从相应的作者。
同意
所有知情同意表格应记录在书面的形式,签署和日期。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
历下田、易姚明,和李尹一视同仁。
确认
本文由特殊的军事科研项目16 bjz05健康。