文摘
客观的。探讨punicalagin在支气管哮喘的疗效和机制。方法。外周静脉血液收集从健康人群和老年支气管哮喘患者。外周血单核细胞分离、培养(PBMCs)。PBMCs在病人组处理不同浓度(0,100,200 mg / L)的punicalagin(双关语)。MTT试验用于检测细胞活性,用ELISA检测干扰素-的水平γ2、il - 4和IL-5,西方墨点法是用来检测p-STAT6的蛋白质含量,Jagged1, GATA3。结果。MTT结果表明,50 - 200 mg / L双关语没有细胞毒性PBMCs在24 h。ELISA结果显示干扰素-的水平γ和2患者的血清明显低于健康人,il - 4的水平和IL-5显著高于健康人。双关语治疗显著增加干扰素-的水平γ和2 PBMCs文化的上层清液,同时显著降低il - 4的水平和IL-5,和变化是与双关语的浓度成正比。免疫印迹结果表明p-STAT6的水平,PBMCs Jagged1, GATA3蛋白质的患者明显高于健康人。双关语治疗可以显著降低p-STAT6的表达,Jagged1, PBMCs GATA3蛋白的病人,减少水平与双关语浓度成正比。结论。双关可以抑制Th2分化和规范Th1 / Th2平衡通过调节il - 4 / STAT6和Jagged1 /切口途径缓解老年支气管哮喘的进步。
1。介绍
也称为哮喘,支气管哮喘是一种慢性气道炎症包括嗜酸性粒细胞、肥大细胞,淋巴细胞,中性粒细胞,和其他细胞和各种媒体,这是老年人常见的(1]。这种慢性炎症与气道高反应性、气喘、胸闷、气短、咳嗽、和可逆的集2]。由于老年患者身体功能不断减弱,免疫能力也下降,呼吸系统脆弱容易导致呼吸道感染,然后引起支气管哮喘,如果不及时治疗,会影响他们的健康。支气管哮喘是突然的,通常发生在晚上,容易产生并发症,严重的甚至导致肺部感染,甚至呼吸衰竭死亡。全球哮喘的发病率已经达到约3亿,在中国呈现出快速的上升趋势(3]。支气管哮喘目前没有彻底的治疗。与此同时,由于急性发作的特点,病程长,易复发,这是一个困难的问题在呼吸相关的疾病。发病机理,Th1 / Th2平衡的CD4 + Th细胞子集是目前公认哮喘的免疫发病机理4]。研究表明,哮喘患者过度Th2细胞分化和过度分泌的Th2细胞因子(5]。
Punicalagin(双关语)是一种多酚植物活性成分提取石榴(6]。近年来,研究发现,双关语具有强大的抗氧化作用,抗,和肿瘤抑制效果,以及antiatherosclerosis和抗炎作用。在主要培养的软骨细胞,双关语可以抑制LPS-induced炎症反应(7]。然而,其具体的作用机制尚未阐明。目前,很少有研究双关语的作用在支气管哮喘的发展。因此,本研究旨在探讨双关的效果和机制在老年人和支气管哮喘的过程提供科学数据和基础治疗支气管哮喘的双关语。
2。材料和方法
2.1。参与者
在这项研究中,30个老年支气管哮喘患者承认我们医院从2021年3月至2021年11月被选为观察组,同期和30个健康的人被选为对照组。通用数据,比如年龄、性别和体重指数两组没有统计学差异,具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。患者的入选标准如下:所有患者遇到了支气管哮喘的诊断标准,指的是1997年指南的诊断标准在中国支气管哮喘的预防和治疗;病程超过6个月;年龄> 65岁;并同意这个临床试验和签署了知情同意书。排除标准如下:与其他免疫或代谢疾病;与其他恶性肿瘤;传染病、血液疾病; and refusing to accept this clinical trial.
2.2。细胞培养
总共10毫升静脉血外围收集从支气管哮喘患者和健康成人的无菌操作。使用肝素抗凝。5毫升的外周血单核细胞(PBMCs)是由聚蔗糖分离方法。PBMCs在RPMI1640培养介质含10%胎牛血清和养殖有限公司5%2孵化器在37°C。
2.3。Punicalagin治疗
从支气管哮喘患者被PBMCs,细胞密度被调整至1×106/毫升,接种于24-well盘子。细胞与PBS对照组治疗,实验组的细胞治疗较低(50 mg / L),中等(100 mg / L),和高(200 mg / L)浓度的双关语,分别。24小时的日常文化为后续实验。
2.4。细胞生存能力分析
从每组PBMCs收集,培养基被移除,与PBS洗一次,20μL 0.5%的肝癌与无血清培养基稀释是添加到每个好,和培养37°C 4 h有限公司5%2孵化器。培养基是丢弃,和150年μL DMSO (Sigma-Aldrich)被添加到每个振动,直到完全溶解。标仪(Labsystems)是用于检测OD570海里吸光度。此外,实验进行了三次,独立。
2.5。酶联免疫吸附试验(ELISA)
酶联免疫试剂盒(eBioscience)是用于检测干扰素-的水平γ2、il - 4和IL-5在健康人的血清和病人和PBMCs上层清液的培养基的病人。手术进行了严格按照指令的装备。
2.6。西方墨点法
总蛋白的提取PBMCs•瑞帕溶解产物,和蛋白质浓度由BCA测量检测设备(Beyotime生物技术)。蛋白质是由sds - page电泳分离,切割和转移到PVDF膜(σ),在室温下和屏蔽5%脱脂奶粉4 h。添加蛋白质抗体主要包括anti-STAT6 (ab32108) anti-Jagged1 (ab109536)和anti-STAT3 (ab199428) (Abcam)和孵化一夜之间在4°C。第二抗体(Abcam)添加第二天在室温下。孵化后1 h,凝胶成像系统被曝光,灰度值分析了乐队Image-Pro + 6.0。
2.7。统计分析
数据被表示为平均数±标准差。使用学生的差异进行了分析t以及或单向方差分析。所有使用SPSS 17.0统计分析软件和GraphPad Prism 8.0软件。差异被认为是具有统计学意义 。
3所示。结果
3.1。PBMCs Punicalagin在活动的影响
与对照组相比,每个浓度的双关语对PBMCs的活性没有显著影响,表明50 - 200 mg / L双关语没有细胞毒性PBMCs在24 h(图1)。
如图2的血清干扰素-γ和2在哮喘患者显著低于健康人( ,图2(一个)),il - 4的水平和IL-5明显高于健康人( ,图2 (b))。PBMCs处理后不同浓度的双关语,上面的上层清液中细胞因子的水平被发现。与对照组相比,干扰素-的水平γ和双关语- 2治疗组显著增加( ),il - 4的水平和IL-5显著下降( )。变化的程度是成正比的浓度双关语(数字2 (c)- - - - - -2 (f))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
3.2。Punicalagin对p-STAT6、Jagged1 GATA3 PBMCs蛋白质含量
如图3后,PBMCs是双关语的不同浓度处理,与对照组相比,p-STAT6的表达水平,Jagged1, GATA3双关语治疗组明显下降( ),这表明,双关语显著地抑制p-STAT6的表达,Jagged1, GATA3。
(一)
(b)
(c)
(d)
4所示。讨论
支气管哮喘是一种慢性呼吸道疾病涉及多个细胞和细胞成分,严重影响人们的身心健康1]。主要表现是气道炎症、气道高反应性和气道重塑(2]。老年人因为身体下降,抵抗力差更容易发生支气管哮喘。支气管哮喘的发病机制与多个信号通路的调节和免疫和炎症监管因素发挥着重要的作用。在哮喘的治疗,一些药物可能会导致一些不良反应,如眼部问题,胃溃疡、高血压、中毒(8]。因此,近年来,安全有效的天然产品开发antiasthma药物相关研究也在增加。
双关语是一种水解单宁,这是最重要的活性成分在石榴皮多酚(大约60 - 70%)。它可以从几个孤立的欧律阿勒种子的植物,如石榴皮和叶树和Chebulae果实。石榴皮石榴的干皮,是一个传统的中草药。双关语具有广泛的药理作用,如抗炎(9),抗菌10),抗氧化剂(11,12),和抗肿瘤13]。
许多研究表明,Th1 / Th2函数的不平衡和Th2细胞的主要区别可能导致哮喘的一个重要机制。Th细胞细胞因子环境位于Th0的最强烈的调节因子是细胞分化成Th1、Th2 [14]。干扰素-γ和2的两个多功能因素之一Th1细胞因子。干扰素-γ参与免疫调节系统Th1 / Th2平衡,和水平越高,对身体的保护作用越强。2是最早发现的细胞因子之一,具有广泛的生物活性。它起着重要的作用在调节人体的免疫功能,可以有效地调节活动和人类T细胞的增值开发,自然杀伤细胞和单核细胞。Th2细胞因子il - 4和IL-5是两个代表性的因素。他们两人可以刺激B细胞合成IgE,促进Th2细胞,而il - 4也抑制Th1。细胞因子的作用需要胞内信号通路和核转录因子。现有的数据表明,有两组相互敌对的分化转录因子Th0, STAT6 / STAT4和T-bet / GATA3。白介素使细胞分化成Th1通过STAT4和T-bet,而il - 4使细胞分化成Th2通过STAT6 GATA3 [15,16]。因此,转录因子发挥重要作用在Th细胞的分化。在这项研究中,健康人的血清中细胞因子水平和哮喘患者检测到。发现干扰素-的水平γ和哮喘患者血清中- 2明显低于健康人,il - 4的水平和IL-5显著高于健康人。然后,PBMCs服用双关语。结果表明,干扰素-的水平γ和文化上层清液- 2显著增加,而il - 4水平和IL-5明显降低了。免疫印迹结果表明p-STAT6的表达和GATA3 PBMCs显著下降。因此,推测双关语可以抑制Th2分化和规范通过il - 4 / STAT6 Th1 / Th2平衡。
Notch通路是一个进化高度保守的信号通路,由切口受体、配体,细胞感受器,效应物,他们的监管机构。Notch通路在人体中起着广泛的监管作用,如促进细胞分化、干细胞增殖,细胞运动,周期(17- - - - - -19]。呼吸系统而言,Notch通路的变化起着重要的作用在肺部疾病如哮喘、慢性阻塞性肺病、肺动脉高压和肺癌。许多研究表明,缺口信号通路和T淋巴细胞调节共同参与哮喘的发生和发展20.- - - - - -22]。其中,切口配体影响Th2细胞分化[锯齿状是主要因素23]。GATA3是一个重要的转录因子的Th2细胞的发展,这对Notch-mediated Th2细胞分化是至关重要的。删除GATA3可以改变切口的Th2 Th1细胞分化的诱导物诱导物。切口和锯齿状配体诱导GATA3高度和诱导CD4 +T分化成Th2细胞(24,25]。这项研究的结果表明,蛋白质含量的Jagged1和GATA3 PBMCs双关语治疗后明显下降,这是猜测,双关语可以抑制Th2分化通过Jagged1 / Notch通路。
总之,双关语可以抑制Th2分化通过调节il - 4 / STAT6和Jagged1 / Notch通路调节Th1 / Th2平衡,从而减轻老年支气管哮喘的发展。
它可以提供理论依据的发展新的药物治疗老年支气管哮喘。然而,本研究有一定的局限性,和随后的体内实验仍需要探讨双关语在老年支气管哮喘的效果。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项研究是一个自我资助的科研项目的健康和卫生委员会广西壮族自治区(Z20211225)。