文摘

介绍。Mannose-binding凝集素(MBL)激活补体系统,建议在糖尿病血管并发症中发挥作用。颈动脉内膜中层厚度(cIMT’)检测亚临床动脉粥样硬化。我们评估MBL与IMT协会在2型糖尿病(T2DM)病人体内的病人。方法。测量血清MBL水平和测量在98年总共有103糖尿病患者,与健康对照组。结果。没有显著差异MBL在2型糖尿病和控制水平。正如所料,在2型糖尿病患者IMT明显高于控制( )。在进行的,测量出最低的是看到患者的正常MBL水平(500 - 1000),同时测量出不断增加高MBL和绝对MBL缺乏状态。这是特别重要的在高MBL与正常MBL T2DM病人( )。根据多元回归分析IMT在2型糖尿病的主要预测因素是年龄( ),ApoA级别( )和MBL ( )。结论。我们的结果显示一个双重角色的MBL cIMT’在2型糖尿病的一个危险因素。MBL也可以用作macrovascular疾病的标志,作为低和高水平表明动脉粥样硬化在2型糖尿病的易感性。

1。介绍

糖尿病是最常见的和独立的风险因素对动脉粥样硬化和心血管疾病(CVD) (1包括冠状动脉疾病(CAD)。心血管疾病死亡的主要原因是2型糖尿病(T2DM)病人体内(1]。几种炎症标记物(纤维蛋白原、CRP、地震和tnf)已经与2型糖尿病患者无症状动脉粥样硬化的标志(2]。Mannose-binding凝集素(MBL)建议在糖尿病患者心血管疾病的发病机制中发挥作用(3,4]。

MBL,先天免疫的一个重要成员,激活凝集素途径的补充,是weak-acute阶段反应物(5)和增加水平只有两到三倍暂时以应对不同的压力因素6]。

先前的研究分析MBL在心血管疾病中的作用也表现出proatherogenic antiatherogenic角色。低MBL把或基因型与动脉粥样硬化的风险更高(有关7,8),动脉血栓形成(9),冠状动脉疾病(10,11],绕过移植物闭塞[12)和颈动脉斑块13]。然而,MBL水平高或正常的基因型也与冠状动脉疾病(14和颈动脉内膜切除手术后再狭窄15]。此外,在2型糖尿病人群中,低MBL基因型与心血管事件的风险增加有关16和贫穷的结果心肌梗塞17]。而高MBL与死亡率增加有关[18)、疾病进展和肾病(19),保护作用的高MBL在糖尿病患者也被建议20.]。

B模式超声介导测量颈动脉内膜中层厚度(cIMT’)允许亚临床动脉粥样硬化的研究,和高危患者心血管疾病可以被识别(21]。评估的相关性研究MBL把或基因型与颈动脉内膜中层厚度(22,23是相互矛盾的。独立的传统危险因素,二次血清MBL u型关系,测量了在类风湿性关节炎患者。它支持的概念;高和低的MBL可能在心血管疾病中发挥作用24]。

本研究的目的是调查假想的双重角色的血清MBL水平发展内膜-中膜厚度在2型糖尿病患者。

2。方法

2.1。研究设计

后获得一个制度伦理间隙和参与者的知情同意,2型糖尿病(T2DM)病人体内的病人参加糖尿病门诊内科,德布勒森大学,参与了这一研究。在糖尿病患者、严重低血糖患者高血糖,糖尿病酮症酸中毒样本集合,前三个月内主动感染、恶性肿瘤和其他共病疾病被排除在外。我们从我们的研究排除了怀孕的女性。只有白种人大于或等于24岁和小于或等于78年被包括在内。健康与非糖尿病的受试者招募控制。主题与吸烟包年≥20被认为是吸烟者。患者高血压的标准包括三个连续的动脉血压值等于或超过140/90毫米汞柱或使用抗高血压药物。高血压药物(病例和控制)包括只有当他们并没有得到很好的治疗高血压危象之前三个月内样本集合。那些满足我们的入选标准,总共103名2型糖尿病病人和98个对照组年龄是匹配的参与这项研究。知情同意,得到了详细的历史和社会人口的细节,从所有参与者。 Laboratory analysis and measurement of IMT was carried out by personnel blinded to clinical status of the subjects.

2.2。实验室分析

血液采集标本后隔夜空腹至少10小时的合格员工。新鲜血清样本用于分析血清葡萄糖、糖化血红蛋白、血脂和使用标准方法的实验室医学,德布勒森大学。灵敏度高c反应蛋白(CRP)测量使用Integra 700自动分析仪系统(罗氏、巴塞尔、瑞士)。血清样本存储在−摄氏80°,MBL水平的进一步分析。这些样本解冻之前MBL的分析。

2.3。MBL的水平

MBL夹心酶联免疫吸附试验测定的浓度作为描述和以前在我们机构(25]。简而言之,鼠单克隆抗体(staten血清研究所、丹麦),优先检测功能MBL的寡聚物,使用。微量滴定板(平底、高结合容量,他一一Bio-One Mosonmagyarovar,匈牙利)被涂上一层主要抗体(HYB131-01) 10μL / 10毫升,1/1000稀释在Tris-buffered解决方案(TBS)和孵化一夜之间在4°摄氏度。血清稀释5倍,25倍和125倍稀释缓冲和串行双重的稀释血清MBL的标准(BioPorto诊断/ S)被添加到井和孵化在37°摄氏度90分钟湿室。1.25 Biotin-labeled二级(HYB131-01B)抗体μL / 10毫升(1/8000稀释)在TBS, Tween-20 0.05%, 0.25μM EDTA (TBS-T-EDTA)在室温下孵化90分钟在湿室。辣根peroxidase-conjugated biotin-avidin复杂(Vectastain向量实验室Inc .,伯林盖姆,CA)和基质的解决方案包含tetramethylbenzidine盐酸盐(三甲,西格玛奥德里奇,Schnelldorf,德国)被用于获取颜色反应。反应停止了2 M H2所以4。吸光度测量在450 nm使用ELISA读者无限200 (Tecan奥地利GmbH, Grodig奥地利)。血清MBL浓度估计的参考标准。计算的结果是麦哲伦ELISA读者的软件程序,使用马夸特曲线拟合。

2.4。颈动脉内膜中层厚度(cIMT’)测量

飞利浦高清11 XE超声波设备7.5 MHz线性传感器是用来测量IMT (mm)。进行了在线测量IMT在遥远的颈总动脉的动脉壁,10毫米近端颈动脉球(21]。所有测量进行冻结,在end-diastole放大图像,传感器在中间外侧的方向。IMT测量1厘米的段。在每一个1厘米的段,10测量IMT进行双方在1毫米的增量。平均IMT的20个值在每个病人进行了计算。

2.5。统计分析

所有统计计算进行了使用IBM SPSS 20.0统计程序包。MBL、血清甘油三酯(Tg)、高密度脂蛋白胆固醇、CRP显示非正态的分布;因此,使用中位数和四分位范围。其他值都作为意味着±标准差(SD)。斯皮尔曼相关分析是用于关联IMT与MBL水平在不同组的病人。此外,由于MBL不足和高MBL与心血管风险升高,每组(2型糖尿病和控制)细分根据血清MBL水平分为4组:绝对MBL不足(< 100 ng / mL),中间MBL不足(100 - 500 ng / mL),正常MBL (500 - 1000 ng / mL),和高MBL水平(> 1000 ng / mL)分析可能的非线性MBL与IMT。在不同的子组IMT比较使用单向方差分析(方差分析)。我们使用的二进制逻辑回归和两个分类测量高(> 0.7)和低(< 0.7)IMT组。我们还利用多元线性回归分析来评价多变量之间的关联IMT(因变量)和心血管疾病的危险因素(预测)。

3所示。结果

3.1。基线特征和MBL

糖尿病患者的基线特征和控制表进行了总结1。两组年龄(2型糖尿病和控制)匹配。此外,他们没有显著不同性别和吸烟者的数量。尽管患者的数量在2型糖尿病组明显高于高血压,但他们都得到很好的治疗,血压正常。中位数(低级和高级质量)水平MBL在2型糖尿病和控制819 ng / mL(321 - 1871)和846年(247 - 1969),分别。两组之间没有显著差异(图1)。通过斯皮尔曼相关分析,MBL并不与年龄、性别、血糖、糖化血红蛋白、高血压、c反应蛋白、总胆固醇糖尿病患者和对照组和糖尿病病程与2型糖尿病组。

表1
人体测量和实验室数据的2型糖尿病(T2DM)病人和我们的研究人口的对照组。
(一)
(一)
(b)
(b)
图1
盒子,须块Mannose-binding凝集素(MBL)分布在2型糖尿病患者和控制。中位数(低级和高级质量)水平MBL在2型糖尿病和控制819 ng / mL(321 - 1871)和846 ng / mL(247 - 1969),分别。两组之间没有显著差异。

因为MBL的双重角色的确定心血管疾病风险,子组的主题与绝对功能不足(MBL < 100 ng / mL),中间缺乏(MBL 100 - 500 ng / mL),正常MBL (500 - 1000 ng / mL),和高MBL水平(> 1000 ng / mL)内DM2和对照组分别进行了分析。的比例四MBL子组没有差别在2型糖尿病患者和对照组,见图2。IMT值的2型糖尿病患者和控制MBL子组也在图2。正如所料,IMT明显高于在2型糖尿病患者( )比控制( )( )(图3)。在控制,没有显著差异在IMT四MBL子组。与此同时,在2型糖尿病,IMT最低的是在子群与正常MBL水平(500 - 1000 ng / mL), IMT不断增加高MBL和绝对MBL缺陷状态(图4)。这是特别重要的在高MBL 2型糖尿病组( )与正常MBL 2型糖尿病组( )( )。同样,在高MBL子群,在2型糖尿病患者IMT高于控制( 和 分别地, )(图4)。


图2
盒子,须情节描绘MBL按劳分配不同子组在2型糖尿病患者和对照组。绝对MBL不足(< 100 ng / mL),中间MBL不足(100 - 500 ng / mL),正常MBL (500 - 1000 ng / mL),和高MBL水平(> 1000 ng / mL)子组进行描述。

图3
颈动脉内膜中层厚度(IMT)(毫米)在2型糖尿病患者和控制。在2型糖尿病患者(IMT明显高于 )比控制( )( )。
(一)
(一)
(b)
(b)
图4
颈动脉内膜中层厚度(IMT)(毫米)在糖尿病患者和控制各种MBL子组。在控制,没有显著差异在IMT四MBL子组。在糖尿病患者中,最低IMT的子群与正常MBL水平(500 - 1000 ng / mL), IMT不断增加高MBL和绝对MBL缺乏症。
3.2。MBL之间的相关性、IMT和临床参数

在2型糖尿病组患者MBL水平高于500,MBL水平有显著相关性,IMT ( , )。在糖尿病患者中,IMT和心血管疾病风险因素的相关性显示最严重的年龄( ),其次是MBL ( )和糖尿病(持续时间 )。此外,ApoA与IMT呈负相关( )。在控制中,男性性别( BMI)、年龄(0.024)、(0.005),腰围( )、葡萄糖( )和糖化血红蛋白( )与IMT显著相关。

3.3。回归分析

二元逻辑回归分析在高IMT组(> 0.7)显示出了极大的争论与ApoA ( 年龄(附近)和重要值 ),甘油三酸酯( )、胆固醇( )。

向后逐步多元回归分析的基础上,在2型糖尿病组IMT的主要预测因素是年龄( ),ApoA级别( )和MBL ( ),而总胆固醇水平( )和高密度脂蛋白( 显示附近显著的预测。其他临床因素(ApoB100, ApoB100 / ApoA、甘油三酯和低密度脂蛋白)被排除在外。在对照组,向后逐步多元回归分析男性性别( ),高密度脂蛋白水平( ),ApoB100 / ApoA ( )预测,而其他临床参数(胆固醇、糖化血红蛋白、ApoB100 TG、葡萄糖、CRP、BMI、腰围、MBL,低密度脂蛋白,和ApoA)被排除在外(表2)。

表2
对β系数的向后逐步多元回归分析的结果和意义。年龄、ApoA和MBL与颈动脉内膜中层厚度显著相关。

4所示。讨论

我们的结果表明,IMT不断增加高MBL和绝对缺MBL在2型糖尿病组。本研究支持双重MBL水平之间的关系的假说,在2型糖尿病患者IMT。它第一次表明高MBL水平和绝对MBL缺陷状态可能导致增加在糖尿病患者测量中,正如前面演示的,两个实验(26和类风湿性关节炎患者24]。

MBL急性期反应物,是由肝细胞合成的。绑定到特定碳水化合物分子通过甘露糖相关的丝氨酸蛋白酶激活补充(5,27]。尽管MBL浓度不同,个体内变异是非常小的个人间的差异相比人口(4]。在白种人中,浓度中位数是800 - 1000μg / L (ng / mL) (3]。我们使用一个双单克隆抗体测定,这是敏感的,可再生的方法来确定血清MBL抗原水平。它准确地表明函数估计mannan-binding C4b沉积分析化验或补体激活。该突变或MBL2复合杂合的基因型有深刻的MBL水平降低。然而,由于额外的非编码多态性和一些未知因素的影响,个体MBL值变化明显在野生型该突变杂合的,因此只提供一个粗略的向导血清MBL浓度。由于血清MBL水平明显不同甚至在患者相同的基因型,测量血清MBL浓度比pcr(更可靠14,20.,28]。

几种机制可能是缺MBL的硬化效应的基础。MBL多元函数调制的炎症,承认self-structures改变,凋亡细胞间隙(29日,30.),清除抗原抗体复合物31日,32]。因此,MBL的缺乏,凋亡/受损细胞不隔离导致脂质积累和动脉粥样硬化。此外,等位基因变异导致有缺陷的补体激活由于减少低聚和功能失调与配体(33),造成受损间隙大甘油三酯丰富的极低密度脂蛋白(VLDL) [34,35),促进动脉粥样硬化。低MBL可能导致增强的促炎细胞因子,如il - 6 (36]和tnf [37预测心血管疾病)。

此外,MBL是一个重要的组成部分先天免疫。因此,MBL水平低和变异等位基因感染易感性增加31日]。急性感染的儿童扰乱血脂水平和增加IMT [38]。慢性感染可能会导致增加生产血清淀粉样蛋白A和其他急性期蛋白质改变高密度脂蛋白的作用从抗炎促炎状态(39]。几项研究已经显示出心血管疾病之间的联系和各种传染性病原体包括巨细胞病毒,幽门螺杆菌,和肺炎衣原体肺炎(c)(40]。c .肺炎感染引起严重的CAD患者变异等位基因(MBL) [41]。

在心脏缺血再灌注模型中,凝集素途径的抑制明显减少梗塞大小在2型糖尿病大鼠42),而MBL在1型糖尿病小鼠中起着至关重要的作用43]。糖尿病可能导致晚期糖化内皮表面导致终端产品增加MBL与随后的补体激活沉积,组织损伤,动脉粥样硬化(44]。终端补充存款(C5b-9)被发现的内膜动脉粥样硬化病变(45]。高血糖介导O-glycation N-acetylglucosamine (GlcNAc) [46的各种蛋白质包括低密度脂蛋白、膜磷脂,载脂蛋白B [44]。MBL强烈结合这些GlcNAc残留47)导致更易氧化,导致低密度脂蛋白间隙的功能改变(31日]。此外,糖化CD59的失活原因,监管蛋白质参与减少内皮易膜攻击复杂介导损伤(48]。上述机制对待高血清MBL T2D促进动脉粥样硬化。

我们假设这双重角色与IMT MBL在2型糖尿病可以解释的MBL的各种功能。绝对缺MBL的提高可以促进动脉粥样化形成的VLDL、促炎细胞因子,诱发慢性感染改变高密度脂蛋白的功能。它也可能限制清算的早期动脉粥样硬化病变由于功能失调的MBL寡聚化。此外,结合高MBL水平和与先进的糖化产品相关的高血糖,果糖胺、低密度脂蛋白间隙改变,和有缺陷的CD59可能会增加动脉粥样硬化。

总之,首次给出的数据证明MBL的潜在的双重角色导致糖尿病患者动脉粥样硬化的病理过程。MBL不足和过度MBL是亚临床颈动脉动脉粥样硬化的危险因素在2型糖尿病。除了MBL在动脉粥样化形成的潜在作用也可能用作macrovascular疾病的标志,作为低和高水平可能表明动脉粥样硬化在2型糖尿病的易感性。早期筛查的患者可能有助于区分高危人群和指导预防性措施。MBL可以评估成员继承了非传统风险因素在糖尿病患者显著影响动脉粥样硬化的发展。

然而,这项研究的主要局限是低的患者数量与人口规模较大,因此进一步的研究需要确定准确的MBL在动脉粥样硬化中的作用。

利益冲突

作者确认没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

前两个作者米Kaplar和沙Sweni在这项研究中有平等的贡献。

确认

这项研究支持的TAMOP-4.2.2。A-11/1 / konv - 2012 - 0031项目。这个项目是由欧盟和欧洲社会基金共同投资。