文摘gydF4y2Ba
本研究的目的是检查尿EVs的密度之间的关系,他们的大小分布,在2型糖尿病患者早期肾损害的进展(DMt2)。患者加入这项研究,糖化血红蛋白(HbA1c)低于7%是正确的阈值控制的糖尿病患者(CD)和糖尿病患者控制不好(UD)。患者进一步分为两组:糖尿病患者没有肾衰竭(NRF)和肾功能衰竭(RF)肾小球滤过率。EVs的密度和直径可调电阻测定脉冲感应。此外,电动汽车被发射方式可视化和环境扫描电镜。Nano-liquid色谱与质谱(MALDI-TOF-MS / MS)耦合的离线应用进行蛋白质组学分析。射频NRF相比降低了电动车的密度。粒度分布研究表明,CD EVs(模式)比UD(115和109海里;gydF4y2Ba);然而平均EVs直径较小的控制比CD组(123和134海里;gydF4y2Ba)。这是表明,电动汽车在尿液丰富。白蛋白、uromodulin和一些独特的蛋白质与细胞压力和分泌的电动汽车被检测出分数。密度和大小的尿EVs反映肾功能恶化,可以视为潜在的肾损害生物标记。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
最近,糖尿病的发病率也显著增长和糖尿病在全世界成为肾损伤的最常见原因。据推测,大约30%的糖尿病患者的1型(DMt1)和10 - 40%的2型(DMt2)将患有肾损害(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。大多数的细胞释放小球形结构称为细胞外膜囊泡(EVs)可分为三组:液(50 - 100 nm),微泡(100 - 1000海里),和凋亡的身体。这些囊泡的成分和不同亚细胞的来源。电动汽车可以在几个体液,包括血浆、尿液、唾液、和牛奶(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。特别是,尿液是一个丰富的这些小泡水库面临的细胞来源于泌尿腔(上皮细胞)。尿电动汽车可以反映肾脏的损害的状态。一些研究结果表明,EVs源自尿液最近成为一个有趣的来源诊断疾病生物标志物和包含分子参与细胞间通信(gydF4y2Ba5gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。特定蛋白排泄率的变化也会有预测价值在肾损害的早期诊断(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
现有的临床标记如血清肌酐、尿白蛋白水平不是很敏感,一般急性或慢性肾损伤时增加完善(gydF4y2Ba11gydF4y2Ba]。中缺乏可靠的生物标志物的肾损伤肾护理。肌酐由实验室提供的小肾损伤的根本原因,信息不准确对病人肌肉较低(gydF4y2Ba12gydF4y2Ba,gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。在糖尿病,最严重的和生活治疗并发症是糖尿病肾病。为了避免这种结束阶段并发症越来越需要发现小说非侵入性生物标记允许检测原发性肾损害早期肾功能的变化(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。在目前的研究中我们测试尿EVs的密度和大小的假设可以被视为生物标志物DMt2肾损害的患者。gydF4y2Ba
本研究的动机是演示的潜在有用性尿EVs在诊断早期肾功能衰竭的糖尿病的并发症。为了实现这一目标,我们应用尿液分析的现代方法:可调电阻脉冲传感(TRPS) EVs枚举和大小分布分析,nano-liquid色谱技术耦合的离线对蛋白质组学质谱(MALDI-TOF-MS / MS)分析和电子显微镜(透射电子显微镜(TEM);环境扫描电子显微镜(整体)EVs可视化。gydF4y2Ba
2。材料和方法gydF4y2Ba
2.1。研究小组gydF4y2Ba
60例(20妇女和40人)与2型糖尿病(DMt2)参加本研究。这些患者被分成组:CD,适当控制(gydF4y2Ba),和UD、糖尿病控制不佳(gydF4y2Ba)。控制,十个健康受试者(4女人和6)平均年龄52 (SD = 7)年。研究了组分配根据糖化血红蛋白(HbA1c)水平的标准。根据波兰糖尿病协会指南从2014年开始,糖化血红蛋白水平的7%碳水化合物代谢的一般标准补偿。糖化血红蛋白水平超过7%的病人被认为是糖尿病控制不佳。更重要的是,糖尿病患者被进一步分为两组:糖尿病患者没有肾衰竭(NRF)和肾功能衰竭(RF)。选择射频的肾小球滤过率(GFR)低于60 mL / min / 1.73米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba从MDRD2公式。微蛋白尿被定义为20 - 200 mg / L和macroalbuminuria > 200 mg / L白蛋白滤过。研究组织的临床特点提出了表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba和gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
2.2。尿液样本收集和准备gydF4y2Ba
第一次早上尿液标本收集到无菌容器(F.L.医疗SRL、Torreglia、意大利)糖尿病患者和健康者。通常50毫升的第一个空白尿液是用于尿细胞外囊泡的隔离和处理2 h内集合。样本离心机在Hermle Z300K (Hermle Labortechnik GmbH, Wehingem,德国)在3000年为10分钟gydF4y2BaggydF4y2Ba在4°C移除细胞和大的碎片。这一步后上层清液被整除,冻结在−80°C进行进一步分析。立即在TRPS测量之前,样本解冻在37°C水浴然后涡30年代,在PBS稀释1:1(猫。美国圣路易斯P4417数量,Sigma-Aldrich),涡流10年代,用于分析。质谱分析和电子显微镜分析,上层清液离心器在150年000年gydF4y2BaggydF4y2Ba1 h在4°C(最适条件™MAX-XP,贝克曼库尔特生命科学,印第安纳波利斯,美国)使用水平转子(猫。367280号,MLS-50 Swinging-Bucked转子,贝克曼库尔特生命科学,美国印第安纳波利斯)。gydF4y2Ba
2.3。血液样本gydF4y2Ba
生化和血液学分析血液样本被吸引的静脉穿刺肘前的静脉使用21-gauge针和Sarstedt S-Monovette血液收集系统(Numbrecht Sarstedt AG) & Co .,德国)后应用止血带。完整的血细胞计数分析和糖化血红蛋白水平,EDTA抗凝剂使用。对于生化分析,血液收集血清分离器管。标准进行血液测试通过的血液学分析仪(普托ELITech集团、法国)。糖化血红蛋白水平测定在十佳分析仪(十佳血红蛋白测试系统,Bio-Rad实验室Inc .,加利福尼亚,美国)。gydF4y2Ba
2.4。可调电阻脉冲传感技术gydF4y2Ba
尿EVs的大小和密度可调电阻测定脉冲传感(TRPS)技术使用qNano系统和可调毛孔标本,NP150 Izon科学(Izon科学有限公司,克赖斯特彻奇,新西兰)。(描述的技术原理gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。探测粒子在60 - 480 nm毛孔NP150标记。聚苯乙烯珠已知的原始浓度(gydF4y2Ba),直径105纳米是来自Izon科学和用作calibrant。通常5 kHz的带宽滤波器应用在测量。我们使用的电解液和稀释缓冲PBS。75年所有测量gydF4y2BaμgydF4y2BaL(电解液缓冲是放置在较低的流体细胞和上层液电池的体积是40gydF4y2BaμgydF4y2Bal .每个样本测量一式三份。密度、意思和模式EVs表示为中值直径(差)。执行数据采集使用Izon套件3.1软件的控制。gydF4y2Ba
2.5。蛋白质组学(Nano-LC-MALDI-TOF / TOF质谱)gydF4y2Ba
蛋白质组学分析尿EVs是从microalbuminuric孤立(CD)和macroalbuminuric (UD)患者和健康者,至少gydF4y2Ba从每组。后超速离心法、尿液上层清液(6毫升)被用于分析。颗粒在60 resuspended获得gydF4y2BaμgydF4y2BaL 10% SDS(猫。美国圣路易斯L3771数量,Sigma-Aldrich), 10gydF4y2BaμgydF4y2BaL 1 m三(猫。美国圣路易斯号T1503 Sigma-Aldrich),和30gydF4y2BaμgydF4y2BaL去离子水(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。蛋白质浓度测定采用BCA法(猫。美国23227号,皮尔斯生物技术、热科学)。意思是蛋白质浓度gydF4y2Ba毫克/毫升;总蛋白量用于女士是40gydF4y2BaμgydF4y2Bag。蛋白质组学分析的nano-liquid色谱仪(EASY-nLC II™,力量Daltonics,德国)。详细的方法以前发表的(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。精度公差是0.7 100 ppm的肽质量和Da碎片离子的质量。个人肽匹配分数高于28被认为具有统计学意义。蛋白质识别是人工进行的,基于两个独特的肽的概率小于0.05。蛋白质的分类是由意味着自由的算法应用于豹分类系统(7月15日发布的11.0版本,2016)(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。重叠的分析蛋白质在健康受试者中,CD, UD是由tree-circle文氏图软件(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.6。透射电子显微镜及环境扫描电子显微镜gydF4y2Ba
2.6.1。整体不gydF4y2Ba
从健康捐献者尿样(100毫升)于3000年离心机gydF4y2BaggydF4y2Ba下上层清液离心器于150年000年gydF4y2BaggydF4y2Ba1 h在4°C。EVs颗粒resuspended在60gydF4y2BaμgydF4y2BaL PBS和20gydF4y2BaμgydF4y2BaL(电动汽车解决方案是放在1×1厘米poly-l-lysine幻灯片(猫。数量J2800 AMNZ热费希尔科学,沃尔瑟姆,马萨诸塞州,美国)在潮湿的室和孵化1 h rt,孵化后下滑是洗两次在PBS和固定在3.7%戊二醛在PBS 30分钟紧随其后的是盐去除阶段。EVs的幻灯片是洗两水PBS稀释,PBS的50%,25%,PBS和去离子水,每1分钟。接下来,脱水是由浸泡样品申请30秒在酒精的解决方案如下:10%,20%,30%,40%,50%,60%,70%,80%,90%,绝对的乙醇。后来,样本干24 h RT[掩护下gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
环境扫描电子显微镜(整体)进行测量使用SEM广达电脑3 d FEG显微镜由范公司(美国)在大学物理研究所,克拉科夫,波兰。gs检测器收集的整体图像使用电子5 keV能量。在测量标本保存在100 Pa RT的水蒸气。gydF4y2Ba
2.6.2。TEMgydF4y2Ba
两个从健康捐献者尿液样本和一个UD是准备以同样的方式进行整体分析。在埃普多夫管和固定样本离心机2.5%戊二醛(猫。数字G5882 Sigma-Aldrich,圣路易斯,美国)在0.1卡可缓冲(猫。C4945数量,奥尔德里奇,圣路易斯,美国)为2 h RT然后后缀在1%锇酸溶液(1小时)。样品被通过分级脱水乙醇系列和嵌入PolyBed 812在68°C。gydF4y2Ba
超薄部分收集300网格网格或一个槽由铜。此外后者覆盖着formvar电影。接下来的部分是对比使用醋酸双氧铀及柠檬酸铅。观察JEOL公司的电子显微镜JEOL JEM 2100 ht(日本东京JEOL有限公司)是用于加速电压80 kV。gydF4y2Ba
2.7。研究TRIFIc外来体测定gydF4y2Ba
时间分辨荧光分析、铕的猫。EX103(细胞制导系统有限公司,剑桥,英国),是用来测量大量的人类研究蛋白质在表面的液在相同的尿液样本。在TRIFIc外来体试验相同的抗体用于绑定目标的试验板和检测。这个试验包括单克隆抗体(与生物素标记)绑定到链霉亲和素涂板捕获蛋白质在表面的液囊存在。一个相同的单克隆抗体(用铕标记)是用于检测。铕测定提供了一种高度的敏感。荧光检测我们使用M200无限PRO板读者(Tecan集团有限公司、Mannedorf、瑞士)。gydF4y2Ba
2.8。统计分析gydF4y2Ba
Statistica 12(美国塔尔萨戴尔Statistica)和OriginPro 2016(美国北安普敦OriginLab公司)是用于统计分析和情节设计。连续数据的分布与Shapiro-Wilk正常测试验证。结果表示为平均(SD)数据与正态分布或中位数和四分位范围(Q1-Q3)数据不是正态分布。生化和流行病学数据分析单向方差分析组间方差分析或克鲁斯卡尔-沃利斯比较。子组之间的差异进行了图基的事后考验或邓恩的多重比较检验。的Mann-WhitneygydF4y2BaUgydF4y2Ba测试是用来比较两个独立的团体之间的区别。EVs密度之间的相关性和生化参数计算和斯皮尔曼等级相关的测试,和多元回归(向后逐步回归)进行预测年龄对其他变量的影响。所有的分析gydF4y2Ba值< 0.05被认为是重要的。gydF4y2Ba
2.9。道德的考虑gydF4y2Ba
这个研究是大学的生命伦理委员会批准的克拉科夫2013年10月24日,接受了所有项目的协议和形式,包括病人的信息表单和一个同意书。许可数量KBET / 206 / B / 2013直到2016年12月31日有效。gydF4y2Ba
3所示。结果gydF4y2Ba
生化参数的比较如血清葡萄糖、尿白蛋白、尿肌酐、血清肌酐、肾小球滤过率(GFR), EVs密度,EVs模式,和平均直径在CD,特拉华大学,和对照组是表中提供gydF4y2Ba1gydF4y2Ba。适当控制糖尿病患者(CD)和糖尿病患者控制不好(UD)的水平明显高于有血清葡萄糖(6.8和5.2更易/ L;gydF4y2Ba和9和5.2更易/ L;gydF4y2Ba)和尿肌酐浓度低(5和12更易/ L;gydF4y2Ba和7和12更易/ L;gydF4y2Ba)与对照组相比。gydF4y2Ba
我们的研究结果显示,血清葡萄糖统计上的显著差异(6.8和9更易/ L;gydF4y2Ba)和尿白蛋白(6和37毫克/升;gydF4y2BaCD和UD组之间)。无显著差异被发现在血清肌酐浓度,这些团体之间的肾小球滤过率(GFR)和电动汽车密度。大小分布分析表明,CD有明显大的电动汽车模式除了UD直径(115和109海里;gydF4y2Ba)。的意思是EVs直径较小的控制比CD组(123和134海里;gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
在射频生化参数的比较,联盟,和对照组在表提供gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。与对照组相比,射频的水平明显高于有血清葡萄糖(8.7和5.2更易/ L;gydF4y2Ba)和血清肌酐(119年和72年gydF4y2BaμgydF4y2Bamol / L;gydF4y2Ba)和尿肌酐浓度低(6和15更易/ L;gydF4y2Ba)和肾小球滤过率(GFR)(49和87 mL / min / 1.73米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba;gydF4y2Ba)。NRF的水平明显高于有血清葡萄糖(7.9和5.2更易/ L;gydF4y2Ba)和尿肌酐浓度低(8和15更易/ L;gydF4y2Ba)相比,健康受试者。gydF4y2Ba
结果表明,射频NRF相比显著降低电动汽车的密度(2.57gydF4y2BaEgydF4y2Ba10和8.73gydF4y2BaEgydF4y2Ba10号/毫升;gydF4y2Ba)。我们观察到血清肌酐(119年和73年的统计上的显著差异gydF4y2BaμgydF4y2Bamol / L;gydF4y2Ba)和肾小球滤过率(GFR)(49和89 mL / min / 1.73米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba;gydF4y2Ba)射频和联盟之间的组织和白蛋白水平之间射频和健康受试者(51和6.2 mg / L;gydF4y2Ba)。因为高可变性在患者组,EVs模式之间没有显著差异被发现直径射频和联盟之间。gydF4y2Ba
斯皮尔曼的结果gydF4y2BaρgydF4y2Ba测试电动汽车密度之间的关系和生化参数表gydF4y2Ba3gydF4y2Ba。我们观察到一个消极的趋势之间的UD (EVs密度和血清葡萄糖水平gydF4y2BaRgydF4y2Ba在射频=−0.33)和负相关(gydF4y2BaRgydF4y2Ba=−(图0.66)病人gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。没有这些参数之间的相关性在CD (gydF4y2Ba)和联盟(gydF4y2Ba)。我们发现EVs密度之间的积极关系和尿肌酐浓度在CD (gydF4y2BaRgydF4y2Ba= 0.52)和联盟(gydF4y2BaRgydF4y2Ba=(图0.33)gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。没有这些参数之间的相关性在UD (gydF4y2Ba)和射频(gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
考虑到年龄可以影响肾功能,多重回归(向后逐步回归)进行显示年龄对电动汽车的数量变化的影响(见补充表gydF4y2Ba在网上补充材料gydF4y2Bahttp://dx.doi.org/10.1155/2016/5741518gydF4y2Ba)。另外,特定的生化参数的相关性(肌酐、白蛋白、血清葡萄糖等)分析了随着年龄的增长。毫不奇怪,在对照组没有相关性。年龄相关的负相关关系在CD和联盟集团的肌酐清除率(GFR)。这样的关系不那么重要的更高级阶段疾病患者(补充表gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
环境扫描电子显微镜(整体)证实了存在颗粒沉淀后的电动汽车超速离心法收集样本(数据gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba1 (d)gydF4y2Ba)。洗EVs形成组合设备,更好的区分通过TEM(数字gydF4y2Ba1 (e)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba1 (f)gydF4y2Ba)。电动汽车的规模估计在130 - 160海里。然而,许多规模较小的和更大的囊泡和其他对象观察。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
(e)gydF4y2Ba
(f)gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
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(c)gydF4y2Ba
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(一)gydF4y2Ba
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(d)gydF4y2Ba
为了看到的起源和生物活性分析电动汽车,尿EVs分数的蛋白质组学分析。尽管尿液样本获得DM的病人在不同的阶段,不同的蛋白尿水平,白蛋白是主要使用质谱和最丰富的蛋白质检测方法(数据gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)。第二个uromodulin尿液中丰富的蛋白质。维恩分析显示之间可能的关系在蛋白质概要文件CD和UD而控制话题。在CD 92蛋白中,49是独特和31日在CD和UD(补充表是很常见的gydF4y2Ba)。UD样本中,蛋白质的总人数是45在控制样本17蛋白被发现。列表中独特的蛋白质补充表中列出每组gydF4y2Ba。常见的蛋白质相互作用预测的常见的列表45蛋白质分析通过搜索工具的交互检索基因/蛋白质(字符串)gydF4y2Ba24gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)。这种分析揭示了核心作用的白蛋白EVs分数,然而压力相关蛋白(血浆铜蓝蛋白、转铁蛋白)和细胞组件(主要是外来体和细胞外地区)(数据gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba4 (d)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
研究TRIFIc外来体分析并没有显示任何统计显著差异的研究学习小组之间的水平,呈现在图gydF4y2Ba5gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
4所示。讨论gydF4y2Ba
到目前为止,没有侵入性方法来描述肾结构病理生理变化(gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。此外,生化标记不够敏感,描述进展的肾病和其他dm相关并发症的风险(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
在这项研究中,我们试图测试如果尿EVs的密度和大小可以被视为潜在生物标志物DMt2患者早期肾损害可导致糖尿病肾病。此外,我们研究了电动汽车密度之间是否有相关性和生化参数在糖尿病患者和健康对照组。gydF4y2Ba
我们的研究结果表明,糖尿病患者肾功能衰竭(RF)密度较低的电动汽车相比,糖尿病患者肾功能衰竭(NRF)。大小分布研究显示显著差异在电动汽车模式CD和UD之间的直径。阿尔及利亚士兵et al。gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]表明,降低电动汽车可能反映了动脉粥样硬化和thrombosis-related活动在肾毛细血管和实质。gydF4y2Ba
目前肾功能监测通过测量血清肌酐,肌酐清除率和蛋白尿。这些临床标记通常晚期肾损害的迹象,表明其功能障碍(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。更重要的是,这些标记并不总是关联与肾损害的严重程度在活组织检查(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。肾脏功能损害的早期诊断肾小球滤过率(GFR)只有通过测量。慢性肾脏疾病的并发症增加和肾小球滤过率(GFR)下降(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。有很多研究证实肾小球滤过率(GFR)水平发展的巨大影响肾损害(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。然而,肾小球滤过率(GFR)下降的良好生物标志物,连同适当的管状损伤的标志,将允许在糖尿病患者肾功能衰竭的诊断之前增加蛋白尿和不可逆转的肾脏损害gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
的一个特定的肾proteins-uromodulin-has被发现为肾小球滤过率(GFR)尿生物标志物,积极与比和降低uromodulin浓度中发现了肾功能衰竭和糖尿病肾病gydF4y2Ba33gydF4y2Ba,gydF4y2Ba34gydF4y2Ba]。在我们的研究中,我们观察到uromodulin是一个杰出的蛋白质相关电动汽车,我们可能认为其尿液浓度下降有关电动汽车密度降低患者肾功能衰竭。Uromodulin可能是参与电动汽车集群和降水(图gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
在我们的研究中,我们观察到电动汽车之间的负相关密度和血清葡萄糖水平射频和UD这些参数之间的消极趋势。梅塔(gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]表明,肾脏是密切参与开发的高血糖危重病人。Sechi et al。gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]证明了不正常的肾小球滤过率(GFR)时血浆葡萄糖水平升高< 50毫升/分钟/ 1.73米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba和整体葡萄糖代谢参数和微量白蛋白尿(MA)没有联系。这些数据符合我们的研究。我们没有观察到马和电动汽车密度之间的相关性在CD和特拉华大学,以及在射频和联盟。因此我们可以假设电动汽车存在更与葡萄糖代谢有关,然后与肾损害的存在生物标志物(MA)和电动汽车可以被视为在糖尿病患者疾病的更不祥的标签。有趣的是,我们还观察到电动汽车密度之间的正相关和尿肌酐浓度在联盟和CD,相比那些更高级的疾病阶段(RF)或占用治疗(UD)。这个观察表明,早期肾功能不全流程更可观的尿液EVs释放。在肾功能衰竭的温和阶段我们可能期望尿液的电动汽车数量越高,肾功能障碍的主要标志。在进一步研究更具体的注意力应该集中在半胱氨酸蛋白酶抑制物C之间的相关性,甚至检验2,这似乎是一个有关预测急性胰腺炎患者的肾脏功能障碍(gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。年龄是影响生理状态,最强的因素以及肾功能。根据流行病学研究的数量,肾小球滤过率(GFR)下降随着年龄平均约0.8 mL / min / 1.73米gydF4y2Ba2gydF4y2Ba每年。多元回归(向后逐步回归)模型并没有显示出显著影响的年龄对电动汽车的数量的变化。gydF4y2Ba
尿EVs丰富蛋白质在膜和胞质货物来自不同的上皮细胞衬尿跟踪。到目前为止,只有很少的研究,揭示了新的尿生物标志物,这是基于蛋白质组学方法。其中,蛋白酶和蛋白酶抑制剂包括激肽释放酶(gydF4y2Ba6gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba,gydF4y2Ba14gydF4y2Ba)和金属蛋白酶(MMP-2 MMP-7, MMP-8)所料已观察到正常蛋白尿和微量白蛋白尿组。macroalbuminuric患者、组织蛋白酶D更丰富的比其他病人(gydF4y2Ba14gydF4y2Ba]。在我们的研究中我们发现新的蛋白酶抑制剂包括inter-alpha-trypsin抑制剂(AMBP-Human)抑制剂补膜攻击复杂(CD59)和蛋白酶包括mannan-binding凝集素丝氨酸蛋白酶2 (MASP2_Human)。大量独特的蛋白质在控制糖尿病的潜在生物标志物可用于选择进一步的研究在这类患者糖尿病肾病的风险。gydF4y2Ba
根据我们的观察的特定标记液(研究)没有显示显著差异(图的水平gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。的研究是一个表面的外来体标记,属于tetraspanin家族(TAPA-1)和参与信号转导和细胞粘附gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。研究蛋白质丰富的外来体膜(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba]。然而,它还没有被证明如果这生物分子区分在糖尿病患者肾脏疾病的严重程度。我们也可以推测,在我们的研究中我们没有观察到显著差异的研究水平在两组之间因为最多CD81-negative (nonexosomes)人口微泡膜泡沫在100 nm(数字gydF4y2Ba1 (e)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba1 (f)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
在我们的研究中我们证实,定量分析尿EVs似乎是一个有前途的工具,定义新的生物标记(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba]。我们见,电动汽车出现在尿液和他们取样和制备过程中保持其完整性。然而,这些研究大多集中在两个方面的进展:膀胱或前列腺癌和肾移植急性排斥反应(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。最近研究糖尿病肾病新型生物标志物发现exosomal regucalcin underexpressed在肾脏疾病患者(gydF4y2Ba42gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
5。结论gydF4y2Ba
最后我们可以得出这样的结论:尿电动汽车有可能在糖尿病患者肾损伤的生物标志物,和结构和酶蛋白的数量(包括uromodulin)可以在尿液EVs分数在使用作为新生物标志物指标或肾功能衰竭和糖尿病肾病的未来。简单的可访问性EVs尿液可以增加其使用的生物标记而侵入性检查。进一步验证,描述内容的生物活性分子,和更大的研究是必要的。gydF4y2Ba
缩写gydF4y2Ba
| CD:gydF4y2Ba | 适当控制糖尿病患者gydF4y2Ba |
| DMt1:gydF4y2Ba | 1型糖尿病gydF4y2Ba |
| DMt2:gydF4y2Ba | 2型糖尿病gydF4y2Ba |
| EDTA:gydF4y2Ba | 乙二胺四乙酸gydF4y2Ba |
| 整体:gydF4y2Ba | 环境扫描电子显微镜gydF4y2Ba |
| 电动汽车:gydF4y2Ba | 细胞外囊泡gydF4y2Ba |
| 肾小球滤过率(GFR):gydF4y2Ba | 肾小球滤过率gydF4y2Ba |
| 走:gydF4y2Ba | 基因本体论gydF4y2Ba |
| 糖化血红蛋白:gydF4y2Ba | 糖化血红蛋白gydF4y2Ba |
| 马:gydF4y2Ba | 微蛋白尿gydF4y2Ba |
| 联盟:gydF4y2Ba | 糖尿病患者肾功能衰竭gydF4y2Ba |
| PBS:gydF4y2Ba | 磷酸盐gydF4y2Ba |
| 射频:gydF4y2Ba | 糖尿病患者肾功能衰竭gydF4y2Ba |
| 透射电镜:gydF4y2Ba | 透射电子显微镜法gydF4y2Ba |
| TRPS:gydF4y2Ba | 可调电阻脉冲传感gydF4y2Ba |
| 丑小鸭:gydF4y2Ba | 控制不佳的糖尿病患者。gydF4y2Ba |
相互竞争的利益gydF4y2Ba
作者宣称没有利益冲突。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这项研究得到了波兰国家科学中心(NCN)授予作品4 Ewa Stępień(2012/07B / NZ5/02510)和波兰科学和高等教育(MNSW),阿格涅斯卡的格兰特Kamińska (7150 / e - 338 / M / 2015)。这项研究是进行设备购买欧洲区域发展基金与金融支持波兰创新经济框架的操作程序(合同编号。POIG.02.01.00-12-023/08)。作者要感谢也Aleksandra Tokarz提供临床病人的数据库。gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
补充表1提供了向后逐步回归分析的结果来确定独立预测因素的影响(年龄、血清葡萄糖、尿肌酐和白蛋白)EVs密度(每毫升细胞外囊泡;在对照组n /毫升)。gydF4y2Ba
补充表2给出的结果nonparametrical回归分析(斯皮尔曼测试)来识别一个流行病学参数之间的关系(年龄)和选择生化标志物(血清葡萄糖、尿肌酐和白蛋白、血清肌酐、肾小球滤过率(GFR)和EVs直径和密度)的学习小组。gydF4y2Ba
缩写:电动汽车-细胞外囊泡;肾小球滤过率(GFR),肾小球滤过率。gydF4y2Ba