文摘

的目标是。这项研究调查了协会的自身抗体结合氧化低密度脂蛋白(oxLDL)在糖尿病性视网膜病变(DR)。方法。等离子体博士从229年类型1和2的患者包括糖尿病黄斑水肿(测距装置)和增生性糖尿病视网膜病变(PDR)与ELISA-based测定分析,确定IgA,免疫球蛋白,IgM绑定oxLDL自身抗体水平。控制是106糖尿病患者视网膜病变(NoDR)和139 (C)非糖尿病的控制。结果。PDR组IgA自身抗体水平明显高于测距装置或NoDR:平均94.9 PDR (SD - 54.7), 75.5(41.8)测距装置( 为NoDR(76.1)和(48.2) )。没有不同的免疫球蛋白、IgM或IgA,具体为博士或测距装置。2型糖尿病患者有较高的IgA比1型糖尿病患者自身抗体(86.0和65.5,分别地。 IgA)和最高水平在2型糖尿病患者被发现PDR (119.1, )。结论。PDR IgA自身抗体增加,特别是2型糖尿病。PDR的高水平的IgA,尤其是在2型PDR患者中,反映了炎症过程和启发oxLDL及其自身抗体在PDR的角色。

1。介绍

糖尿病和其长期的并发症继续代表世界各地的一个严重的健康问题。一些最近的研究强调糖尿病带有强烈的炎症组件和血管炎症在糖尿病的感应是失调的氧化反应(1- - - - - -3]。等离子体的循环氧化低密度脂蛋白水平升高(oxLDL)与代谢综合征和糖尿病等与肥胖相关的代谢紊乱(4]。血管的存在氧化应激和与增加对氧化低密度脂蛋白(LDL)在2型糖尿病(尤其突出5]。

氧化低密度脂蛋白免疫原性(6)和循环自身抗体结合氧化抗原表位oxLDL已经在人类和动物中发现等离子体(7,8]。动脉粥样硬化小鼠模型的免疫球蛋白M (IgM)类型自身抗体绑定oxLDL展出假定atheroprotective属性(9]。在一些研究中,血清IgA绑定到氧化低密度脂蛋白的浓度与代谢异常升高科目(8),这一现象与血浆炎症介质水平(10]。此外,等离子体IgA自身抗体水平绑定oxLDL已被证明是积极和免疫球蛋白g自身抗体水平是负相关的标记的葡萄糖代谢以及2型糖尿病的独立危险因素(8]。

自身抗体的水平结合oxLDL下降与年龄、糖尿病持续时间、糖化血红蛋白(HbA1c)水平(1,11]。这种现象归因于增加oxLDL-specific形成免疫复合物(12]。看来,这些复合物13)以及oxLDL本身(14)诱导巨噬细胞可以转化为泡沫细胞。自身抗体诱导的巨噬细胞产生细胞因子(15进而激活内皮细胞和触发炎症级联(13,16]。炎症和内皮细胞的激活也关键元素在糖尿病性视网膜病变(DR)的起始17,18]。以前,oxLDL已被证实能扮演一个角色发展的博士自载脂蛋白B(飞机观测oxLDL)组织化学染色发现2型糖尿病患者的视网膜中有或没有博士和增加oxLDL水平反映了视网膜病变的严重程度(19]。在另一项研究中,福等人表明,改性低密度脂蛋白诱导的氧化应激是博士;,修改后的低密度脂蛋白对毒性作用在毛细管的周(20.]。此外,高水平的免疫复合物oxLDL已被证明与1型糖尿病视网膜病变的进展(21]。

等离子体水平的自身抗体绑定oxLDL可能作为一种生物标志物对糖尿病性视网膜病变的严重程度,但他们的作用尚未研究的很透彻了。本研究的目的是调查自身抗体绑定的水平在糖尿病患者的血浆oxLDL没有糖尿病视网膜病变在同质,良好的芬兰人口研究。

2。方法

2.1。研究对象

这是一个病例对照研究,研究人口(图1)组成的229糖尿病患者临床中度到重度博士(DR组)从奥卢大学医院或赫尔辛基大学医院和106年糖尿病患者没有视网膜病的迹象(noDR组)参加奥卢博士的眼底成像筛查城市医疗中心。时间对糖尿病患者进行糖尿病的患者只包括那些疾病持续时间至少10年noDR组因为糖尿病和高血糖持续时间是主要的预后因素发展的博士博士的诊断和分类在眼底图像的临床检查和/或由经验丰富的眼科医生的奥卢和赫尔辛基大学的眼科医院(22,23]。我们也调查了139名非糖尿病的患者在赫尔辛基大学医院接受眼科手术对照组(C组)。


图1
研究人口。

DR患者分为两组根据他们的视网膜病变状态(图1)。因此测距装置组包括65例临床上重要的糖尿病黄斑水肿(测距装置)和增生性糖尿病视网膜病变(PDR)组包括76名患者。所有受试者从奥卢大学医院和奥卢城市医疗中心填写一份调查问卷,提供血液样本。调查问卷包括质疑他们的糖尿病,糖尿病并发症,其他疾病和药物,和生活方式。受试者从赫尔辛基大学医院也提供了血液样本和不同类型的问卷填写,但因此缺少一些数据表和数据。糖尿病患者被诊断出患有微量白蛋白尿或蛋白尿列为有肾病和神经病变的诊断是基于之前的诊断根据问卷。本研究遵循赫尔辛基宣言的指导原则,是奥卢大学医院的伦理委员会批准。

2.2。实验室测量

等离子体采集标本后一夜快,离心机,并存储−70°C。空腹血浆葡萄糖水平,糖化血红蛋白、肌酐、总胆固醇、低密度脂蛋白,高密度脂蛋白(HDL),和甘油三酯测定受试者提供的血液样本从奥卢大学医院和奥卢城市医疗中心奥卢大学医院的常规实验室测量。低密度脂蛋白从人血浆样品池中提取的七个健康控制研究对象的性别和纯化透析(24]。纯化低密度脂蛋白被氧化了25分钟与0.5 + 37°C丙二醛(MDA) (6]。从MDA-base MDA-solution使用生产解决方案孵化4 N + 37°C的盐酸12 - 15分钟,直到变黄和1 N氢氧化钠中和。

2.3。自身抗体测定

等离子体免疫球蛋白、IgM IgA类自身抗体滴度与化学发光氧化低密度脂蛋白测定ELISA如前所述[25]。测量板被涂上一层MDA-oxLDL和孵化隔夜+ 4°C。井是用缓冲溶液(磷酸缓冲盐与乙二胺四乙酸(PBS-EDTA))和postcoated鱼肉明胶一小时在室温下为0.5%。与PBS-EDTA第二个洗后,样品在一夜之间,0.5%鱼肉明胶被添加和孵化+ 4°C。每个板包含商业纯化免疫球蛋白的一式三份标准控制(西格玛奥德里奇,圣路易斯,密苏里州),纯PBS-EDTA-FISH-gelatin zero-sample,和两个控制样品一式三份(“高”和“低”),稀释覆盖尽可能广泛的一系列标准。第三个洗后,反抗体0.5%鱼肉明胶添加和孵化一小时在室温下。随后与PBS-EDTA洗盘子和蒸馏水,然后他们孵化LUMIPHOS 0.33% (Lumigen Inc .)位于MI) 90分钟和分析维克多multilabel计数器(PerkinElmer沃尔瑟姆,MA)。

为了保持样品发光计数在标准范围内,样品被稀释在鱼肉明胶。最终分析前,我们进行了多次测试,以确定每个自身抗体的稀释类型。稀释的选择是基于最低的变异系数(CV)之间的测量。免疫球蛋白稀释1:2000,1:为IgM 1333,和1:400 (MDA-ox)或1:100 (IgA Cu-ox)。我们进行了一式三份的测量每个样品。每个一式三份的简历计算测量。CVs在所有样本都低于20%。

平均相对光从发光单元(RLU)值的计算计数降低空白值(zero-sample)一式三份的平均发光计数测量。创建一个线性标准曲线和rlu转化为相对等离子体自身抗体水平除以rlu与标准曲线斜率,然后乘以稀释系数。表示为相对水平单位(俄文)。

2.4。统计分析

与IBM SPSS统计分析软件(、IBM公司,纽约Armonk)。自身抗体水平的统计学意义两个学习小组之间进行了计算与独立样本 以及方差分析是用于比较几个学习小组。交叉表(卡方检验)是用来评估差异分类变量。多重线性回归分析被用来解释自身抗体的水平和变量包含在模型选择是由于相关(皮尔森相关)与自身抗体水平(性别、年龄、体重指数、糖尿病持续时间和类型,gHbA1c,低密度脂蛋白,和药物)。 值小于0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。基线特征

学习小组的临床特点如表所示1和2。博士( )和NoDR ( )组没有显著差异的年龄,性别,身体质量指数(BMI)、糖尿病类型或低密度脂蛋白、总胆固醇浓度,但博士组糖尿病控制(表的还要糟糕1比NoDR组),糖化血红蛋白的平均值高博士组。博士组血脂较差有高甘油三酯和高密度脂蛋白浓度低于NoDR组(表1)。

表1
糖尿病患者的临床特点和MDA-ox低密度脂蛋白水平与糖尿病性视网膜病变(DR)和无糖尿病视网膜病变(noDR)。数据表示为(标准差(SD))或意义 (百分比(%))。
表2
糖尿病性视网膜病变(DR)患者的临床特征与黄斑水肿(测距装置)或增生性糖尿病视网膜病变(PDR)。数据表示为(标准差(SD))或意义 (百分比(%))。

测距装置组患者的平均年龄比PDR组(63.6和55.4年,分别地。 )(表2)。正如所料,2型糖尿病患者的比例在测距装置组高于PDR组(72.3%,39.5%的患者在测距装置和PDR(分别 )),但有一些重叠。没有其他的差异测量组(表之间的临床特点2),除了更多的病人患有肾病(微量白蛋白尿)PDR组相比测距装置组(分别为42.9%和23.8%, )。使用的药物治疗糖尿病受试者如表所示3。糖尿病患者,根据临床指南,药物影响血压和血脂除了抗糖尿病的药物和患者的比例有β-受体阻滞药、血管紧张素转化酶抑制剂,和他汀类药物在NoDR博士组高于组。没有不同的胰岛素,口服糖尿病药物,或发现了ASA博士和NoDR之间。

表3
百分比的糖尿病患者使用脂质降低,抗高血压,口服糖尿病药物,胰岛素,或亚撒。
3.2。自身抗体水平博士

视网膜病不影响测量自身抗体水平:免疫球蛋白,IgM,或IgA;自身抗体水平博士和noDR组之间没有显著差异( , , 职责。)(表1,图2)。然而,PDR组显著增加IgA自身抗体水平;IgA的平均值是94.9 54.7 (SD)与75.5(标准差41.8)测距装置( )(图248.2)和76.1 (SD, 在NoDR)(表1)。


图2
自身抗体水平对MDA-oxLDL (MDA-Ox IgG、MDA-Ox IgM MDA-Ox IgA)黄斑水肿患者(测距装置)、增生性视网膜病变(PDR),和1型和2型糖尿病患者。表示为水平意味着相对单位和标准偏差。
3.3。自身抗体水平在糖尿病

我们也想评估糖尿病对自身抗体水平的影响。糖尿病影响IgM自身抗体水平:糖尿病患者(博士和NoDR)对MDA-oxLDL IgM自身抗体水平明显低于非糖尿病的控件(3389年3998年(SD)与4258年(SD 3578), ),但是免疫球蛋白和IgA自身抗体水平D组之间没有显著差异(博士和NoDR)和C组。IgM的水平,免疫球蛋白,IgA是3389 (SD 3998), 6944 (SD 5280)和79.6(标准差46.3)为D组和4258 (SD 3578), 6874 (SD 4718)和80.7(标准差46.2)C组,分别。

3.4。型糖尿病对自身抗体水平的影响

1型糖尿病患者的平均年龄为45.7岁(SD 13.5)和2型糖尿病患者是66.8(标准差9.6)。我们细分根据类型的糖尿病,这是发现IgA在1型糖尿病自身抗体水平明显低于在2型糖尿病(65.5(标准差30.5)1型和2型86.0(标准差51.3), )(图2)。我们进一步测试了PDR组型糖尿病的影响,发现IgA水平最高的PDR组有2型糖尿病(119.1(标准差64.1)和77.5(标准差38.7)PDR 1型人口( ))(图3)。


图3
IgA自身抗体水平对MDA-oxLDL (MDA-Ox IgA)黄斑水肿患者(测距装置)和增生性糖尿病视网膜病变(PDR)患者除以类型(类型1和类型2)。表示为水平意味着相对单位和标准偏差。
3.5。多元线性回归

多元线性回归运行测试自身抗体水平的主要决定因素。模型中的变量是性别、年龄、体重指数、糖尿病持续时间和类型,gHbA1c,低密度脂蛋白,和药物。添加统计上显著的变量方程如表所示4。一般来说,免疫球蛋白自身抗体是增加了2型糖尿病和减少口服糖尿病药物和他汀类药物( )。高的低密度脂蛋白浓度影响IgM水平和他们减少了女性性和口服糖尿病药物( )。此外,发现IgA自身抗体水平增加了年龄增加,gHbA1c,低密度脂蛋白和ASA药物( )。

表4
多元线性回归的自身抗体水平。模型中的变量包括性别、年龄、体重指数、糖尿病持续时间和类型,gHbA1c,低密度脂蛋白,和药物。负值表示逆效应性,女性有降低作用。

4所示。讨论

在这项研究中,我们调查了自身抗体水平在糖尿病视网膜病变与MDA-OxLDL,观察分析使用一个横断面研究设计,发现IgA类型自身抗体的水平增加了PDR患者相比测距装置或noDR和2型患者PDR组最高水平。

有证据表明,自身抗体绑定oxLDL参与博士的发病机理和它可能是组织功能与免疫复合物。吴等人所示,氧化低密度脂蛋白的intraretinal免疫荧光法测量飞机观测- 100(低密度脂蛋白)的蛋白质成分存在于人类捐赠糖尿病视网膜和免疫荧光水平增加的严重性(博士19]。甚至在最初阶段博士临床视网膜病变的发病之前,一个聚合氧化低密度脂蛋白的发现在视网膜上。氧化低密度脂蛋白也是一个有效的引发的视网膜毛细血管周细胞凋亡导致的击穿blood-retina障碍,发展的一个关键事件(博士26]。,修改脂蛋白可能发挥关键作用的发展博士;中所描述的现象是人类、动物和细胞培养的研究(20.]表明脂蛋白可能潜在的因果因素发展的博士,博士致病过程发生在可能有些平行观察动脉粥样硬化。此外,OxLDL博士可能是重要的发病机制本身或作为触发炎症在视网膜和周边视网膜血管。已经表明,改性脂蛋白激活先天和适应性免疫反应与促炎信号和干扰微脉管系统的完整性(27]。福等人的研究支持这一假设,因为oxLDL-immune复合物引发细胞凋亡和增强炎性细胞因子分泌对视网膜的周(28]。此外,似乎oxLDL博士和自身抗体可能也很重要的预后oxLDL-immune复合物和先进的糖化结束产品改性低密度脂蛋白(AGE-LDL)与风险增加发展为先进的1型糖尿病患者视网膜病变(21]。

如上所述,似乎有一些相似之处的角色oxLDL博士和动脉粥样硬化的发病机制。有证据表明在人类IgM抗体绑定oxLDL可能有一个atheroprotective效果如图所示在人类和小鼠的研究(9,24),虽然有争议29日]。似乎不是一个独立的危险因素在动脉粥样硬化,IgM自身抗体可能调节相关的冠状动脉疾病的风险水平升高氧化生物标记(30.]。IgA的角色自身抗体绑定在动脉粥样硬化oxLDL仍然有些不清楚。假设,自身抗体水平高绑定oxLDL脂蛋白氧化的可能有用的临床参数检测macrovascular疾病的糖尿病患者(31日]。我们的研究结果表明,确定等离子体自身抗体水平对oxLDL可能代表一个潜在的指标对糖尿病性视网膜病变,但这值得进一步研究。

等离子体的自身抗体水平对oxLDL也被证明与糖尿病或糖尿病的风险。以前,oxLDL抗体水平低,特别是免疫球蛋白类型的自身抗体,与2型糖尿病相关,因为较低的总oxLDL自身抗体水平已与2型糖尿病的发展女性(32和反向关联标记的葡萄糖代谢8]。此外,有害的角色提出了IgA自身抗体,因为较高的IgA自身抗体增加患糖尿病的风险在以人群为基础的队列虽然没有发现协会IgM自身抗体的水平和葡萄糖代谢之间的一项研究[8]。我们发现IgA水平在2型糖尿病PDR组最高,表明高水平发现不仅是特定疾病而且diabetes-type-specific。之前,它已经表明,这些IgA自身抗体与炎症标记物有关,肥胖和2型糖尿病10]。PDR的炎症和氧化过程是比测距装置和看起来更活跃,与PDR 2型糖尿病,这些过程可能会进一步增加由于当地(或一般)氧化应激。看来IgA自身抗体oxLDL可能有一个角色在2型糖尿病并发症中遇到,至少在微血管水平。其他类型的自身抗体似乎与其他类型的糖尿病并发症相关,因为免疫球蛋白类型自身抗体增加在1型糖尿病33)和肾病的发展可能有致病作用[34]。

在病例对照研究中,我们观察到显著增加的IgA自身抗体水平PDR NoDR或测距装置组相比,这增加2型PDR患者是最突出的。这是第一个自身抗体水平的分析结合oxLDL 2型糖尿病患者视网膜病变。在目前的研究中,一个相对大量的特征包括1型和2型糖尿病患者和测距装置PDR患者进行了研究。尽管如此,因为糖尿病控制,视网膜病变的筛查和治疗博士是严格监管在芬兰,研究人口,而同型的。一些当前的研究可能是限制自由自身抗体的水平和自身抗体绑定到oxLDL形成immunocomplexes [10个体之间的)可能会有所不同。我们的方法不会测量总自身抗体水平或反映总免疫反应的抗原。这是一个普遍的现象在测量血浆样品的循环抗体。此外,等离子体水平的oxLDL自身抗体不特定的视网膜损害也可能影响动脉粥样硬化的严重程度和/或肾脏疾病或可能影响糖尿病对血管壁的影响(35]。也有一些相反的证据使用anti-oxLDL作为一个标记,作为抗体浓度可能反映个体免疫力强度,还有待在将来的研究中解决。

5。结论

我们的研究表明,等离子体水平的IgA类型PDR自身抗体增加,特别是2型患者PDR组最高水平。我们的研究结果强调oxLDL及其自身抗体在PDR的作用,表明他们可能相关性作为我们理解oxLDL博士的指标在糖尿病视网膜病变的发病机理是增加但仍有未开发的领域。阐明炎症和免疫的作用在糖尿病血管并发症的发展值得关注和增加可能为预防和治疗博士带来的工具。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

反抗体被博士请提供Sohvi Horkko研究小组和作者也很感激他们优秀的建议和合作。熟练的技术援助的Saara Korhonen, Marja-Leena Kytokangas,和纱丽Pyrhonen非常赞赏。作者也要感谢Jari Jokelainen和Hannu Vahanikkila宝贵的帮助统计数据。这项工作是支持由眼睛基金会和眼睛和组织银行基金会,芬兰赫尔辛基。