文摘

本研究旨在调查止血剂生物标记物之间的关系,促炎和抗炎细胞因子在1型糖尿病患者慢性肾病。患者分为两组:肾病(蛋白尿肾小球滤过率(GFR) 30毫克/ g和/或< 60毫升/分钟/ 1.73米²),;和没有肾病蛋白尿< 30毫克/ g和肾小球滤过率(GFR)60 mL / min / 1.73米²),。正,γ,il - 6、il - 10和TNF -α流式细胞术测定血浆水平。VWF、ADAMTS13抗原和酶联免疫吸附试验测定肺动脉栓塞等离子体水平和ADAMTS13活动被荧光共振能量转移分析评估。高浓度的正-γ、VWF、ADAMTS13抗原、肺动脉栓塞和减少ADAMTS13活动/抗原比观察肾病患者比那些没有肾病(,,,,、职责)。细胞因子和止血剂生物标志物仍与肾病相关调整后(使用他汀类药物,阿司匹林,血管紧张素转换酶抑制剂,和血管紧张素拮抗剂)。正,γ肿瘤坏死因子-α,il - 10和止血剂生物标志物显著相关。炎症和血凝过快状态与1型糖尿病肾病和它们之间的相互关系可能发挥重要作用在糖尿病肾病发病机制。

1。介绍

慢性肾脏疾病(CKD)是一种很常见的并发症的糖尿病(DM) [1]。它被定义为在肾脏结构和功能异常的存在时间超过三个月,对健康的影响。慢性肾病的诊断标准包括一个或多个生物标志物的存在肾实质损伤,如蛋白尿和/或肾小球滤过率(GFR)低于60 mL / min / 1.73米²在超过三个月(2]。

糖尿病肾病并发症,如肾脏疾病和心血管事件的结束阶段,负责增加糖尿病患者发病率和死亡率(3]。很少有可用的药理治疗治疗肾脏疾病(4]。因此,它是非常重要的研究分子和代谢机制参与的开发和发展在DM肾机能障碍,因为这将导致新的治疗策略的发展。

新出现的证据表明,炎症通路发挥重要作用的发展,糖尿病肾病的进展。据报道,T细胞和炎症细胞因子发挥核心作用在DM(肾脏疾病的发展5]。此外,高血糖可以诱发多种促炎细胞因子的表达,如干扰素γ(INF -γ)、白细胞介素- 6 (il - 6)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α),导致慢性亚临床炎症状态的发展DM (6]。白细胞介素- 10”(il - 10)的缺乏,抗炎细胞因子,也可能与增加炎症状态(7]。

炎症和代谢异常之间的相互关系,DM可能会导致内皮损伤和释放的血管性血友病因子(VWF) [6]。VWF水平增加,内皮功能障碍的生物标志物,在1型与肾脏疾病(DM1)和2型糖尿病(DM2) [8,9]。VWF促进血小板粘附在血管损害站点,它介导血栓形成的发展10]。高浓度的VWF能促进microthrombi形成血管,导致血凝过快地位和肺动脉栓塞的形成,这是一种纤维蛋白降解片段,还与糖尿病肾病相关(11,12]。ADAMTS13 (disintegrin和金属蛋白酶与血小板反应蛋白1型图案,成员13)是一种酶负责乳沟VWF的大型多聚体10]。VWF之间的不平衡和ADAMTS13也可能导致糖尿病患者微血管并发症的发展(13]。

在先前的研究中,我们已经描述了VWF之间的协会,ADAMTS13,肺动脉栓塞DM1患者不同程度的肾功能障碍和我们提出假说,炎症可能与糖尿病肾病患者(血凝过快14]。因此,本研究的目的是调查之间的关联止血剂生物标志物VWF, ADAMTS13,肺动脉栓塞,促炎细胞因子正-γ、il - 6和TNF -α和抗炎细胞因子il - 10在DM1 CKD患者。

2。患者和方法

2.1。道德

所有程序中执行本研究按照1964年赫尔辛基宣言》及其修正案晚些时候或类似的道德标准。本研究的研究伦理委员会批准联邦大学的米纳斯吉拉斯(研究设计院,0392.0.203.000-11)和知情同意是获得所有个体参与者包括在这项研究。研究协议不妨碍任何医疗建议或处方。

2.2。病人

的临床记录所有240 DM1病人接受援助在大学医院的内分泌科门诊服务(医院达斯丹尼)和Santa Casa /贝洛奥里藏特,巴西,从2011年11月到2012年9月,进行了分析。排除标准应用程序后,125名患者的临床和实验室的诊断DM1,根据美国糖尿病协会标准(15),从18岁到60岁,被选为这个研究。

DM1肝脏疾病患者、酗酒、止血剂异常,恶性疾病,急性传染病、怀孕、接受血液透析和肾移植的历史和心血管疾病被排除在研究之外。

2.3。研究协议

一份详细的病史和临床变量得到了每个病人的医疗记录:年龄、性别、身体质量指数(BMI)、糖尿病持续时间、糖尿病并发症如视网膜病变和神经病变,并使用药物如血管紧张素转换酶抑制剂(ACEi),血管紧张素拮抗剂,甲状腺素,抑制素,乙酰水杨酸(AAS)。

DM1患者分为两组:与慢性肾病(蛋白尿≥30毫克/ g肾小球滤过率(GFR)和/或< 60毫升/分钟/ 1.73米²),;没有慢性肾病(肾小球滤过率(GFR)蛋白尿< 30毫克/ g和≥60毫升/分钟/ 1.73米²),。增加蛋白尿和肾小球滤过率(GFR)下降的存在被证实在三分之二的场合,在一段时间内三至六个月(2]。

2.4。生物化学参数的确定

糖化血红蛋白是由immunoturbidimetric方法EDTA全血样品和肌酐是由酶方法血清样本,使用强生干化学技术工具包(邻位的临床诊断)和体外4600分析器。肾小球滤过率(GFR)估计使用慢性肾脏疾病流行病学合作(CKD-EPI)公式基于肌酸酐16]。

尿白蛋白排泄(UAE)决定在收集尿液样本至少4小时的早晨尿潴留,尿肌酐和尿白蛋白规范化。尿白蛋白被immunoturbidimetric评估方法和评估了尿肌酐酶方法,使用强生干化学技术工具包(邻位的临床诊断)和体外4600分析器。

2.5。炎性细胞因子测定

正,γ,il - 6、il - 10和TNF -α流式细胞术测定血浆水平,使用人类的基本装备FlowCytomix(eBioscience),遵循制造商的建议。数据采集和分析在dual-laser进行流式细胞仪口径TM流式细胞分析仪(BD生物科学Pharmingen,圣何塞、钙、美国),使用双相障碍的生物科学CBA软件。

2.6。止血剂生物标记物测定

VWF、ADAMTS13抗原和肺动脉栓塞等离子体水平决定了酶联免疫吸附试验(ELISA),使用IMUBIND VWF工具包(美国Diagnostica IMUBIND ADAMTS13工具包(美国Diagnostica)和ASSERACHROM D-Di工具包(StagoDiagnostica),分别。ADAMTS13活动评估荧光共振能量转移(FRET)试验,使用ACTIFLUOR ADAMTS13活动工具包(Sekisui诊断)。内部interassay系数的变化,分别对VWF 9%和13%,4.0%和7.3% ADAMYS13抗原,< 6%,< 10%为肺动脉栓塞,ADAMTS13活动的4.1%和4.4%。

2.7。统计分析

使用SPSS软件统计进行比较(SPSS 20.0版)。Shapiro-Wilk测试用来测试如果连续变量是正态分布。数据正态分布表示为平均数±标准差,并通过学生的比较以及。数据不是正态分布表示为中位数(百分位数25% - -75%)和被Mann-Whitney相比测试。分类变量表示为频率和使用卡方检验(相比)。止血剂和炎症生物标记物之间的联系与CKD评价二元和多元逻辑回归分析和计算比值比。变量包含在多元逻辑回归分析以前与CKD的二元逻辑回归分析(),包括使用ACEi或血管紧张素拮抗剂,使用他汀类药物,利用原子吸收光谱法。之间的相关性之间的促炎细胞因子和抗炎的炎症和止血剂生物标志物进行使用斯皮尔曼相关测试。差异被认为是重要的时候。

3所示。结果

125 DM1患者的特点和临床变量包含在这个横断面研究展示在表中1。CKD患者BMI较低()和一个更高频率的使用IECA或血管紧张素拮抗剂(),他汀类药物()和原子吸收光谱法()比没有CKD的患者。组之间没有明显差异对年龄、性别、糖尿病持续时间、糖化血红蛋白、甲状腺素的使用,和神经病变的存在。然而,更高频率的视网膜病变组的肾病患者比没有CKD的患者()被观察到。

正,γ肿瘤坏死因子-α等离子体、白细胞介素6、il - 10水平更高的CKD患者比那些没有肾病(,,,职责。)(表1)。CKD患者提出VWF的血浆水平升高,ADAMTS13抗原,ADAMTS13活动,肺动脉栓塞和VWF / ADAMTS13活动比率,降低ADAMTS13活动/抗原比率比那些没有肾病(,,,,,、职责)。VWF / ADAMTS13抗原组之间的比率没有显著不同。

二元逻辑回归分析的结果提出了在桌子上2。一般来说,炎症和止血剂生物标记与CKD相关显著,相应的为1.021(1.008 - -1.035)或INF -γ,TNF - 1.006 (1.002 - -1.011)αil - 6, 1.224 (1.051 - -1.426), 1.002 (1.000 - -1.003), il - 10对VWF 1.003 (1.001 - -1.004), 1.005 (1.002 - -1.007) ADAMTS13抗原,为ADAMTS13活动1.030 (1.009 - -1.051),0.667 (0.490 - -0.907)VWF / ADAMTS13抗原,为1.129 (1.031 - -1.236)VWF / ADAMTS13活动,7×10⁻¹¹(4×10⁻¹⁵1×10⁻⁵)ADAMTS13活动/抗原,为肺动脉栓塞和1.008 (1.004 - -1.012)。这些协会仍然重要,即使调整使用ACEi或血管紧张素拮抗剂,他汀类药物,通过多元回归物流分析和原子吸收光谱法,如图所示(表2)。

促炎细胞因子il - 6,正-γ和肿瘤坏死因子-α提出了一个显著相关()和抗炎细胞因子il - 10 (、0.805和0.813,分别地),呈现在图1。炎症和止血剂之间的相关性提出了生物标记物在表3。正,γ提出了VWF的显著相关性,ADAMTS13抗原,VWF / ADAMTS13活动比率,ADAMTS13活动/抗原比(,0.192,0.220,0.385−职责)。肿瘤坏死因子-α明显与ADAMTS13抗原,ADAMTS13活动/抗原比率和肺动脉栓塞(−0.337和0.217,分别地)。il - 10与VWF表现出显著相关性,VWF / ADAMTS13活动比率,ADAMTS13活动/抗原比率和肺动脉栓塞(、0.192−0.270和0.244,分别地)。il - 6与止血剂的生物标志物没有显著相关。

4所示。讨论

在我们的研究中,高水平的正-γ、il - 6和TNF -α观察在DM1 CKD患者无肾病相比,在协议与其他研究[17- - - - - -22]。

高血糖与增加产量的晚期糖化终产物(年龄),可以绑定到他们出现在内皮细胞表面的受体,平滑肌细胞,成纤维细胞,淋巴细胞,单核细胞和巨噬细胞,导致激活的NF -κB可以提高正-γ转录在T细胞il - 6和TNF -α转录在糖尿病肾小球23- - - - - -25]。大量的正-γ是由辅助T 1 (Th1)细胞,促进活化的巨噬细胞和细胞介导免疫性,这可能调解组织损伤在糖尿病患者26]。肿瘤坏死因子-α可以诱导单核细胞化学引诱物蛋白1 (MCP-1)系膜细胞中表达,导致巨噬细胞在肾小球招聘和积累,加剧肾脏炎症(27]。高血糖症也会导致增强循环oxygenize-2 (cox - 2)表达和前列腺素E2 (PGE2)生产,导致il - 6表达在肾小管上皮细胞,导致肾小球硬化症的发展,间质纤维化,蛋白尿(28]。此外,il - 6和TNF -α细胞毒性细胞因子,可能导致肾小球内皮细胞损伤,从而刺激促凝血的分子的释放和表达,如VWF、纤溶酶原激活物inhibitor-1 (PAI-1)和组织因素。他们还可以抑制抗凝分子的表达,如thrombomodulin,内皮细胞(29日),导致血凝过快的状态,这也可能导致糖尿病肾病的进展8]。

Wolkow et al。30.)报道,il - 6可能与肾病的进展有关DM1微蛋白尿患者和一个荟萃分析表明,il - 6是一个有效的生物标志物预测DM2肾病的进展(31日]。此外,尿TNF -α和可溶性肿瘤坏死因子受体1和2 (TNFR1和TNFR2)已被证明是DM2患者肾小球滤过率(GFR)下降的重要预测因子32,33]。因此,它可以表明高血糖促进肾实质慢性低度炎症的发展,以增加促炎细胞因子水平正-γ肿瘤坏死因子-α和il - 6水平,可能参与了糖尿病肾病的发病机制。

il - 10是由辅助T 2 (Th2)细胞和中扮演一个重要的角色在限制级联的促炎细胞因子激活和表达下调T细胞介导免疫反应(34]。治疗大鼠il - 10减少蛋白尿和炎症状态和减毒肾损伤(35]。较低频率的CG基因型多态性il - 10 -1082 g / A,这是与高表达的细胞因子,与肾病DM2 [36]。CKD患者在我们的研究中,提出了高水平的il - 10比没有肾病的病人,这是在协议与其他研究[34]。这个结果可以部分解释为一种补偿机制,il - 10的等离子体水平增加由于较高的等离子体水平的促炎细胞因子正-γ肿瘤坏死因子-α肾病患者,il - 6在调节炎症状态,由于il - 10是一种抗炎细胞因子。促炎细胞因子之间的显著相关,il - 10在这项研究证实了这个假设。这补偿增加il - 10水平也可以延长DM1患者的肾病。

VWF的血浆水平升高与糖尿病肾病相关的在目前的研究中,也验证了其他作者(9,37]。这是证明一些炎性细胞因子,如正-γ、il - 6和TNF -α,能促进VWF的释放29日,38]。的确,VWF和正-之间的显著相关性γ在这项研究中,这表明炎症和内皮功能障碍之间的相互关系可能参与糖尿病肾病的发病机制。

ADAMTS13抗原和活动等离子体水平也升高DM1 CKD患者比那些没有肾脏功能障碍,这在其他研究中也发现了(39]。这个结果可以解释为一种补偿机制,ADAMTS13合成增加是由于明显的海拔VWF等离子体水平,保持VWF / ADAMTS13抗原比不变。然而,ADAMTS13抗原水平上升并不是伴随着ADAMTS13活动比例增加,因为ADAMTS13活动/ ADAMTS13 Ag)比率较低和VWF / ADAMTS13 DM1肾病患者活动比率较高。

一个在体外研究表明,il - 6可以抑制ADAMTS13活动(40),影响VWF的蛋白水解作用。肿瘤坏死因子-α和正γ呈现显著的负相关与ADAMTS13活动/抗原比率和ADAMTS13抗原显著正相关,但不与ADAMTS13活动,这是与高血糖引起的炎症状态的假设也可能导致减少ADAMTS13的活动,因此,在减少了VWF的蛋白水解作用,导致VWF之间的不平衡和ADAMTS13活动DM1 CKD患者。这种不平衡可能促进microthrombi形成和凝固性过高状态,导致肺动脉栓塞等离子体水平升高,也观察到在DM1 CKD在这个研究和其他研究[11,12]。肺动脉栓塞和TNF -之间显著正相关α在本研究加强了炎症和血凝过快之间的联系。

促炎细胞因子增加血浆水平与心血管疾病的发展有关DM1患者(21]。这些细胞因子可以促进释放促凝血的分子,如VWF [29日),可能可以减少ADAMTS13活动,促进VWF和ADAMTS13活动之间的不平衡,因此,microthrombi形成,可以表明,慢性低度炎症出现在CKD患者,至少部分,负责糖尿病肾病和高心血管风险之间的联系结果。然而,纵向研究仍有必要阐明这个问题。

总之,提高等离子体的促炎细胞因子水平正-γ肿瘤坏死因子-α抗炎细胞因子il - 10、il - 6,止血剂生物标志物VWF, ADAMTS13抗原,ADAMTS13活动,和肺动脉栓塞与DM1 CKD患者和VWF / ADAMTS13活动之间的不平衡和ADAMTS13活动/抗原与炎症相关细胞因子,表明之间的相关性炎症和血凝过快可能导致DM1肾脏疾病的发展和恶化。这些研究结果可以用于指导未来的纵向研究旨在更好地理解与糖尿病肾病炎症和血凝过快发展之间的相互关系,使肾脏疾病进展的新生物标记物的鉴定和引入新的治疗策略。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢FAPEMIG,斗篷和CNPq /巴西。设计师小金玛丽亚s Dusse玛丽亚das夫人卡瓦略,卡琳娜布拉加戈麦斯,和安娜葆拉·费尔南德斯是感激CNPq研究奖学金。