文摘

本研究探讨糖尿病代谢控制之间的关系为代表的糖化血红蛋白水平,早期糖化产品——(果糖胺(FAM)), serum-advanced糖化终端产品(s-AGEs) lipoperoxidation产品(法律流程外包),高级氧化(AOPP)和循环TGF -蛋白质产品β与DM1年轻患者。79名患者的研究小组由DM1(仅8年)。31岁健康儿童被用作控制(1 - 16年)。通过学生的基线特征的患者比较t以及和非参数Mann-Whitney测试(Statdirect),分别。测量参数之间的相关性研究使用皮尔逊相关系数r和斯皮尔曼等级测试。一个被认为是具有统计学意义。糖化血红蛋白测定由LPLC s-AGEs spectrofluorimetrically,法律流程外包和AOPP spectrophotometrically TGF -β通过ELISA。我们的研究结果显示,参数的糖化和氧化DM1患者明显高于健康控制。血清水平TGF -β在糖尿病患者相比,明显高于控制:7.1 (3.6;12.6)和1.6 (0.8;3.9 ng / mL。TGF -β随着年龄的增长和持续时间的DM1显著相关。没有发现任何重大TGF -之间的关系βparameres糖化和氧化。然而,这些结果并不排除TGF -之间的关系β和糖尿病并发症的发病。

1。介绍

糖尿病1型是最常见的自身免疫性疾病之一,特点是绝对或内生胰岛素的绝对缺乏导致高血糖症,被认为是糖尿病并发症的主要原因。糖尿病会导致各种慢性微和macrovascular并发症。糖尿病肾病和心血管疾病发病率和死亡率的主要原因在DM患者。

持续的高血糖与糖化和glycoxidation。在糖化和glycoxidation,形成早期,中级、高级糖化产品(年龄)。积累的时代有几个毒性作用和参加糖尿病并发症的发展1- - - - - -3),如肾病(4),神经病变、视网膜病变和血管病(5]。高血浆水平的年龄也与事件相关的心血管疾病和全因死亡率DM1 [6]。年龄被认为能诱导细胞氧化应激通过互动与特定的细胞受体(7]。

有人建议,糖尿病的慢性高血糖症提高生产活性氧(ROS)从自然氧化葡萄糖,蛋白质糖化,glycoxidation,导致组织损伤(8- - - - - -10]。同时,累积的急性高血糖症可急性氧化压力的来源。大量的研究总结了糖化和氧化的关系11]。控制生产ROS常常会导致损伤的细胞大分子(DNA、脂质和蛋白质)。

一些氧化产品或脂质过氧化可能结合蛋白质和放大glycoxidation-generated病变。多不饱和脂肪酸的脂质过氧化反应,一个激进的反应在活的有机体内,能充分反映增加氧化应激在糖尿病。

高级氧化蛋白质产物(AOPPs)形成在氧化应激通过氯化氧化剂的作用,主要是次氯酸和氯胺。在糖尿病,AOPP的形成是由强化glycoxidation流程,oxidant-antioxidant失衡,共存炎症(12]。AOPPs应该是在结构上类似于年龄和施加类似的生物活性随着年龄,也就是说,促炎细胞因子诱导的中性粒细胞,单核细胞,以及粘附分子(13]。积累AOPP被发现在慢性肾脏疾病患者14]。进一步氧化压力的来源可能是降低抗氧化防御系统,或改变酶通路。年龄及其受体(愤怒)轴刺激氧化应激和生成和随后唤起在肾小管细胞纤维发生的反应,从而在糖尿病肾病(社会层次15]。生长因子TGF -β1是profibrotic细胞因子之一,是一个重要的中介在糖尿病肾病的发病机制16,17]。TGF -β1刺激生产的细胞外基质成分如collagen-IV、纤连蛋白和蛋白聚糖(decorin biglycan)。TGF -β1可能导致肾小球硬化症和因果因素之一myointimal增生气球后颈动脉的损伤。它介导血管紧张素ⅱ调制器对平滑肌细胞生长的影响。旁边profibrotic活动,TGF -β1具有免疫调节功能适应性免疫。年龄引起结缔组织增长factor-mediated通过TGF -肾纤维化β独立1 Smad3信号(18,19]。

本研究探讨糖尿病代谢控制之间的关系由实际的糖化血红蛋白水平,早期糖化产品——(果糖胺(FAM)), serum-advanced糖化终端产品(s-AGEs),脂质过氧化反应产品(法律流程外包),高级氧化蛋白质产品(AOPPs)和循环TGF -βDM1患者。

2。材料和方法

2.1。病人和设计

研究小组包括79儿童和青少年(仅8年)T1DM定期参加第一届儿科、儿童Diabetological斯洛伐克共和国的中心,大学医院、医学院、Comenius大学,布拉迪斯拉发。他们T1DM持续时间至少为5年。我们患者的尿液样本收集3次一夜之间,微蛋白尿时被认为是积极的阿联酋是20至200微克/分钟。没有变化(眼底糖尿病视网膜病变)被发现的眼科医生检查眼睛没有视网膜病变。糖尿病性神经病EMG勘探证实了使用传感器和电机的导电率评估周围神经纤维。控制文件由31岁健康儿童(1 - 16年)。EDTA毛细管血液样本被用来确定糖化血红蛋白和血清样本用于确定家人,s-AGEs,法律事务外包,AOPP。血清样品的存储在18°C /−−80°C。

2.2。阿联酋的确定

阿联酋决心通过immunoturbidimetric试验(Cobas Integra 400 +,罗氏,瑞士),使用商业套装400/400 +。病人的执行分析作为常规监测实验室医学系,大学医院,布拉迪斯拉发。

2.3。果糖胺测定

测定果糖胺我们使用动能,比色测定,随后spectrophotometrical决心在波长530纳米。我们使用1-deoxy-1-morpholino-fructose (DMF)作为标准。血清样本存储在−79°C和解冻一次。这个测试是基于能力的ketoamines减少氮蓝四唑(电视台)甲瓒在碱性条件下染色。甲瓒的生成速率,以530海里,是直接与果糖胺的浓度成正比。测量进行了一个块5样本。3毫升0.5更易与L电视台被添加150毫升的血清和混合是在37°C的环境中10分钟。10分钟和15分钟后吸光度测量的孵化Novaspec分析仪二世生物技术(德国)。

2.4。糖化血红蛋白测定糖化血红蛋白

糖化血红蛋白测定的EDTA毛细管血液后立即获得的低pressureliquid色谱法(美国DiaSTAT LPLC)结合梯度洗脱。在测试之前hemolysate加热消除不稳定的分数在62 - 68°C和5分钟后引入列。血红蛋白种类阳离子交换的洗提列在不同的时间,取决于他们的指控,与应用程序的缓冲区增加离子强度。血红蛋白的浓度测量从列洗脱后,然后用来量化糖化血红蛋白通过计算每个峰面积。仪器校准总是当引入一个新列设置程序进行(Bio-RAD, Inc ., 2003)。

2.5。测定血清年龄

血清年龄AGE-linked特定荧光测定,血清与去离子水稀释20倍,荧光强度测量在346 nm激发后,使用分光光度计在发射418海里珀金埃尔默LS-3,美国。Chinine硫酸盐(1微克/毫升)被用来校准仪器。荧光的相对荧光强度表示为任意单位(美)。

2.6。测定血清时

血清脂质过氧化物测定碘解放spectrophotometrically在365 nm (Pharmacia LKB Novaspec II,生物技术,SRN)。这个试验的原理是基于氧化活性脂质过氧化物,将碘碘。碘可以简单地通过光度计测量在365海里。使用氢过氧化枯烯得到了校正曲线。观察化学计量关系之间的有机过氧化物化验和碘的浓度(20.]。

2.7。测定血清AOPP

AOPPs测定血浆使用之前的方法由Witko-Sarsat et al。21)和修改Kalousova et al。22]。短暂,用分光光度法检测AOPPs读者(fp - 901、化学分析仪、Labsystems、芬兰)和与chloramine-T校准解决方案,在碘化钾吸收在340海里。在标准井,10毫升1.16碘化钾加入200毫升水中chloramine-T解micromol / L(0 - 100) 20毫升的醋酸紧随其后。200年试验井,每毫升血浆稀释1:5在PBS被细胞9频道,以及20毫升的醋酸是补充道。反应混合物的吸光度立即阅读在340 nm读者对包含200毫升的PBS的空白,碘化钾10毫升,20毫升的醋酸。在340 nm chloramine-T吸光度线性0到100的范围内micromol / L, AOPP浓度被表示为微摩尔每升chloramine-T等价物。

2.8。测定循环TGF -β

定量检测TGF -β血清是由酶联免疫吸附测定,用人类TGF -β1酶联免疫试剂盒(BMS249/2本德MedSystem)。简短的描述方法:洗,anti-TGF -β1预镀微型板块添加prediluted(1: 10)血清(100毫升)和“HRP-Conjugate”作为antihuman-TGF——(50毫升)β1单克隆抗体和孵化4小时旋转(100 rpm)。后洗板机(3次)、“三甲衬底解决方案”(100毫升)补充道,孵化10分钟。酶反应是停止通过添加“停止解决方案”(100毫升)。每个microwell读的吸光度HumaReader分光光度计(人类)使用450纳米波长。TGF -β1浓度测定标准曲线准备从7 TGF -β1标准稀释。每个样本和TGF -β1标准稀释进行复制。

2.9。统计分析

Shapiro-Wilk测试执行测试所有连续变量的分布。皮尔逊相关系数的测试r和斯皮尔曼是一个与斯皮尔曼等级相关系数R对于小数量的变量被用来关联参数描述文本,在所有的病人进行了研究。P值小于0.05被接受为显著。所有统计分析进行了使用Excel 2003、8和起源生物抑制剂2009。

3所示。结果

3.1。比较临床和生化参数

患者的临床和生化特征DM1没有糖尿病并发症和控制表1。

如表所示1,有更高水平的年龄(图1(一)),AOPP(图1 (b)),法律流程外包(图1 (c)),及(图1 (d)DM1)患者比健康的控制。

3.2。测量参数之间的相关性

糖化血红蛋白与DM1时间显著相关(;与家人)和(;)(图2(一个))。与家人S-AGEs显著相关(;)。

与家人AOPP也显著相关(;)、糖化血红蛋白(;)和s-AGEs (;)(图2 (b))。

法律流程外包与家人显著相关(;与s-AGEs), (;与AOPP)和很强的(;)(图2 (c))。

TGF -β随着年龄的增长显著相关(;DM1)和时间(;)。与其他参数的关系未达到统计上的显著水平。

4所示。讨论

许多研究处理的影响glycative强调糖尿病并发症的发展。我们还研究了glycative和氧化压力参数对糖尿病并发症presence-absence和在对血糖的补偿23,24]。在这项工作中,我们专注于临床参数之间的关系,研究循环标记糖化或氧化和循环细胞因子TGF -β在年轻患者(儿童和青少年)DM1没有蛋白尿(表1)。微蛋白尿首先是蛋白尿的临床表现定义为尿白蛋白排泄率20到200人μ克/分钟。

TGF -β1有一个非常广泛的活动在体外。例如,TGF -β等重要的细胞功能调节细胞外基质蛋白质的扩散率和生产广泛的细胞类型。的结果归因于TGF -广泛的活动β,许多组织调查循环水平是否TGF -β1可能是各种疾病状态下的改变。只有一个例外,所有的这些研究都认为TGF -β1在等离子体从健康人体的检测水平25]。TGF -β例如在正常妊娠(水平不变的26]。

此外,等离子体TGF -β1浓度明显不同(高达10倍)受试者患有各种疾病,包括自身免疫性疾病、动脉粥样硬化和各种癌症,与对照组相比,25]。如果这样apathopysiological等离子TGF -的角色β1是证明,它可能成为未来疾病风险的预测指标和/或并发症的疾病和治疗干预的目标。

TGF -β1在细胞外基质堆积中起着举足轻重的作用,在糖尿病肾病的发病机制(图3)。TGF -β1可能参与糖尿病的发展和发展微和macrovascular并发症(27- - - - - -29日]。TGF -之间的关系β1在糖尿病和心血管疾病的患者是有争议的30.]。

TGF -β1是一种重要的细胞因子的发展肾损伤患者DM2 [31日]。高血清水平的TGF -β1患者被发现DM2 [31日- - - - - -33]。DM1患者的研究中还发现,改变水平的循环TGF -β1 (34,35]。高浓度的循环TGF -β1是与增生性视网膜病变和糖化血红蛋白(35]。年龄扮演关键角色在糖尿病肾病血管病变与年龄相关沉积和受体年龄(愤怒)upregulation [18]。

在我们的研究中,高浓度的TGF -β1在受试者DM1可能表明趋势等肾和血管内皮损伤的病人。血清TGF -β1可以可能早期糖尿病血管病变的诊断指标之一。然而,TGF -β只有随着年龄的增长和持续时间的DM1相关。没有发现任何重大TGF -循环之间的关系β参数的早期和晚期糖化氧化。然而,糖尿病肾病是糖尿病患者中缺席。

5。结论

TGF -水平在年轻患者血清DM1(儿童和青少年)明显高于健康控制进行了比较。TGF -β只有随着年龄的增长和持续时间的DM1相关。没有发现任何重大TGF -循环之间的关系β参数的早期和晚期糖化氧化。然而,这些结果并不排除TGF -之间的关系β和糖尿病并发症的发病。

利益冲突

作者报告没有利益冲突。

确认

这项工作是支持的批准号从织女星1/0451/12机构。作者感谢l·巴拉克,医学博士,e . Jančova医学博士j . Stanik医学博士和a . Stanikova医学博士关于主题的帮助招聘和评估。