; ) as compared to the control group ( ), followed by a reduction in the A. Blazei-treated group ( ; ). iNOS was found increased in the lung in diabetic rats and reduced in the A. Blazei-treated group. The pulmonary tissue in diabetic rats showed oxidative alterations related to the streptozotocin treatment. The A. Blazei treatment effectively reduced the oxidative stress and contributed to tissue recovery."> 影响双blazei Murill与体外实验糖尿病动物的肺组织 - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果

糖尿病研究期刊》的研究

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糖尿病研究期刊》的研究/2010年/文章

研究文章|开放获取

体积 2010年 |文章的ID 543926年 | https://doi.org/10.1155/2010/543926

法比奥Cangeri Di Naso罗德里戈·诺德梅洛,西尔维亚博纳,亚历山大•迪亚斯摄影记者Marilene Porawski, Alexandre de Barros法尔考Ferraz,马克•弗朗索瓦•里克特诺玛Possa Marroni, 的影响摘要blazeiMurill与体外实验糖尿病动物的肺组织”,糖尿病研究期刊》的研究, 卷。2010年, 文章的ID543926年, 8 页面, 2010年 https://doi.org/10.1155/2010/543926

的影响摘要blazeiMurill与体外实验糖尿病动物的肺组织

学术编辑器:Subrata k Chakrabarti
收到了 2009年10月30日
修改后的 2010年1月07
接受 2010年3月04
发表 2010年5月26日

文摘

本研究旨在评估氧化应激以及治疗效果的摘要blazeiMuril (答:Blazei)与体外大鼠糖尿病。我们使用25 Wistar鼠,DM被注射链脲霉素诱导i.p(70毫克/公斤)。摘要blazeiMuril是日常管理开始发病后40天。答:Blazei测试作为一个水提物对其植物化学的成分,及其体外抗氧化活性也进行了评估。Lipoperoxidation(法律流程外包)和超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活动测定肺组织,以及诱导一氧化氮合酶的存在(间接宾语),通过免疫组织化学。一个anatomopathologic研究也执行。植物化学的筛选答:Blazei发现生物碱、皂苷的存在。提取DPPH-scavenging表现出显著的抗氧化活性和hipoxanthine /黄嘌呤氧化酶化验。肺提供法律服务外包的增加在糖尿病动物( ; )与对照组( ),其次是减少答:Blazei治疗组( ; )。伊诺被发现在糖尿病大鼠肺增加和减少的答:Blazei治疗组。在糖尿病大鼠肺组织氧化链脲霉素治疗相关的改变。的答:Blazei治疗有效地减少了氧化应激,导致组织恢复。

1。介绍

糖尿病(DM)是一种内分泌代谢疾病的发病率和临床相关性高的发病率和死亡率(1]。在其慢性并发症是微观和宏观血管疾病与肾、心血管、神经系统(2]。然而,在过去的二十年里,呼吸功能的改变也被报道在临床和实验研究。肺功能的下降多年来,有关肺体积和容量的降低措施,证明在糖尿病患者受损的代谢控制(3,4]。结构改变的基底膜肺毛细血管内皮也存在于DM alveolus-capillary膜的增厚和减少扩散能力(5,6]。此外,糖尿病患者更容易肺部感染,特别是肺结核,这位大发病率在这个特定的人口(7,8]。尽管所有这些改变体现在临床和实验研究中,很少有研究调查主要physiopathologic机制涉及肺并发症与糖尿病有关。

有4个途径与慢性糖尿病并发症相关,即多元醇通路,蛋白激酶C (PKC)的激活,增加流动己醣胺通路,和先进的通路glycosilation产物(年龄)。虽然以不同的方式呈现在每种情况下,氧化应激(OS)有牵连在上面引用的四个途径(9]。

有大量的证据表明,一氧化氮(NO)的增加,形成的诱导一氧化氮合酶的作用(间接宾语)是负责的一个因素导致并发症的发病机理和DM (10,11]。的使用外源性抗氧化剂可能代表一个伟大的治疗的潜在治疗DM (12- - - - - -14]

的担子菌类摘要blazeiMurill (答:Blazei),俗称“阳光蘑菇”,原产于巴西和日本广泛种植,因为它的药用价值。这种蘑菇是传统上用于治疗动脉粥样硬化、肝炎、高脂血症,皮炎,和癌症,它已被证明有immunomodulating和体内和体外抗诱变剂的影响。多糖α多糖和β多糖的功能负责免疫和antitumoral刺激(15- - - - - -17]。

答:Blazei已经被证明是有益的胰岛素抵抗与2型糖尿病相关,但没有研究表明抗氧化剂的潜力答:Blazei体内在DM (17]。因此,本研究旨在评估氧化应激以及治疗效果的答:Blazei与体外实验DM动物的肺组织。

2。方法

2.1。蘑菇

脱水蘑菇的物种摘要blazeiMurill (C型)是一个来自路易斯安东尼奥Graciollo博士的礼物什么学系的圣保罗州立大学(UNESP),巴西。

2.2。的制备答:blazei水提物

风干了的部分(100克)被注入研磨和水提取制备(1/10蘑菇/溶剂)。注入站在室温下30分钟。冷却和过滤后,冻干法提取被冻结和集中的五天一夜之间,为了获得答:blazei水提物。

2.3。化学药品和试剂

2-Diphenil-1-picrylhidrazyl (DPPH)、次黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶,trolox,水杨酸是购自σ(圣路易斯,美国)。

2.4。植物化学的筛选

植物化学的分析(黄酮类、单宁、蒽醌类、生物碱、皂甙、香豆素和心脏苷)答:blazei是根据Harborne[描述的方法18]。后的薄层色谱分析系统和开发人员由瓦格纳和Bladt表示19]。

2.5。次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶试验

方法用来测定羟自由基清除能力的提取是基于欧文的方法等。20.]。简单,提取溶解在分析缓冲区(次黄嘌呤、铁(III), EDTA和水杨酸)在2.0毫克/毫升的浓度和稀释适当(一式三份)测定缓冲区的最后一卷1.0毫升范围0.1 - -2.0毫克/毫升。一个5 L整除的黄嘌呤氧化酶在3.2米(NH消失了4)2所以4是添加到启动反应。样品管是孵化3小时37°C,反应完成的时间。30 L整除的反应混合物进行了分析通过高效液相色谱使用色谱条件被欧文et al。21,22]。色谱分析是使用梯度基于甲醇/水/醋酸μBondaPak C18反相柱和检测在325海里。高效液相色谱设备有2695模块和紫外检测器分离2487。水杨酸和次黄嘌呤的羟基化监控= 325 = 278海里,分别。dihydroxyphenols的数量(2,5-dihydroxibenzoic酸和2,3-dihydroxibenzoic酸)(2 5-DHBA和2 3-DHBA)产生的羟基自由基(OH•)攻击水杨酸决心从标准曲线与纯dihydroxyphenols各自准备。

2.6。DPPH-Scavenging化验

清除DPPH自由基的测定使用修改后的方法描述了山口et al。23)的不同methanolic植物提取物添加到Tris-HCl(100毫米)缓冲区,pH值7.0,包含250毫米DPPH溶解在甲醇。至少六种不同稀释的提取进行了测试,并允许站在黑暗中20分钟,在517 nm吸光度测量之前使用日本岛津公司分光光度计模型uv - 1602 pc(日本京都)。实验进行了一式三份。抗氧化活性(AOA)表示为IC50(抑制浓度 克/毫升的样品或积极控制必要DPPH的吸光度降低50%比消极的控制)。集成电路越低50越高,AOA [23]。

2.7。动物和实验协议

使用的实验协议符合建立的规范伦理和健康研究委员会的研究和研究生的研究医院丹尼的阿雷格里港以及原则涉及动物的研究(NAS)。只有雄性Wistar鼠被使用,从育种获得殖民地的皇家研究院Ciencias Basicas哒Saude哒大学联邦做南里奥格兰德(UFRGS)。动物的平均体重的研究是200 - 300克。他们被关在一个12:12小时光/暗周期(光从早上7点到下午7点)温度控制的环境中(22±4°C)。

DM是由单一注射链脲霉素诱导i.p。(STZ,σ化学公司,圣路易斯密苏里州、欧洲大学协会)的剂量(70毫克/公斤体重24]。STZ是溶解在柠檬酸钠缓冲(0.1米,pH值4.5)和管理在左腹部区域的动物在缓冲溶液溶解后大约10分钟。对照组的动物只有氯化钠ip 0.9%用于溶解STZ同样体积的缓冲。的答:blazei提取被稀释的浓度0.1 g / mL蒸馏水溶液(10%),左2小时在室温下(25]。管理路线胃强饲法的最终解决方案2毫升和治疗开始从糖尿病诱导的40天。动物被随机分配在不同的组:控制(CO),糖尿病治疗生理盐水(DM)和糖尿病治疗答:blazei(DM +答:blazei)。收集血液样本从retro-orbital丛诱导前的一天,和2和后30天的开始实验。最后60天的试验动物被放血诱导安乐死,麻醉后xilasine和氯胺酮。血液从retro-orbital丛采样和肺是切割出来,保存在4%甲醛进行组织学分析。左肺切除和冷冻−80°C的额外的分析。

2.8。血清分析

血液样本被放置成与肝素(Liquemine)测试管,以避免凝结。然后材料离心机在1.800 g 15分钟。沉淀是丢弃和等离子体移除。

确定葡萄糖、胆固醇和甘油三酯水平我们使用了比色酶试验(Kit Labtest生物Diagnostica)和吸光度测定的分光光度计(卡里3 e-uv -可见分光光度计瓦里安)。动物葡萄糖浓度超过250 mg / dL (26)被认为是糖尿病。

2.9。生化分析氧化应激和抗氧化试验

肺与9毫升的均质磷酸盐缓冲剂(氯化钾140毫米,磷酸20毫米,pH值7.4)每克组织。这些肺匀浆中的蛋白质含量是决定使用一个标准的解决方案的牛白蛋白根据Lowry et al。27]。

肺lipoperoxidation是由硫代巴比土酸活性物质的方法(TBA-RS) [28]。

肺组织超氧化物歧化酶(SOD)的活动确定了利用一种基于技术抑制肾上腺素肾上腺素红形成的自然氧化(29日]。过氧化氢酶(CAT)活性测定肺组织中的其他地方描述(30.)和selenium-dependent谷胱甘肽过氧化物酶的测定肺组织是通过测量的技术组成的NADPH氧化谷胱甘肽还原酶(31日]。

2.10。组织学研究

组织学分析样本嵌入在石蜡两次。使用切片机,石蜡块切成3 - 连续的部分。在染色阶段,幻灯片是沉浸在hematoxylin-eosin和picrosirius。在脱水阶段,经历了三个集装箱的结构与二甲苯进行绝对酒精和两个容器。阅读了与光学显微镜(尼康Labophot)在100 。分析是由2病理学家谁不知道研究细节。

2.11。免疫组织化学检测伊诺

免疫组织化学反应是在肺组织中执行部分通过streptavidin-biotin过氧化物酶的技术复杂的(StreptABC DAKO)。幻灯片以前由硅烷涂层解决方案(摘要、σ)在4%丙酮稀释。3 - 米厚的部分得到使用机械切片机。部分被deparaffinized先后沉浸在二甲苯和辐照热乙醇和提交给抗原复苏的高压锅(绮年华,Nigro)使用柠檬酸缓冲(10毫米,pH值6.0)15分钟。过氧化物酶阻断了使用双氧水为3%,其次是孵化主要抗体NOS-2(进气阀打开,1:40,Santa Cruz)。的反应是标有diaminobenzidine(轻拍,σ)解决方案60毫克%和哈里斯的苏木精复染色(默克公司)。为每个反应积极的控制被用来组织已知阳性抗体测试。两个消极的控制也被第一个没有主要的抗体和第二个通过删除二级抗体反应步骤。例视为iNOS-positive棕色颜色至少中等强度时可见细胞胞浆和10%以上的细胞。

2.12。统计分析

数据的平均值±标准偏差(SD)和通过统计软件SPSS 15.0进行分析。变量是通过Kolmogorov-Smirnov测试测试正常。单向方差分析(方差分析)是用于组间差异。学生Newman-Keuls事后测试是用于非参数的参数变量和克鲁斯卡尔-沃利斯。使用水平的意义

3所示。结果

3.1。植物化学的分析

植物化学的分析答:blazei皂苷、生物碱的存在。等次生代谢物蒽醌类、强心苷、香豆素、黄酮类化合物、fenolic酸和单宁没有检测到。

3.2。次黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体外测定

提取物的体外抗氧化活性测定通过监控生产羟基安息香酸(DHBA)作为一个产品的氢氧自由基攻击hipoxanthine-xanthine氧化酶测定水杨酸。减少总氧化产品的浓度的函数答:blazei水提物添加到分析导致剂量依赖性的方式的体外抗氧化能力。的水提物答:blazeiDHBA物种的形成都减少到45.2%的最高浓度(2毫克/毫升)使用。的集成电路50值的计算,发现0.99毫克/毫升。第二种类型的蘑菇(地区香菇)作者没有发现生物碱的存在被用作控制样本(IC501.95毫克/毫升)。Trolox(维生素E)是作为积极的控制并显示一个集成电路500.34毫克/毫升(图1)。

3.3。DPPH-Scavenging化验

的自由基的清除效果答:blazei水提物,l . edodoes水提物以及trolox,积极控制,进行了测试,利用DPPH自由基清除试验(23]。的集成电路50答:blazei水提物和l .香菇提取表所示1。trolox的自由基清除作用的结果(IC50= 0.02毫克/毫升),用作积极控制,用于验证试验。尽管提取物的自由基清除能力降低(更高浓度的吸光度是必要的,以减少DPPH 50%)比trolox的影响,答:blazei水提物(黄烷酮含量最高)集成电路提出了有前途的抗氧化活性501.77毫克/毫升。l .香菇,另一方面,最低清除活动(IC50= 3.22毫克/毫升)在协议缺乏alckloids种蘑菇。


样本 抑制DPPH (%)
浓度 0.1 克/毫升 0.25毫克/毫升 0.5毫克/毫升 1毫克/毫升 2毫克/毫升 集成电路50(毫克/毫升)

Trolox 91.27 93.53 96.71 99.03 99.89 0.02±0.00
摘要blazei 7.28 10.77 17.09 46.32 48.81 1.77±0.08
地区香菇 2.19 4.68 8.33 18.56 30.63 3.22±0.12

平均值±标准偏差的3个人的决定。结果是基于测量值在20分钟。Trolox作为积极的控制。* DPPH: 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl。
3.4。体重和血清分析

糖尿病动物的体重显著减少,和答:Blazei对待动物体重更(表2)。的答:Blazei提取明显降低糖尿病大鼠血糖( ),但血糖曲线在糖尿病和治疗动物相似。然而,答:Blazei显著降低总胆固醇和甘油三酯水平( )。DM和DM +答:Blazei组不同的样本大小由于更高的死亡率的DM组的动物实验。


N 重量(克) 葡萄糖(mg / dL) 总胆固醇(mg / dL) 甘油三酸酯(mg / dL)

有限公司 5 442.00±10.95 244.17±68.01 28.35±4.62 61.33±33.43
DM 8 306.22±32.11__ 482.37±36.81 * 42.88±6.44 * 161.00±76.80# #
DM +答:Blazei 12 282.00±44.11# 468.19±62.46# 33.99±5.23 * * 45.87±10.61 * *

数据显示为平均数±标准差。答:控制、糖尿病:糖尿病和DM +答:Blazei:糖尿病+双blazei蘑菇。
公司与DM。
DM与DM +答:Blazei。
公司与DM。
,DM和DM +答:Blazei。
公司与DM。
3.5。生化分析和氧化应激

答:Blazei显著降低( )lipoperoxidation水平取决于TBA-RS(表3)。然而,抗氧化酶SOD和CAT活性组没有任何区别。酶GPx活性显著增加糖尿病组和减少答:Blazei治疗组( )。


TBARS (nmol /毫克的蛋白质) SOD (U /毫克蛋白) 猫(pmoles /毫克蛋白) GPx (nmol /毫克蛋白)

有限公司 0.18±0.02 76.33±3.39 0.10±0.04 0.41±0.07
DM 0.43±0.09 * 69.32±11.73 0.18±0.07 1.10±0.53 *
DM +答:Blazei 0.33±0.04 * * 74.84±8.75 0.15±0.03 0.45±0.09 * *

数据显示为平均数±标准差。答:控制、糖尿病:糖尿病和DM +答:Blazei:糖尿病+双blazei蘑菇。
公司与DM。
DM与DM +答:Blazei。
3.6。组织学分析

STZ-induced糖尿病造成严重血管损伤肺组织(图2 (c)),肺泡变化如隔膜破裂也证明。Picrosirius染色显示扩张的alveolocapillary空间连接组织的糖尿病组(图2 (d)),此模式的明显逆转Ab-treated组(图2 (f))。

3.7。免疫组织化学分析,进气阀打开

3显示伊诺分布在肺组织通过免疫组织化学检测。积极的污点在布朗的肺支气管上皮细胞和毛细血管内皮DM组表示伊诺积极性。伊诺染色并不明显答:Blazei集团和公司组中缺席。

4所示。讨论

自由基的清除效果的结果答:blazei水提物在hipoxantine /黄嘌呤氧化酶体外试验、DPPH自由基清除实验,表现出显著的体外抗氧化活性。在分析提取表示更高的抗氧化活性,与水提物的比较l .香菇,这是另一种蘑菇,只提出了皂苷,但不是生物碱、黄酮类化合物或单宁。里贝罗等人提出的,相关的抗氧化活性可能存在生物碱的蘑菇。换句话说,更高的生物碱浓度产生更好的抗氧化活性(32]。

本研究的主要发现是减少肺lipoperoxidation与体外大鼠糖尿病治疗后摘要blazei。先前的研究显示glycemia-reducing效应,降低胰岛素抵抗,提高的释放 胰腺细胞(17,33]。然而,答:Blazei这里治疗显示出有益的影响关于氧化应激相关的变量,尽管不降低高血糖。

金等人描述antidiabetogenic的影响 -glucanes提取答:Blazei及其酶水解oligosacharides,评估在体外和体内的文化影响 胰腺细胞和在动物体外糖尿病。治疗后, -glucanes oligosacharide动物提出了降低血糖,甘油三酯和胆固醇在动脉粥样硬化和活动(34]。在我们的研究中,使用总提取物进行治疗答:Blazei,没有分离的化合物,这是可能的解释缺乏antiglycemic行动。

的提取答:Blazei体外和体内抗氧化活性,然而治疗显著降低动物的重量。这个事实可以解释由于高剂量的答:blazei提取在这个实验中,使用不同的剂量用于其他研究并不证明减肥(34]。然而,在一项研究评估90天subchronic毒性水提物的老鼠,没有一致的治疗相关的临床症状的变化,体重和食品消费的剂量2654毫克公斤−1对于雄性老鼠,剂量高于使用在我们的研究(15]。更多的研究是必要的评估的毒性作用。Blazei在这些剂量,分析特定的变量。

GPx糖尿病组显著增加,显著降低答:Blazei治疗。GPx可以占的增加减少减少谷胱甘肽的水平,因为它是主要的衬底规范其活动。Gumieniczek等人在实验表明,DM存在肺部氧化应激的减少lipoperoxidation抗氧化酶活性和增加。周后感应后这种变化是更重要的。在DM有减少铜、Zn-SOD活动和过氧化氢酶活性的增加35]。在我们的研究中,SOD和过氧化氢酶活性变化没有一个不同的组。一个可能的解释为我们发现不同于Gumieniczek是在我们的研究中抗氧化酶早些时候进行的分析。

在我们的实验模型大量肺系统观察组织学改变。这些改变是在协议与文献报道7,36,37),特别是在连接组织的增加和增厚的基板通过picrosirius染色技术观察。治疗后,答:Blazei这样的改变变得不那么明显。分子间的形成与胶原分子间结合,造成glycosilation的过程中,会导致结构性变化组织蛋白质如增加刚度,抗消化蛋白水解和细胞外基质(包括纤连蛋白、胶原α2、类型III, IV和VI胶原蛋白,laminina) [38,39]。在我们的研究中,这一过程的主要因素降级治疗后答:Blazei可以解释为减少氧化应激导致的损害了肺lipoperoxidation的减少。

长期高血糖的状态与变化在伊诺表达式在多个组织(10]。的免疫组织化学分析研究伊诺是显著提高糖尿病大鼠的肺组织和动物被处理时显著降低答:Blazei。研究已经证明,mRNA的表达内皮一氧化氮合酶(以挪士)降低,而伊诺可能增加一起代环鸟苷酸(c-GMP) [14]。

在最近发表的一项研究中,lipoperoxidation,超氧化物歧化酶活性,伊诺的分布和以挪士亚型在糖尿病大鼠的肺组织进行评估。增加氧化应激同时增加伊诺的观察糖尿病大鼠的肺组织,在抗氧化治疗组逆转α-酸(40]。这些发现是在协议与报道在目前的工作,如发现氧化应激增加,组织学肺部改变,抗氧化剂治疗的效果在这个DM模型。

目前的研究表明的有益作用答:Blazei水提物对氧化应激变量和肺morphopathology在体外糖尿病。这些发现可能对更好的理解作出了重大贡献的肺生理病理学DM。我们的研究也是相关的,关于治疗的潜力答:Blazei

承认

这项工作是支持由巴西机构“底部de Incentvo尽管e Eventos (FIPE)医院丹尼·德·阿雷格里港(HCPA)”,和“Laboratorio de Hepatologia e Fisiologia实验达大学联邦做南里奥格兰德(HCPA / UFRGS)”。

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