对传统的应用阿托伐他汀强化Proapoptotic潜力Antileukemic代理在体外

文摘

之前它已经表明,他汀类药物用于高浓度显示antileukemic潜在对慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞。然而,他们使用仅在临床实践中可能是有限的由于高剂量的这些药物的副作用。另一方面,结合治疗白血病的他汀类药物和传统的化疗是可疑的,因为未知的第一标准治疗结果的影响。本研究揭示了在体外阿托伐他汀增加cladribine的proapoptotic潜力和mafosfamide在慢性淋巴细胞白血病细胞分离外周血的病人。此外,与上面的他汀类白血病细胞处于敏感状态预孵化CM-induced凋亡甚至在小的药物浓度。一起使用阿托伐他汀或其次是应该考虑常规化疗的治疗白血病的治疗选择。有趣的是,CM-resistant患者可能从阿托伐他汀政府最大的好处。

1。介绍

尽管大量的治疗选择介绍了最近,慢性淋巴细胞白血病(CLL)仍然还是不治之症。淋巴细胞水平的增加是由于细胞凋亡的减少过程和提高生存由于白血病细胞的内在属性和微环境刺激。这种疾病是高度异构可变临床病程和预后1]。慢性淋巴细胞白血病治疗的新策略仍在开发(2- - - - - -4]。目前,关注重点是单克隆抗体,也就是说,美罗华和阿仑单抗CD20目标和CD52抗原,分别。美罗华、环磷酰胺和氟达拉滨组合(RCF)被认为是黄金标准在慢性淋巴细胞白血病的治疗5]。然而,一些患者被排除在免疫疗法以来RCF方案增加的风险myelosuppression [2]。已知的过敏反应或过敏小鼠蛋白质是单克隆抗体的使用禁忌。此外,利妥昔单抗政府增加显著发展严重感染的风险(6]。因此,需要非常仔细的治疗慢性淋巴细胞白血病患者机会性,复发性或慢性感染。此外,过敏性肺炎是罕见的,但威胁生命的副作用表明的抗体注射利妥昔单抗中止(7]。与免疫治疗的研究进展,同时改善传统化疗效率也应该发生。

无数的缺陷已经显示在慢性淋巴细胞白血病细胞的脂质代谢。与正常的B淋巴细胞、白血病细胞表现出过度的脂蛋白脂肪酶(LPL),促进血清脂蛋白甘油三酯的水解的酶(甘油三酯)游离脂肪酸(FFA) (8]。LPL生成过氧物酶体扩散国激活受体的配体α(PPARα)参与脂肪酸β氧化(9]。核受体的高水平已经表示在静止的慢性淋巴细胞白血病细胞和它与白血病的发展。LPL以及PPAR的浓度升高α淋巴细胞的改变他们的FFA代谢向更高的利用率(8,9]。此外,似乎除了LPL分解脂肪的活动必须服务于一个额外的重要功能细胞,放松管制的可能与激进的白血病(8]。

穆勒et al。10]都表明,慢性淋巴细胞白血病和急性淋巴细胞白血病)患者具有降低血清高密度脂蛋白(HDL)水平,以及增加白血病淋巴细胞内胆固醇酯的水平相比,正常的。此外,引用科学家观察到高水平的胆固醇酯化的细胞分裂素处理,而当肿瘤淋巴细胞的减少水平已经暴露于抑制剂的玻璃纸扩散等mTOR抑制剂,RAD。他们建议胆固醇酯化可能是细胞增长模式控制通过自由胆固醇浓度的调节脂质筏。因此,他汀类药物,药物影响胆固醇生物合成3-hydroxy-3-methyl-glutharyl-coenzyme(β)还原酶抑制作用,可能是有前途的化合物针对cholesterol-dependent通路白血病细胞的生长和增殖。

尽管不是完全理解,他汀类药物的抗癌活性已经被很好地记录下来了(11- - - - - -13]。认为主要有抑制甲羟戊酸途径(MVA)分子的来源是非常重要的对细胞的生存,也就是说,泛醌,多萜醇,通过焦磷酸(FPP) geranylgeranyl焦磷酸(GPP),等等(14- - - - - -17]。这些化合物确定适当的细胞呼吸,糖蛋白组装、或prenylation蛋白参与细胞内信号作用(ρ,Ras、Rab和Rac),分别为(18,19]。此外,据报道,他汀类药物表达下调的组蛋白甲基转移酶剂zeste同族体2 (EZH2)在结直肠癌细胞,导致p27^KIP1超表达、细胞周期阻滞和抑制肿瘤恶化的20.]。

之前它已经表明,他汀类药物显示细胞毒性也可能对慢性淋巴细胞白血病细胞在体外(21,22]。白血病淋巴细胞似乎表明对中间产品的需求特别高的胆固醇生物合成或胆固醇,这使得它们更容易堵塞的β-还原酶活性比正常细胞(22]。

当前研究的目的是比较的proapoptotic活动合成化合物,阿托伐他汀,CM (cladribine + mafosfamide /环磷酰胺)药物组合通常用于慢性淋巴细胞白血病的治疗。此外,我们旨在建立阿托伐他汀对CM的antileukemic活动对原发肿瘤外周血单核细胞(PBMCs)在体外。

2。实验

2.1。病人

PBMCs得到从血液24未经治疗的慢性淋巴细胞白血病患者(18人,6女性)之前介绍的抗癌治疗。病人的特点给出了表1。

慢性淋巴细胞白血病诊断标准的临床及免疫学的基础上标准和临床阶段。疾病分类根据修改Rai系统(23]。白血病PBMCs被CD5的表达特点,CD19和CD23表面抗原和monoclonality免疫球蛋白轻链。本研究经当地伦理委员会批准的医科大学Łodź(RNN数量/ 143/10 /克)和所有的病人给他们的书面同意。

2.2。隔离的单核细胞

PBMCs刚获得外周血中分离的样品(EDTA)收集histopaque - 1077密度梯度离心法(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.3。荧光原位杂交(FISH)

鱼的间期核执行PBMCs获得未经治疗的慢性淋巴细胞白血病患者如前所述。以下使用商用探针:大规模集成电路D13S319 (13 q14.3) / LSI 13 q34 CEP 12探针,LSI p53 (17 p13.1) / LSI ATM (11 q22.3)探针(Vysis /雅培分子,美国)。对于每一个探测器,200间期细胞核被拿下。估计截止水平如下:8%德尔(13)(q14.3),德尔(11)(q22.3),德尔(17)(p13.1)分别为5%,三倍体。

2.4。仪分析ZAP70表达式

在一些情况下,细胞内的表达的化验ζ链——70年(TCR)相关的蛋白激酶在CD5 (ZAP70)⁺/ CD19⁺从以前未经治疗的慢性淋巴细胞白血病患者白血病细胞。执行检测ZAP70透化作用和染色过程的表达载体分子探针。简单地说,50μL外周血样本是孵化FITC-conjugated anti-CD5和PerCP-conjugated anti-CD19抗体(或适当的同形像控制)正欲在室温下15分钟在黑暗中。100年之后,μL固定介质的表达载体分子探针是添加到每个样本。15分钟后孵化样本洗3毫升PBS + 0.1% NaN₃+ 5%的边后卫和离心5分钟在300×g。然后,上层清液吸气,100μL透化作用介质的表达载体分子探针和PE-conjugated anti-ZAP70抗体(或相应的同形像控制)BioLegend(美国圣地亚哥,CA)补充道。孵化后(20分钟),血细胞样本在3毫升PBS + 0.1%南再次清洗₃+ 5%的边后卫,使离心5分钟在300×g。然后,上层清液被删除,而细胞resuspended鞘液和立即用流式细胞仪分析第二章(美国正欲,圣何塞,CA)流式细胞分析仪。

2.5。细胞培养和药物治疗

洗后的PBMCs磷酸盐(PBS)的细胞样本(2×10⁶/毫升)resuspended RPMI 1640中有10%胎牛血清补充2毫米谷酰胺,100μg / mL链霉素和100 U /毫升青霉素。PBMCs孵化24和48 h在标准条件下,也就是说,在37°C的氛围中5%的股份有限公司₂。模型细胞暴露在阿托伐他汀在10μ25米,μ50米,μM, cladribine和mafosfamide的组合(环磷酰胺的活性形式),以及cladribine mafosfamide和阿托伐他汀。细胞样品没有药物(s)或DMSO(阿托伐他汀的溶剂)被认为是控制(Ctr)和车辆控制,分别。Cladribine和mafosfamide被添加到培养基的浓度与血清中浓度的慢性淋巴细胞白血病患者化疗期间CC (Cladribine +环磷酰胺):0.175μM和2.5μM,分别。

阿托伐他汀是购自LKT实验室Inc . Cladribine获得了研究所的生物技术和抗生素,Bioton(华沙,波兰),而mafosfamide来自巴克斯特肿瘤学GmbH德国法兰克福。

此外,评估是否预处理慢性淋巴细胞白血病细胞的探针的小剂量阿托伐他汀影响细胞对常规化疗药物敏感性,也就是说,cladribine mafosfamide, PBMCs孵化了0.1μ米和1μ阿托伐他汀的米24 h。然后,改变了培养基和细胞暴露在厘米下48 h。

2.6。细胞生存和凋亡/坏死率

评价白血病PBMCs的可行性,以及凋亡和坏死细胞的百分比PBMCs暴露人群的膜透性向测试代理/死细胞凋亡工具包表达载体分子探针(尤金,或者)根据制造商的协议。单核细胞群是封闭的基础上FSC(向前散射)和SSC(散射)参数。分析了24和48 h后细胞暴露在研究药物和量化使用光敏电阻II血细胞计数器(美国正欲,圣何塞,CA)。

4实验细胞生存能力和细胞凋亡率与阿托伐他汀预培养后进行评估,以及24和48 h后暴露在厘米。获得的结果与coincubation PBMCs来自同一个患者的阿托伐他汀与CM 48 h。

2.7。Caspase-3激活

评估的百分比PBMCs caspase-3活性形式的控制,药物治疗的细胞群体育活动caspase-3凋亡工具包(圣地亚哥BD Pharmingen CA)使用。48 h的孵化后的分析与测试人员根据制造商的协议。测量是由光敏电阻二流式细胞分析仪(美国正欲,圣何塞,CA)。

2.8。DNA内容

DNA含量PBMC样本估计24和48 h后孵化有/没有测试药物,因为它曾描述(22]。简单地说,1×10⁶细胞被固定为70%乙醇和孵化−20°C 2 h。随后,细胞被孵化的核糖核酸酶的存在(在PBS的最终浓度为0.5毫克/毫升)和碘化propidium(π;在PBS的最终浓度为0.01毫克/毫升)30分钟,在黑暗中在37°C。然后,π测定的荧光流式细胞术(流式细胞仪第二章;美国正欲,圣何塞,CA)和sub-G1细胞的数量估计FL-3直方图的基础上使用流式细胞仪天后软件(美国正欲,圣何塞,CA)。一万事件是为每一个分析检查。

2.9。蛋白质分离和免疫印迹

白血病PBMCs细胞溶解和免疫印迹分析之前准备描述(24]。蛋白质在细胞溶解产物定量执行根据洛瑞法(25]。大约50μg蛋白的加载每车道和探测器分离板凝胶,通过sds - page到8%和12.5%取决于分析蛋白质的分子量,分别为(26]。然后,根据Towbin蛋白质转移到止动剂P et al。27)和彩色可逆0.05%朱红色年代解决证实他们的平等的加载。随后,膜被孵化的脱脂奶粉5% TBST缓冲区(10毫米Tris-HCl (pH值7.5),150毫米氯化钠,和0.05%渐变20)一夜之间连续1 h在室温下孵化与特定抗体的稀释:anti-PARP-1 (1: 5000;sc - 7150), anti-lamin B (1: 2000;sc - 6216), anti-caspase-9 (1: 5000;sc - 8355), anti-Mcl-1 (1: 5000;sc - 819), anti-Bcl-2 (1: 1000;sc - 492)和anti-Bax (1: 1000;sc - 1035),从圣克鲁斯生物技术(圣克鲁斯,CA) anti-caspase-3(1: 1000)从Sigma-Aldrich anti-ZAP70(1: 1000)从细胞信号,以及anti-actin(1: 1000)抗体从Abcam(英国剑桥)。洗后三次TBST缓冲区,膜被孵化与共轭二次血清碱性磷酸酶(Sigma-Aldrich) 2 h和洗3次。抗原抗体复合物在孵化后可视化磷酸酶底物的膜解决方案包含:0.33毫克/毫升的硝基蓝四唑,0.17毫克/毫升的5-bromo-4-chloro-3-indolyl磷酸盐在100毫米Tris-HCl (pH值9.5),100毫米氯化钠,MgCl 5毫米₂。在一些实验中,二次抗体结合辣根过氧化物酶的应用。然后,Novex合显色底物(三甲)从英杰公司申请检测的蛋白质。

2.10。统计分析

所有的结果提出了均值±金丝统计数据分析是由方差分析与图基的事后测试。阿托伐他汀和阿托伐他汀的组合获得的数据与CM比较结果DMSO治疗细胞(车辆控制),而厘米组合有效性与模型细胞孵化没有药物(Ctr)。结果被认为是具有统计学意义。

此外,魏克森讯号等级测试是用来统计评估测试药物的细胞毒性的差异在PBMC CM-sensitive和CM-resistant组织样本。

3所示。结果与讨论

3.1。鱼的分析

在当前的研究中,18 4分析慢性淋巴细胞白血病患者表示正常鱼结果(见表1)。最常见的染色体异常检测在慢性淋巴细胞白血病患者的检查小组被删除13 q14(8例),通常在~ 70%的慢性淋巴细胞白血病患者和与预后良好作为唯一的异常(2]。删除17 p13和11 q22-q23发现1和2慢性淋巴细胞白血病患者进入鱼分析,分别。这些染色体畸变均与损失的函数TP53肿瘤抑制基因以及抵抗嘌呤类似物和最相关(自动取款机)和最糟糕的(TP53)预后[1,4,5]。两个CLL患者表现为11的时候一起13 q14删除,删除11的时候与德尔13 q14三倍体12,分别。三染色体细胞12作为唯一异常只是一个病人中观察到。

在当前的研究阿托伐他汀的proapoptotic潜力,以及结合厘米,不相关的高风险的存在预后标记,如德尔17 p13或del 11 q22-23。

3.2。细胞生存和凋亡/坏死评估

来验证是否规定的药物经常对年长人与高胆固醇血症可能是盈利或反向不利的治愈慢性淋巴细胞白血病患者通常超过60岁我们测试了高和低浓度的阿托伐他汀对其公认的proapoptotic潜力对慢性淋巴细胞白血病细胞。

PBMCs的可行性从血液获得24个CLL患者进入研究本质上是减少了阿托伐他汀单独使用(A),以及阿托伐他汀结合cladribine mafosfamide (CM),也就是说,厘米+ A的化验检查的早期凋亡细胞数量在人口调查暴露在使用代理确认proapoptotic阿托伐他汀的潜力,以及传统的应用组合,厘米。平均测试药物的细胞毒性和proapoptotic活动中提供数据1(一)和1 (b)。嘌呤模拟和alkylator展品强proapoptotic潜力,特别是在48 h。细胞暴露于CM 24小时效率不及24小时暴露在25μ米和50μ阿托伐他汀。然而,48 h后25的影响μM化合物与CM的行动组合。虽然没有建立最大剂量的他汀类药物可用于人类没有诱导的细胞毒性,这对抗癌治疗药物浓度可能难以实现。因此,我们评估的潜力厘米+结合在慢性淋巴细胞白血病细胞诱导细胞凋亡。CM和10的综合治疗μ阿托伐他汀(CMA10)比厘米更有效。antileukemic潜在的改善测试药物相比,厘米就约10%的膜透性评估/死细胞凋亡工具包。模型的48小时孵化细胞样本与50厘米结合使用μ阿托伐他汀与广泛的晚期凋亡/ PBMCs的继发性坏死(图1)。

细胞样本划分的基础上,对常规化疗的敏感性组合在体外。我们分类成三组之一(比较表1):第一个:CM-sensitive (S),第二个:部分敏感(P),第三个:CM-resistant (R),当慢性淋巴细胞白血病细胞暴露在厘米细胞生存能力下降超过30%,15% - -30%,48小时后,分别小于15%。表中所示1在检查24慢性淋巴细胞白血病细胞样本的最大组(13;54%)厘米,7例(29%)却很弱。4例(17%)显示部分响应到CM。

当我们阿托伐他汀的平均细胞毒性相比,厘米,和他们的组合在CM-resistant PBMCs在体外使用他汀类药物,即使在最低浓度,造成antileukemic潜力高于CM药物组合(如图2- r)。在所有的白血病细胞耐药样品被归类为厘米,25岁μ米阿托伐他汀减少细胞生存能力与效率高于厘米。此外,阿托伐他汀和CM导致白血病PBMCs强细胞毒性效应相比,厘米。在6 7 CM-resistant细胞样品的阿托伐他汀在10μM PBMCs引发细胞凋亡的程度高于CM后48 h。差异引起的细胞毒性厘米+ 25厘米+ A50股指与厘米是统计学意义和分别(魏克森讯号等级测试)。平均CMA10-treated细胞的生存能力下降是~ 20%相比,细胞样品暴露在厘米。

所有测试细胞样品中,只有检查探测器获得病人的血液数量20没有容易两厘米和阿托伐他汀。其他调查慢性淋巴细胞白血病样本抵抗传统抗癌药物组合- CM没有配他们的电阻对阿托伐他汀与他们不同的机制对模型细胞的行动。

见图2- p,在慢性淋巴细胞白血病细胞组分为部分敏感厘米,50μ米阿托伐他汀显示最antileukemic潜力在所有测试阿托伐他汀剂量,同样作为CM组合,而厘米+ A10组合诱导细胞生存能力下降~ 10%相比,厘米。这些药物添加剂造成的影响。

相反,在CM-susceptible慢性淋巴细胞白血病细胞集团CM组合操作更有效地比阿托伐他汀使用测试浓度(比较图2- s)。阿托伐他汀还表示细胞毒性可能高于观察CM-resistant慢性淋巴细胞白血病细胞。虽然阿托伐他汀联合行动和CM显示对白血病PBMCs infra-additive影响,增加antileukemic活动检查代理是统计学意义(CM和CM + A10一双样品和他汀类药物浓度较高;魏克森讯号等级测试)。平均增加10μM阿托伐他汀厘米触发检测细胞生存能力下降只有5%相比传统CM的组合。

与此同时,如图3与阿托伐他汀慢性淋巴细胞白血病细胞样品的预孵化,即使在1μM,减少他们的生存能力相比,细胞治疗只有厘米(没有以前的预培养)。

3.3。DNA内容

DNA含量化验血液细胞样本中进行13慢性淋巴细胞白血病患者。平均DNA含量分析结果PBMCs暴露在检查药物呈现在图1 (c)。Sub-G1 PBMCs对应人口的细胞群与凋亡DNA碎片放大24和48 h后孵化与所有测试代理相比,控制(和细胞暴露在DMSO溶剂对阿托伐他汀)。没有区别控制细胞的DNA含量和车辆控制。CM sub-G1组合诱导4 -和三倍增加细胞数量相比,控制PBMCs 24和48 h后,分别。细胞凋亡的存在证实了sub-G1上涨剩PBMCs剂量依赖性的方式。阿托伐他汀的最低浓度引发的患病率提高subdiploid PBMC人口控制DMSO相比。阿托伐他汀的浓度仅在使用50μM细胞诱导的DNA的变化内容高于PBMC中观察到样本孵化厘米(~ 50%与43%)。重要的是,模型的结合治疗细胞10μ阿托伐他汀和CM是更有效(~ 15%)超过厘米。阿托伐他汀的添加浓度高于10μM CM组合antileukemic增加后者的潜力。在某些情况下,然而,极端的DNA nucleolysis无法可靠地分析细胞的DNA含量(这些病例被排除在分析)。

3.4。Caspase-3激活

的百分比PBMCs表达caspase-3的活性形式是cytometrically评估。结果证实proapoptotic使用阿托伐他汀的浓度的潜力,厘米,以及CM与阿托伐他汀。模型中细胞,细胞凋亡诱导强化剂量的比例调查代理,获得超过45%增加CM-treated细胞相比,控制在40%和65% 25 PBMCs暴露于阿托伐他汀的浓度μ米和50μM,分别(模范病人13号;参见图1 (d))。厘米的意思proapoptotic潜力高于25μ米的他汀类药物阿托伐他汀,但低于50μm .低凋亡细胞数量增加车辆控制相比,细胞没有DMSO指出。重要的是,治疗白血病细胞的探针与阿托伐他汀和CM一起比这些药物单独使用更有效率。

3.5。免疫印迹分析

评估proapoptotic阿托伐他汀药物治疗慢性淋巴细胞白血病细胞的潜力,选择凋亡标记的表达水平,也就是说,保利(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP-1)和核纤层蛋白B1,检查。这两个核蛋白质proteolytically裂解的活动还存在细胞凋亡的执行阶段28,29日]。结果证实这些其次是细胞凋亡标记的乳沟暴露在CM组合,以及阿托伐他汀单独或结合厘米。在5例,48小时暴露在厘米不诱导全长蛋白的表达水平的变化与116 kDa和67 kDa的质量,分别。然而,在慢性淋巴细胞白血病细胞的孵化与阿托伐他汀浓度上升,PARP-1的蛋白水解作用和核纤层蛋白B1在4。与此同时,乳沟升高产品85 kDa, 44 kDa,分别。因此,一个轻微的易感性白血病细胞cladribine和mafosfamide不需要他们的抵抗他汀类药物有关。

调查procaspase-9和procaspase-3表达的免疫印迹显示使用化合物发酵菌的细胞水平的影响可能是由于这些酶的激活(见图2)。获得的数据显示一个线粒体在细胞凋亡参与慢性淋巴细胞白血病细胞暴露在测试代理。同样,Cafforio et al。30.)曾表示线粒体细胞器参与statin-induced细胞凋亡。我们假设,然而,这些细胞器不是中央细胞凋亡的起始剩慢性淋巴细胞白血病细胞。剩细胞凋亡的线粒体途径不是坚定地证实了bcl - 2 (b细胞白血病/淋巴瘤2)家族蛋白表达数据。尽管mcl1的下降(髓细胞白血病1;~ 40 kDa)细胞水平被认为在大多数情况下,慢性淋巴细胞白血病样本,如图2,这种改变并不是伴随着antiapoptotic-Bcl-2壮观的表达水平的多样性和proapoptotic-Bax (bcl - 2×相关蛋白)的蛋白质。伯灵顿的增加表达在CM-sensitive慢性淋巴细胞白血病细胞探针接触后常规厘米或其组合应用程序与阿托伐他汀(见图2- s)。此外,这些蛋白质表达水平的比较显示,apoptosis-related蛋白质的蛋白质水解,PARP-1和核纤层蛋白B1、观察与假定的激活caspase-9 caspase-3,它有时就像mcl1水平下降(见图2- s;病人数量1和图2- p;病人数量19)。因此,它表明改变mcl1表达可能与蛋白水解作用在细胞凋亡过程中,细胞凋亡诱导的原因。重要的是,bcl - 2表达下降后只看到细胞暴露于药物浓度最高。

此外,ZAP70激酶的表达在几个慢性淋巴细胞白血病细胞样本估计孵化与阿托伐他汀,厘米,与阿托伐他汀和CM。细胞内高表达这种酶被认为是消极的慢性淋巴细胞白血病的预后因素(2]。值得注意的是,免疫印迹试验表明在体外暴露在阿托伐他汀导致ZAP70激酶减少PBMCs ZAP70-positive血液的病人(积极性证实了流式细胞术)的协议结果Yavasoglu et al。31日]。观察到ZAP70蛋白质水平下降可能与细胞凋亡的执行阶段,因为类似的效果也是CM-susceptible白血病细胞从血液中检测到的病人1号暴露出来在体外到CM。此外,没有ZAP70表达之间的相关性和PBMC样品测试药物的敏感性(s)被发现。

因果的参与细胞凋亡紊乱和染色体畸变和白血病细胞对药物的评价/实验证实了化合物白血病细胞系(32,33),主要慢性淋巴细胞白血病细胞样本(33- - - - - -36),和动物模型37,38]。最近,报告数据在活的有机体内小鼠模型(38,39)来解释不同组件的微环境有利于血液肿瘤发病机理。一个有趣的方法涉及使用慢性淋巴细胞白血病细胞/ nurse-like coculture调查白血病药物治疗后cells-microenvironment交互模型是描述40]。的在体外测试的慢性淋巴细胞白血病细胞暴露于药物(s)是应用于微分染色细胞毒性测试,盘(34),最近得到了改进和简单TRAC(抗肿瘤药化合物肿瘤反应)(35,41]。

总结,我们的研究结果表明,阿托伐他汀增加proapoptotic潜在的药物组合,CM在慢性淋巴细胞白血病细胞在体外。此外,即使小剂量阿托伐他汀应用预孵化期间可能会加剧厘米对白血病细胞的细胞毒性在体外。因此看来,阿托伐他汀使用期间,慢性淋巴细胞白血病患者抗癌疗法或之前不是禁忌cladribine和环磷酰胺应用程序。相反,它可能会加强常规化疗的疗效。支持阿托伐他汀和CM组合效应可能与他们的不同的行为模式。传统抗癌药物触发细胞死亡主要由内产生损伤DNA和RNA分子导致细胞凋亡的线粒体途径(42]。他汀类药物的代谢变化引起白血病细胞可以诱导细胞死亡不管bcl - 2家族蛋白表达的变化和caspase-9激活。这可能与内质网(ER) stress-dependent细胞凋亡有关,这是一个主要的机制参与慢性淋巴细胞白血病细胞的自发凋亡,或自噬43- - - - - -45]。除了proapoptotic潜力,阿托伐他汀也可能影响到射流的抗癌药物在细胞外,同样作为洛伐他汀已被证明能够抑制(ATP)的活动绑定卡式录音带药物转运蛋白在白血病细胞(46]。

先前已经表明不应该服用他汀类药物的患者治愈的免疫疗法(47]。他汀类药物和单克隆抗体的结合治疗是不明智的将可能影响这些药物对白血病细胞抗原的细胞定位和结构。但最近公布的数据显示,他汀类药物略微影响rituximab-dependent ADCC(抗体依赖的细胞毒性)48]。有趣的是,它最近被证实胆固醇分子面具肿瘤相关膜鞘糖脂使肿瘤逃避免疫系统识别。因此,他汀类药物降低胆固醇水平可以促进免疫监视的某些类型的癌症的膜(49,50]。根据这些数据可能看来,他汀类药物的好处cotreatment可能高于他们的缺点也患者的免疫治疗。一些最近发表的结果表明改进的反应率和生存的复发或难治性慢性淋巴细胞白血病患者接受他汀类药物和/或阿司匹林一起RCF支持以上概念(51]。同样,李等人[52)显示,他汀类药物能够加强贝伐单抗的抗血管新生的影响大肠癌细胞。另一方面,有很多的争议与他汀类药物的使用有关50,53]。高剂量阿托伐他汀用于抗癌疗法可能导致药物诱导肝损伤(帝力)易感患者[54]。另一种可能性是增强糖尿病发展的风险,特别是老年患者。他汀类药物潜在的致糖尿病的发生大约四年后他汀类药物治疗被报道(55]。

4所示。结论

结果表明在体外阿托伐他汀独自能够诱导细胞凋亡在CM-sensitive和CM-resistant慢性淋巴细胞白血病细胞。此外,coincubation或预孵化与阿托伐他汀糖分会让慢性淋巴细胞白血病细胞CM-induced细胞凋亡并应考虑作为慢性淋巴细胞白血病患者的治疗选择。看来CM-resistant和/或这些患者的预后较差的标志与传统化疗治疗从阿托伐他汀的介绍可能有更大的好处。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的批准号1407Łodź大学的。作者要感谢实验室的同事血细胞计数,Łodź大学仪测量细胞的生存能力/细胞凋亡率和caspase-3激活。

引用

1. g . Gaidano失落r, r . Dalla-Favera,“慢性淋巴细胞白血病的分子发病机制,”《临床研究杂志》上,卷122,不。10日,3432 - 3438年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. p . Smolewski m . Witkowska, a . Korycka-Wołowiec“生物学的新见解、预后因素和当前在慢性淋巴细胞白血病的治疗策略,”ISRN肿瘤学ID 740615条,卷。2013年,7页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. a . m . Wu Akinleye,朱x”小说代理慢性淋巴细胞白血病”血液学和肿瘤学杂志》上》第六卷,没有。1,第三十六条,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. a . Cuneo f . Cavazzini m·西科尼et al .,“现代治疗慢性淋巴细胞白血病:影响生存和功效在高危组,“癌症医学,3卷,不。3、555 - 564年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. l, m . Shawi j . Grenier r . Aloyz和l . Panasci“我phosphatidylinositol-3激酶抑制剂BKM120 B-chronic淋巴细胞白血病细胞中诱导细胞死亡在体外”,国际癌症杂志》上,卷133,不。1,第252 - 247页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. j . c . Gea-Banacloche“Rituximab-associated感染”,研讨会在血液学卷,47号2、187 - 198年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. a . r . Tonelli r . Lottenberg r·w·艾伦和p·s·“Rituximab-induced过敏性肺炎、”呼吸,卷78,不。2、225 - 229年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. m·l·哈特曼和z . m . Kilianska”脂蛋白脂肪酶:一个新的预后因素在慢性淋巴细胞白血病,”现代肿瘤学,16卷,不。6,474 - 479年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. d . e .跨度、李、y史et al .,“PPAR-alpha是慢性淋巴细胞白血病的治疗目标,“白血病,27卷,不。5,1090 - 1099年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. d·m·f·穆勒c Abete Pulisci et al .,“胆固醇酯作为淋巴细胞白血病细胞的生长调节剂,”细胞增殖,44卷,不。4、360 - 371年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. t·p·埃亨t . l .睫毛p . Damkier p . m .克里斯琴森和d . p . Cronin-Fenton,“他汀类药物和乳腺癌预后:证据和机会,”柳叶刀肿瘤学,15卷,不。10、pp. e461-e468, 2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 江p, r . Mukthavaram y曹国伟et al .,“体外和体内抗癌效果的甲羟戊酸途径在人类癌症细胞的调制,”英国癌症杂志》,卷111,不。8,1562 - 1571年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. a . Sławińska-Brych b Zdzisińska, m . Kandefer-Szerszeń”Fluvastatin抑制增长和改变C6神经胶质瘤细胞的恶性表型,”药理报告,卷66,不。1,第129 - 121页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. w·a·马耳他和j . r . Aprille”甲羟戊酸的合成关系线粒体泛醌含量和呼吸功能培养神经母细胞瘤细胞,”《生物化学》杂志上,卷260,不。21日,第11529 - 11524页,1985年。视图:谷歌学术搜索
15. I.-M。Chojnacki搁浅地,大肠薯条、t、g . Dallner”compactin dolichyl磷酸盐生物合成的抑制培养的大鼠肝细胞,”欧洲生物化学杂志,卷155,不。2、447 - 452年,1986页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. a·w·爱尔,”洛伐他汀和HMG - CoA还原酶simvastatin-inhibitors胆固醇生物合成,“心脏病学,卷77,不。4、14号至21号1990页。视图:谷歌学术搜索
17. n . Vallianou a . Kostantinou m . Kougias, c . Kazazis“他汀类药物和癌症,”在药物化学抗癌药物,14卷,不。5,706 - 712年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. j·h·杰克逊,c·g·科克伦j·r·伯恩·a . Solski j·e·巴斯和c j . Der”金合欢醇修改Kirsten-ras外显子4 b蛋白对转换至关重要,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷87,不。8,3042 - 3046年,1990页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. a·a·海德里。麦克米兰,h . Thorlacius“β-还原酶调节通过geranylgeranylation CCL17-induced结肠癌细胞迁移和RhoA激活,“生物化学和生物物理研究通信,卷446,不。1,第72 - 68页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. 石川,h . Hayashi k .木下光男et al .,“他汀类药物抑制肿瘤恶化通过增强剂结肠直肠癌zeste 2-mediated同系物表观遗传改变的”国际癌症杂志》上,卷135,不。11日,第2536 - 2528页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m . Podhorecka d . Halicka p . Klimek m . Kowal s Chocholska和a . Dmoszynska“辛伐他汀和嘌呤类似物有协同效应在慢性淋巴细胞白血病细胞的细胞凋亡,”《血液学,卷89,不。11日,第1124 - 1115页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. j·d·Zołnierczyk a . Borowiak p Hikisz et al .,“有前途的阿托伐他汀anti-leukemic活动,”肿瘤的报道卷,29号5,2065 - 2071年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. b . d . Cheson j·m·班尼特,m . Grever et al .,“国家慢性淋巴细胞白血病癌症Institute-sponsored工作组指导方针:修改后的诊断和治疗指南,”血,卷87,不。12日,第4997 - 4990页,1996年。视图:谷歌学术搜索
24. a . Kobylińska j . Bednarek j . z Blonski et al .,”b细胞的体外敏感性慢性淋巴细胞白血病与mafosfamide cladribine及其组合和/或米托蒽醌,”肿瘤的报道,16卷,不。6,1389 - 1395年,2006页。视图:谷歌学术搜索
25. o·h·劳里:j . Rosebrough a . l . Farr, r·j·兰德尔“蛋白质测量Folin酚试剂,”《生物化学》杂志上,卷193,不。1,第275 - 265页,1951。视图:谷歌学术搜索
26. 英国Laemmli”劈理的结构蛋白组装T4噬菌体的头,“自然,卷227,不。5259年,第685 - 680页,1970年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. h . Towbin t . Staehelin和j·戈登,“从聚丙烯酰胺凝胶电泳的蛋白质硝基表:过程和某些应用程序中,“美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷76,不。9日,第4354 - 4350页,1979年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. 麦肯基d . j .,“Calcium-dependent,白介素1-converting酶inhibitor-insensitive退化核纤层蛋白B1和胸腺细胞细胞核DNA碎片在孤立”《生物化学》杂志上,卷271,不。37岁,22398 - 22406年,1996页。视图:谷歌学术搜索
29. p·加尼叶,w .应,r . a . Swanson“缺血性预处理的半胱天冬酶乳沟保利(ADP-ribose) polymerase-1”神经科学杂志》上,23卷,不。22日,第7973 - 7967页,2003年。视图:谷歌学术搜索
30. p . Cafforio f . Dammacco a . Gernone f . silvestri,“他汀类药物激活人类淋巴母细胞凋亡的线粒体途径和骨髓瘤细胞,”致癌作用,26卷,不。5,883 - 891年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. Yavasoglu, g . Sargin g . Kadikoylu a . Karul z . Bolaman,”阿托伐他汀和罗格列酮CD38的活动,ZAP70和凋亡淋巴细胞b细胞体外,慢性淋巴细胞白血病”医学肿瘤学,30卷,不。3,第603条,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. s . Al-harbi b·t·希尔美国Mazumder et al .,”一个凋亡bcl - 2家族表达式指数预测慢性淋巴细胞白血病的反应abt - 737”血,卷118,不。13日,3579 - 3590年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. a .可•福尔兰正f·维拉诺瓦,f . Pietrogrande m . Celadin m . Sanzari f . Vianello,“低剂量氟达拉滨增加利妥昔单抗细胞毒性B-CLL细胞体外,还存在通过触发激活”白血病和淋巴瘤,51卷,不。1,第113 - 107页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. a·g·Bosanquet p·b·贝尔,“慢性淋巴细胞白血病的增强型体外药物敏感性测试使用精制盘试验方法,”白血病的研究,20卷,不。2、143 - 153年,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. a·g·Bosanquet s·m·理查兹,r·韦德et al .,“毒品抗力移转和慢性淋巴细胞白血病的治疗导致耐药性的增强方法个性化肿瘤反应测试,”英国血液学杂志》,卷146,不。4、384 - 395年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. j·d·Żołnierczyk a . Borowiak j . z Blonski et al .,”在活的有机体内和体外反应的慢性淋巴细胞白血病细胞嘌呤类似物与烷化剂相结合,“药理报告,卷65,不。2、460 - 475年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. X.-J。燕,大肠Albesiano: Zanesi et al .,”B细胞受体TCL1转基因老鼠像那些咄咄逼人,人类难治性慢性淋巴细胞白血病,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷103,不。31日,第11718 - 11713页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. 克莱恩和r . Dalla-Favera“新见解慢性淋巴细胞白血病的发病机理,“在癌症生物学研讨会,20卷,不。6,377 - 383年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. d . Bagnara考夫曼m . s . c . Calissano et al .,“慢性淋巴细胞白血病的小说过继转移模型表明,T淋巴细胞的疾病的一个关键的角色,”血,卷117,不。20日,第5472 - 5463页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. a . a·菲利普、b . Ciseł和e . Wąsik-Szczepanek“有罪的旁观者:nurse-like细胞微环境的模型支持白血病淋巴细胞,”临床和实验医学,15卷,不。1,第83 - 73页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. e .澳特斯a·g·Bosanquet r·韦德,s·m·理查兹m, d . Catovsky,“使用个性化治疗的肿瘤反应测试选择:第二个随机化的结果探测器CLL4试验和测试的预测价值试验条目,”白血病,27卷,不。2、507 - 510年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. t·罗巴克和p .可观,“嘌呤核苷类似物治疗罕见慢性淋巴白血病”当前的药物设计,18卷,不。23日,第3388 - 3373页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. e . Rosati r·萨巴蒂g . Rampino et al .,“新靶点B-CLL内质网应激细胞凋亡,”血,卷116,不。15日,第2723 - 2713页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. l . w . x Peng Li元,r·g·梅塔l . Kopelovich和d·l·麦考密克”抑制增殖和诱导自噬的阿托伐他汀生物前列腺癌细胞的差别与对这些Bcl2 upregulation mir - 182和p21,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。8篇文章ID e70442 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. s . Ghavami p . Sharma b Yeganeh et al .,“气道由甲羟戊酸级联抑制间充质细胞死亡:集成的自噬,展开蛋白质反应和细胞凋亡关注Bcl2家族蛋白质,”Biochimica et Biophysica学报,卷1843,不。7,1259 - 1271年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. e . Głodkowska-Mrowka p . Mrowka g . w . Basak et al .,“他汀类药物抑制ABCB1和ABCG2慢性骨髓性白血病细胞和药物转运体活动加强antileukemic伊马替尼的影响,“实验血液学,42卷,不。6,439 - 447年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. m . Winiarska j .基本脉冲电平大肠Wilczek et al .,“他汀类药物影响的利妥昔单抗的抗肿瘤效应诱导CD20的构象变化,“《公共科学图书馆·医学》杂志上,5卷,不。第三条e64, 2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. a . Poggi s Boero a马苏之后,m . r . Zocchi“选择性甲羟戊酸途径的作用在调节穿孔素但不是FasL TNFalpha释放人类自然杀伤细胞,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。5篇文章ID e62932 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. a·诺瓦克b . Binnington颜,k .查德威克n . Fleshner和c a . Lingwood”胆固醇面具膜鞘糖脂在人类癌症肿瘤相关抗原减少immunodetection活检,”糖生物学,23卷,不。11日,第1239 - 1230页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. s . Pisanti p . Picardi e . Ciaglia a .达利山德罗和m . Bifulco”小说他汀类药物在癌症治疗药物的前景,”药理研究卷,88年,第98 - 84页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. Chae y k, l·陈,p . Jain et al .,“他汀类药物和阿司匹林与改善的结果货代治疗复发/难治性慢性淋巴细胞白血病。”血,卷123,不。9日,第1426 - 1424页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. s·j·李,李,j·李,c .公园和w·k·康,“他汀类药物加强人类结肠直肠癌,贝伐单抗的抗血管生成效应”英国癌症杂志》上,卷111,不。3、497 - 505年,2014页。视图:谷歌学术搜索
53. 美国Bonovas,“他汀类药物:他们有一个潜在的作用在癌症预防癌症和修改结果?”药物,卷74,不。16,1841 - 1848年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. m . f . Carrascosa j . r . Salcines-Caviedes麻省理工学院卢塞纳,胜选,r . j .安德拉德“急性肝衰竭后阿托伐他汀剂量升级:有特殊的肝毒性的阈剂量吗?”肝脏病学杂志,卷62,不。3、751 - 752年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. 英国桑普森,m·f·林惇,法齐奥,“他汀类药物致糖尿病的吗?”目前看来在心脏病学,26卷,不。4、342 - 347年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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