文摘
背景。激活突变受潮湿腐烂基因会导致甲状腺髓样癌(MTC)。指导方针鼓励执行受潮湿腐烂分析对象与遗传和零星的疾病。材料和方法。设计。观察、案例研究系列报告。病人。受试者被诊断为矿渣MTC,甲状腺切除术中执行一个中心在哥斯达黎加在2006年和2015年之间。诊断和随访。预处理和术后降钙素,受潮湿腐烂突变,和颈部超声和x线断层摄影术。结果。21个学科矿渣MTC随访的组织学诊断。诊断的平均年龄为52.0±15.7年。降钙素的术前平均值是1340±665 pg / mL。的证据受潮湿腐烂突变被发现在26.3%的患者中,其中只有2分组在同一家族。我们发现突变之间在统计上有显著差异的平均年龄(38.4±20.2 y)和不变异RET基因(54.6±11.8 y,)。关于肿瘤大小没有明显差异,转移,手术reintervention。结论。我们报告的结果受潮湿腐烂突变分析对象与哥斯达黎加的矿渣MTC在一个单一的中心。这个工具的可用性识别家族矿渣MTC的概率增加,检测影响主体的利益和他们的亲属在早期的年龄。
1。介绍
甲状腺髓样癌(MTC)是一种罕见的神经内分泌肿瘤,仅占3%至5%的甲状腺癌症。然而,这种肿瘤疾病是一个最合适的实体肿瘤的病理、生化、分子和遗传属性1]。大约75%的病例将在零星的形式和其余部分将显示一个遗传模式2]。一个细胞的激活突变受潮湿腐烂(重新安排在转染)protooncogene报道在几乎所有情况下遗传形式的矿渣MTC与多发性内分泌瘤2型(男2),和一个躯体受潮湿腐烂突变可以在多达50%的零星的形式的矿渣MTC [3,4]。
的受潮湿腐烂基因在神经组织中细胞信号传导起着重要的作用,特别是在开发的早期阶段。这个基因的突变导致细胞增殖和分化异常的组织来源于神经嵴细胞。的C-cells甲状腺和肾上腺髓质嗜铬细胞都受到影响,导致MTC和嗜铬细胞瘤,分别5]。二十年前,一个激活的突破性发现受潮湿腐烂变异存在于主体与MTC和男人2掀开了新的一页在个性化医疗时代和遗传关联研究[6]。目前,筛选的受潮湿腐烂基因被广泛应用于一些遗传疾病的检测,不仅识别基因携带者的MTC诊断,而且还作为临床诊断在他们的家庭7]。
据美国甲状腺协会(ATA),所有的矿渣MTC情况下,无论是遗传还是零星的,应该有遗传咨询和直接DNA分析来检测突变受潮湿腐烂等位基因(8]。如果一个细胞受潮湿腐烂发现突变,患者的一级亲属应提供遗传咨询和测试。尽管改变的基因序列受潮湿腐烂基因被认为是男性的原因2综合症,必须补充突变与疾病的临床表现在一个家庭成员。这需要至少两个受影响的个人与家族矿渣MTC,男人2或2 b表型(9]。
遗传稳定性评估细胞受潮湿腐烂突变2 MTC和男性有患者辅助内分泌学家提供病人,以及他们的亲戚,更准确的诊断。这里我们提出第一个哥斯达黎加矿渣MTC的情况下,包括人口报告受潮湿腐烂突变分析。
2。材料和方法
2.1。病人
在这项研究中,我们研究了共21个学科从一个三级保健中心从圣何塞,哥斯达黎加,矿渣MTC的诊断,总甲状腺切除术。患者手术治疗之间的2006年和2015年血液和分子分析受潮湿腐烂基因突变在19的情况下进行。本研究经医院伦理委员会批准拉斐尔天使卡尔德龙Guardia博士。
2.2。降钙素测定
血浆降钙素是由immunoradiometric测量试验,使用IMMULITE 1000免疫分析系统(德国西门子®),与建立正常价值小于2 pg / mL。收集血液样本在手术之前,立即术后时期,至少每六个月的随访评估。
2.3。筛查受潮湿腐烂突变,提取DNA, PCR扩增
突变分析受潮湿腐烂基因是由使用标准的PCR和Sanger测序协议。简单地说,从矿渣MTC患者外周血收集和DNA被使用麦格纳纯2.0自动提取(瑞士罗氏诊断®)平台。PCR进行高保真PCR试剂盒(罗氏诊断)协议后根据Jindřichova et al。10在95°C]:初始变性10分钟紧随其后40周期(95°C的变性30年代,在优化退火温度(60 - 68°C)为30秒,1分钟和伸长在72°C)和最终伸长72°C 10分钟。PCR产品评估Qiaxell系统(公司试剂盒®、希尔登,德国)和突变进行评估通过Sanger测序3500基因分析仪(生命技术®,加利福尼亚,美国)通过使用BigDye 3.1化学。
2.4。手术治疗和随访
在大多数情况下,总甲状腺切除术的手术治疗包括;然而由于前两个病人只接受叶切除术的侧叶。在一个细针穿刺活检的患者(FNA)报告记录髓样癌,双边中央颈部解剖室结合淋巴结的切除。如果超声评价记录可疑颈外侧淋巴结转移病灶隔间,外科医生进行侧颈部解剖。所有患者术后随访至少六个月在我们医院的内分泌科单位。后续评估包括临床检查、降血钙素测量,超声波或颈部的CT扫描。
2.5。组织病理学
甲状腺和淋巴结进行了研究使用标准的组织病理学技术,以及甲状腺球蛋白免疫组织化学染色,synaptophysin,降钙素。
2.6。统计分析
使用SPSS统计软件进行统计分析(SPSS Inc .版本22日,芝加哥,IL)。连续变量描述与平均或中值和比较以及在适当的时候或者Mann-Whitney测试。我们确切概率法用于比较分类变量的频率。的值被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
在这一系列的情况下,我们总共包括21个学科与甲状腺髓样癌的病理诊断。大多数患者是女性(81%,17/21)和平均年龄在诊断年。矿渣MTC的家族先行词被发现只有在两种情况;然而其余的家人疾病的患者没有明确的知识记录。值得注意的是,其他的诊断受潮湿腐烂不相关的肿瘤被发现在23.8%(5/21)的病例,占一个变量是由黑色素瘤肿瘤起源,乳头状甲状腺、甲状旁腺、胃、大肠癌、乳腺癌、和基底细胞癌。
在术前评估,所有的病人接受FNA活检但只有55%(11/21)的受试者对活检报告正确的髓样癌的诊断。滤泡性肿瘤是最常见的报告,40%(4/10)的患者误诊。结果,不到一半的病例术前降钙素测量评估。然而,那些被取样,我们估计降钙素平均值pg / mL。
我们找到了一个细胞受潮湿腐烂26.3%(5/19)的患者的突变与基因检测进行评估(见表1)。患者5被诊断出患有男性2 b。他第一次看到一个甲状腺髓样癌,手术10岁的时候。在青春期,他开发了一个明显marfanoid体质。在外科手术之后,他的降钙素水平保持稳定(少于300 pg / mL)。到目前为止,他没有表现出任何放射性和嗜铬细胞瘤复发的证据没有被记录。另外,病人被诊断患有男性2。她的首次检测到肿瘤是申请者在53岁。在手术后的后续,左肾上腺质量记录和确认后嗜铬细胞瘤切除术。随访期间,她有地方,骨骼,和她的纵隔复发申请者需要多个手术和放疗。
一个患者受潮湿腐烂基因突变是一个统计上显著的年轻在诊断(年),相比,患者没有这些变化(年)(见表2)。影响颈部淋巴结转移是相似的两组:60% (3/5)受潮湿腐烂积极组织和57% (8/14)受潮湿腐烂阴性组()。外科reintervention需要在40%(2/5)的患者受潮湿腐烂突变相比,35.7%(5/14)的患者没有这些遗传变异()。关于肿瘤直径没有显著差异,血管侵犯的频率,或远处转移组比较。
4所示。讨论
这是第一个临床特征的矿渣MTC患者获得我们的中心,包括遗传筛查。后的实现受潮湿腐烂突变筛查项目,我们能够确定在26.9%的矿渣MTC患者生殖细胞突变。这个频率的受潮湿腐烂突变是类似于数据在其他情况下系列报道11,12]。大量的遗传性肿瘤的存在在我们的病人,除了细胞的存在受潮湿腐烂突变多达14.9%的零星的矿渣MTC患者(13),确认需要常规遗传筛查ATA建议的指导方针。
诊断病人的平均年龄年,这类似于其他地方所报道(8]。零星的比例和遗传性肿瘤的发现也符合其他案例系列11]。在我们的样例女性多于男性,比例的17:4 (F:米),这是不同于之前已经报道过了1,8]。女性比男性在本研究发现可能与这一事实有关女性使用哥斯达黎加国家卫生系统比男性更频繁,不管事实获得卫生服务是相同的两性(14]。
在这项研究中,细针细胞学只有准确报告矿渣MTC诊断病人的55%。众所周知,MTC具有细胞学变量出现在愿望,这常常导致怀疑诊断。从这个意义上说,建议(即免疫组织化学研究。,calcitonin or chromogranin) should be used in order to improve the cytological evaluation [15]。自降钙素措施并不经常使用它可以解释我们很高比例的矿渣MTC的误诊。这个结果在一个不完整的术前评估术前降钙素值,这可能导致可能的错误在选择最好的外科手术病人。此外,据报道,仅依靠FNA活检在零星的矿渣MTC情况下可能产生负面影响病人的最初的手术治疗,可能误导走向全甲状腺切除术,而不是全甲状腺切除术+中央颈部解剖程序在需要的时候(16]。
我们发现患者存在在他们的生殖细胞突变受潮湿腐烂基因是,平均而言,16岁的年轻在诊断,相比那些没有这些基因变异。这个观察报告,和其他来源(6,11),可以解释为两个主要原因。首先,在诊断过程中扩展的筛查方法受潮湿腐烂胚系突变,更容易找到病人的家属在早期年龄通常在临床前阶段的疾病(12]。第二,风险最高的突变(类D,根据ATA风险分类)主要是出现在显化疾病的患者在儿童时代(17]。
在我们的研究中,我们发现四个不同的细胞受潮湿腐烂突变。根据ATA指南(8),其中一个被列为“最高风险”一个病人的突变(M918T),其余的被认为是“适度风险”突变在其他四个科目(V804M和L790F和C611R)的两倍。矿渣MTC攻击性通常是相关的类型和临床表现受潮湿腐烂突变,在零星的和遗传的形式。尤其是在遗传情况下,有一个已知的关联受潮湿腐烂突变,其表型,预后[11]。根据这一点,受潮湿腐烂突变可能决定最佳的年龄时将执行手术病人,这个过程可能需要一个扩展是否淋巴结切除除了甲状腺切除术(8]。另一方面,的存在受潮湿腐烂致癌基因体细胞突变在零星的矿渣MTC与区域及远处转移有关,有较高的死亡率和一个更大的肿瘤大小(3]。
细胞的存在受潮湿腐烂指向遗传突变形式的矿渣MTC [18]。然而,有趣的是,病人1临床诊断的一个明显的零星的MTC但还发现细胞突变(V804M)情况,据报道在别处(19]。这强调的重要性有常规分子受潮湿腐烂分析所有矿渣MTC患者强调这一事实并不总是足够的标准来区分有零星的世袭矿渣MTC,即使临床表现,诊断实验室测试和组织学结果。
密码子611(外显子10)受潮湿腐烂基因编码的细胞外cysteine-rich域和经常影响与突变相关的两个遗传MTC和经典2人(11]。这些突变患者应该筛选家族矿渣MTC在5岁和甲状旁腺功能亢进和嗜铬细胞瘤从16岁开始8]。我们发现C611R突变患者2,虽然她是老的,当她被诊断出的MTC和嗜铬细胞瘤,这种突变仍与描述的典型报道积极的生物学行为(11]。她的案件显示,骨远处转移的证据,纵隔,一个广泛的淋巴结妥协。
患者3和4是一个母亲和女儿都拥有L790F突变。他们也有病变局限于甲状腺但没有出现在后续转移。考虑到遗传变异在密码子790已知不完全外显率20.),这个突变患者不能开发一个电子。虽然他们有相同的基因突变,但女儿此前表现,因此评估和诊断后不久,她的母亲是治疗。
主题与男性2 b有矿渣MTC或C-cell增生典型表型特性,比如marfanoid身体体质,粘膜神经瘤,肠道ganglioneuromatosis,有或没有PHEO [9]。以前的大型出版系列报道的低频MTC男人2 b相关综合症,发现只有6.7%的CMT病例38年的经验(21]。在我们的示例中,只有病人5被诊断出患有M918T胚突变的外显子16点受潮湿腐烂基因。他有一个外科手术在10岁的时候,并没有显示出矿渣MTC 18年的随访后的复发。同样,大多数的男性2 b患者临床表现在生活的第二个十年,需要有一个总甲状腺切除术时最初诊断(8]。尤其是在这个病人,同样的突变不是他的母亲也没有检测到的髓样癌的历史被发现在他的父亲或母亲的亲戚,这表明这种突变发生新创,这是一种相对常见的发现,大约有75%的男性患者2 b新创受潮湿腐烂突变(22]。
随着时间的经验受潮湿腐烂也被应用于生殖细胞突变的体细胞突变分析矿渣MTC组织样本(23]。这是近年来一个新兴的领域成为一个可行的测试可以执行的病人(如样本的28.6%(4/14))细胞没有港口受潮湿腐烂突变,但发展不完全可切除的远处转移或复发。没有提供具体建议目前的指导方针需要调查零星的矿渣MTC的体细胞突变。然而,关于这个主题的证据正在增加,在积极的转移性肿瘤尤其重要。最近出版有关RET, RAS, TP53、BRAF AKT或里边PIK3C体细胞突变测试先进的患儿70例,转移性CMT显示体细胞突变在91.4%的情况下进行评估。在变异的情况下,受潮湿腐烂突变(主要是M918T)非常普遍。然而,在足够数量的情况下,不止一个受潮湿腐烂体细胞突变能找到同样的肿瘤组织,和这些特色学科关联到一个更糟的结果(24]。
参考中心现在有长期经验受潮湿腐烂突变筛选,二十年后,一些相关结果已经出版。虽然不可能估计这些突变的真正流行,我们有一个清晰的想法关于最常见的遗传缺陷分布与熟悉的矿渣MTC, V804M点突变是最常见的确定的变化(17]。此外,除了这种类型的遗传评估可能影响患者本身,它是至关重要的,亲人是筛选以确定突变和家庭成员不变异。这可能给他们的关爱医生能够明确区分病人应该开始一个临床和生化评价程序从那些不应该,尤其是那些与早期治疗预后情况会改变。早期诊断和干预可以提高这些患者彻底治愈的可能性(17]。
这个案例中系列报告也有一些局限性。首先,它是在一个单一的中心,我们有少量的科目。这个问题的一个原因是,肿瘤组的一部分医生不知道矿渣MTC患者的遗传筛查;因此许多这样的病人并不包括在试验开始,因为他们没有分子的评估。第二,因为病人的评估没有标准化的根据受潮湿腐烂突变,我们有不完整的数据对术前和术后随访评估。值得特别注意的是缺乏数据(即重点实验室研究。降钙素)不是来自我们的病人。
5。结论
我们首先报道了矿渣MTC患者各自的临床特征受潮湿腐烂突变的地位,从一个中心在哥斯达黎加。我们也能够识别最普遍受潮湿腐烂突变,在我们小组的患者。一个细胞受潮湿腐烂突变被发现在26%的受试者。这些突变的患者在诊断有一个年轻的年龄;然而,我们不可能建立显著差异对于肿瘤的生物学行为,患者相比,没有这些变体。我们知道这是第一步建立一个更好的临床评价矿渣MTC在我们的中心,ATA的指导方针。我们也知道矿渣MTC患者的常规基因测试将帮助我们评估受试者的风险和他们的亲属对矿渣MTC相关疾病。这将导致更高的概率识别新家族申请者作为男性2的一部分,而且,更重要的是,提供早期诊断无症状的科目。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突。
确认
作者要感谢杰西Gaboury为他贡献的编辑和校对手稿。