文摘
上下文。p53免疫组织化学染色是用作诊断标记与恶性肿瘤相关的几个唾液腺肿瘤组织学类型。这个标记可能是有用的在区分多形性腺瘤(PA)癌前多形性腺瘤(CPA),因为这些肿瘤通常很难区分的基础上形态。客观的。评估无论肿瘤抑制基因的失活(p53)随肿瘤恶化最终从正常唾组织到PA和注册会计师。设计。石蜡块29例PA,周围正常腮腺,检索和27例癌前多形性腺瘤和验证。在所有情况下的癌前多形性腺瘤,PA“鬼”被确认,未分化癌或腺癌恶性元素。结果。结果表明负核P53的表达在正常腮腺。核P53表达强烈的6/29(20.7%)多形性唾腺瘤和10/27(37%)例多形性腺瘤癌。结论。我们的数据表明p53的失活可能发挥重要作用的进化多形性唾腺瘤和癌前多形性腺瘤。
1。介绍
多形性唾腺瘤(PA)是最常见的唾液腺肿瘤(1)和显示有时发生恶变的自然(2]。癌前多形性腺瘤(CPA)被认为是预先存在的多形性腺瘤的恶性转化产物(3]。注册会计师是最常见的恶性混合瘤,估计占10%的唾腺恶性肿瘤(4]。发病的机制参与的多形性腺瘤癌进展尚不清楚,需要评估的分子事件引起多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤(5]。目前癌症的分子生物学的研究已经证明的损失函数等肿瘤抑制基因p53的发展可能导致许多不同的癌症类型(6,7]。肿瘤标志物在注册会计师发表的文献是有限的因为这些肿瘤是罕见的。P53肿瘤抑制基因的突变,位于17号染色体的短臂,是最常发现在人类肿瘤基因异常。
我们的研究旨在描述的改变和畸变p53的表达,探讨肿瘤抑制基因的失活与肿瘤恶化(p53)增加最终从正常唾组织到PA和注册会计师。
2。材料和方法
存档formalin-fixed,石蜡包埋组织块的29例多形性腺瘤,27例多形性腺瘤癌病例从口腔病理学系获得阿勒颇(表牙科学校1和2)。肿瘤周围正常组织的唾腺被用作控制在29例多形性腺瘤。抗体的免疫组织化学表现p53在选定的情况下检查。
2.1。入选标准为例多形性腺瘤癌
根据世界卫生组织的组织学分类于2005年出版,恶性PA的变化包括三种不同类型:CPA,癌肉瘤,转移的PA。
拟议的标准定义例多形性腺瘤癌由Nagao et al。8)被用来选择和重新分类癌前多形性腺瘤的病例。
使用严格的病理标准可能低估了癌前多形性腺瘤的频率,因为恶性细胞在某些情况下可能会覆盖掉原来的多形性腺瘤。
入选标准为癌例多形性腺瘤包括以下:(我)大腺主要病变(腮腺或颌下),和宏观特性表明恶性多形性腺瘤的转换包括定义糟糕的和/或渗透性的肿瘤边缘,焦点的存在出血,坏死。(2)良性和恶性元素的存在被认为是。(3)良性的元素可以在肿瘤质量,多形性腺瘤活检证实先前的PA(多形性腺瘤)的历史表明,在相同的位置,随后癌。(iv)恶性元素可以未分化癌、腺癌和多种模式的区别包括未分化或腺癌模式。
2.2。排除标准为例多形性腺瘤癌
排除标准为例多形性腺瘤癌包括其他公认唾液腺癌和那些不确定的类型包含在当前肿瘤组织学分类(9]。
综述了所有标本用苏木精和伊红幻灯片由两个病理学家确认重新分类的组织病理学诊断和研究情况。根据上述标准癌病例分类为未分化癌或腺癌。研究伦理委员会在阿勒颇牙科学校提供了一个有利的伦理观点(Ref: 145/2010)。
2.3。免疫组织化学
石蜡包埋,4 -μ米从所有55标本组织部分被剪掉了。部分deparaffinized在二甲苯,通过分级醇脱水。部分是使用streptavidin-biotin-peroxidase方法处理。短暂,内源性过氧化物酶被3%氢过氧化物酶5分钟TBS洗紧随其后。非特异性免疫反应性被孵化与正常山羊血清20分钟。主要TP53单克隆抗体鼠标反人类的(克隆、D-O7: Dako)稀释至1:25 (40μL /毫升)三羟甲基氨基甲烷缓冲液盐(TSA)含0.1%牛血清白蛋白在室温下2小时。TBS的所有部分都洗5分钟。部分是孵化与生物素化的二次抗体试剂30分钟(TBS)洗5分钟紧随其后。幻灯片是孵化与链霉亲和素辣根过氧化物酶30分钟紧随其后(TBS)三羟甲基氨基甲烷缓冲液盐水洗5分钟。酝酿与准备的显色底物的解决方案(Diaminobenzidine) 15分钟。部分在蒸馏水和0.25%甲基绿复染色5分钟。部分在Depax脱水和安装。鳞状细胞癌作为积极的控制。负控制使用只有替换和TBS的主要抗体。P53-positive核的比例是由两个独立的观察员和半定量的评估得分为负(0)没有核内蛋白的表达,(1)弱染色0 - 25%全部显示阳性染色细胞的细胞核,(2)适度染色> 25 - 75%的总细胞测试区域显示积极核染色,(3)强烈的染色> 75 - 100%的细胞显示积极核染色。
2.4。统计分析
癌的细胞组成部分注册会计师总是得分。统计分析包括使用描述性统计,频率/比例和交叉制表。同时,统计分析,包括Mann-Whitney Wilcoxon非参数测试,进行数据。所有统计测试是双面的P值小于。05年被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。p53表达唾腺周围正常组织的多形性腺瘤
三个组件、导管、腺泡的细胞,间质中检查的多形性腺瘤旁正常组织图1。我们评估p53-positive细胞的百分比在每种情况下,使用频率测试。结果在表3(nontumor导管细胞的核染色)表明p53显示强阳性染色在1(3.4%)例29日与适度染色3(10.3%)例,13例(44.8%)例染色较弱,12例(41.4%)病例没有表达式(表3)而p53的表达nontumor导管细胞胞质染色存在如下:3(10.3%)例与温和的染色,29日9(31.0%)染色较弱,与负染法17 (58.6%)。
p53(腺泡细胞的核染色)显示负染法在24(82.8%)29例,4例染色较弱和1(3.4%)例中度染色(表4)。
p53核染色(基质)中观察到1(3.4%)例29,并有很强的染色,染色较弱,8例(27.6%)和20例(69.0%)和负染法(表5)。
结果显示在表p53表达消极与积极的核染色在大多数元素或低对照组(导管、腺泡的细胞和间质)。
3.2。多形性腺瘤中p53的表达
p53强烈表达肿瘤6管细胞(20.7%)例29。16(55.2%)例显示适度染色,和7(24.1%)例表达弱染色(表6)。p53的表达在多形性腺瘤是如图2,3,4。
p53核染色myxochondroid组织被确认与强大的染色1(3.4%)例,10例(34.5%)例中度染色,和18(62.1%)例染色较弱(表7)。
多形性腺瘤的p53表达澄清在交叉表表(表中8)比较p53表达myxochondroid和管细胞。
Wilcoxon p53的表达之间的测试显示显著差异p53 myxochondroid和肿瘤管细胞,核染色P值<措施)。
3.3。p53表达癌在多形性腺瘤引起
p53强烈表达细胞癌10例(37%)病例27。适度染色是2(7.4%)例15(55.6%)例表示负染法数字5,6,7,8。
3.4。对比p53表达在多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤引起
曼惠特尼测试显示,多形性腺瘤p53表达之间无显著差异(管肿瘤细胞)和癌出现在PA (P价值。08 > . 05)。6例肿瘤29显示了强劲的p53染色的导管细胞多形性腺瘤,但10例27显示相同的表达式在癌的细胞。
p53表达多形性腺瘤或癌病例出现在多形性腺瘤中显示数据2- - - - - -7。
4所示。讨论
4.1。p53和唾液腺的正常组织
p53表达消极的或弱核染色正常唾液腺(对照组)导管和腺泡的细胞,而这些结果符合Deguchi et al。10)表示,没有发现p53免疫染色在正常唾腺组织。
索伊尼et al。11]提到p53野生型蛋白短半衰期小于p53突变蛋白p53突变蛋白可以被探测到的细胞。的作者(12)指出,没有证据表明正常胸腺上皮细胞p53表达。奥格登et al。13]研究p53表达标本正常、良性口腔黏膜。从54标本活检获得良性的组织(正常粘膜、扁平苔癣、popillomas角化病)。p53蛋白在上面没有被观察到病变。奥格登et al。14)检测到p53的过度表达在正常口腔黏膜的口腔癌患者。p53阳性在正常粘膜可能是由于野生型p53的稳定。肿瘤抑制基因p53蛋白存在于各种细胞。在正常细胞中,野生型p53蛋白的浓度通常是低于免疫组织化学方法检测水平。然而,在p53的基因编码的蛋白质,经常发生点突变,导致突变蛋白的积累。因此,在22 - 70%的恶性肿瘤(如结肠癌、胃癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、甲状腺、p53蛋白可以通过免疫组织化学(15,16]。
得出结论,野生型p53在正常组织通常不是由免疫化学检测,由于低表达和短半衰期的组合。p53基因的突变导致的蛋白质的构象变化,变得稳定,因此允许immunohistochmical检测。
4.2。p53、多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤引起
p53强大而温和的核染色分为积极和现有指标改变p53在多形性腺瘤和癌中出现。低,负核染色归类为负,和现有的野生型指标(nonaltered p53)。p53-positive核染色细胞的比例(强大的和温和的)在肿瘤(75.9%)导管细胞的多形性腺瘤病例(22例29日表示强烈或温和的染色)。这些结果符合Azuma et al。17发现p53积累在75%(3/4)多形性腺瘤细胞系(使用Ab 1801和2401 Ab抗体)。Deguchi et al。1033]发现6例(18%)与良性多形性腺瘤p53阳性(使用cm - 1抗体)。山本et al。5]分析了包含三个形态组件包括腺瘤组织标本,过渡疫源地,癌8例癌在多形性腺瘤引起。p53蛋白的免疫组织化学分析(使用ab-6,克隆是1抗体)发现,p53表达的只有一个的多形性腺瘤8例(13%)。李等人。18]分析了数字17号染色体的畸变和p53基因多形性腺瘤中删除。染色体17(29.6%)所示的多形性腺瘤细胞。p53表达2 75例多形性腺瘤。他们证实,染色体畸变在多形性腺瘤早期开始。
山本et al。19)没有发现p53突变观察的多形性腺瘤7例(对照组)。Nordkvist et al。20.]研究p53表达(使用7抗体)在68例良性多形性腺瘤。68年只有8例p53表达与弱阳性染色。盖洛et al。21)发现,3例显示积极p53(11%) 26例腮腺良性肿瘤。Karja et al。22)报道,p53表达(使用Ab 1801)表达的多形性腺瘤的41%。
癌在多形性腺瘤引起的结果显示,12例(44.4%)表示中度或强烈的p53染色。这是与67%的频率10)和75% (5),先前报道。李等人。18]研究了数字17号染色体的畸变和p53基因删除癌在多形性腺瘤引起。多染色体观察到19.6%的癌细胞,染色体17(30.8%)的注册会计师所示细胞(癌在多形性腺瘤)。免疫组织化学染色显示p53表达CPA 6 9例(66.7%)。
山本et al。19)发现了一个高速率的突变(杂合性丢失)作为检测到p53基因在癌在多形性腺瘤引起的情况下(58%)。Nordkvist et al。20.]研究24例多形性腺瘤癌病例。17例表明p53表达。9例与p53阳性染色阳性细胞的1 - 10%,5例显示在11 - 50%的p53阳性染色细胞,和3例显示很强的染色的p53在51 - 100%的细胞。
Karja et al。22)研究中发生的癌12例PA, 6例(50%)病例显示p53-positive核染色。
4.3。p53强大核染色作为改变p53的强大的指标
如果我们认为p53-positive强染色单独作为一个强大的指标改变p53(> 75 - 100阳性细胞),然后,结果表明p53表达强烈6(20.7%)例导管细胞(肿瘤)29在多形性腺瘤10例(37%)27例癌引起的。结果表明p53变更增加的发病率从多形性腺瘤癌在多形性腺瘤引起。
结果表明p53表达的进步改变在多形性腺瘤中,发展为癌引起的。很可能的转录变异蛋白质在细胞核中积累和容易被探测到免疫组织化学占大多数的这些情况。
4.4。的解释的变化检测p53染色
这个差异p53的表达在我们的研究和上面提到的其他人可能是以下原因造成的。(1)使用不同的抗体。(2)不同的分类,例如,(0 =负染法,1 =低,2 =温和,3 =强或0 - 3 = - 4 0 - 2 = =正面或负面的,和3 - 4 =积极或消极的和积极的染色)。(3)固定时间和浓度的抗体。(4)的敏感性所使用的技术。
突变通常是增加细胞从良性肿瘤癌。是令人惊讶的结果表明,改变p53的比例高于癌在多形性腺瘤病例中、强染色后结合在一起,一起和消极和低染色。要是强阳性染色作为指标的改变在肿瘤抑制蛋白p53的表达,然后改变p53的表达的癌在多形性腺瘤中含量增加而多形性腺瘤。
免疫染色技术一直只用于检测p53的表达的改变在我们的研究中。这种技术是一种简单的方法来执行,但正面或负面的评估核染色细胞是有争议的。许多作者使用不同的标准,所以结果不能相比。在目前的研究中,使用评估的正面和负面的染色染色避免任何混乱的解释结果。理想情况下只使用免疫染色技术结合的另一个技术例如,(聚合酶链反应,免疫印迹)检测和确认存在突变。许多研究使用标准等负面的,低,温和,和强大的染色。
4.5。p53的表达在肿瘤导管细胞多形性腺瘤和Myxochondroid组织
Wilcoxon测试表明p53的表达显著区别myxochondroid和肿瘤管细胞,核染色(P值<措施)。
p53表达多形性腺瘤显示,这些蛋白的异常表达的发病率更高比myxochondroid管肿瘤细胞组织。虽然在表达式在myxochondroid组织p53显示变更,有证据表明myxochondroid组织显示低水平的细胞增殖(23]。
4.6。比较统计分析p53的多形性腺瘤和癌在多形性腺瘤引起
曼惠特尼测试显示,多形性腺瘤p53表达之间无显著差异(管肿瘤细胞)和癌出现在PA (P值> . 05)。不幸的是,p53不能用作指标区分多形性腺瘤和癌中出现。
5。结论
结论可以总结以下几点。(我)癌在多形性腺瘤的情况下产生的样本是大(27例)与他人相比,尽管进一步的研究需要增加样本量确定肿瘤抑制蛋白的作用在多形性腺瘤的恶性病变的发病机理。(2)p53在PA和改变增加了注册会计师的频率。(3)使用一个标准的积极的和消极的核染色评估肿瘤抑制蛋白的表达似乎给更有说服力的结果比消极等不同类别的使用,低,温和,和强大的染色。(iv)肿瘤抑制蛋白p53肿瘤显示异常表达在导管细胞比myxochondroid细胞组织,更频繁的概念,后者可能不会阻止肿瘤细胞恶性发展负责。(v)p53的表达改变PA和注册会计师。进一步的研究从研究病例中提取DNA检测突变可能失活的主要原因,确定甲基化或损失等其它原因造成的失活杂合性建议。
缩写
| PA: | 多形性唾腺瘤 |
| 注册会计师: | 癌前多形性腺瘤。 |