矩阵Metalloproteinase-1基因多态性与Ultrasound-Assessed颈动脉厚度在老年人中

文摘

背景和目的。由于血管疾病的发病率高,有必要确定新的循环或结构标记预测患慢性疾病的风险。一些研究表明MMP1基因多态性与原位酶表达水平(例如,在动脉粥样硬化斑块)。目标。因此,这种多态性的研究可以帮助了解冠状动脉疾病的病理生理学。方法。我们进行了横断面的临床和实验室评估(包括测量颈动脉内膜-中膜厚度)和基因分型的MMP1 SNP rs495366 (A / G) 366年老人。结果。基因型之间没有显著差异被发现为生化、代谢、炎症或临床变量除了显著差异为左颈动脉内膜-中膜厚度和意义的趋势。结论。MMP1表达较低的运营商相关的等位基因(等位基因)提出了更大的颈动脉厚度。我们认为,这一现象可以解释为重建受损的动脉壁(可怜的降解胶原纤维在这种情况下),产生颈动脉壁增厚和脑血管事件的内在风险更大。

1。介绍

世界卫生组织(世卫组织)报告说,全球60%的死亡是由于慢性疾病,主要vascular-related障碍(1,估计,这个值将在2020年达到80%在发展中国家(2]。在巴西,大约三分之一的人超过60岁的死亡引起的血管事件,类似于联邦地区[比例3]。循环系统疾病与临床和生物发现如肥胖、系统性动脉高血压、2型糖尿病、血脂异常、遗传因素,总之,互动和作为风险因素血管疾病的发病和进展,从而影响患者的死亡率。在这种背景下,动脉粥样硬化是一个潜在的原因,因为它触发致命或致残事件的比例最高4]。

动脉粥样硬化动脉壁的慢性炎症的结果引发了针对内生结构修改时,尤其是氧化脂蛋白。人们普遍认识到,刺激循环介质的先天和适应性免疫反应会导致进一步的血管壁损伤,促进疾病进展(5]的证据支持和抗炎因素之间的不平衡中扮演着一个关键的角色在早期血管内皮功能障碍(6]。

动脉粥样硬化是一种进步,造成不可逆过程的一系列特定的细胞和分子因素影响大中型弹性或肌肉动脉(7]。主要关心的是引起血栓形成的可能性或严重动脉狭窄,导致危及生命的不良事件,如心肌梗塞、中风、肾脏和肠道和缺血性损伤,以及其他表现。避免发病率和死亡率循环导致识别证明重大利益的无症状患者处于危险之中。在这种背景下,增厚的颈总动脉的内膜-中膜层是一种亚临床生物标志物与合理预测容易衡量的能力相关的血管事件(8]。有证据的文献将测量颈动脉内膜中层厚度(cIMT’)与心血管风险(9- - - - - -11]。在关心脑血管设置,Eigenbrodt et al。12)和Baldassarre et al。13)独立提出证据颈动脉厚度和中风之间的关联事件,表明这种方法可以是一个有价值的预后的生物标志物。

脆弱的动脉粥样硬化斑块的发展涉及到强烈的炎症的淋巴细胞,巨噬细胞和肥大细胞。在这个环境中,基质金属蛋白酶(MMPs)通常是由巨噬细胞分泌,逐步降低胶原纤维囊的组件。基质金属蛋白酶是肽链内切酶,含有锌和/或钙在其活跃的站点和降解细胞外基质蛋白,胶原纤维等,从而影响内皮基膜的完整性和斑块稳定先进粥样斑破裂的风险(4,14]。

因为心血管疾病仍然是主要的死亡原因在全世界范围内,有必要确定新的循环或结构标记预测患慢性疾病的风险。研究基质金属蛋白酶的表达是很重要的对于理解生物过程,如细胞分化和功能,与病理过程(15),如冠状动脉疾病(16]。一些研究表明MMP1基因多态性与酶表达水平相关,包括原位水平(例如,在动脉粥样硬化斑块)[17]。例如,MMP1基因表达可能是影响单核苷酸多态性(SNP)基因的启动子区域位于11 q22.3位置,导致微分MMP1表达根据等位变异(15,17]。

在这种背景下,陈等人。18使用高通量,全基因组扫描程序,确定一个协会之间的rs495366 MMP1基因的SNP和循环,血清水平的可以。因此,这种多态性的研究有助于阐明血管疾病的病理生理学。本研究的总目标是测试之间的关联rs495366 MMP1基因的多态性与血管危险因素的样本中发现巴西联邦区的老年人口。

2。方法

2.1。样本

样品管控的60岁以上患者没有临床症状严重的动脉粥样硬化是招募了2011年和2013年两个一般老年门诊(老年单元的天主教大学的巴西利亚(UCB)和老年人医疗中心大学的巴西利亚(超窄带))位于大都会地区的联邦地区,巴西。样品被用来评估通过横断面评估心血管事件的风险。超窄带被送到了医院病人招募的天主教大学的巴西利亚(HUCB)获得一个标准化的基线评估临床协议由相同的医疗团队。

入选标准为患者自发寻求主要或次要照顾血管事件在上述健康网站。排除标准包括展示(我)自身免疫性疾病的病史或任何类型的肿瘤,现在或过去的;(2)肺条件兼容的报告严重梗阻症状;(3)严重的慢性肾脏疾病由肌酐清除率< 25毫升·分钟⁻¹;和/或(iv)临床复发性感染或慢性炎症的历史。

该项目研究伦理委员会批准的医学院的协议下的超窄带数字061/2011。所有参与者签署知情同意的形式。

2.2。临床和生化评价

临床检查由一个通用评估测量患者的静息血压(BP)、心脏和肺听诊,表面和深层的腹部触诊,检查和数字触诊的下肢根据常规也是标准。问卷调查也管理获得的信息社会经济概况和药物使用,消费记录活动原则及其分类。之前的循环事件,如心肌梗塞或中风,以及生活方式方面,如久坐不动的生活方式和吸烟,也记录下来。

2型糖尿病的诊断包括自我报告的条件和禁食糖化血红蛋白(HbA1c)≥6.5%,考虑到消费的血糖过低的代理或胰岛素。个人被认为是运动如果他们报道30分钟或者更长时间的练习一周至少四天,而吸烟被定义为> 100支香烟的消费。对于代谢分析,以下测量得到根据常规临床生物化学和表达在标准单位:血糖、糖化血红蛋白(HbA1c),总胆固醇和分数,甘油三酯,高敏c反应蛋白和促甲状腺激素(TSH)。人体测量分析评估的身体质量指数(BMI,公斤/米²),每个主题的腰围(cm)。

2.3。内中膜厚度的测量

颈动脉内膜中层厚度(cIMT’)是决定早在所有参与者使用高分辨率超声(飞利浦、模型即33)与3 - 9 MHz线性传感器。测量的测量进行双边颈总动脉远端墙的灯泡和颈内动脉的起源时,使用一个自动边缘检测软件,可以显示任何10毫米的最大值150测量部分(19]。最大测量手动测量的意思是三个独立的测量。所有临床过程和成像评估在联合医院进行。

2.4。MMP1基因分型

总基因组DNA可以使用商业开采装备(QIAamp DNA迷你包、试剂盒、巴西)。PCR反应是使用qPCR执行(实时PCR) TaqMan®普遍掌握混合试剂,测定特定的SNP rs495366热费希尔(麻萨诸塞州,美国),与探测器来探测到侧翼区域和多态变化基于TTGACCTAAATTTCTGCAAACTATA [R] TCTTATGGTTATGACTCTTTTTGT序列。变性/扩展时间和数量的周期使用标准程序使用的设备,QuantStudio 3实时PCR系统(美国马萨诸塞州热费舍尔®)。

2.5。评估炎症

时的生化评价,全血收集。获得的血清是冻结在−80°C和评价免疫介质后解冻。细胞因子浓度被传统评估immunoenzymatic化验(ELISA)使用特定工具制造的BD生物科学(美国圣地亚哥,CA)使用根据制造商的协议。

短暂,每个血清样本处理的标准样品一式两份一起提供的中介工具,和阅读了BioTek®读者(美国VT Winooski)。标准曲线生成的每个细胞因子的线性回归,和每个血清样本的浓度取决于插值从相应的曲线。

2.6。统计分析

测试之间的差异的临床、生化和人体测量的样品根据MMP1基因型,我们统计分析相比Mann-Whitney集中趋势测量的测试(连续变量)或卡方检验的频率。所有变量的正态分布是使用Kolmogorov-Smirnov测试评估。这些分析,采用显著性水平。所有分析社会科学统计软件包(SPSS)对Windows(版本17.0)。

3所示。结果

共有366人60岁及以上没有临床症状的严重动脉粥样硬化连续治疗的老年病学单位机构包括参与这项研究。SNP基因分型结果rs495366透露,该等位基因构成一个少数民族(),被添加到杂合的组形成一个组()(现代)等位基因的携带者。GG基因型组包括192名患者类似的平均年龄和性别比例。基因型比例并没有违反哈迪温伯格平衡()。

推论统计的人体测量、代谢和生化变量分析了个人根据基因型群体定义并展示在表1。在纯粹的描述性术语,样本的高患病率的生化和代谢紊乱如超重、2型糖尿病、血脂异常,如预期和系统性动脉高血压、老年个体从一个发展中国家20.]。然而,在频率没有变化或发现了这些结果的平均值根据MMP1基因型。

类似于生化和代谢变量,为临床变量组之间没有显著差异指出除了足够的差异在左侧颈动脉内膜-中膜厚度()和一个趋势在右边对应的领土有显著差异()。关于行为变量增加心血管事件的风险,如久坐不动的生活方式或吸烟,没有统计和观察临床显著差异。

4所示。讨论

本研究的主要发现是一个重要的区别在左颈动脉内膜-中膜厚度,在运营商的0.17毫米厚rs495366等位基因与运营商GG基因型相比。左侧颈总动脉可能被认为更容易动脉粥样硬化相比,可能更容易发生动脉粥样硬化斑块的发展因此中风(21,22)由于该地区更大的血流量,其余的健康问题(23]。基于内膜壁厚的增加体现在这里,我们可以假设的等位基因携带者的rs495366 SNP可能更容易中风,洛伦茨et al。(24]表明颈动脉厚度0.10毫米增加中风的风险增加17%。

一些遗传因素被认为是动脉粥样硬化疾病发展的决定因素。大约400个基因可能参与各种因素的规定,如内皮功能、凝血、炎症,和脂质代谢25]。其中,我们强调MMP1 (collagenase-1)多态性,因为一个不平衡的活动报告文学的因素导致斑块不稳定粥样斑(26]。

MMP1表达增加动脉粥样硬化的早期阶段组织重塑过程可能是代偿反应,涉及生理应激下延迟血栓栓塞事件的进展26]。然而,一个不能忽视的假设可以通过过度积累中具有重要的病理生理学作用,由于平滑肌细胞积累在坏死核心纤维帽下,它削弱了高压区域(6),诱发破裂的斑块4,27]。尽管这一假设,可以激活对血管壁重塑至关重要,防止内膜层的过度增长,以应对损伤主要由血管平滑肌细胞的迁移或重组。从这个意义上说,它是合理的,观察协会源自能力受损促进一个等位基因携带者的重构,这是与减少运营商的等位酶表达的组织形式(6]。Galon et al。16)建议降低MMP1表达导致细胞外基质蛋白的积累,导致血管病变的早期形成和促进粥样斑块破裂的结构性变化。

的保护作用增强MMP1表达支持Lemaitre et al。28和你们et al。26),这表明增加MMP1表达在动脉粥样化形成的结果在较小和较严重的损伤胶原蛋白含量较低,这是兼容-重构(胶原蛋白退化矩阵),延迟动脉粥样化形成的过程和结果更稳定的病变。

关于我们的发现的有效性,假设两个基因型组规模大致相等,惠特利的方程和球29日)是用来计算后验的力量我们的研究检测颈动脉厚度的变化。考虑左侧颈动脉测量在不同基因型之间的平均值是0.17毫米和普通变量的标准差是0.62毫米,标准化的差异被发现是0.17/0.62 = 0.274 (0.3)。因此,参与者需要检测的数量差异的80%和5%计算统计显著性水平在每组176例。我们的研究是非常接近所需的样本量认为它代表,只有短暂的两个人在群G该等位。

应该认识到,动脉粥样硬化斑块的发生是多因素疾病主要是由于不健康的生活习惯,比如富含脂类和碳水化合物的饮食,久坐不动的生活方式,和吸烟。虽然不可能调查病人的膳食摄入量,我们的研究有助于证明后者方面的文学团体之间的相似,因此没有显著影响的结论。同样,符合几项研究,分析了不同的风险因素的影响中风在几个全球人口(30.- - - - - -34),经典的频率中风的危险因素(高血压、血脂异常、肥胖和糖尿病)基因型组之间没有差别,可能揭示一个等位基因的效应大于组间同质时经典的决定因素。甚至系统性炎症因子,与侧颈动脉分支(之间的不平等35),似乎并不在我们最近的研究结果产生影响。尽管MMP1缺乏实际的评估水平,作者认为这种限制是处理,在某种程度上,减少了调查,正是依赖基因变异影响MMP1水平的确凿的证据。因此,我们的条件被认为是最好的代理。

然而,重要的是要认识到矩阵退化不仅取决于组织金属蛋白酶的表达也激活模式的酶在细胞外空间,由内源性抑制剂的抑制程度提升,酶的存在和活动不直接降低metalloprotease矩阵。因此,更好的理解矩阵的相关元素和动态降解纤维斑块在高压力的地区需要提供稳定和不稳定斑块的进展信息在循环树(6]。

5。结论

在这项研究中,研究对象相关的等位基因携带MMP1表达表现出较低的左颈动脉内膜中层厚度增加,这个发现是推测老年门诊病人中增加中风的风险。不平衡时,可以活动先进动脉粥样化可能是斑块不稳定的因素之一。因此,我们假设MMP1表达增加动脉粥样化形成的早期阶段可能是有益的适应性反应。

数据可用性

在生成的数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。

的利益冲突

作者声明不存在任何潜在的利益冲突。

作者的贡献

吉尔伯托·桑托斯极其初中和她奥利维拉罗德里格斯评估MMP1基因型;奥黛丽塞西莉亚Tonet-Furioso和Adriane Dallanora戴安娜基因分型结果执行质量控制程序;露西奥里维拉戈麦斯和克莱顿佛朗哥·莫拉执行医疗组件的研究;吉尔伯托·桑托斯极其初中和Ciro布进行人体测量评估对象;克莱顿佛朗哥·莫拉和Otavio托莱多Nobrega设计和协调的研究以及分析结果;吉尔伯托·桑托斯极其小她奥利维拉罗德里格斯,Otavio托莱多Nobrega参与原稿的准备。

确认

这项研究是支持赠款445692/2014和442925/2014号从CNPq以及格兰特从FAPDF 193.000.967-2015 193.001.240 2016号,与助学金极其吉尔伯托·桑托斯初级生产力研究(披肩)和奖学金,Otavio托莱多Nobrega (CNPq)。

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