单一标准物质提取的十一个组件的同时测定Paeoniae基数Alba(芍药的根笼罩。)

文摘

Paeoniae基数Alba (PRA),一种草药药物产生的根源芍药棺罩。,is widely used in many herbal medicine prescriptions/preparations. Since the pharmacological effects of PRA come from multiple chemical components, it is important to establish a method for the determination of those components in PRA extracts with simple operation and low cost, which is more suitable to evaluate the quality of PRA extracts and optimize the extraction process. This work introduced the quantitative analysis of multicomponents with a single-marker (QAMS) method for the simultaneous determination of eleven bioactive components in PRA extracts, including gallic acid, oxypaeoniflorin, catechin, albiflorin, paeoniflorin, ethyl gallate, galloylpaeoniflorin, pentagalloylglucose, benzoic acid, benzoylpaeoniflorin, and paeonol. In the QAMS method established based on high performance liquid chromatography with diode array detection, only the reference substance of paeoniflorin was needed, and the other ten components were determined based on their relative correction factors (RCFs) to paeoniflorin. Moreover, the repeatability and robustness of the RCFs were studied with different column temperatures, detection wavelengths, flow rates, column types, and instruments. In method validation, good linearity (r> 0.999)、稳定性、可重复性(RSD < 1.9%),和准确性(复苏在96.1% - -105.5%)。样品分析表明,QAMS方法与传统的外部标准方法是相一致的。建立的方法提供了一个全面、高效和低成本的工具PRA提取物的常规质量评价。

1。介绍

Paeoniae基数Alba (PRA)中国的药用历史悠久,生产的根源芍药棺罩。(RPLP)通过删除其根皮,煮水,在阳光下干燥。PRA主要包含组件包括单萜苷(如。、芍药苷、albiflorin oxypaeoniflorin、benzoylpaeoniflorin galloylpaeoniflorin),单宁(如。没食子酸、没食子酸乙酯,pentagalloylglucose),芍药醇,等。(1,2]。现代药理研究表明,PRA的组件止痛剂(3,4],王亚南[5),和抗炎6- - - - - -8)的影响。PRA也用于许多草药处方/准备工作,如Shaoyao Gancao煎煮,Danggui Shaoyao煎煮,信息量计算Shiquan确定大埠药片,Bazhen药片,等。在当前中国药典9),PRA出现在158中药制剂,中药排名第七。使用的处方或生产准备,PRA通常由水或含水乙醇提取。生物活性成分提取的内容的质量有很大的影响最后的准备,确定其临床效果。因此,生物活性成分定量方法评估需要PRA提取物的质量,优化提取工艺。

当前中国药典9)只需要芍药苷作为内容的quality-marker决心,这使得它难以全面反映PRA的内在质量,因为据报道,PRA来自不仅芍药苷的药理作用但也有许多其他组件(8]。近年来,有各种各样的方法来分析报道PRA的组件,如高效液相色谱法(1),但是10)和核磁共振(11),等。然而,由于一些标准物质像oxypaeoniflorin, galloylpaeoniflorin, benzoylpaeoniflorin是昂贵和难以做好准备,分析的成本会相对较高,如果多个组件是使用传统的外部标准量化方法(ESM)。此外,质和NMR方法不是很方便,HPLC-UV方法由于其高仪器成本。因此,有必要找到一种更低成本和方便的方法来评估PRA提取物的质量。定量分析的多组分single-marker (QAMS)是一种基于相对校正因子的定量方法分析物之间的(rcf),它使用只有一个参考物质代替多个参考物质(12,13]。因为在不同的分析情况(如。不同的乐器),不同分析物的检测响应(校正因子)通常变化方向相同(即。,同时增加或减少),量化的rcf几乎不变和健壮。QAMS方法可用于克服困难的参考物质短缺和高成本分析(13- - - - - -19]。然而,在报道QAMS方法,分析物的数量通常小于7。分析物的数量的增加,QAMS方法的优势将更加突出。

为更好的质量评价PRA提取物具有操作简单和成本低,这项工作开发高效液相色谱法来确定多达11个组件,包括没食子酸、oxypaeoniflorin,儿茶素,albiflorin,芍药苷、没食子酸乙酯,galloylpaeoniflorin, pentagalloylglucose,苯甲酸,benzoylpaeoniflorin,芍药醇(图1),只使用一个参考芍药甙的物质,调查QAMS方法的可行性和适用性。通过充分的分离条件的优化,同时十一个组件可以很好地分隔,使紫外检测器的使用而不是更多的选择性但昂贵的探测器(如女士)。由于其低要求仪器和标准的引用,该方法被认为是方便使用在未来相关研究PRA和RPLP。

2。材料和方法

2.1。材料

RPLPs是来自四个不同产地在中国,包括吉林省白山,潘位于浙江省东阳市浙江,浙江杭州,干使用前(即。处理,而不是通过移除根树皮和沸腾的水像PRA的准备部分)。准备的PRA是在中国从四个不同的药店购买,包括Zhangzhongjing药房(安徽亳州,中国),河南中药制药(安徽亳州,中国),Qixiangge(浙江金华,中国),和Renshoutang(浙江绍兴,中国)。物种鉴定是由羽扇秦教授(中国浙江医科大学)。没食子酸对照品的购买推动生物技术有限公司有限公司(成都,四川,中国)。oxypaeoniflorin的参考物质,albiflorin、芍药苷和benzoylpaeoniflorin从胜利购买生物科技有限公司有限公司(成都,四川,中国)。儿茶素的对照品是购自上海原液生物技术有限公司(上海,中国)。pentagalloylglucose的参考物质从Xunchen购买生物科技有限公司有限公司(成都,四川,中国)。没食子酸乙酯和苯甲酸的参考物质从罗恩购买科技有限公司有限公司(上海,中国)。芍药醇对照品的购买是由生物技术有限公司(上海,中国)。应用高效液相色谱法是所有参考物质的纯度超过98%。 HPLC grade acetonitrile and methanol were purchased from Tedia Co., Inc. (Fairfield, OH, USA). HPLC grade phosphoric acid was purchased from Tianjin Saifurui Technology Co., Ltd. (Tianjin, China). Deionized water was produced with a UPH-III-5T water purification system (Chengdu Chaochun Technology Co., Ltd., Chengdu, Sichuan, China).

2.2。提取Paeoniae基数Alba /根芍药笼罩在

PRA / RPLP粉粒度低于0.85毫米。5 g的粒子提取25毫升的70% (v / v)乙醇超声提取方法40分钟。提取被让站在室温和70% (v / v)乙醇添加到减肥期间提取。提取是离心5分钟,每分钟16000转,上层清液用于分析。

2.3。高效液相色谱分析

水域e2695的高效液相色谱分析进行了高效液相色谱系统配备了2998照片(PDA)二极管阵列检测器(水Corp .,米尔福德,妈,美国)使用Phenomenex Luna C18柱(5μ米、250×4.6毫米)。流动相乙腈和移动阶段B是0.01% (v / v)磷酸水溶液。使用线性梯度洗脱如下:8% 0-20分钟,8 - 24%在20 - 50分钟,50%在50 - 60分钟,50 - 90%在60 - 68分钟。流量为1.0毫升/分钟和列温度是27°C。注射体积是10μl .紫外线波长274 nm为没食子酸、儿茶素、albiflorin,芍药苷、没食子酸乙酯,galloylpaeoniflorin, pentagalloylglucose,苯甲酸,oxypaeoniflorin benzoylpaeoniflorin,芍药醇257海里。

2.4。准备标准的解决方案和解决方案示例

oxypaeoniflorin,股票的解决方案没食子酸儿茶素,albiflorin,芍药苷、没食子酸乙酯,galloylpaeoniflorin, pentagalloylglucose,和benzoylpaeoniflorin浓度的4.975,2.974,0.7321,7.051,95.95,12.62,0.2959,3.838,和3.727毫克/毫升准备,分别由每个参考物质的溶解在30% (v / v)甲醇。股票的解决方案苯甲酸和芍药醇浓度的23.69和4.009毫克/毫升准备,分别由每个参考物质溶解在甲醇。根据提取11成分的浓度,混合标准解决方案由混合适量的十一个股票的解决方案和稀释为30% (v / v)甲醇。没食子酸的最终浓度、oxypaeoniflorin儿茶素,albiflorin,芍药苷、没食子酸乙酯,galloylpaeoniflorin, pentagalloylglucose,苯甲酸,benzoylpaeoniflorin,芍药醇分别为42.29,108.5,56.74,409.0,6141,107.3,136.0,343.5,236.9,240.4和36.08μ分别g / mL。

PRA / RPLP提取直接分析作为示例解决方案没有任何样品预处理。所有的样品和标准的解决方案被储存在4°C和室温之前分析。

2.5。应用多组分的相对校正因子定量分析

在公式(1),年代代表的内部标准(即。,芍药苷)和工作一个_年代峰面积得到来自哪里米_年代(组件的质量年代)。校正因子(f_年代)计算米_年代/一个_年代。为组件x,一个_x的峰面积吗米_x(组件的质量x),校正因子(f_x)计算米_x/一个_x。的RCF公司x来年代(f_{x /秒})可以计算f_x/f_年代。

RCF可以通过高效液相色谱分析测定的混合标准溶液。然后组件的内容x(米_x”)可以由高效液相色谱分析的样本和计算公式(2)。

和峰值区域获得的高效液相色谱分析样品的解决方案。和米_年代^”芍药苷的含量,可以由传统的外部标准方法。

2.6。方法验证

国际协调会议指南(后20.)方法进行了验证,包括线性、检测极限(LOD),量化的限制(定量限)、精度、重复性、稳定性和准确性。

3所示。结果与讨论

3.1。分析条件的优化

酸的效果添加到分离的流动相比较第一,由于酚类化合物的保留行为和pentagalloylglucose rp -列可以显著影响流动相的pH值(1,21]。Oxypaeoniflorin /儿茶素和albiflorin /芍药苷不能没有酸性流动相分离,和严重的拖尾峰出现。流动相中的磷酸的加入可以降低albiflorin和芍药苷的峰宽度达到更好的分离。当磷酸的浓度为0.1%或0.5% (v / v),可怜的没食子酸的分离,oxypaeoniflorin,儿茶素显示和尾矿山峰albiflorin和芍药苷也被观察到。然后磷酸的浓度降低到0.01%,导致更好的这些组件的分离。

分离的组件与类似的保留时间(如。oxypaeoniflorin /儿茶素)是一个关键的优化分析条件。尝试不同的梯度洗脱条件后,8%的权力平等主义的洗脱0-20分钟然后梯度洗脱是更好的分离组件对保留时间,比如oxypaeoniflorin /儿茶素和galloylpaeoniflorin / pentagalloylglucose。三种不同列的阿克苏诺贝尔公司Kromasil C18 (5μ米、250×4.6毫米),热科学ODS海波西尔C18 (5μ米、250×4.6毫米),Phenomenex Luna C18 (5μ米、250×4.6毫米),不同列温度(25日27日,30日,35岁和40°C),和不同的流率(0.8,1.0,和1.2 mL / min)。在Kromasil C18柱,oxypaeoniflorin和儿茶素的分离并不好。海泼斯尔合金的C18柱无法单独的没食子酸和oxypaeoniflorin从附近的干扰峰。相比之下,卢娜C18柱oxypaeoniflorin分离是有效的,儿茶素,galloylpaeoniflorin, pentagalloylglucose和苯甲酸。当温度超过30°C,没食子酸,oxypaeoniflorin,儿茶素不分离。27°C被选中,是因为分离比在25°C。当流速为0.8毫升/分钟,没食子酸和galloylpaeoniflorin可怜的分离和pentagalloylglucose不能分开苯甲酸。1.0毫升/分钟的流量可能相对较好分离组件。通过充分的分离条件的优化,十一个组件的决议都大于1.5。

十一个组件通过PDA的光谱探测器在图所示2。Albiflorin、芍药、galloylpaeoniflorin benzoylpaeoniflorin,芍药醇测定在最大吸收波长(274海里)。最大吸收波长的没食子酸、儿茶素没食子酸乙酯,pentagalloylglucose,和苯甲酸270海里,278 nm、271 nm、280 nm和272 nm,分别。这些组件确定在同一波长274 nm的因为它们的光谱接近274海里都很平坦(图2),和敏感性最大波长的类似。Oxypaeoniflorin决心在其最大吸收波长为257 nm。优化分析的色谱收购条件如图3(274海里)。

(一)

(b)

(c)

(d)

(e)

(f)

(g)

(h)

(我)

(j)

(k)

(一)

(b)

3.2。方法验证

3.2.1之上。校准曲线和相对校正因子

不同的卷(2、5、10、20、35岁和50岁μL)的混合标准溶液注入到仪器和分析。线性方程的计算是通过最小二乘回归方法,以注入组件的质量为X变量和峰值区域Y变量。所有的11个组件显示良好的线性相关系数(r(表)都大于0.99941)。


组件	线性方程	r	线性范围(ng)	LOD (ng)	定量限(ng)

没食子酸	Y= 2939X−7.236×10⁴	0.9999	-2114 - 84.57	5.373	13.43
Oxypaeoniflorin	Y= 1714X−1.486×10⁵	0.9999	-5427 - 217.1	19.63	196.3
儿茶素	Y= 713.1X−3.237×10⁴	0.9999	-2837 - 113.5	37.52	75.04
Albiflorin	Y= 93.82X−1.700×10⁴	0.9999	818.0 - -2.045×10⁴	209.8	419.6
芍药苷	Y= 103.0X−3.256×10⁵	0.9999	1.228×10⁴-3.070×10⁵	344.7	689.4
没食子酸乙酯	Y= 3158X−1.939×10⁵	0.9999	-5365 - 214.6	7.451	29.80
Galloylpaeoniflorin	Y= 1034X−9.033×10⁴	0.9999	-6798 - 271.9	20.27	40.53
Pentagalloylglucose	Y= 2380X−5.623×10⁴	0.9994	687.0 - -1.718×10⁴	14.59	36.46
苯甲酸	Y= 545.9X−9.042×10⁴	0.9999	473.7 - -1.184×10⁴	41.02	82.04
Benzoylpaeoniflorin	Y= 171.2X−2.513×10⁴	0.9999	480.8 - -1.202×10⁴	25.68	128.4
芍药醇	Y= 5077X−9.662×10⁴	0.9999	-1804 - 72.16	4.079	8.159

芍药苷被选为芍药苷的内部标准,因为保留时间通常是在中间,它的浓度是最高的11个要素之间的关系。芍药苷对照品的相对便宜,这也是一个合适的因素为内部标准。rcf公司收购了从不同的注入量(表关系密切2)和平均相对离心力被用于以下工作。


相对校正因子	50μl	35μl	20μl	10μl	5μl	2μl	的意思是	相对标准偏差(%)

f_{没食子酸、芍药苷}	0.0350	0.0353	0.0354	0.0356	0.0353	0.0330	0.0349	2。8
f_{oxypaeoniflorin /芍药苷}	0.0601	0.0613	0.0611	0.0637	0.0636	0.0592	0.0615	3所示。0
f_{儿茶素、芍药苷}	0.146	0.144	0.148	0.153	0.155	0.148	0.149	2。9
f_{albiflorin /芍药苷}	1.10	1.09	1.10	1.09	1.09	1.02	1.08	2。6
f_{没食子酸乙酯/芍药苷}	0.0327	0.0327	0.0327	0.0329	0.0333	0.0326	0.0328	0.8
f_{galloylpaeoniflorin /芍药苷}	0.0998	0.100	0.100	0.102	0.104	0.0992	0.101	1。7
f_{pentagalloylglucose /芍药苷}	0.0436	0.0417	0.0412	0.0413	0.0418	0.0406	0.0417	2。4
f_{苯甲酸/芍药苷}	0.189	0.189	0.195	0.194	0.193	0.181	0.190	2。6
f_{benzoylpaeoniflorin /芍药苷}	0.603	0.603	0.607	0.613	0.615	0.604	0.607	0.9
f_{芍药醇/芍药苷}	0.0203	0.0203	0.0203	0.0204	0.0207	0.0193	0.0202	2。3

3.2.2。检测和量化的极限

混合标准解决方案先后稀释为30% (v / v)甲醇为一系列不同浓度的标准解决方案和分析。钟表和定量限的信噪比测量3和10个,分别。结果显示(表接受灵敏度的方法1)。

3.2.3。精度

提取是作为样品溶液和反复注射6次盘中估计精度。盘中的所有组件显示良好的精密度rsd < 2.0%(表3)。


组件	盘中精度(RSD = / %)	中间精密度(RSD = / %)	重复性(RSD = / %)	稳定(相对标准偏差(%)

没食子酸	1。5	1。1	1。9	1。9
Oxypaeoniflorin	1。2	1。9	1。4	0.6
儿茶素	0.6	1。7	1。7	0.5
Albiflorin	1。0	1。9	1。8	2。0
芍药苷	0.9	2。2	1。9	2。0
没食子酸乙酯	1。7	1。8	1。4	2。0
Galloylpaeoniflorin	0.8	1。8	1。9	1。8
Pentagalloylglucose	1。6	2。9	1。3	2。7
苯甲酸	0.8	2。7	1。6	0.9
Benzoylpaeoniflorin	1。3	2。8	1。7	1。8
芍药醇	0.5	0.5	0.5	0.1

中间精密度研究通过分析一个样品溶液三天使用两个水域高效液相色谱系统。所有组件的rsd为2.9%(表内3)。

评估可重复性,提取分别加载到6样品瓶和分析,因为没有样品预处理进行了提取。所有组件的rsd为2.0%(表内3)。

3.2.4。稳定

稳定性评估通过分析一个样品溶液接触后在室温下为0,1,2,4,8日,12日和24小时。我们可以看到从rsd =(表3),样品在室温下稳定在24 h。

3.2.5。精度

经济复苏实验测量精度。过程如下:0.1毫升的适当的混合标准溶液浓度上升到0.1毫升的提取物(提前进行分析),和飙升的样本进行了分析。提取组件的质量,混合标准溶液,上升(表样本4)被乘法计算量(0.1或0.2毫升)的浓度决定。十一个组件计算的复苏,从96.1%到105.5%不等(表4),显示良好的准确性。


组件	原始(μg)	上升(μg)	发现(μg)	恢复(%)	平均回收率(%)	相对标准偏差(%)

没食子酸	60.14	42.29	101.5	97.7	97.1	1。1
	58.34	42.29	100.1	98.7
	51.15	42.29	92.43	97.6
	53.03	42.29	93.75	96.3
	53.94	42.29	94.60	96.1
	31.25	42.29	72.02	96.4

Oxypaeoniflorin	103.6	108.5	211.0	99.0	101.8	2。7
	103.8	108.5	212.1	99.8
	82.36	108.5	195.9	104.6
	88.36	108.5	200.9	103.7
	88.18	108.5	201.6	104.5
	114.2	108.5	222.1	99.4

儿茶素	32.29	56.74	91.44	104.3	105.5	1。9
	29.87	56.74	89.32	104.8
	31.65	56.74	91.04	104.7
	26.12	56.74	87.05	107.4
	36.56	56.74	95.31	103.5
	37.48	56.74	99.07	108.6

Albiflorin	459.5	409.0	853.7	96.4	98.5	2。7
	440.2	409.0	858.7	102.3
	367.3	409.0	758.7	95.7
	385.3	409.0	772.1	94.6
	308.5	409.0	723.7	101.5
	365.0	409.0	776.5	100.6

芍药苷	7775年	6141年	13979年	101.0	98.3	1。5
	7997年	6141年	13934年	96.7
	6275年	6141年	12336年	98.7
	6750年	6141年	12742年	97.6
	6720年	6141年	12741年	98.1
	6860年	6141年	12855年	97.6

没食子酸乙酯	190.8	107.3	295.9	97.9	98.3	2。6
	186.0	107.3	296.7	103.2
	162.2	107.3	268.1	98.7
	159.2	107.3	262.3	96.0
	166.5	107.3	270.2	96.6
	216.8	107.3	321.5	97.5

Galloylpaeoniflorin	167.1	136.0	306.8	102.8	104.6	0.9
	161.9	136.0	304.1	104.6
	133.0	136.0	275.8	105.0
	141.6	136.0	283.5	105.0
	137.6	136.0	280.4	105.5
	70.24	136.0	213.7	102.9

Pentagalloylglucose	646.4	343.5	989.2	99.8	98.5	1。6
	643.5	343.5	977.8	97.3
	525.3	343.5	873.0	101.2
	583.6	343.5	919.4	97.8
	571.1	343.5	905.4	97.3
	570.9	343.5	906.3	97.6

苯甲酸	223.5	236.9	465.8	102.3	102.8	1。2
	226.2	236.9	475.1	105.1
	199.7	236.9	442.8	102.6
	218.3	236.9	461.5	102.7
	202.0	236.9	445.5	102.8
	125.6	236.9	365.4	101.2

Benzoylpaeoniflorin	326.5	240.4	558.8	96.6	96.1	0.9
	333.1	240.4	561.7	95.1
	272.8	240.4	505.7	96.9
	302.2	240.4	533.2	96.1
	273.6	240.4	502.0	95.0
	297.9	240.4	531.0	97.0

芍药醇	15.12	36.08	50.75	98.7	99.6	1。6
	13.40	36.08	49.08	98.9
	14.50	36.08	51.52	102.6
	14.52	36.08	50.67	100.2
	17.93	36.08	53.49	98.6
	25.16	36.08	60.84	98.9

3.3。可重复性和健壮性的相对校正因子

应用QAMS成功,可重复性好,鲁棒性相对离心力是关键的问题。rcf的重复性测试在不同的实验室三个水域高效液相色谱系统。意味着rcf和标准偏差的结果获得从六个不同的注入量(2、5、10、20、35岁和50岁μL)和表中列出5。


相对校正因子	Waters-1	Waters-2	Waters-3	平均

f_{没食子酸、芍药苷}	0.0349±0.0010	0.0351±0.0008	0.0350±0.0009	0.0350±0.0009
f_{oxypaeoniflorin /芍药苷}	0.0615±0.0018	0.0623±0.0017	0.0616±0.0017	0.0618±0.0018
f_{儿茶素、芍药苷}	0.149±0.004	0.151±0.004	0.153±0.004	0.151±0.004
f_{albiflorin /芍药苷}	1.08±0.03	1.10±0.01	1.10±0.01	1.09±0.0140
f_{没食子酸乙酯/芍药苷}	0.0328±0.0002	0.0330±0.0004	0.0329±0.0007	0.0329±0.0005
f_{galloylpaeoniflorin /芍药苷}	0.101±0.002	0.101±0.002	0.101±0.003	0.101±0.002
f_{pentagalloylglucose /芍药苷}	0.0417±0.0010	0.0411±0.0012	0.0404±0.0010	0.0411±0.0011
f_{苯甲酸/芍药苷}	0.190±0.005	0.191±0.006	0.212±0.004	0.197±0.005
f_{benzoylpaeoniflorin /芍药苷}	0.607±0.005	0.609±0.008	0.595±0.018	0.604±0.010
f_{芍药醇/芍药苷}	0.0202±0.0005	0.0202±0.0006	0.0201±0.0003	0.0202±0.0005

高效液相色谱条件包括柱温度、流速、类型的列,仪器,检测波长略有改变评估的可靠性rcf(表6和表7)。通过对比rcf表5和表6,可以看出rcf健壮当列温度偏差在±2°C。当流量被−0.05 mL / min,偏见−0.1 mL / min, + 0.02 mL / min, rcf公司是一致的。因为pentagalloylglucose和苯甲酸流量时不能很好地分隔的偏见,+ 0.05 mL / min或+ 0.1毫升/分钟的RCF 1.02毫升/分钟的流量测量。YMC-Pack Pro C18柱(5μ米、250×4.6毫米)和水本·C18柱(5μ米、250×4.6毫米)也可以用于单独的组件,所以他们被用来测量的重复性相对离心力,结果是接近Phenomenex Luna C18柱。然而,当这两列,流率(表调整6)更好的分离oxypaeoniflorin /儿茶素和pentagalloylglucose /苯甲酸。rcf测量安捷伦1260液相色谱系统和Dionex终极3000高效液相色谱系统接近水域的高效液相色谱系统。


相对校正因子	Temp-25^一个	Temp-26^一个	Temp-28^一个	Temp-29^一个	流- 0.90^b	流- 0.95^b	流- 1.02^b	Column-YMC^c	Column-BEH^d	仪器^e	Instrument-U^f

f_{没食子酸、芍药苷}	0.0361	0.0365	0.0349	0.0350	0.0357	0.0359	0.0354	0.0329	0.0323	0.0359	0.0364
f_{oxypaeoniflorin /芍药苷}	0.0610	0.0622	0.0620	0.0625	0.0614	0.0625	0.0618	0.0564	0.0548	0.0598	0.0591
f_{儿茶素、芍药苷}	0.154	0.157	0.154	0.153	0.147	0.156	0.150	0.145	0.143	0.155	0.146
f_{albiflorin /芍药苷}	1.10	1.10	1.12	1.14	1.14	1.13	1.09	1.05	1.04	1.15	1.16
f_{没食子酸乙酯/芍药苷}	0.0337	0.0334	0.0323	0.0319	0.0335	0.0332	0.0328	0.0310	0.0319	0.0323	0.0330
f_{galloylpaeoniflorin /芍药苷}	0.104	0.103	0.100	0.0995	0.102	0.102	0.102	0.104	0.0999	0.102	0.100
f_{pentagalloylglucose /芍药苷}	0.0423	0.0420	0.0409	0.0411	0.0423	0.0419	0.0417	0.0421	0.0435	0.0423	0.0439
f_{苯甲酸/芍药苷}	0.203	0.199	0.199	0.198	0.200	0.194	0.197	0.190	0.198	0.198	0.194
f_{benzoylpaeoniflorin /芍药苷}	0.639	0.634	0.603	0.608	0.608	0.615	0.624	0.601	0.601	0.615	0.619
f_{芍药醇/芍药苷}	0.0212	0.0212	0.0203	0.0210	0.0206	0.0207	0.0211	0.0201	0.0207	0.0206	0.0208

^一个列温度改为25日26日28或29°C。^b流量改为0.90、0.95或1.02 mL / min。^c列改为YMC-Pack Pro C18柱(5μ米、250×4.6毫米)和流量改为0.95毫升/分钟。^d列了一个水本·C18柱(5μ米、250×4.6毫米)和流量改为0.95毫升/分钟。^e安捷伦仪器改为1260系统(安捷伦科技公司,Waldbornn,德国)。^f仪器被改为Dionex终极3000系统(热科学Inc ., germer完成,德国)。


相对校正因子	−2 nm的偏见	−1海里有偏见	+ 1海里有偏见	+ 2海里有偏见

f_{没食子酸、芍药苷}	0.0338 (272/272)^一个	0.0346 (273/273)	0.0354 (275/275)	0.0352 (276/276)
f_{oxypaeoniflorin /芍药苷}	0.0610 (255/272)	0.0620 (256/273)	0.0608 (258/275)	0.0603 (259/276)
f_{儿茶素、芍药苷}	0.159 (272/272)	0.161 (273/273)	0.147 (275/275)	0.141 (276/276)
f_{albiflorin /芍药苷}	1.09 (272/272)	1.09 (273/273)	1.09 (275/275)	1.09 (276/276)
f_{没食子酸乙酯/芍药苷}	0.0320 (272/272)	0.0327 (273/273)	0.0333 (275/275)	0.0331 (276/276)
f_{galloylpaeoniflorin /芍药苷}	0.101 (272/272)	0.101 (273/273)	0.101 (275/275)	0.0995 (276/276)
f_{pentagalloylglucose /芍药苷}	0.0425 (272/272)	0.0423 (273/273)	0.0409 (275/275)	0.0395 (276/276)
f_{苯甲酸/芍药苷}	0.188 (272/272)	0.189 (273/273)	0.193 (275/275)	0.197 (276/276)
f_{benzoylpaeoniflorin /芍药苷}	0.610 (272/272)	0.610 (273/273)	0.621 (275/275)	0.634 (276/276)
f_{芍药醇/芍药苷}	0.0203 (272/272)	0.0204 (273/273)	0.0203 (275/275)	0.0201 (276/276)

^一个有偏见的检测波长(nm)括号中标注(分析物/芍药苷的波长)的波长。

rcf的偏置检测波长的影响进行评估,通过引入±1和±2纳米的偏见到检测波长(表7)。例如,当有2 nm偏见,oxypaeoniflorin和芍药苷的峰地区获得255和272海里,分别,这导致了f_{oxypaeoniflorin /芍药苷}0.0610。当波长偏差在±2 nm, rcf(表7)都是接近平均rcf表5,除了儿茶素。偏见的影响,检测波长的RCF儿茶素是由其引起的相对较大的吸光度的变化接近272海里(图2 (c))。

3.4。分析物的峰的识别

当使用QAMS,分析物的色谱峰的识别可以通过结合相对保留时间(rrt)和紫外光谱(图2)。十个组件的rrt芍药苷在不同的列和仪器进行调查(表8)。的rrt Phenomenex Luna C18柱和YMC-Pack Pro C18柱接近。但是水本·C18柱的保留行为不同于其他两列。pentagalloylglucose和苯甲酸的洗脱顺序倒生的YMC-Pack Pro列和本·列,而月神列。因此,当应用这个方法与不同的列,有必要确定组件根据紫外光谱(图2)。另一方面,当使用安捷伦1260系统和Dionex终极3000系统,rrt几乎一样的。


相对校正因子	Column-Luna^一个	Column-YMC^b	Column-BEH^c	仪器^d	Instrument-U^e

RRT_{没食子酸、芍药苷}	0.14	0.14	0.14	0.15	0.16
RRT_{oxypaeoniflorin /芍药苷}	0.65	0.62	0.34	0.62	0.69
RRT_{儿茶素、芍药苷}	0.69	0.67	0.37	0.67	0.73
RRT_{albiflorin /芍药苷}	0.92	0.92	0.78	0.92	0.93
RRT_{没食子酸乙酯/芍药苷}	1.04	1.02	0.93	1.04	1.05
RRT_{galloylpaeoniflorin /芍药苷}	1.21	1.23	1.44	1.19	1.21
RRT_{pentagalloylglucose /芍药苷}	1.26	1.28	1.55	1.25	1.25
RRT_{苯甲酸/芍药苷}	1.27	1.24	1.26	1.27	1.28
RRT_{benzoylpaeoniflorin /芍药苷}	1.37	1.42	1.98	1.37	1.34
RRT_{芍药醇/芍药苷}	1.48	1.51	1.99	1.50	1.46

^一个水域上的Phenomenex Luna使用C18柱高效液相色谱系统。^bYMC-Pack Pro C18柱水高效液相色谱系统上使用。^c水本·C18柱水高效液相色谱系统上使用。^d仪器是安捷伦1260系统(安捷伦科技公司、Waldbornn、德国)和Phenomenex Luna C18柱。^e仪器是Dionex终极3000系统(热科学Inc ., germer完成,德国)和Phenomenex Luna C18柱。

3.5。外部标准方法的比较和多组分的定量分析Single-Marker方法

比较与ESM QAMS方法,四个批次PRA RPLP和四个批次的分析(表9)。去离子水和70% (v / v)乙醇被用于提取这些批次,因为他们是两个常用的提取溶剂生产相关的中药制剂。相对误差(REs)之间的两个方法是−4.2%,+ 3.9%。oxypaeoniflorin REs的PRA是比其他组件,因为低的内容该组件和小峰区域。没食子酸的内容在RPLPs提取低70% (v / v)乙醇与其他批次相比。儿茶素的内容的70%乙醇提取物RPLP锅国安和东阳更高、接近线性范围的上限(表1),导致更大的研究》的内容albiflorin RPLPs从锅,东阳市,杭州高于从白山。没食子酸乙酯只有RPLP的70%乙醇提取物中发现从白山和杭州。Pentagalloylglucose无法检测到的四个批次水提取物,可能是因为其低水溶性的。苯甲酸的内容PRA提取物都低于LOD。芍药醇不能被发现在PRA和RPLP的水提取物。


组件	定量方法/再保险^一个	RPLP从锅里安	RPLP从东阳市	RPLP从白山	RPLP来自杭州	从Zhangzhongjing PRA药房	从Renshoutang PRA	从Qixiangge PRA	PRA河南草药药店	RPLP从锅里安^b	RPLP从东阳市^b	RPLP从白山^b	RPLP来自杭州^b

没食子酸	ESM	25.64	25.79	31.29	51.13	149.3	137.3	113.5	168.1	78.6	119.3	111.8	386.0
	QAMS	25.06	25.09	30.68	50.54	150.0	138.5	113.8	168.7	79.91	122.4	113.3	387.4
	再保险(%)	−2.3	−2.7	−1.9	−1.2	0.5	0.8	0.2	0.4	1。6	2。6	1。3	0.4

Oxypaeoniflorin	ESM	120.4	143.2	99.61	99.60	78.73	70.71	77.87	78.13	119.7	129.4	79.30	106.2
	QAMS	119.8	142.9	97.64	97.20	75.81	67.75	74.91	75.07	120.6	131.5	77.21	103.8
	再保险(%)	−0.5	−0.2	−2.0	−2.4	−3.7	−4.2	−3.8	−3.9	0.7	1。6	−2.6	−2.2

儿茶素	ESM	276.2	607.1	61.22	65.54	137.9	118.5	123.1	152.2	/^c	52.10	/	/
	QAMS	286.8	631.0	60.92	65.14	140.8	121.2	125.4	155.6	/	52.51	/	/
	再保险(%)	3所示。8	3所示。9	−0.5	−0.6	2。2	2。2	1。9	2。2	/	0.8	/	/

Albiflorin	ESM	6183年	7913年	353.7	2950年	1092年	908.7	847.4	741.2	4673年	4387年	234.9	3830年
	QAMS	6251年	7966年	347.2	2953年	1090年	909.7	844.1	735.9	4782年	4511年	229.5	3829年
	再保险(%)	1。1	0.7	−1.8	0.1	−0.1	0.1	−0.4	−0.7	2。3	2。8	−2.3	0.0

没食子酸乙酯	ESM	/	/	63.09	70.59	/	/	/	/	/	/	/	/
	QAMS	/	/	61.53	68.91	/	/	/	/	/	/	/	/
	再保险(%)	/	/	−2.5	−2.4	/	/	/	/	/	/	/	/

Galloylpaeoniflorin	ESM	154.3	131.3	98.35	131.7	158.8	129.5	133.8	165.8	75.69	66.02	78.02	181.2
	QAMS	154.9	130.3	96.33	130.3	158.8	129.0	132.9	165.8	74.06	64.18	75.96	181.0
	再保险(%)	0.4	−0.7	−2.1	−1.1	0.0	−0.4	−0.7	0.0	−2.2	−2.8	−2.6	−0.1

Pentagalloylglucose	ESM	437.7	460.6	251.4	365.0	603.2	404.0	407.2	553.8	/	/	/	/
	QAMS	444.9	465.9	255.8	368.4	609.0	410.6	412.0	558.5	/	/	/	/
	再保险(%)	1。7	1。2	1。7	0.9	1。0	1。6	1。2	0.8	/	/	/	/

苯甲酸	ESM	338.6	572.8	112.0	111.6	/	/	/	/	1245年	1231年	765.3	658.1
	QAMS	338.9	573.0	109.3	108.5	/	/	/	/	1271年	1264年	774.4	655.2
	再保险(%)	0.1	0.0	−2.3	−2.8	/	/	/	/	2。1	2。6	1。2	−0.4

Benzoylpaeoniflorin	ESM	335.0	368.7	268.8	274.1	149.3	118.8	150.4	165.8	102.3	154.3	110.1	129.7
	QAMS	339.1	372.3	269.4	273.6	145.8	114.8	146.9	162.5	99.00	154.4	106.5	125.0
	再保险(%)	1。2	1。0	0.2	−0.2	−2.4	−3.4	−2.3	−2.0	−3.2	0.1	−3.3	−3.7

芍药醇	ESM	15.68	17.64	18.42	/	/	/	/	/	/	/	/	/
	QAMS	15.04	16.96	17.77	/	/	/	/	/	/	/	/	/
	再保险(%)	−4.1	−3.8	−3.5	/	/	/	/	/	/	/	/	/

^一个相对误差(RE),计算(C _QAMS−C _ESM)/C _ESM×100%。^b水是用来代替70% (v / v)乙醇的提取这些批次。^c“/”意味着LOD下面的内容。

4所示。结论

在这项工作中,QAMS方法建立了基于高效液相色谱法,以芍药苷为对照品,同时确定多达11个组件。方法验证表明,该方法具有良好的线性度、重复性、稳定性和准确性。该方法提供了一个有效的和低成本的工具PRA提取物的质量评估。该方法可用于监视和优化PRA的提取工艺。

数据可用性

所有的色谱数据用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作得到了国家自然科学基金(82073956和82073956号)和浙江省的基本公共福利研究项目(没有。LGF19H280005)。作者感谢实验制药研究中心公共平台的支持下,中国医学科学院、浙江中国医科大学。

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