定量测定等离子体自由变肾上腺素通过一个简单的和具有成本效益的微萃取吸附剂充满了多孔石墨碳和液体Chromatography-Tandem质谱分析

文摘

等离子体自由变肾上腺素是广泛用于嗜铬细胞瘤和副神经节瘤的诊断(PPGL),然而,使用一个简单的和具有成本效益的方法量化变肾上腺素可能是一个挑战由于preanalytical和分析约束。在这项研究中,我们建立和验证一个新的方法,基于微萃取的等离子体自由变肾上腺素的定量测定了吸附剂(议员)和多孔石墨碳(包括)和液体chromatography-tandem质谱(HILIC-MS / MS)。洗脱步骤完全兼容HILIC模式没有蒸发和调整。分析物都好解决,和潜在的干扰(54物质)。该方法从24.7 -2717 pg / mL线性变肾上腺素(MN)和24.5 -4010 pg / mL normetanephrine (NMN能否)确定系数(R²)高于0.994。MN和NMN能否检测的极限是12.4 pg / mL和12.3 pg / mL,分别。内部和interassay印象≤12.8%上升为商业质量控制质量控制和≤13.6%;分别的方法恢复范围在88.0 -109.0%。的接受者操作特征(ROC)曲线下的面积是0.848±0.047 MN和0.979±0.021 NMN能否。验证是由比较临床标本和各种生化结果表明,等离子体自由变肾上腺素在坐立姿势可比敏感性和特异性降低尿自由变肾上腺素,可补偿结合其他生化测试。新开发的议员方法导致省时的,可靠和具有成本效益的微萃取技术,筛选PPGL可以申请成功。

1。介绍

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(PPGL)是一种罕见的神经内分泌肿瘤的特点是儿茶酚胺的生产过剩1),这可能导致严重心血管并发症,如高血压危象、心肌梗死和中风(2]。生化检测诊断PPGL是至关重要的。与血浆儿茶酚胺和尿儿茶酚胺相比,等离子体自由变肾上腺素(O-methylated儿茶酚胺代谢产物)提供更高的敏感性和特异性,这些肿瘤的诊断,因此被推荐为一线检测与尿分离变肾上腺素(3]。这些测量通常包括变肾上腺素(MN)和normetanephrine (NMN能否),肾上腺素的O-methylated代谢物(EPI)和去甲肾上腺素(NE)。

液相色谱法与电化学检测(LC-ECD)是一种常用的方法来测量等离子体变肾上腺素(4,5),但这种方法需要大量的样本,费力的样品制备,并长时间色谱实现灵敏度。Immunoassay-based方法提供一个替代LC-ECD;然而,非特异性结合反应和大无法避免使用这种方法(6,7]。近年来,液相色谱串联质谱(质/ MS)被广泛用于测量等离子体自由变肾上腺素由于其固有的选择性和灵敏度8- - - - - -16]。然而,这些化合物和高极性,也差得礼物在非常低的浓度在一个复杂的矩阵。因此,一个有效的、简单的、敏感的和具有成本效益的样品清理复杂的矩阵前质/ MS分析是至关重要的。

在过去的几十年中,一般固相萃取(SPE)经常被用作分析的样品制备步骤等离子体变肾上腺素(9- - - - - -16]。弱阳离子交换SPE吸着剂(WCX)已经成为流行的隔离变肾上腺素从生物样品10- - - - - -16]。此外,离子对试剂也可以用来形成一个复杂的变肾上腺素,可保留在C18 SPE墨盒(9]。在这些研究中,提取蒸发浓度或使用非易失性盐作为缓冲或大量的样本(500μL (9)或900μL (12(35)和注射卷μL (11)或40μL (9)被要求实现必要的敏感性和特异性。这些程序可以增加的复杂性和时间需求和分析柱的寿命缩短。

多孔石墨碳(包括),特定的物理和化学性质,开发作为一个静止的色谱LC在1980年代早期的阶段。极性化合物,包括电离分子,可以在热解色谱保留不使用离子对代理。这种独特的财产来自电子的离域乐队,使稳定电子相互作用和直接π重叠的不同分析物(17]。热解色谱固定相是利用分析极性药物(18),杂质(19),或内源性代谢物。目前,包括吸附剂已成为商用包装在SPE和微萃取吸附剂(议员)格式。议员是一种小型的SPE技术已被接受作为一个有吸引力的选项和一个强大的样品制备方法适用于完成分析挑战自2004年出现以来[20.]。这个方法最大的优势是它的干净和简单的议员们与短程序运行时。它可以处理小样本体积,同时保持足够的选择性,精度和准确性(21]。然而,我们所知,只有几个议员方法使用amino-propyl介绍了硅烷(APS)或使用C18吸着剂的样品清理几个生物胺(22- - - - - -24]。

这项工作的目的是开发和验证一个变肾上腺素的定量分析方法采用简单的最小的血浆样品和具体的欧洲议会议员兼容亲水相互作用色谱法(HILIC)模式更适合亲水性化合物的质/ MS分析(25]。大量的等离子体的潜在干扰变肾上腺素也被调查。此外,本研究评估其效用通过比较它与其他代谢物,包括免费尿儿茶酚胺、变肾上腺素、vanillylmandelic酸(VMA)在常规临床设置。

2。材料和方法

2.1。材料和化学物质

MN和NMN能否购买从多伦多(加拿大安大略省)研究化学物质。MN-d3和NMN-d3获得剑桥同位素实验室,Inc .(马、美国)。内分泌等离子体控制和等离子体从Chromsystems获得的校准标准变肾上腺素(Grafelfing,慕尼黑,德国)。(高效液相色谱)-高效液相色谱法-年级乙腈、甲醇、甲酸、乙酸和甲酸铵获得热费希尔科学Inc .(马、美国)。超纯水获得使用Milli-Q系统(美国马水微孔)。

2.2。质/ MS条件

质/ MS系统是由一个API 4000 +三重四极质谱仪(美国AB Sciex仪器,CA)配备了日本岛津公司LC-30A高效液相色谱系统(日本京都)。质谱仪是在积极的电喷雾电离(ESI)多反应监测(MRM)模式。柱温箱保持在40°C, autosampler是设定在4°C。色谱分离ZIC-HILIC列上执行(150毫米×2.1毫米,3.5μ米)从默克公司(达姆施塔特,德国)。分析物被筛选了梯度移动阶段包含乙腈(流动相)和40毫米甲酸铵(移动阶段B, pH值3.0)。83%的初始LC梯度线性下降到75%在3分钟和1分钟。梯度快速增加到60%在0.1分钟,1分钟;最后,列平衡在83%为3分钟。流量为0.35毫升/分钟,周期是8分钟。注射量是5μl

分析软件,从AB Sciex 1.6.2版本,是用于仪器控制和分析。离子喷雾是优化1500 V电压在550°C,和窗帘气体维持在45 psi。喷雾器气体和气体加热器设置在40 psi,而碰撞离解激活(CAD)气体保持在12 psi。MRM转换和复合参数总结在表S1为每个过渡,100 ms停留时间。

2.3。标准和标本

MN和NMN能否标准股票的解决方案准备在0.2乙酸浓度为1毫克/毫升。离子源参数的优化是由注入变肾上腺素溶液(500 ng / mL醋酸50%甲醇含0.2米)的流量5μL / min。内部标准(是)工作的解决方案,包括MN-d3 (5 ng / mL)和NMN-d3 (40 ng / mL),准备在0.2 M乙酸在水里。

Chromsystems等离子校准标准重组根据试剂的指令。six-calibrator曲线制备和储存在−20°C到使用。这种材料是稳定最多3个月。方法的验证、质量控制(QC)样本准备三个浓度(低:100 pg / mL MN, NMN能否150 pg / mL;中间:500 pg / mL MN, NMN能否750 pg / mL;高:2000 pg / mL锰、3500 pg / mL NMN能否)的血浆样品。常规临床分析,标准浓度(60 MN pg / mL, NMN能否100 pg / mL)和pathological-concentration (MN 1500 pg / mL, NMN能否7000 pg / mL)控制也由重组Chromsystems正常——根据试剂和pathological-range控制指令,分别。随后,pathological-range控制稀释1:2与空白血浆从Chromsystems确保NMN能否在线性范围内下降。控制被整除和保持在−20°C存储2个月。

2.4。样本收集和准备

EDTA血浆标本是从样品提交临床试验选出来的。根据样本消除识别信息和管理指南的机构审查委员会批准北京大学第三医院。

一种包含热解色谱吸附剂(颗粒大小:30议员μm;孔隙大小:250;热费希尔科学、澳大利亚)和一个手持自动分析注射器(另一个星球;热费希尔科学、澳大利亚)是用于等离子体提取。新的吸附剂被激活在3×200μL(甲醇和3×200μL水之前提取。第一步是用甲醇蛋白沉淀。简单地说,100年μL甲醇添加到100年μ包含10 L血浆样品μL(工作的解决方案。然后沉淀样本在15000转离心5分钟。上层清液稀释1000μL的水,然后起草和通过注射器(7×200μL)没有丢弃它。的吸着剂被50μL的水,和分析物被筛选了40μL(流动相的解决方案。每次提取后,吸着剂冲洗4×100μL混合物的乙腈:水(8:2,v / v,包含2%甲酸)2×100紧随其后μL的水。议员可以重用的吸着剂50倍。操作的示意图议员如图S1。

2.5。方法验证

该方法根据临床和实验室验证标准协会(CLSI) C62-A和FDA指南。线性评估通过分析浓度不同的三天六点校准器。量化的下限(LLOQ)被定义为最低浓度在±20%的不精确和准确性。检测极限(LOD)被定义为信噪比> 3。评估不精确度和准确性在等离子体分析,五个复制三个控制材料重复连续三天(共15测量在每个级别的控制)。此外,正常和病理水平的QC样品Chromsystems一起处理,结果是比预期范围由制造商提供。每个控件的重复化验为20天。我们准备两个飙升样品使用混合等离子体调查议员复苏:prespiked postspiked。prespiked样本被分析物飙升到准备汇集血浆议员之前,而postspiked样本由飙升在同一浓度分析物的提取后获得欧洲议会议员联合等离子体。百分比提取恢复计算百分比响应prespiked样本中的每个分析物比那些postspiked样本。 A postcolumn infusion study was performed to evaluate the matrix effect by injecting the plasma matrix after MEPS (no IS added) onto the LC column and simultaneously injecting the IS standard solution at 10 μL / min柱流出物。评估结转,一组高(H)和低(l)样品化验在接下来连续顺序:3l,2H,1l,2H4l,2H,1l,2H,1l,2H,1l。分析特异性研究通过分析大量的内源性和外源性的化合物。个人能整除的中间质量控制等离子体样本找出了解决方案的潜在干扰。建议CLSI EP7-A2干扰测试在临床化学,是用于指导准备干扰浓度。血浆样品稳定性评估24 h后存储在室温或冰箱(4°C) 5天。postextracts存储在4°C autosampler 120 h也测试了。在每个存储条件,测定样品重复在一式三份。

3所示。结果与讨论

3.1。柱层析法和女士条件优化

可怜的保留传统C18柱由于高极性代表执行色谱分离变肾上腺素时的一个挑战。另一个困难是好看变肾上腺素和化合物的色谱法在结构上类似于他们。尽管HILIC列是特别适合保留变肾上腺素(混合模式吸附和更好的电离效率)(26),分析干扰的测量等离子体变肾上腺素在HILIC模式最近报道。例如,可能发生交叉污染由于肾上腺素/ NMN能否等压分析物与相同的MRM过渡,4-hydroxy-3-methoxymethamphetamine (HMMA), 3的代谢物,4-methylenedioxymethamphetamine (MDMA)和NMN能否共享一个公共药效基因导致同样的产品后离子碎片(27]。一个内生所有血浆样品中分析物,3-O-methyldopa,不能被多级分段(MRM)³)[28),这可能使更具体的目标量化与传统MRM(相比29日]。因此,色谱分离是不肯舍弃干扰涉及质量碎片的重要决策。因此,各种HILIC-type列筛选,包括亚特兰蒂斯HILIC硅(150毫米×2.1毫米,5μm)和XBridge酰胺(50毫米×2.1毫米,3.5μ米)水域(米尔福德,妈,美国),月神二醇(100毫米×2.1毫米,5μ米)从Phenomenex(托兰斯、钙、美国),Cosmosil HILIC(100毫米×2.0毫米,5μ米)从Nacalai tesque(日本京都)和ZIC-HILIC(150毫米×2.1毫米,3.5μ米)。ZIC-HILIC列是最佳列保留和分离变肾上腺素与低干扰(详细分析特异性部分)。典型的色谱从病人没有PPGL和组织学证实PPGL图所示1。这两个分析物在5.0分钟内完全分开运行时为8.0分钟。

参数优化的女士使用500 ng / mL的直接流动注射分析分析物的解决方案在0.2醋酸50%甲醇。正如之前报道的(24,30.],[mh的更稳定的离子信号₂O + 1)⁺MN和NMN能否变肾上腺素观察与预期相比质量/电荷(米/z)的比率[M + H]⁺应急服务国际公司的来源,作为前体离子。MRM转换为所有分析物及其氘类似物,连同质量检测器设置,介绍了表S1。

3.2。优化样品制备

选择合适的样品制备技术从复杂的生物隔离变肾上腺素矩阵并不简单。议员是一种新型的小型SPE具有一些优势,如样品制备时间短、样品体积的小型化,低消费的有机溶剂,没有提取蒸发。在这项研究中,汇集血浆样本用于开发和量化的分析物”内生的贡献。几个关键参数与议员们筛选试验。

3.2.1之上。吸着剂类型的选择

由于血浆蛋白造成堵塞的议员墨盒、蛋白质沉淀(PP)在装货前样品的议员墨盒通常是必要的。几种类型(甲醇、乙腈和混合物)的有机处理剂进行了测试研究。虽然大量的不同的吸着剂可用,议员盒的选择是非常困难的因为低变肾上腺素的保留页的解决方案。首先,阳离子交换,使用C18(颗粒大小:-μm;孔隙大小:60;热费希尔科学、澳大利亚)议员的墨盒,主要用于SPE,选择进行测试。然而,这些使足够的保留在吸附剂变肾上腺素即使PP上层清液的稀释(20×)含有大量的有机溶剂。上层清液中的有机溶剂降低变肾上腺素的保留。

另一个适合亲水性化合物的吸附剂是热解色谱,最近推出了议员格式(31日]。甲醇被选为合适的PP溶剂,因为只有5:1(水:沉淀样本)稀释比例是需要使变肾上腺素的保留热解色谱吸附,而一个更大的稀释比例为乙腈作为除蛋白剂是必要的。因此,热解色谱吸附剂被选为议员提取没有大加载示例步骤中分析物的损失。

3.2.2。加载示例

分析物的保留在热解色谱吸附剂萃取的循环次数的影响。样例的不同数量的周期经历了有效地增加了提取。另一方面,等离子体,一个复杂的矩阵,可饱和吸收剂阶段和阻止访问分析物吸附的网站。结果表明,七个提取周期提供了最好的条件变肾上腺素保留在热解色谱吸附剂(图2(一个))。提取的循环次数增加没有提高提取效率,缩短议员吸附剂的一生。

3.2.3。洗涤、洗脱

吸着剂清洗步骤是必要的删除不必要的干扰分析矩阵没有重大泄漏的化合物。三个不同的清洗解决方案(水、10%甲醇水和2%的甲酸水)汇集血浆样品进行评估。在这些溶剂中,采用水作为最合适的溶剂在不牺牲复苏(数据未显示)。分析涉及的后续阶段洗脱变肾上腺素的吸收剂与溶剂体积最小。使用流动相洗脱效率进行了测试,乙腈和水的混合溶液(8:2)含有甲酸2%,2%的氨水,或没有添加剂为溶剂(图2 (b))。最高的分析信号应用中洗脱溶剂流动相对应,也是最合适的洗脱溶剂由于完美兼容HILIC色谱法。

3.2.4。延滞的议员

我们终于调查议员的结转,视为减速在样品制备步骤。中使用的少量议员筒之间可以很容易地和有效地洗了痛苦。乙腈和水的混合物含有2%甲酸作为一个合适的清洗解决方案(4×100μL)减少延滞的重用议员吸附剂(图2 (c))。重用前结转< 0.2%。

3.3。方法验证

3.3.1。线性和分析灵敏度

分析物的响应的线性校准范围内24.7 MN -2717 pg / mL (R²24.5 > 0.9951)和校准范围的NMN能否-4010 pg / mL (R²> 0.9942),变异系数(CV)≤7.3%,每个分析物的斜坡在三个不同的日子。lack-of-fit野生也为线性测试;MN纯误差测试的结果(F^∗= 0.887, )和NMN能否(F^∗= 0.154, )表明,锰和NMN能否的关系是线性的。LLOQ是24.7 pg / mL MN,简历≤13.0%,相对误差(RE)≤−3.2%和24.5 pg / mL NMN能否简历≤11.0%,再保险≤−1.8%。的LOD MN和NMN能否12.4 pg / mL和12.3 pg / mL,分别由逐渐稀释校准器。

3.3.2。精度、准确性和提取复苏

内部和interassay不精确的质量控制和Chromsystems QC样品≤12.8%,≤13.6%,分别。QC样品的盘中精度范围内,从94.0%提高到108.1%,平均为99.3%,而interday精度是88.6%到108.0%,平均为101.0%。Chromsystems QC样品盘中精度是88.0%到103.0%,平均为95.9%,而interday精度平均102.5%的97.2%至109.0%。结果证实了分析精密,准确。

由传统postextraction方法提取恢复进行评估。血浆样品的提取和分析以及nonspiked血浆样本。分析物的提取回收率均高于77.6%。

3.3.3。基体效应和结转

氘是解决方案的信号强度在输液监测研究,表示没有显著matrix-induced离子抑制效应的相关保留时间的所有测试样本类型(图S2)。均值(SD)的低锰浓度样品后60 pg / mL样品是57.5 (5.1)pg / mL,和低浓度样品的平均(SD)后1500 pg / mL样品是60.7 (7.6)pg / mL,导致延滞的MN 3.2 pg / mL。NMN能否低浓度样品的平均(SD)后100 pg / mL样品是104.0 (12.1)pg / mL,和低浓度样品的平均(SD)后7000 pg / mL样品是89.2 (15.9)pg / mL,导致延滞的NMN能否−14.8 pg / mL。没有统计上显著的移行观察分析物。

3.3.4。分析特异性

潜在的干扰,测试浓度和百分比偏差测试样品中分析物的浓度与相应的基线样本如表所示S2对内源性和外源性物质。Petteyset al。(11]调查28物质,包括结构相关的化合物,常用药物,或补充,和异丙肾上腺素,isoetharine, 3, 4-methylenedioxyamphetamine (MDA),和3,4-methylenedioxymethpheamphetamine (MDMA),这可能会干扰量化。在我们的研究中,54个化合物被评估为潜在的干扰,确保拟议中的欧洲议会议员的强劲性能的方法,包括伪麻黄碱、异丙肾上腺素,isoetharine,柳胺苄心定,HMMA, MDA, MDMA,肾上腺素,3-O-methyldopa干扰MRM检测变肾上腺素(11,27- - - - - -29日),除了内源性化合物、维生素和经常使用的非处方药物。左旋多巴,isoetharine、异丙肾上腺素和4-methoxymethamphetamine (PMMA)被确定在保留时间为1.20分钟,2.70分,1.13分,1.93分钟的大规模转型色谱MN,分别,但没有干扰量化。HMMA 3-O-methyldopa,肾上腺素被确认为2.46分钟,5.09分,5.51分钟在质量色谱图的过渡NMN能否,分别,但没有干扰量化。MDA和混合胺溶液在2.06分钟,可见的范围1.6 - -2.2分钟在大规模转换变肾上腺素,分别,不干扰量化。相比之下,这些化合物的混合物不能识别由于缺少个人标准参考。代表色谱图的一些干扰人血浆图所示3。此外,拉贝洛尔和伪麻黄碱不可见原因分析的选择性热解色谱吸附剂。没有一个54化合物干扰MN和NMN能否进行测试。低于15%±QC样品的浓度差异表明,定量不受各种各样的物质。

3.3.5。稳定

整除的血浆样本一式三份分析了储存在室温下24 h,并为5天4°C。结果表明,一个≤14.7%的变化在所有分析物在这些条件下,获得了满意的稳定±15%变化的根据验收标准。此外,一个≤4.5%变化是观察到的在4°C postextract autosampler 120 h,允许再分析在常规reperforming议员。(表1)

3.4。通过可用方法的比较分析性能

开发方法的分析性能的比较与分析总结了发表在表2。表中显示,该方法提供了几个优势以前公布的方法。首先,欧洲议会议员是更具成本效益的比传统的SPE(议员们可以被再利用超过50次血浆样本与传统的SPE柱或微型板块SPE相比,这只能使用一次)。第二,欧洲议会议员更环保与报道样本清理。只需要在相对少量的溶剂洗涤议员(< 1毫升)和洗脱(10 - 50μL)的分析物从吸附剂由于∼2毫克的全部充填吸着剂。第三,议员们需要减少总分析时间。这部小说包括议员吸附剂的选择使使用流动相洗脱溶剂兼容HILIC模式。吸附剂的量很小;吸着剂调节、蒸发和调整中不必要的议员们为他们在SPE。

3.5。等离子体变肾上腺素在临床标本

在这项研究中,等离子体变肾上腺素的水平从161年疑似病人在一个坐着的位置都是使用新开发的方法。23例(7雄;16岁女性:14 - 64岁),PPGL基于组织学的诊断确认手术切除肿瘤。不实用的诊断恶性PPGL 1例(雌性;观察年龄48岁)基于成像研究转移性疾病的证据。其他137名患者(73男性;64:14 - 87岁)包括原发性高血压、继发性高血压由其他因素引起的,阴道将肾上腺肿瘤诊断使用临床或病理发现PPGL排除在外。图4表明等离子体的分布变肾上腺素在临床标本。在137名患者没有PPGL、锰”年代等离子体浓度范围从12.4到79.2 pg / mL(平均23.2)和NMN能否从12.4到207.7 pg / mL(平均42.5)。24 PPGL患者中,等离子体浓度的锰范围从17.0到3161.4 pg / mL(平均52.1)和NMN能否从41.6到26815.1 pg / mL(平均1273.9)。等离子体之间的NMN能否输出PPGL显示患者中增加30倍高于中等水平在对照组患者和MN中增长了2.1倍。的接受者操作特征(ROC)曲线下的面积NMN能否为0.979±0.021,0.848±0.0047 MN(图5)。此外,95.8%(23/24)有增加等离子体NMN能否高于截止诊断价值,而锰75.0% (18/24)。

等离子体自由变肾上腺素和尿自由变肾上腺素是PPGL的推荐为一线测试。尽管等离子体测试的诊断准确性可能高于尿测试,不同之处在于相对较小。然而,没有一个测试可以提供绝对的诊断PPGL因为一个异常代谢物不是一个特定的指数正常浓度的基础上其他代谢物,并测量多个生化分析物可用于消除概率为嗜铬细胞瘤的诊断。因此,等离子体的诊断性能变肾上腺素还与其他生化测试一组104例,包括21 PPGL患者,决定在我们的实验室26,32)(表3)。尿儿茶酚胺和VMA显示可比性低敏感性(71.4%)。结合等离子体NMN能否和MN结果演示了一个类似的诊断敏感性(90.5%比90.5%)与尿自由变肾上腺素但较低的诊断特异性(88.0%比98.8%)。理想情况下,样本收集从仰卧的病人相比,坐在病人将提供最优的诊断敏感性和特异性等离子体变肾上腺素。3]。然而,不适当的取样位置有时是不可避免的在诊所,从仰卧位和重复血样测试提供一个具有成本效益的方法。假阳性结果可能会补偿相结合的测试等离子体和尿变肾上腺素或儿茶酚胺、变肾上腺素或影响。

4所示。结论

本研究描述了一个简单的、小型化和成本效益分析方法确定等离子体变肾上腺素使用议员样品制备技术。我们最好的知识,包括吸附剂用于第一次变肾上腺素作为样品制备的固定相。小说的选择包括议员吸着剂,适用于亲水性化合物的提取、使我们使用的流动相洗脱溶剂,这是完全兼容HILIC模式。因此,样品处理所需的时间明显减少蒸发和调整步骤。分析成本大大减少由于约50提取议员墨盒的重用,减少样品体积,溶剂和废物处理。可靠性和适用性验证使用临床血浆标本。这种新方法可能作为临床常规实验室分析的工具,简单,快速,需要小样本册。

缩写

PPGL:	嗜铬细胞瘤和副神经节瘤
米歇尔。内格罗蓬特:	变肾上腺素
NMN能否:	Normetanephrine
SPE:	固相萃取
议员们:	微萃取的包装吸着剂
定量限:	量化的限制
LOD:	检测极限
MRM:	多反应监测
SD:	标准偏差
包括:	多孔石墨化碳
WCX:	弱阳离子交换
APS:	Amino-propyl硅烷
是:	内部标准
质量控制:	质量控制
中华民国:	接收机操作曲线。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者承认金融支持中国的国家自然科学基金国家自然科学基金委- 81672107和国家自然科学基金委- 21405007。作者感谢黄博士张从thePeking大学第三医院临床流行病学研究中心提供的帮助lack-of-fit统计。

补充材料

表S1: MRM转换和各自的分散参数串联质谱分析变肾上腺素和各自的氘内部标准。表S2:偏离基线的血浆浓度变肾上腺素为外生和内生潜在的干扰。图S1:操作示意图议员。图S2: postcolumn注入实验。(补充材料)

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