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分析方法在化学杂志》上
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分析方法在化学杂志》上/2021年/文章

研究文章|开放获取

体积 2021年 |文章的ID 6650366 | https://doi.org/10.1155/2021/6650366

李余,洋洋张、赵细细,于他,Haofang Wan,海通Wan, Jiehong杨, ”Spectrum-Effect高效液相色谱指纹与抗氧化活性之间的关系的Yangyin Tongnao处方”,分析方法在化学杂志》上, 卷。2021年, 文章的ID6650366, 11 页面, 2021年。 https://doi.org/10.1155/2021/6650366

Spectrum-Effect高效液相色谱指纹与抗氧化活性之间的关系的Yangyin Tongnao处方

李余,1 “阳阳”张,1 细细赵,2 于他,3 Haofang广域网,4 海通广域网,1 和 Jiehong杨2

1中国医科大学生命科学学院、浙江,杭州,310053年浙江,中国

2基本医疗科学学院、浙江中医药大学、杭州,310053年浙江,中国

3制药科学学院、浙江中医药大学、杭州,310053年浙江,中国

4中国医学科学院、浙江中医药大学、杭州,310053年浙江,中国

学术编辑器:爱德华多Dellacassa
收到了 2020年10月10日
修改后的 2021年3月29日
接受 2021年5月19日
发表 2021年6月21日

文摘

Yangyin Tongnao (YYTN)处方作为中国传统草药配方,它有抗氧化活性,主要贡献在心血管和脑血管疾病的治疗。然而,与其抗氧化活性相关的化合物仍未知。在目前的研究中,YYTN提取物不同萃取条件下的指纹通过高效液相色谱法(HPLC)来识别常见的山峰所有的样品处理。2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl DPPH自由基清除活性测定和铁降低抗氧化能力(收紧)测定进行了评估提取物的抗氧化活性。Spectrum-effect YYTN的高效液相色谱指纹与抗氧化活性之间的关系评估皮尔逊积差相关系数(PPMCC)和多元线性回归分析(MLRA)。结果表明,山峰5、6、13、15日和24的指纹抗氧化活性密切相关。确定了五个山峰:香草酸(P5)、葛根素(P7)、阿魏酸(P13)、大豆苷(P21),芒柄花黄素(P23)。我们的研究成功地建立了spectrum-effect YYTN的高效液相色谱指纹与抗氧化活性之间的关系,提供了一个通用的方法,来建立质量标准结合色谱和抗氧化活性。

1。介绍

Yangyin Tongnao处方是一种传统的中草药配方组成的六种中国草药,生地,黄芪,Puerariae Lobatae基数,Ligustici Chuanxiong根茎,Dendrobii主茎,水蛭。然而,这些中国四种草药除外Dendrobii主茎和水蛭研究了简化公式在很多研究[1,2]。草药成分的比例Yangying Tongnao (YYTN)简化处方如表所示1(3]。YYTN的疗效进行了临床试验和动物实验。据中国医学,滋养阴和益气的影响(阴不足或气是一种综合征;阴不足通常出现气冲冲的,气不足有疲倦的感觉)。在西方医学,它可以促进血液循环,特别是心血管和脑血管疾病的治疗4]。先前的研究已经证明YYTN抑制神经细胞凋亡的功能,改善血液学的障碍(5),并与抗氧化和消炎作用[6]。作为中国传统草药配方,YYTN也可以改善神经赤字后焦脑缺血性梗塞大鼠(3]。同时,发现YYTN保护作用在氧化应激脑缺血损伤在活的有机体内通过动物实验7]。然而,似乎没有任何报告之间的关系有效成分和制药YYTN的效果。
药品名称 植物的名字 植物的家庭 数量(g) 采用植物部分
生地 地黄Libosch。 玄参科 1 块茎状的根
黄芪 黄芪(费)。知母。 豆科 1 根
Puerariae Lobatae基数 葛根(Willd)。Ohwi 唇形科 1。2 根
Ligustici Chuanxiong根茎 当归chuanxiong长的矮。 伞形科 0.67 根和根茎
表1
的草药成分YYTN简化处方。

抗氧化剂发挥着至关重要的作用在防止各种严重疾病引起的氧化应激损伤。目前,几种方法已经应用于评估抗氧化活性,包括化验铁降低抗氧化能力(收紧)[8- - - - - -10),2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)自由基清除11- - - - - -13),和氢氧自由基清除14,15]。因此,越来越多的研究人员关注寻找天然化合物从植物或植物药物具有抗氧化特性的生化(16- - - - - -18]。然而,YYTN负责其抗氧化活性的化合物是不清楚。

如今,spectrum-effect用于研究组件和中药的功效之间的关系。例如,迷迭香已经发现的主要vasorelaxant组件通过使用化学spectrum-effect关系(19]。高效液相色谱指纹图谱和生物活性验证被用来研究化学成分之间的相关性和制药(潜在影响20.,21]。一个代表性的方法找到的主要活性成分复杂的中国传统草药配方基于spectrum-activity关系的研究。

有三个主要类别的数据处理方法spectrum-effect关系,如相关分析、聚类分析和回归分析。相关分析的统计方法研究变量之间的亲密程度(22),包括灰色关联分析(GRA)、皮尔森积差相关系数(PPMCC)。聚类分析是数据挖掘的重要技术之一,探索性数据分析(23),包括分层聚类分析(HCA)和无等级聚类分析(N-HCA)。回归分析是一种统计分析方法确定(两个或两个以上变量之间的定量关系24),包括多元线性回归分析(MLRA)和偏最小二乘(PLS)。因此,草地,PPMCC,请和MLRA spectrum-effect关系应用于研究组件之间的相关分析和中国公式的有效性25- - - - - -29日]。

在我们的研究中,高效液相色谱指纹图谱结合的数据2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl DPPH自由基清除和铁降低抗氧化能力(收紧)化验研究使用体内存在和MLRA spectrum-effect YYTN关系。它奠定了基础药物动力学实质性YYTN的基础。

2。材料和方法

2.1。材料和试剂

生地,黄芪,Puerariae Lobatae基数,Chuanxiong根茎从中医购买件有限公司,有限公司浙江中国医科大学(杭州)和被Shengwu黄教授,浙江中医药大学(杭州)。HPLC-grade Tedia公司的得到了甲醇和乙腈,Inc .(费尔菲尔德,美国)。水净化微孔净化系统(微孔有限公司、Billerica妈,美国)。DPPH购自上海生物化学有限公司(上海,中国)。收紧工具包是购自南京生物工程研究所(中国南京)。香草酸的参考标准(≥99.0%),葛根素(≥98.0%),阿魏酸(≥98.0%),大豆苷(≥99.0%),和芒柄花黄素(≥98.0%)是购自上海原液有限公司有限公司(上海,中国)。

2.2。高效液相色谱的指纹
2.2.1。色谱条件

高效液相色谱法分析使用水域2695高效液相色谱配备2498紫外检测器。色谱分离是一个海泼斯尔合金BDS C18柱(4.6毫米×300毫米,5μ米)保持在25°C。流动相由乙腈(一个)和0.5%甲酸水(B)使用以下优化的梯度洗脱:0分钟:2%;10分钟:10%;29分钟:12%;35分钟:15%;50分钟:25%;第65分钟:60%;第70分钟:90%的流量与注射量1.0毫升/分钟10μL,检测波长被设定为280海里。

2.2.2。制备的标准解决方案

混合参考标准的解决方案是由添加3毫克的香草酸,36毫克的葛根素,2.4毫克的阿魏酸,6毫克的大豆苷和1.8毫克的芒柄花黄素在10毫升容量瓶和溶解在50%甲醇获得最终浓度为0.3,3.6,0.24,0.6,和0.18毫克/毫升。那么解决方案是透过0.22µ米微孔膜,50%甲醇加入最终浓度为0.15,0.075,0.05,0.0375,和0.03毫克/毫升的香草酸;1.8、0.9、0.6、0.45和0.36毫克/毫升的葛根素;0.12、0.06、0.04、0.03和0.024毫克/毫升的阿魏酸;0.3、0.15、0.1、0.075和0.06毫克/毫升的大豆苷;0.09、0.045、0.03、0.0225和0.018毫克/毫升的芒柄花黄素高效液相色谱分析。

2.2.3。制备样品的解决方案

四个草药被粉碎成粗颗粒。准确的重量为1.00克生地,1.00克黄芪,1.20克Puerariae Lobatae基数,0.67克Chuanxiong根茎粗颗粒混合,水提取准备使用ultrasound-assisted提取表2和3。所有的解决方案都是透过一个0.22µ米微孔膜和储存在4°C到分析。
因素 水平
1 2 3
温度(°C) 50 60 70年
提取时间(分钟) 40 50 60
Solvent-to-material比率(mL / g) 6 7 8
偏差 1 2 3
表2
独立变量和水平。
运行 温度(°C) 提取时间(分钟) Solvent-to-material比率(mL / g) 偏差
S1 1 1 1 1
S2 1 2 2 2
S3 1 3 3 3
S4 2 1 2 3
S5 2 2 3 1
S6 2 3 1 2
S7 3 1 3 2
S8 3 2 1 3
S9 3 3 2 1
表3
正交表的示例解决方案。
2.2.4。验证的方法

五个复制注射方法精度评估的一个样本,在重复性评估五个独立样本准备从相同的初始条件。稳定性研究,样品的解决方案被储存在室温和分析(0,2、4、8、12和24小时。

2.2.5。峰鉴别和评估的指纹

参考标准的解决方案被注入到高效液相色谱系统,和样品的解决方案被确定的色谱峰的保留时间根据参考物质。

每个样品溶液和标准溶液与高效液相色谱法分析了优化条件获得高效液相色谱指纹。指纹匹配是自动的中药色谱指纹图谱相似度评价系统(30.)(2012年版)。然后参考指纹是由系统使用中值方法从9个样品的比较,以及参考和9个样本之间的相似度值计算使用这个软件。

2.3。抗氧化活性测定
2.3.1。DPPH实验

根据周DPPH自由基清除活性测定et al。31日用细微的修改。简单地说,100年µL(0.4毫米DPPH无水乙醇溶液和100年µ每个样品溶液在不同浓度L被添加到96微型板块。孵化后30分钟在黑暗中在室温下,混合物的吸光度为517 nm (SpectraMax Plus384吸光度微型板块读者,分子器件、美国)。DPPH自由基清除活性计算根据以下方程: 在哪里一个我是样品的吸光度+ DPPH;一个j是样品的吸光度+无水乙醇;一个0是无水乙醇+ DPPH的吸光度。

2.3.2。收紧化验

收紧的总抗氧化活性评价试验(32]。收紧的解决方案是由混合1.50毫升300更易与L醋酸缓冲(pH = 3.6)和0.15毫升10更易与盐酸在40更易与L / L TPTZ解决方案和0.15毫升20 L FeCl更易3解决方案,孵化为30分钟37°C在黑暗中。一个新的100毫米FeSO4解决方案是从FeSO准备的4.7H2O标准材料。然后5μL的样本和180年μL收紧的解决方案添加到96微型板块,并允许在黑暗中反应在室温下6分钟,和吸光度测量593海里(SpectraMax Plus384吸光度微型板块读者,分子器件、美国)。水的标准解决方案0.15,0.3,0.6,0.9,1.2,和1.5更易FeSO / L4被用来生成校准曲线。最后的结果表示为FeSO的当量浓度4标准的解决方案。

2.4。Spectrum-Effect关系
2.4.1。皮尔逊积差相关系数

PPMCC是统计方法研究之间的亲密程度和方向变化的两个变量(33]。在这项研究中,PPMCC被用来计算24常见的山峰的峰面积值之间的关系,所有的样品(P1来P24)高效液相色谱指纹和抗氧化活动。

2.4.2。多重线性回归分析

消除多重共线性的问题,可能存在多个独立的变量,本研究利用逐步回归模型多元线性回归在SPSS统计软件(34]分析高效液相色谱指纹图谱的峰,IC50DPPH自由基清除的百分比值,分别和铁减少的抗氧化能力。因此,特征峰在多个选择独立变量之间有显著相关性。

2.5。统计分析

的集成电路50计算使用以下URL:https://www.aatbio.com/tools/ic50-calculator。MLRA和PPMCC通过SPSS 25.0软件进行。

3所示。结果

3.1。高效液相色谱指纹的结果
3.1.1。方法验证

方法验证的高效液相色谱指纹图谱结果表明精度范围内的同一样品溶液的相对保留时间的0.19 - -1.37%和0.75 - -2.67%的平均峰面积普遍峰所有的样品。实验的可重复性出现0.15 - -1.04%的范围内的相对保留时间和相对峰面积的0.57 - -2.48%常见的山峰。样品稳定性相对保留时间为0.11 -1.32%和0.69 -2.74%常见峰的相对峰面积的所有样品。高效液相色谱分析的结果表明,该方法是有效的和令人满意的。

3.1.2。高效液相色谱的指纹

的高效液相色谱指纹提取YYTN及其参考指纹如图1,样品和参考溶液混合数据所示2和3,分别。24山峰有良好的分离和大峰地区被选为常见的山峰的所有样品。样品的平均保留时间和峰面积的变异系数(CV) 24峰值区域表中列出4。CV值都超过8.96%,这表明,每个组件的内容的样品在不同萃取条件变化很大,特别是峰所代表的未知化合物2。


图1
高效液相色谱指纹YYTN及其引用(检测波长被设定为280海里,表达的时间是在几分钟内)。

图2
YYTN的高效液相色谱指纹图谱。

图3
混合标准溶液的高效液相色谱指纹图谱。香草酸(P5)、葛根素(P7)、阿魏酸(P13)、大豆苷(P21),芒柄花黄素(P23)。
没有达到顶峰。 tR(分钟) 化合物 意味着每个常见的峰(峰面积n= 3) 简历(%)
年代1 年代2 年代3 年代4 年代5 年代6 年代7 年代8 年代9 控制
P1 4.35 未知的 58.239 1598.968 1434.003 2242.623 1847.072 1928.97 1514.767 1870.101 1977.346 1608.01 37.13
P2 13.874 未知的 894.038 124.294 106.241 153.788 127.161 149.786 112.926 141.261 149.642 217.682 110.10
P3 14.459 未知的 158.758 485.685 410.196 602.872 477.105 570.061 429.368 537.156 520.098 465.7 26.48
P4 17.721 未知的 2097.543 1797.045 1551.842 2169.958 1794.198 2087.783 1494.875 1850.784 1858.046 1622.726 12.73
P5 20.252 香草酸 188.243 199.638 160.548 267.092 216.213 258.9 190.743 241.708 237.757 196.955 15.98
P6 23.059 未知的 98.432 268.577 247.529 487.828 425.278 529.692 497.381 759.812 755.699 452.248 46.47
P7 23.891 葛根素 12356.807 11137.137 9685.376 12278.256 10341.828 12285.794 9020.642 10978.242 10895.806 10997.765 10.16
P8 26.192 未知的 3068.374 2724.584 2365.726 3034.727 2546.809 3021.683 2213.586 2713.51 2681.596 2472.933 10.92
P9 27.737 未知的 2692.924 2497.148 2104.842 2746.072 2280.202 2812.948 2077.906 2645.69 2564.506 2491.36 10.39
P10 33.463 未知的 451.595 431.389 415.448 893.588 757.391 812.497 767.16 924.589 988.359 715.78 29.60
P11 37.292 未知的 55.412 208.42 138.712 237.401 195.599 230.8 189.65 238.356 233.033 191.932 29.67
P12 38.998 未知的 118.244 134.402 218.107 382.948 320.283 391.466 352.623 444.97 479.304 315.816 39.00
P13 39.844 阿魏酸 537.599 227.175 341.181 481.695 367.531 450.176 324.529 400.558 437.673 396.457 22.17
P14 44.968 未知的 53.301 210.321 153.735 280.818 177.932 210.875 185.905 233.502 270.171 174.027 33.13
P15 46.175 未知的 119.763 155.493 123.31 252.22 161.781 170.748 149.025 186.218 221.438 171.111 23.92
P16 46.762 未知的 318.118 175.192 120.313 183.771 131.151 157.711 134.175 161.501 147.948 169.987 32.89
P17 47.891 未知的 567.238 1400.02 1197.264 1678.034 1391.706 1645.648 1264.935 1542.522 1496.576 1290.745 23.53
P18 48.897 未知的 102.963 171.029 160.95 196.841 163.064 193.266 142.509 174.395 174.906 152.996 16.49
P19 50.891 未知的 541.894 225.149 194.53 275.116 230.743 267.933 190.102 258.261 244.444 209.586 38.67
P20. 52.074 未知的 480.788 483.885 403.028 540.935 453.536 531.823 424.461 547.367 501.954 431.888 10.64
P21 56.112 黄素 1632.799 617.779 593.706 561.935 520.579 618.128 268.638 354.741 442.295 623.4 60.14
P22 58.608 未知的 232.051 245.562 204.692 333.709 276.466 323.545 212.518 301.423 304.541 244.717 17.31
P23 64.372 芒柄花黄素 218.719 179.679 178.056 174.758 174.97 173.96 174.36 173.419 171.243 155.605 8.96
P24 68.493 未知的 200.638 237.3 214.887 266.736 211.177 245.117 209.784 207.319 239.623 225.842 9.26
简历(%)=σ/μ×100;年代标准差;μ峰面积的平均值。控制是控制指纹自动生成的中药色谱指纹图谱相似度评价系统。
表4
每个共有峰的峰面积的所有样品。
3.1.3。定量分析的YYTN

与参考标准后,五24常见的山峰,是香草酸(P5)、葛根素(P7)、阿魏酸(P13)、大豆苷(P21),芒柄花黄素(P23)。如表所示5、质量控制的内容进行五个化合物在9个样本。
化合物 标准曲线(R2) 每组样品的含量(毫克/毫升)
年代1 年代2 年代3 年代4 年代5 年代6 年代7 年代8 年代9
香草酸 Y= 1×107X−7.89×104(R2= 0.999) 0.059 0.056 0.048 0.069 0.059 0.068 0.054 0.064 0.063
葛根素 Y= 1×107X−1.30×104(R2= 0.999) 2.397 2.230 1.940 2.458 2.071 2.460 1.807 2.198 2.182
阿魏酸 Y= 3×107X+ 6.59×104(R2= 0.998) 0.024 0.021 0.018 0.028 0.013 0.026 0.017 0.022 0.025
黄素 Y= 8×106X+ 9.69×104(R2= 0.998) 0.124 0.130 0.124 0.116 0.106 0.130 0.043 0.064 0.086
芒柄花黄素 Y= 2×106X+ 1.63×104(R2= 0.999) 0.155 0.163 0.162 0.159 0.159 0.158 0.158 0.157 0.155
R 2相关系数的平方,可以判断线性回归直线的拟合程度。
表5
每组样本的内容。
3.1.4。指纹的相似性分析

分析了每个样本的指纹YYTN与参考指纹来评估这些样本之间的相似性。结果参考和9个样本之间的相似度值如表所示6。
年代1 年代2 年代3 年代4 年代5 年代6 年代7 年代8 年代9 控制
年代1 1 0.907 0.951 0.942 0.944 0.947 0.943 0.942 0.941 0.957
年代2 0.907 1 0.956 0.954 0.954 0.955 0.953 0.952 0.952 0.964
年代3 0.951 0.956 1 0.998 0.999 0.999 0.997 0.996 0.996 0.998
年代4 0.942 0.954 0.998 1 1 0.999 0.999 0.998 0.998 0.998
年代5 0.944 0.954 0.999 1 1 1 0.999 0.999 0.999 0.998
年代6 0.947 0.955 0.999 0.999 1 1 0.999 0.999 0.998 0.999
年代7 0.943 0.953 0.997 0.999 0.999 0.999 1 1 1 0.998
年代8 0.942 0.952 0.996 0.998 0.999 0.999 1 1 1 0.997
年代9 0.941 0.952 0.996 0.998 0.999 0.998 1 1 1 0.997
控制 0.957 0.964 0.998 0.998 0.998 0.999 0.998 0.997 0.997 1
进行这种分析的软件“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”。
表6
样本相似性分析。
3.2。抗氧化活性测试的结果
3.2.1之上。DPPH实验

的集成电路50值的DPPH自由基清除活性测试表中列出7。结果显示,九提取YYTN展出IC解决方案50值的范围内出现3.023 - -4.396毫克/毫升。如表所示7,S5展出最DPPH自由基清除活性。
样品没有。 DPPH
集成电路50(毫克/毫升)		 收紧
FeSO4等价(更易/ L)
年代1 3.775±0.017 6.328±0.025
年代2 4.396±0.024 6.170±0.034
年代3 3.290±0.018 5.331±0.029
年代4 3.694±0.011 7.242±0.022
年代5 3.023±0.016 6.003±0.019
年代6 3.637±0.016 7.762±0.022
年代7 3.307±0.017 7.345±0.025
年代8 3.296±0.022 7.959±0.033
年代9 3.116±0.017 8.245±0.032
表7
结果抗氧化活动( ±SD,n= 3)。
3.2.2。收紧化验

根据收紧工具包,FeSO的吸光度值4标准是横坐标,绘制相应的吸光度和浓度在纵坐标值绘制。回归方程如下:Y= 3.4887X−0.0291,R2= 0.9994。结果显示,9个提取YYTN解决方案的不同从5.331到8.245相当于FeSO更易/ L4。如表所示7,S9表现出最高的铁降低抗氧化能力。

3.3。Spectrum-Effect关系结果
3.3.1。皮尔逊积差相关系数

PPMCC执行分析的峰值区域24山峰作为独立变量和集成电路50DPPH自由基清除值百分比和收紧值作为因变量。PPMCC结果如表所示8。PPMCC代表峰值区域之间的关联和集成电路50自由基清除和收紧值百分比的值。如果PPMCC值是积极的,它表明,有一个积极的独立和相关的变量之间的相关性。相反,如果PPMCC值是负的,然后有一个负相关。PPMCC的绝对值越大,相关性越好。
因素 峰数量
P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 票数 P10 赛 P12 P13 好 P15 P16 P17 P18 P19 P20 P21 第22位 P23 P24
DPPH
集成电路50(毫克/毫升) −0.2435 0.2430 −0.1080 0.3392 −0.0309 −0.4989 0.4827 0.4651 0.3832 −0.5174 −0.1174 −0.6136 −0.2102 −0.1070 −0.1094 0.4606 −0.1174 −0.0125 0.2710 0.2299 0.3774 −0.0647 0.3425 0.3301
收紧
FeSO4(更易/ L) −0.2473 −0.1771 −0.4057 −0.5325 −0.2092 0.5277 −0.6005 −0.5876 −0.3878 0.3466 0.0211 0.3863 −0.1669 −0.0786 −0.1410 −0.4685 −0.3621 −0.6388 −0.3650 −0.2388 −0.7714 −0.2389 −0.5031 −0.6329
表8
PPMCC 24之间常见的山峰YYTN和抗氧化活动。
3.3.2。多重线性回归分析

使用SPSS软件,峰地区24常见的山峰被选为独立变量,表示为P1- - - - - -P24,集成电路50DPPH自由基清除值百分比和收紧的值被选为因变量,表示为日元和Y2,分别。通过逐步回归分析,集成电路的多重回归方程50DPPH自由基清除比例变量的值被表示为日元= 0.308−0.004×P5−0.001×P6+ 0.001×票数−0.002×P13−0.004×P15+ 0.006×P16−0.001×P21+ 0.011×P24,收紧的方程表示为Y2=−1.742 + 0.011×P5+ 0.008×P6−×票数+ 0.001×P13−0.026×P15+ 0.024×P16−0.001×P21+ 0.044×P24。这两个多元线性回归方程表示与IC的山峰,有紧密的关联50值的DPPH自由基清除和收紧值百分比。在回归过程中,一些山峰没有消除明显的相关性和多重共线性。最后,选择相关峰值得到回归方程。

4所示。讨论

YYTN由生地,黄芪,Puerariae Lobatae基数,和Chuanxiong根茎。生地被发现有抗癌的作用通过促进激活自然杀伤细胞和树突细胞(35,36]。黄芪具有抗肿瘤活性在体外和在活的有机体内(37]。也对心血管药理活性,免疫,呼吸和肝系统(38]。Puerariae Lobatae基数已被证明是有效的治疗高血压,脑缺血,和糖尿病39- - - - - -41]。Chuanxiong根茎对糖尿病肾病的保护作用,抗癌和抗氧化剂药理作用[42,43]。因此,YYTN,作为中国传统草药配方,结合了这四种中药,已经广泛应用于治疗脑损伤(3]。然而,很少有报道YYTN的高效液相色谱指纹图谱和药理功效。

从图1和表4,有一定的差异之间的峰值区域九个不同提取条件下样品。然而,如表所示6,9个样本的相似度值的指纹和参考指纹范围从0.907到0.999,这表明的质量YYTN组成的生地,黄芪,Puerariae Lobatae基数,Chuanxiong根茎相对一致的和稳定的。我们确定了五个化合物YYTN通过比较数据2和3:P5香草酸,P7葛根素,P13阿魏酸,P21大豆苷,P23芒柄花黄素。随后,我们进行了这些化合物的定量测定的内容。结果如表所示5:已知的内容组件在YYTN葛根素大豆苷> >芒柄花黄素>香草酸>阿魏酸,表明葛根素在YYTN最丰富。这个实验的结果是一致的与我们实验室的先前的研究。

如表所示7、DPPH自由基清除比例和收紧值可以反映抗氧化活性44]。结果表明,YYTN有很好的抗氧化活性。文献表明,集成电路的抗氧化活性增加而减少50比例的DPPH自由基清除和收紧值的增加45,46]。根据PPMCC表所示8,P4,P6,P7,P8,票数,P10,P12,P16,P21,P23,P24与DPPH清除和收紧值百分比呈正相关。P6,P10,P12与集成电路是负相关50DPPH自由基清除的百分比,而这些山峰和收紧呈正相关。高峰和集成电路之间的相关性50DPPH自由基清除的百分比P12>P10>P6随后,收紧值P6 >P12>P10。MLRA可以消除多重共线性的问题,可能存在多个独立的变量。因此,MLRA分析显示峰值与抗氧化活性比PPMCC少。MLRA,P5,P6,票数,P13,P15,P16,P21,P24有关集成电路50的DPPH自由基清除和收紧值百分比。其中,P5,P6,P13,P15,P24与集成电路是负相关50DPPH自由基清除的百分比P5,P6,P13,P24与收紧呈正相关,这意味着P5,P6,P13,P15,P24可能有显著的抗氧化活性。P5和P13通过高效液相色谱法香荚兰酸和阿魏酸,但P6,P15,P24不确定在本研究中。因此,我们将进一步确定这三个未知组件和证明这五个山峰是否有抗氧化活性更大的贡献。

由于中药成分的复杂性,化学指纹图谱不能准确评估组件及其功效之间的相关信息(47,48]。在这项研究中,建立了YYTN的指纹,没有相关的报告在文献中被发现。总结,本研究奠定了基础建立YYTN的指纹。随后,YYTN的抗氧化活性进行了测试,表明YYTN有一定程度的抗氧化活性和提供某种治疗方法治疗心血管和脑血管疾病因为YYTN已被证明是有效的脑缺血和心肌缺血动物实验(49,50]。最后,YYTN与抗氧化活性相关的组件是由相关分析,这可能是重要的研究治疗YYTN的物质基础。

数学建模中使用的中药spectrum-effect关系(34]。例如,我们使用的两个方法(PPMCC和MLRA)在这项工作表明,可以建立光谱相关性模型确定的色谱峰的抗氧化活性密切相关。这项工作中提到的两种抗氧化方法也被用于很多研究[51- - - - - -53]。结果表明,抗氧化活性测定方法可靠在体外。当然,我们将验证这一结果进一步在细胞和动物实验在活的有机体内。我们的研究不仅建立了spectrum-effect关系,而且定量分析YYTN与其他活性成分的中药spectrum-effect相关性(20.,34]。

总的来说,这项研究的主要优势是高效液相色谱的指纹和YYTN的抗氧化活性之间的关系。主要抗氧化成分YYTN进一步确定并将有助于YYTN的质量标准和其他抗氧化剂组件的机制的研究。

5。结论

在目前的研究中,我们建立了高效液相色谱指纹spectrum-effect关系和DPPH清除活动的总抗氧化活性YYTN收紧。的高效液相色谱分析用于构建指纹YYTN含有24常见的山峰,并评估了这些指纹的相似性值相似性分析。结果表明,9个样本的相似性值超过0.907,和葛根素在YYTN最丰富的化学成分。spectrum-effect关系结果表明高峰5,6,13日,15日和24日可能主要组件负责YYTN的抗氧化活性。这项研究表明,指纹识别方法进行验证;它可以提供一个可靠和实用的方法,中药质量的一致性和其他草药制剂。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

“阳阳”张先生和李余了同样的工作。“阳阳”张完成了实验。李余设计实验和起草了手稿。赵细细分析数据。Haofang Wan和Yu他帮助修改手稿。海通Wan和杨Jiehong构思研究和修订后的手稿。

确认

这项研究是由中国国家自然科学基金(批准号。81904083,81904083,81630105),重点项目的浙江省自然科学基金(批准号LZ18H270001),浙江中医药大学的基础(批准号2018 zj11)。

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