分析色酮的抗氧化能力Saposhnikoviae基数所以通过超声深低共熔溶剂提取

文摘

所以本文超声深低共熔溶剂(DES)提取用于收购色酮(cimicifugin prim-o-glucosylcimifugin, 5-o-methylvisamminoside)Saposhnikoviae基数(SR)。11准备密不可分的提取效果以色酮含量为指标的筛选。此外,最佳提取条件被证实使用单因素试验和响应面优化试验。清除DPPH阴离子和abt阳离子自由基的活动不同的SR提取物(DES、甲醇和乙醇)进行了研究。最佳提取条件优化的分析结果设计专家软件如下:提取时间(40分钟),提取温度(60°C)和固体/液体比率(32毫升/ g)。DES提取物对DPPH自由基的清除率和abt阳离子自由基被认为是75.31%和65.71%,也高于甲醇和乙醇提取物。总之,发达提取方法可以被视为一个安全的,绿色,和更有效的老色酮的提取方法。

1。介绍

Saposhnikoviae基数(SR)的干燥根中提取出来的Saposhnikovia衣属鸦葱(Turcz)。Schischk没有花和茎。SR辛辣,微甜的味道,自然是温暖。SR诱导发汗驱散风的影响,缓解痉挛,和克服湿(1]。SR是一个有着悠久历史的中国传统医学,这是上市的高档”的草药经典神农。“老主要用于治疗外源性风冷,全身疼痛,头痛,头晕,和潮湿的保留2]。

SR包含色酮、香豆素、有机酸、多糖、聚乙炔和甾醇类成分,色酮的主要有效成分是(3- - - - - -6]。根据研究,prim-o-glucosylcimifugin (POG)和5-o-methylvisamminoside (5 om)不仅可以降低温度对发热大鼠也有明显的解热、镇痛、抗炎和抗血小板聚集的影响7]。此外,cimicifugin的内容(CIM)是最高的等离子体。苷以来SR(包括波格游戏和5 om)必须转化为CIM在小肠被吸收(8]。因此,CIM、波格游戏和5 om的三种最具代表性的色酮,被选为索引组件SR的萃取效果的评估。

研究SR近年来相对比较全面,包括化学成分、药理作用、识别、及相关质量标准(9]。老审查的研究表明,所有深入的研究依赖于活性成分。因此,它是至关重要的提高有效成分的提取率。

深低共熔溶剂(一部分)的概念在2003年被首次提出(10]。DES是一个正在迅速崛起的,新的,绿色溶剂,可用于替代传统溶剂和离子液体。DES是由两个或两个以上的氢键捐赠者和氢键受体在一定摩尔比。它具有低熔点、低成本、低毒性、容易制备、再生,和生物降解性11]。此外,DES具有良好的物理和化学性质,如粘度可调、广泛的极性,和良好的溶解性。因此,DES具有广阔的应用前景的分离,提取和合成的食物和药物化学领域。目前,大量的文献的应用DES的分离和提取中药(TCM)据报道(12- - - - - -15]。

摘要ultrasound-assisted DES方法应用于老色酮的提取以优化了DES的成分。DES的最佳比例,超声提取时间、提取温度、超声功率使用单因素实验研究了。老色酮提取的抗氧化能力进行了研究评价的清除DPPH阴离子和abt阳离子自由基。

2。材料和方法

2.1。材料和试剂

SR是来自吉林Baiqi有限公司。(白城,中国)和被副教授Xianwen悦的药房白城学院医学院。CIM(批号:111710 - 200602),波格游戏(批号:111522 - 201913),和5 om(批号:111523 - 201811)是购自中国药品生物制品检定研究院(中国,北京)。甲醇(费舍尔,美国)是色谱级。磷酸(优秀的纯度)获得Guangfu科技发展有限公司有限公司(天津)。纯净水是从杭州娃哈哈有限公司购买,氯化胆碱,麦芽糖,丙氨酸,PL-malic酸,甜菜碱,乳酸,果糖,苯酚,丙三醇,丙二醇,木糖醇,尿素,醋酸,和柠檬酸都从郑州康元获得化工产品有限公司有限公司(河南,中国)。1-Diphenyl-3-nitrophenylhydrazine (DPPH)从Ruji购买生物技术有限公司(上海,中国)。2,2′-Azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸)联胺盐(abt)和过硫酸钾是来自Macklin生化有限公司有限公司(上海,中国)。老三种最具代表性的色酮的化学结构如图1。

2.2。的设备

色谱分析进行安捷伦1260高效液相色谱法(HPLC)系统(包括四元低压混合泵,autosampler,柱温箱,二极管阵列检测器,和chemstation工作站)。AB135-S电子天平购买从梅特勒-托利多国际有限公司,有限公司kq - 250超声清洁从昆山超声仪器有限公司有限公司78 - 1磁力加热搅拌器收购从常州国华电器有限公司,有限公司q - 901旋涡混合器从海门Qilinbeier买乐器制造有限公司有限公司

2.3。色谱条件

决心是取得Alltima™C₁₈列(250毫米×4.6毫米,5μ米)的列温度30°C。流动相是由甲醇(一个)和0.1%磷酸溶液(B)。流率维持在1.0 mL / min。侦探波长设置为254海里。样品的注射量是10μl .特定的梯度洗脱条件如下:0∼10分钟,⟶20% 5%;10∼20分钟,⟶55% 20%;20∼35分钟,55%⟶55%;35∼60分钟,55%⟶100%。

2.4。制备的混合标准的解决方案

CIM(6.4毫克)加权恰恰与甲醇溶解(最终调整卷5毫升)获得使用CIM标准的解决方案。波格游戏(8.32毫克)和5 om(6.84毫克)加权准确,和CIM标准解决方案(精确1毫升)被放置在相同的容量瓶,用甲醇溶解(最终调整卷10毫升)获得混合证券标准的解决方案。最后,混合证券标准解决方案(精确0.5毫升)被溶解和甲醇(最终调整卷10毫升)获得混合标准解决方案与CIM的浓度6.4μ41.6 g / mL,波格游戏μ34.2 g / mL,和5 omμ克/毫升。上面的解决方案是通过0.22过滤μm膜过滤器在高效液相色谱分析。

2.5。DES的准备

一部分是准备使用搅拌加热方法在一个恒定的温度。所选组件准确称重根据摩尔比的计算值和放置在100毫升锥形烧瓶。DES通过搅拌在100°C(20∼120分钟),直到一个稳定和均匀的液体形成。本文的DES类型准备显示在表中1。

2.6。提取过程

50毫克的老粉(粒度、≤100网)和1.5毫升的准备DES被添加到2毫升离心管帽。随后,管被放置在一个60°C水浴5分钟和5分钟通过涡动摇了,紧随其后的是超声治疗(40 KHz和250 W) 30分钟。然后,离心管离心5分钟在3000 r / min后冷却的速度。最后,上层清液(精确0.2毫升)被溶解和甲醇(最终调整卷1毫升)获得测试解决方案。0.22测试解决方案被过滤μ米微孔膜在高效液相色谱分析。此外,甲醇和乙醇被用作参考萃取溶剂代替DES获得参考基于上述方法的测试解决方案。

2.7。抗氧化能力测定

2.7.1。清除DPPH自由基的活动

1-diphenyl-3-nitrophenylhydrazine DPPH, 1日,是一种稳定的自由基与氮的中心。DPPH检测的原理是将一个稳定的DPPH的激进分子与一个电子对提供的抗氧化剂。形成无色组合产品将减轻自由基的典型紫色的解决方案(16,17]。与不同浓度提取解决方案的SR(5.10, 4.25, 3.40, 2.55, 1.70, 1.02,和0.51毫克/毫升)和DPPH阴离子(50的解决方案μg / mL)与甲醇首先准备。然后,提取解决方案与不同浓度(0.1毫升)和DPPH阴离子的解决方案(0.1毫升)涨跌互现,动摇了好,放置在黑暗30分钟获得DPPH测试解决方案。DPPH的吸光度测试解决方案(n= 3)分析了517海里。清除DPPH自由基速率计算下列方程的基础上使用甲醇作为空白控制: 在哪里一个₀:吸光度测试解决方案(0.1毫升DPPH + 0.1毫升甲醇),一个₁:吸光度测试解决方案(0.1毫升DPPH + 0.1毫升提取解决方案),和一个₂:吸光度测试解决方案(0.1毫升甲醇+ 0.1毫升提取解决方案)。

2.7.2。清除活动abt阳离子自由基

abt可以通过活性氧氧化形成蓝绿色的abt阳离子自由基。然而,抗氧化剂可以与abt阳离子自由基反应变色abt激进的解决方案(18]。abt(0.038克)和过硫酸钾(0.0075克)重准确,用去离子水溶解(最终调整后的体积,10毫升),分别。然后,等于这两个解决方案是混合和反应在一个黑暗的地方12 h。反应的解决方案(1.0毫升)被溶解和甲醇(最终调整卷10毫升)获得abt阳离子的解决方案。与不同浓度提取解决方案的SR(5.10, 4.25, 3.40, 2.55, 1.70, 1.02,和0.51毫克/毫升)与甲醇准备。然后,提取解决方案与不同浓度(0.05毫升)和abt阳离子的解决方案(0.15毫升)喜忧参半,动摇了好,放置在黑暗2 h收购abt测试解决方案。abt的吸光度测试解决方案(n= 3)决心在734海里。清除的abt激进是根据以下方程来计算使用甲醇作为空白控制: 在哪里一个₀:吸光度测试解决方案(0.15毫升abt + 0.05毫升甲醇),一个₁:吸光度测试解决方案(0.15毫升abt + 0.05毫升提取解决方案),和一个₂:吸光度测试解决方案(0.15毫升甲醇+ 0.05毫升提取解决方案)。

3所示。结果与讨论

3.1。选择DES系统老色酮的提取

3.1.1。不同类型的DES的效果

的影响不同类型的DES老色酮的含量在图所示2(一个)。CIM的高效液相色谱色谱、波格游戏和5 om混合组成的标准解决方案和测试解决方案用DES chloride-acetic酸胆碱是显示在图3。一些DES不能被视为萃取溶剂由于其固体或粘稠液体状态。因此,还需要增加一定比例的水增加萃取溶剂的流动性,提高萃取效率和可行性19,20.]。提取条件如下:液体/固体比率(30 mL / g),超声波电源(40 KHz, 250 W),提取时间(30分钟),提取温度(60°C)。如图2(一个)时,可以获得更好的提取影响DES chloride-lactic酸胆碱,胆碱chloride-fructose-water, chloride-xylitol-water胆碱,胆碱chloride-acetic酸,尤其是胆碱chloride-acetic酸。CIM的内容、波格游戏和5 om分别为0.4259,2.9195和2.4075毫克/克使用chloride-acetic酸胆碱作为提取溶剂。然而,内容CIM、波格游戏和5 om 0.3030, 2.2908和2.1374毫克/克使用甲醇作为提取溶剂。CIM的内容、波格游戏和5 om分别为0.3455,2.7206和2.2329毫克/克使用乙醇作为提取溶剂。DES(胆碱chloride-acetic酸)的萃取效率比传统的溶剂。因此,DES chloride-acetic酸胆碱组成的被选为最优DES类型。

3.1.2。不同比率的胆碱Chloride-Acetic酸的影响

不同比率的chloride-acetic酸胆碱(N: N;1:1,1:2、1:3,1:4和1:5)被选择并准备进DES用于老色酮的提取提取条件如下:DES (chloride-acetic酸胆碱),液体/固体比率(30 mL / g),超声波电源(40 KHz, 250 W),提取时间(30分钟),提取温度(60°C)。CIM的内容更改,波格游戏,老5 om提取DES与不同比例的胆碱chloride-acetic酸表现出在图2 (b)。DES的最佳组合是胆碱chloride-acetic酸(N: N;1:2)的光色酮的萃取率。

3.1.3。提取时间的影响

SR提取在不同的时间包括10、20、30、40、50分钟来优化提取条件。提取条件如下:DES(胆碱chloride-acetic酸,1:2),液体/固体比率(30 mL / g),超声波电源(40 KHz和250 W),和提取温度(60°C)。作为显示在图2 (c),色酮增加的内容随着开采时间的增长。然而,30分钟后萃取率达到一个恒定值。活性成分不能完全提取通常在很短的时间内。物质的稳定性,尤其是DES的活动,将会受到长时间提取的影响。此外,提取效率也会受到长期影响萃取(21,22]。因此,30分钟被认为是最好的萃取时间。

3.1.4。提取温度的影响

不同提取温度的影响(30、40、50、60、70和80°C)对萃取率调查为了最大限度地提取目标化合物。提取条件如下:DES (chloride-acetic酸胆碱:1:2),液体/固体比率(30 mL / g),超声波电源(40 KHz, 250 W),和提取时间(30分钟)。我们可以看到在图2 (d),老色酮的萃取率较高时,萃取温度设置为60°C。这可能是由于这样的事实,当萃取温度增加,药用材料内部温度的增加,这将促进有效成分的溶解。然而,过度的温度下的活性成分将被摧毁。最后,60°C是确认合适的萃取温度。

3.1.5。液体/固体比例的影响

液体/固体比率是最重要的一个影响因素提取效率。然而,提取效率并不总是随着液体/固体比例增加。适当比例的液体/固体不仅能最大化目标化合物的提取也减少溶剂的使用和节约开采成本23]。在这项研究中,不同的液体/固体比10,20、30、40、50 mL / g是检查屏幕的最佳提取条件。提取条件如下:DES (chloride-acetic酸胆碱:1:2),超声波电源(40 KHz, 250 W),提取时间(30分钟),提取温度(60°C)。可以观察到在图2 (e)老色酮提取的内容从开始减少液体/固体比以来30 mL / g。因此,液体/固体比30 mL / g选择深造。

3.1.6。超声功率的影响

近年来,大量的研究表明,超声波萃取是提取天然有效成分的理想方法。它不仅效率高的特点,操作简单和短的时间,但也有明显的优势在保护活性成分的化学结构和生物活性(24,25]。本文超声波功率(100 W、150 W、200 W、250 W和300 W),超声提取的一个重要参数,检查。提取条件如下:DES (chloride-acetic酸胆碱:1:2),液体/固体比率(30 mL / g),提取时间(30分钟),提取温度(60°C)。如图2 (f)五,萃取率几乎没有区别超声波权力。超声波功率没有影响老色酮的提取效果。

3.2。响应面优化实验

者进行响应面优化实验,以获得目标化合物的最佳提取工艺参数。超声波协助提取的影响因素从老色酮DES (chloride-acetic酸胆碱),提取时间(一个)、提取温度(B)和液体/固体比(C)进行了单因素实验的基础上。结果如表所示2。

设计专家软件被用于多元回归拟合的数据表2。结果显示在表中3。缺乏适合的三个模型是超过0.05,和相关系数(R²)超过0.95。此外,三个模型都是重要的( )。结果表明,这些模型是high-fitting度。方程可以很好地反映了每个因素与响应面之间的关系。波格游戏的多重回归方程(Y₁)、CIM (Y₂),5 om (Y₃)独立变量包括提取时间(一个)、提取温度(B)和液体/固体比(C)如下:

每一个因素(图的表面4)是比较陡峭,表明提取时间,提取温度,固体/液体比例对提取效果有显著影响。图4根据原则,分析了地面坡度的陡响应面图和等值线密集,更大的两个因素之间的相互作用(8,26- - - - - -28]。结果表明,响应面之间形成的曲面斜率因子B(提取温度)和因素C(固体/液体比)之间的最大响应表面两个因素的相互作用。提取温度和固体/液体之间的交互比例是最强的。

基于软件的分析结果,老的最佳提取条件如下:提取时间(40.00分钟),提取温度(60.55°C)和固体/液体率(31.58 mL / g)。波格游戏内容的预测价值,CIM和5 om色酮提取的上述条件为3.5032,0.5445和3.2005毫克/克。考虑到实验的可操作性,优化条件修改如下:(40分钟)提取时间,提取温度(60°C)和固体/液体比率(32毫升/ g)。平均波格游戏内容、CIM和5 om的三个并行验证测试是3.4599,0.5393,和3.1304毫克/克,按照预测价值。结果表明,优化提取条件稳定、可行。

3.3。抗氧化能力测定

3.3.1。清除DPPH自由基的活动

扫气的不同浓度的SR提取物对DPPH阴离子是显示在图5(一个)。结果表明,清除的DES提取物(0.51毫克/毫升和5.1毫克/毫升)对DPPH阴离子分别为20.99%和75.31%,分别。SR提取物浓度越高的解决方案,DPPH阴离子的清除能力越强。清除的甲醇和乙醇提取物对DPPH(5.1毫克/毫升)阴离子分别为59.93%和50.33%,分别。总之,老的清除速率提取与DES(胆碱chloride-acetic酸)对DPPH阴离子高于与甲醇和乙醇提取。

3.3.2。清除活动abt阳离子自由基

清除老的不同浓度的提取abt阳离子如图5 (b)。结果表明,清除的DES提取物(0.51毫克/毫升和5.1毫克/毫升)abt阳离子分别为15.43%和65.71%,分别。SR提取物浓度越高的解决方案,abt阳离子的清除能力越强。清除的甲醇和乙醇提取物(5.1毫克/毫升)abt阳离子分别为53.18%和50.52%,分别。一句话,老的清除速率提取与DES(胆碱chloride-acetic酸)abt阳离子高于提取甲醇和乙醇。

4所示。结论

在这篇文章中,一个绿色和新DES被用来从老,而不是传统的溶剂提取色酮。DES的最佳成分被证实为胆碱chloride-acetic酸(N / N, 1: 2)。DES的最佳提取条件提取时间(40分钟),提取温度(60°C)和固体/液体比率(32毫升/ g)。波格游戏的平均含量、CIM和5 om DES色酮提取的3.4599,0.5393,和3.1304毫克/克。清除DES提取物对DPPH自由基和abt阳离子自由基被认为是75.31%和65.71%,高于甲醇和乙醇提取物。这项研究提供了一种新的、高效和环保色酮的提取方法,它可以被视为一个有前途的,安全的,可推荐的提取植物有效成分的提取策略。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者想感谢嘉明徐提供分析工具。这项研究由“13日五年计划”吉林省教育科学研究规划项目部门(JJKH20200025KJ)。

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