用UHPLC-MS/MS方法比较了法Farfarae原和蜜制法Farfarae口服液大鼠体内8种有效成分的药代动力学

摘要

在中国，千百年来，法Farfarae flos (FF)被广泛用于治疗咳嗽，但人们对其药代动力学特性知之甚少。本研究旨在建立快速、准确的超高效液相色谱-三四极串联质谱法，比较八种活性化合物口服原和蜜制银花提取物的药代动力学研究。在Thermo Hypersil GOLD C18柱(100 mm×2.1 mm, 1.9)上进行最佳分离μm particles size) with a gradient elution of acetonitrile as mobile phase A and 0.3% formic acid aqueous solution as mobile phase B. The flow rate was set as 0.3 mL/min and separated for 34.0 minutes. Electrospray ionization in the negative ion mode and selected reaction monitoring were used to identify and separate active components. The results met the acceptance criteria and showed that this method exhibited good linear, precision, accuracy, and stability. The extraction recoveries ranged from 81.54% to 104.48%, and the matrix effects ranged from 81.94% to 103.02%. These results show that the validated method could be successfully applied to evaluate the pharmacokinetic study in rats after oral administration of raw farfarae flos (R-FF) and honey-processed farfarae flos (H-FF).

1.介绍

一般来说，在中药用于特定的临床应用之前，它的原药通常是经过特殊加工的，在中文里叫做“泡脂”。1]。传统的中国医药加工方法是葡萄酒处理，盐处理，醋处理，蜂蜜处理，甘草处理，硫熏蒸等[2，3]。中药炮制的目的是提高疗效，消除毒性，减少副作用，改变原药材的性质。

Farfarae FLOS（FF）属于菊科植物，款冬L.的干燥花蕾，是几千年来广泛使用的中药之一，它通常用于治疗咳嗽，祛痰，急慢性气管炎和哮喘[4-6]。据《十方论治》记载，蜜炙法farfarae (H-FF)能增强润肺止咳的功效，说明蜜炙法farfarae (H-FF)增强了FF的临床疗效。重要的是，H-FF是咳嗽药的最佳选择，它有着悠久的历史，被广泛应用于止咳巨红口服液和止嗽清果合剂等许多中成药中。7，8]。尽管FF的临床应用历史悠久，但对其药代动力学特性知之甚少。因此，由于缺乏科学证据和研究方法，对生鲜和H-FF的体内动力学还没有很好的了解。

FF具有显著的药理作用，如抗血小板聚集、抗炎、抗过敏、抗肿瘤等，引起了人们的广泛关注[9]。FF有含挥发油，酚酸类，黄酮类，多糖类，甾醇，生物碱，萜烯类复杂的化学成分。但提请注意，现代植物化学研究表明，FF的总酚酸部分已润肺逮捕咳嗽活动[6]。而据我们所知，FF中所含的总酚酸主要由绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸等组成[五，10]。芦丁具有明显的抗炎、抗氧化、降血脂等药理作用，对神经有一定的保护作用[11]。我们推测，H-FF的临床疗效不同于原药，这可能与生物活性化合物在体内的药代动力学变化有关。然而，以往对FF及其加工产品的研究往往侧重于定量分析[12和药理学作用的改变[6]，但尚未研究过生物活性化合物口服R-FF和H-FF提取物后的药代动力学差异。为了了解活性化合物在体内的动态变化，有必要建立一种精确、快速的方法来比较这些活性化合物在raw和H-FF中的药代动力学差异。

在这项研究中，精确和快速UHPLC-MS / MS方法首先建立了绿原酸，cryptochlorogenic酸，neochlorogenic酸，异绿原酸B，异绿原酸C，咖啡酸，阿魏酸，和芦丁大鼠血清中的同时测定。它也施加到原料的比较药动学和其蜂蜜加工产品的首次研究。与此同时，上FF活性化合物的药代动力学行为蜂蜜处理FF的效果进行阐述。

2.实验

2.1。化学制品

绿原酸，cryptochlorogenic酸，neochlorogenic酸，异绿原酸B，异绿原酸C，咖啡酸，阿魏酸，芦丁，和氯霉素的可信标准（内部标准，IS）购自购成都生物必备（成都，中国）。这些标准的纯度通过超高效液相色谱/光电二极管阵列（UPLC-PDA）检测器确定的98％以上。这些标准的结构示于图1。HPLC级甲醇和HPLC级乙腈购自Fisher Scientific (Janssen pharmaceutical alaan 3a 1 Reagent Lane)。HPLC级甲酸(FA)从Dikma公司(美国)获得。纯净水购自娃哈哈(中国杭州)。所有其他化学试剂都是分析级的。

(一)

(b)

(c)

(d)

（e）中

（F）

（G）

(h)

(我)

R-FF和H-FF购自哈尔滨中药材市场。所有样品经黑龙江中医药大学教授苏连杰鉴定为菊科。所有样品在25℃下干燥，并在恒温箱中保存。

2.2。色谱和质谱条件

在TSQ定量上进行质谱分析^™三四极质谱仪(Thermo Scientific)^™，的Vanquish^™，（沃尔瑟姆，MA，USA））在装有自动进样器。Chromatographic separation was performed on a Thermo Hypersil GOLD C18 column (100 mm × 2.1 mm, 1.9 μ米粒子)。柱温保持在30℃。通过Thermo Scientific™获取并处理TraceFinder™软件。流动相由乙腈(A)和水(均含0.3%甲酸)(B)组成，采用梯度洗脱程序(0-5分钟:10-19%乙腈，5-8分钟:19-25%乙腈，8-28分钟:25%-100%乙腈，28-32分钟:100%-10%，32-34分钟:10%-10%)。系统在第二次注射前4.0分钟的初始流动阶段重新平衡。流速设置为0.3 mL/min，注射体积设置为2μl

分析物在TSQ Quantis三四极子质谱仪上检测，通过选择的反应监测(SRM)，配备一个加热的电喷雾电离源在负离子模式下工作。参数设置如下:护套气体和辅助气体分别设置为30 Arb和10 Arb;离子转移管温度保持在325℃;设置蒸发器温度为350℃。

2.3。提取的制备R-FF和H-FF

取70 g的R-FF和h - ff分别在85%乙醇中煮沸3次，每次1 h，然后分别用纱布过滤。然后通过旋转蒸发器的蒸发和浓缩将提取物合并。最后，用UHPLC-MS/MS将R-FF和H-FF提取物重新稀释至相同浓度，在相同的色谱条件下分别进行定量测定。相应的绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸、芦丁、和浓度分别为4557.54、622.01、483.18、4920.11、2895.64、368.36、34.63、9457.26μ克/克的R-FF提取物和5396.67，654.35，492.09，2729.93，1472.28，598.71，57.38，而在H-FF提取9612.12，分别。

2.4。制备的标准

甲醇制得绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸、芦丁、IS等原液(1mg /mL)。然后将原液混合，用甲醇水(50:50,v/v)连续稀释，得到混合校准标准。每次实验前，所有溶液保存于4℃。

2.5。校准曲线的制备

标准储备溶液和质量控制（QC）样品通过尖峰100制备 μL个不同的浓度混合校准标准溶液和695的 μL的乙腈变成100μ大号空白血清和5 μL IS。Ťhe final serum-derived working solutions of chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, neochlorogenic acid, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid C, caffeic acid, ferulic acid, hyperoside, and rutin were in the range of 4.35–118500.00 ng/mL, 2.38–168000.00 ng/mL, 2.67–39000.00 ng/mL, 1.30–211000.00 ng/mL, 4.87–230000.00 ng/mL, 2.78–8840.00 ng/mL, 2.05–1000.00 ng/mL, and 1.45–8150.00 ng/mL, respectively. The low, middle, and high concentrations of QC samples were prepared containing 3500.00, 40400.00, and 110000.00 ng/mL for chlorogenic acid; 2000.00, 50000.00, and 100000.00 ng/mL for cryptochlorogenic acid; 1000.00, 15000.00, and 25000.00 for neochlorogenic acid; 2000.00, 80000.00, and 160000.00 ng/mL for isochlorogenic acid B; 1500.00, 7500.00, and 140000.00 ng/mL for isochlorogenic acid C; 380.00, 3800.00, and 6000.00 ng/mL for caffeic acid; 100.00, 200.00, and 500 ng/mL for ferulic acid; and 600.00, 4000.00, and 8000.00 ng/mL for rutin, respectively.

2.6。血清样品的制备

五 μL的是含氯霉素100 ng/ml和795的溶液μL的乙腈加到100μ用于蛋白质的沉淀大号药物血清样品。Subsequently, the 1.5 mL centrifuge tube containing mixture was vortexed for 5 min. After that, the mixture was centrifuged at 12,000 rpm for 20 min at 4°C. Finally, the supernatant fluid was removed and evaporated to dryness under a stream of nitrogen at 35°C. The dried residue was redissolved by 100 μL 50％甲醇水溶液。将上清液制备上述通过0.22过滤 μm膜通过UHPLC-MS/MS系统转移至小瓶进行数据分析。

2.7。方法验证

通过对不同大鼠血浆空白血清的色谱分析，评价了该方法的特异性;采用混合校准标准和IS的加药空白血清，以及口服R-FF提取物4 h后的大鼠血清样本，如图所示2。所有的样品中没有观察到的内源性物质的干扰在所述分析物的保留时间和IS。结果表明，该方法具有良好的选择性。

(一)

(b)

(c)

校准标准曲线是通过计算11个分析物的峰面积比和IS与各自分析物在血浆中的浓度的加权(1/)而制备的X²线性最小二乘回归。定量的下限(LLOQ)被定义为信噪比(S/N)为10:1的分析浓度。

通过在同一天(日内精密度)和连续三天(日间精密度)对不同浓度的QC样品进行6次重复，评估精密度和准确性。准确度(100%)计算为(测量平均浓度-理论平均浓度-浓度/理论平均浓度)×100%。精密度和准确度分别用相对标准偏差(RSD)和相对误差(RE)表示。

恢复通过比较计算出的分析物/ IS与纯参考标准掺入空白血清中提取被分析物的峰面积比。基体效应是由组分的比较来测量/ IS在拔牙后的峰面积比掺有从标准溶液获得的样品。这两种评估RSD应小于15％。

通过将QC样品在室温下保存4小时计算短期稳定性。通过将相同的QC样品在−20℃的冰箱中保存30天来考察其长期稳定性。通过分析相同的QC样品，在连续3次冻融(- 20 ~ 20℃)循环后，确定冻融稳定性。通过将QC样品在自动取样器中保存24小时来评价制备后的稳定性。

2.8。药代动力学研究

12adult male SD rats (weighing 250∼300 g) were used in pharmacokinetics experiments and randomly assigned to two groups: R-FF group and H-FF group. Before being administered R-FF or H-FF extract, all the rats fasted but with free access to water for 12 h. The R-FF or H-FF extract was orally administered to the rats (140 g/kg body weight). Aliquots of 0.3 ml blood samples were collected in 1.5 ml heparin lithium-anticoagulant tubes at (0.083, 0.166, 0.333, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 36, and 48 h) via the postorbital venous plexus veins from each rat after oral administration. The blood sample was immediately centrifuged at 3500 rpm for 5 min, and the supernatant 100 μ大号血清转移到一个新的离心管中并储存在-80℃直至分析。

3.结果与讨论

3.1。UHPLC-MS / MS条件的优化

用注射泵(200ng /mL的分析物和IS用甲醇水稀释(50:50,v/v))优化质谱参数。结果表明，在负电离模式下，所有被分析物和被分析物都有较高的信号。分析了绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸、芦丁和IS (m/)的SRM模式ž353.04、353.04、353.04、515.00、515.10、178.96、193.00、610.00、321.00)丰度稳定。结果见表1。为了获得合适的保留时间和良好的峰形，我们对色谱柱、流动相、修饰剂和梯度洗脱程序进行了优化。在这个初步实验中，我们首先选择了ACQUITY UPLC 1.8μm HSS T3柱(水)进行洗脱，但发现有部分尾峰。然后，我们选择了1.9μm Hypersil金柱(Thermo)进行洗脱，我们发现所有化合物都能快速完全分离。当甲醇/乙腈(流动相A)最初作为有机流动相进行测试时，观察到乙腈具有更高的信号。当含有0.1%甲酸水溶液，0.2%甲酸水溶液，或0.3%甲酸水溶液的流动相B增加时，我们发现0.3%甲酸能得到最好的电离。最后,1.9μ选用m Hypersil金柱(Thermo)梯度洗脱34.0 min，流动相为含0.3%甲酸的乙腈-水，流速为0.3 mL/min。


没有达到顶峰。	分析	保留时间（分钟）	Precursor ion ([M − H]⁻) (m / z）	产品离子(m / z）	碰撞能量（V）	极性

1	阿魏酸	13.05	193.00	134.00;177.97	27.93;13.03	负
2	咖啡酸	6.11	178.96	107.0;135.0	22.66;15.53	负
3	绿原酸	5.65	353.04	126.92;190.97	34.30;16.75	负
4	Neochlorogenic酸	2.94	353.04	178.97;190.97	18.23;18.87	负
五	Cryptochlorogenic酸	6.14	353.04	173.04;178.97	15.65;16.26	负
6	Isochlorogenic酸乙	12.86	515.00	173.05;353.07	26.91;18.98	负
7	Isochlorogenic酸C	14.40	515.10	172.97;353.16	28.35;17.92	负
8	芦丁	13.17	610.00	300.04;301.01	36.35;34.64	负
是	氯霉素	10.85	321.00	152.07;257.07	16.26;16.22	负

3.2。方法的验证

该方法通过特异性、检测下限、定量下限、日内精密度、日内精密度、准确度、稳定性、回收率、回收率和基质效应验证。

空白血清、含混合标准品和IS的空白血清、口服R-FF提取物血清样品4 h后的色谱图见图2。没有明显的杂质干扰峰在化合物和IS两者的保留时间发现。Ťhe retention times of chlorogenic acid (5.65 min), cryptochlorogenic acid (6.14 min), neochlorogenic acid (2.94 min), isochlorogenic acid B (12.86 min), isochlorogenic acid C (12.86 min), caffeic acid (6.11 min), ferulic acid (6.11 min), rutin (13.17 min), and IS (10.85 min), respectively.

绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸、芦丁在大鼠血清中的线性回归显示出良好的线性关系。经验证的方法具有良好的线性度([R²> 0.990)在表中2。Ťhe LLOQ of chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, neochlorogenic acid, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid C, caffeic acid, ferulic acid, and rutin was determined as 4.35, 2.38, 2.67, 1.30, 4.87, 2.78, 2.05, 1.45 ng/mL, respectively.


分析	范围(ng / mL)	校准曲线	相关系数（[R²）	LLOQ (ng / mL)

阿魏酸	2.05 - -1000.00	ÿ= 0.027X−0.857	0.993	2.05
咖啡酸	2.78 - -8840.00	ÿ= 0.035X−14.394	0.999	2.78
绿原酸	4.35-118500.00	ÿ= 0.002X−1.566	0.999	4.35
Neochlorogenic酸	2.67-39000.00	ÿ= 0.013X−2.914	0.990	2.67
Cryptochlorogenic酸	2.38-168000.00	ÿ= 0.032X−32.266	0.990	2.38
Isochlorogenic酸乙	1.30-211000.00	ÿ= 0.031X−2.370	0.991	1.30
Isochlorogenic酸C	4.87 - -230000.00	ÿ= 0.057X−9.097	0.990	4.87
芦丁	1.45 - -8150.00	ÿ= 0.020X + 1.045	0.994	1.45

在三个QC水平下计算日内和日间的精度(RSD%)，均低于4.94%。所有化合物的精确度(RE%)范围为- 5.11-4.81%。所有结果见表3。结果表明，精密度和准确度均满足。


分析	飙升的浓度(ng / ml)	盘中(ñ = 6)		Interday (ñ = 6)
分析	飙升的浓度(ng / ml)	准确性(RE, %)	精度(取代,%)	准确性(RE, %)	精度(取代,%)

阿魏酸	100.00	4.09	3.48	4.73	4.89
	200.00	1.42	1.12	3.79	3.92
	500.00	2.14	2.18	4.81	3.55

咖啡酸	380.00	1.43	3.08	−5.11	3.57
	3800.00	4.34	3.63	4.31	3.27
	6000.00	−1.19	1.22	2.45	4.55

绿原酸	3500.00	-3.24	2.79	−4.54	3.75
	40400.00	−1.20	1.26	−3.56	3.78
	110000.00	−3.72	2.41	4.70	4.03

Neochlorogenic酸	1000.00	−3.15	3.61	4.37	4.51
	15000.00	1.07	2.83	2.00	2.64
	25000.00	1.06	1.85	−3.78	4.30

Cryptochlorogenic酸	2000.00	2.63	3.65	4.84	3.82
	50000.00	1.28	1.95	2.65	2.18
	100000.00	2.47	2.93	3.99	2.44

Isochlorogenic酸乙	2000.00	1.56	1.84	3.90	3.51
	80000.00	-2.30	2.47	-2.24	4.79
	160000.00	1.19	2.33	2.39	3.47

Isochlorogenic酸C	1500.00	1.53	3.92	4.09	4.65
	7500.00	−2.45	2.88	4.23	3.02
	140000.00	−1.42	2.72	4.46	4.94

芦丁	600.00	1.78	3.98	3.85	3.00
	4000.00	2.41	2.64	4.38	2.10
	8000.00	1.04	2.35	2.87	4.81

氯霉素（IS）	One hundred.	1.11	1.26	3.06	3.48

提取回收率为81.54 ~ 104.48%，SD小于7.60%。回收效果令人满意。三种浓度QC样品的基质效应在81.94 ~ 101.71%之间，SD在12.51%以下。所有结果汇总在表中4。


分析	浓度(ng / mL)	基质效应(%，平均值±标准差，ñ = 6)	回收率(%，平均值±标准差，ñ = 6)

阿魏酸	100.00	91.70±3.26	102。70 ± 4.97
	200.00	88。68 ± 2.80	100.49±2.41
	500.00	98.99±5.31	99.04±4.10

咖啡酸	380.00	81.94±3.24	104.48±5.80
	3800.00	8五。03 ± 9.17	81.54 ± 3.06
	6000.00	9五。五4 ± 6.83	9五。五五 ± 7.83

绿原酸	3500.00	91。3五 ± 4.79	100.07±5.27
	40400.00	99.34±7.87	99。48 ± 3.17
	110000.00	9五。09 ± 4.47	95.81±2.29

Neochlorogenic酸	1000.00	9五。7五 ± 4.72	90.14±4.73
	15000.00	99.46±8.90	99。29 ± 5.83
	25000.00	99。63 ± 3.71	99。28 ± 3.32

Cryptochlorogenic酸	2000.00	97.98±2.49	97.94±6.42
	50000.00	101。71 ± 3.20	99.30±7.60
	100000	100.32±6.42	97。6五 ± 4.42

Isochlorogenic酸乙	2000.00	101.26±6.32	99。13 ± 7.56
	80000.00	99.45±12.51	99。83 ± 4.23
	160000.00	99.88±4.49	103.60±3.72

Isochlorogenic酸C	1500.00	103。02 ± 5.12	One hundred.。五4 ± 3.38
	7500.00	99.03±7.34	98.80±4.49
	140000.00	100.43±4.79	90.31 ± 5.51

芦丁	600.00	99。五7 ± 4.76	102。72 ± 3.55
	4000.00	98。70 ± 3.57	100.86±6.63
	8000.00	99。11 ± 4.95	101。40 ± 4.63

氯霉素（IS）	100.00	90.77 ± 6.66	92.85±4.67

短期稳定，长期的稳定性和冷冻/解冻的稳定性进行了测试。这些数据汇总于表五结果表明，该方法适用于同时测定绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸、芦丁的含量。所有分析物的变化范围在实际值的15%之内。


分析	浓度(ng / mL)	短期（RE％）	长期(RE %)	冻融(RE %)

阿魏酸	100.00	2.02	2.16	4.78
	200.00	−0.51	3.51	1.65
	500.00	0.79	1.03	1.23

咖啡酸	380.00	−3.53	−3.82	4.73
	3800.00	1.00	1.23	4.70
	6000.00	1.03	1.97	1.01

绿原酸	3500.00	0.12	−2.47	−1.34
	40400.00	1.78	-1.56	−1.72
	110000.00	-2.36	−2.94	−2.67

Neochlorogenic酸	1000.00	2.04	2.83	4.96
	15000.00	0.62	−4.71	2.35
	25000.00	1.47	2.60	−3.54

Cryptochlorogenic酸	2000.00	2.36	1.02	1.73
	50000.00	1.54	3.73	1.67
	100000	2.25	2.06	3.86

Isochlorogenic酸乙	2000.00	−0.21	2.84	2.90
	80000.00	1.10	2.06	1.59
	160000.00	1.41	-2.26	−1.12

Isochlorogenic酸C	1500.00	1.31	4.77	2.78
	7500.00	−0.29	1.42	3.65
	140000.00	0.87	3.63	2.79

芦丁	600.00	−0.53	−4.09	−2.83
	4000.00	0.77	3.92	−1.23
	8000.00	1.23	3.30	2.31

氯霉素（IS）	One hundred.	0.74	-2.22	−4.77

3.3。药代动力学研究

迄今为止，中药药代动力学的研究受到了较多的关注，主要集中在原药的药代动力学研究上，而对加工药材的药代动力学研究较少。本研究建立的UHPLC-MS/MS方法对R-FF、H-FF提取物口服后同时测定绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、咖啡酸、阿魏酸、芦丁均具有足够的灵敏度。8种化合物的相应浓度为4557.54μg / g和5396.67μ克/克为绿原酸，622.01 μ克/克和654.35 μg/g隐绿原酸，483.18μg / g和492.09μ克/克为neochlorogenic酸，4920.11 μg / g和2729.93μ克/克为异绿原酸B，2895.64 μg / g和1472.28μg/g为异绿原酸C, 368.36μg / g和598.71μ克/克为咖啡酸，34.63 μg / g和57.38μ克/克为阿魏酸，和9457.26 μg / g和9612.12μg/g分别为R-FF和H-FF提取物中的芦丁。8种化合物在两种处理下的平均血清浓度-时间曲线如图所示3。R-FF和H-FF的药代动力学参数，包括Ť_马克斯，C_马克斯AUC0 -ŤAUC0 -∞Ť1/2，MRT总结在表6和7。

(一)

(b)

(c)

(d)

（e）中

（F）

（G）

(h)


复合名称	C_马克斯(ng / mL)	Ť_马克斯(h)	Ť_1/2(h)	AUC_{0 -Ť}（纳克/ L）	AUC_0-∞（纳克/ L）	捷运_{0 -Ť}(h)

咖啡酸	4466.83±310.88	0.33 ± 0.00	32.31 ± 17.62	20170.48±405.49	35243.49±9993.30	14.33±0.25
阿魏酸	2五2。五91 ± 25.68	0.33 ± 0.00	5.07±1.87	852.73±29.44	2142.091±195.59	4.21±0.11
绿原酸	7五五8五。07 ± 3061.79	0.33 ± 0.00	33.39±3.36	167278。14 ± 21752.90	236184.38 ± 75589.19	10.62±0.82
Cryptochlorogenic酸	67806.79 ± 3098.94	0.33 ± 0.00	21.85±9.25	169993.99±5978.78	242406.33 ± 49101.77	11.19±0.53
Neochlorogenic酸	148五2。03 ± 2370.78	0.33 ± 0.00	30.13±6.85	56034.70±4221.63	86956.297±8336.51	12。五3 ± 1.19
Isochlorogenic acidB	25184.90±1591.85	0.33 ± 0.00	9.68±1.36	193886.50±6583.48	200747.374±7208.02	10.91±1.04
Isochlorogenic酸C	12916。78 ± 3117.99	0.33 ± 0.00	20.36±5.22	110510.52±9500.31	119513.50±7705.49	14.32±1.56
芦丁	7431.05±446.28	0.33 ± 0.00	30.73 ± 14.04	100474.64±9127.45	211030.24±37905.16	18。91 ± 0.17


复合名称	C_马克斯(ng / mL)	Ť_马克斯(h)	Ť_1/2(h)	AUC_{0 -Ť}（纳克/ L）	AUC_0-∞（纳克/ L）	捷运_{0 -Ť}(h)

咖啡酸	4546.03±234.68	0.33 ± 0.00	78.91±26.02	24077.72±2058.94	66775.53±12172.05	12。74 ± 0.38
阿魏酸	380.29 ± 5.89	0.33 ± 0.00	3.31 ± 0.68	17五五。91 ± 224.17	22五3.06 ± 441.77	3.33±0.11
绿原酸	80426.52±6354.93	0.33 ± 0.00	32.87 ± 4.87	280872.79±10762.66	428350.92±41590.65	11。10 ± 0.16
Cryptochlorogenic酸	97347。78 ± 1148.09	0.33 ± 0.00	17.57±1.57	350674.18±16655.08	401169.15±21996.95	13。22 ± 0.39
Neochlorogenic酸	24733.36±3224.91	0.33 ± 0.00	14.72±3.88	9五663。97 ± 6559.48	116684。五74 ± 15910.07	10。87 ± 0.44
Isochlorogenic酸乙	五2292.60 ± 3007.78	0.33 ± 0.00	16.77±5.09	388737.23±24473.56	455375.91±14598.23	1五。19 ± 0.19
Isochlorogenic酸C	28183.80±3739.61	0.33 ± 0.00	22.14±9.73	186463。五4 ± 18492.14	231840.44 ± 35996.24	16。42 ± 0.84
芦丁	7035.33 ± 429.34	0.39±0.09	14.28±2.28	64616。五4 ± 4911.51	105151.44±9984.91	22.73±0.82

如表所示6，口服后的R-FF，所有化合物可以在血清中在5分钟内检测到，并且这种现象表明，所有的化合物可以迅速吸收到血液循环系统。It is interesting to note that, after oral administration, all compounds reach the maximum serum concentration in the same 20 min, indicating all compounds had a fast absorption rate. The R-FF group including chlorogenic acid, cryptochlorogenic acid, neochlorogenic acid, isochlorogenic acid B, isochlorogenic acid C, caffeic acid, and rutin pharmacokinetics parameters of theŤ1/2，MRT值分别为相对长，这表明它们具有缓慢消除速率。同时的阿魏酸药代动力学参数Ť1/2和MRT值很短，相对来说，他们有一个快速的消除率。在图3，咖啡酸，阿魏酸，neochlorogenic酸，和芦丁可以观察明显双峰现象两个R-FF和H-FF，其可能是由于重吸收，分布，和肠肝循环。

与R-FF表比较6）基团，蜂蜜处理FF对的药代动力学参数几乎没有影响Ť_马克斯结果表明，它并没有改变这些活性化合物的吸收速率。然而，所研究的8个化合物的其它药代动力学参数在R-FF组和H-FF组之间存在相当大的差异。在H-FF组中，Ť1/2（h）和MRT0-Ť(h)异绿原酸B、异绿原酸C和芦丁的值升高，说明加工可以减缓这些化合物的消去速率。我们还注意到ŤH-FF组绿原酸、隐绿原酸和新绿原酸的1/2值稍短于R-FF组，但MRT0 -Ť延长。这表明，绿原酸，酸cryptochlorogenic和neochlorogenic酸对大鼠的血清消除具有速度慢，这可能被处理能促进复杂的化学矩阵变换影响其代谢。有趣的是，所有化合物在，AUC的药代动力学参数（0-Ť)和AUC(0 -∞)值均增大。研究结果可能表明，蜂蜜处理FF减缓了这些化合物的去除率，提高了这些化合物的生物利用度。我们推测蜂蜜处理FF后润肺止咳可能与这些活性化合物有关。这一猜想与以前的报告一致[6]。标准化FF的处理，如认证，以控制其质量和提高疗效的重要。

总之，我们可以得出结论，这八个活性化合物可被迅速吸收并发挥体内药效。结果也证明了蜂蜜处理FF的改善R-FF的疗效的可行性。

4.结论

一个快速，准确的UHPLC-MS / MS方法首先建立和验证大鼠血清中8种分析物R-FF和H-FF的同时测定。而且，我们都知道，这是R-FF和H-FF之间的药代动力学对比研究的第一份报告。药代动力学参数分析表明蜂蜜处理FF可能会改变的化合物的药物动力学行为，这提供了原料和蜂蜜处理FF之间的药理学活性的差的理论基础。这些结果可能有助于澄清相关的基础和临床研究和蜂蜜处理机制。

数据可用性

用于支持该研究结果的数据包括在项目之内。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突。

作者的贡献

刘洋和海江为这项工作做出了同样的贡献。

致谢

这项工作是由中国国家自然科学基金资助下的数字81803690，81703684，81973604和支持;创新人才资助下，授权号2018RCD25中国黑龙江中医药大学;[研究生经费黑龙江大学ofChinese医学]下格兰特[数字2019YJSCX013][黑龙江省自然科学基金]下的格兰特[numberH2015037]710071 [中国医药DoctoralInnovation基金会的黑龙江大学] [数字2014BS05，2013BS04]。格兰特[数字2014RFQXJ149]在[哈尔滨科技局的应用技术研究和开发项目]。在格兰特数字LBH-Q16210和LBH-Q17161黑龙江省博士后科研发展基金;大学护理专业与下授权号UNPYSCT-2017215和2017219期黑龙江省创新人才培养青年学者;和国家自然科学基金资助下的数字匹配项目2017PT01和2018PT02;从中央财政专项资金支持地方高校发展。

补充材料

图形摘要简要概括了本次研究实验的框架，便于读者快速理解本次实验的思路、过程和结果。表S1总结了8种化合物和内标化合物的基质效应和萃取回收率的全部结果。表S2总结了稳定性的结果，包括短期稳定性、长期稳定性和冻融循环。（补充材料）

参考文献

D.籍，X.苏，Z.黄，Q.旺，和T.路，“A新型超高效液相色谱法 - 串联质谱法用于同时测定呫和甾体皂苷的方法原油和盐处理的知母川芎水提取物，”分离科学杂志第41卷，no。11, 2018年2310-2320页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
H.姜，L.羊，X.性等，“HPLC-PDA结合化学计量学为活性组分和原料的质量评估的定量和加工的水果苍耳L。”分子第23卷，no。2，P。243，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
“生醋与加工醋中六种成分的药代动力学之比较”达芙妮法采用UHPLC-MS/MS方法给药大鼠后的水提取物，"色谱杂志B卷。1079，第34-40，2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
吴元文，高元云，苏元芳，贾文华，段宏奇，肖宝国，“Leontopodium药用植物的植物化学与药理研究进展”，中国中药杂志第30卷，no。4，第245-248页，2007。视图:谷歌学术搜索
吴志中，张志中，徐晓霞，张明中，“柞蚕花蕾的化学成分和生物活性研究进展”，中国野生植物资源卷。34，没有。2，第33-36页，2015年。视图:谷歌学术搜索
Q.-Z。吴,D.-X。赵，Xiang j, Zhang m, c.f。张,X.-H。徐博士从四种具有止咳、祛痰和抗炎活性的咖啡因奎尼酸中分离出来Tussilago farfara”,生物制药第54卷，no。7, 2016年第1117-1124页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
H.问：赵和M. W.王“唐洪研究咳嗽的过程口服液”中成药第13卷，no。11，第4-5页，1991。视图:谷歌学术搜索
崔c.y.，“止嗽清果合剂已获批准，”中成药卷。14，没有。8，P。43，1992年。视图:谷歌学术搜索
侯a.j.，郭歆，曼文等，“银花化学成分及药理作用研究进展”，中医药资讯卷。36，没有。1，第107-112，2019。视图:谷歌学术搜索
杨，尚奎，杨，李，袁宏杰，《花蕾的化学成分》Tussilago farfara”,天然化合物化学卷。53，没有。3，第584-585，2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
X.-Y。程，张新欣，廖m.j，梁俊杰，刁新平，张丽泰，“用UPLC-Q-TOF-MS分析法氏花的化学成分”，中药第48卷，no。12, 2390-2400, 2017。视图:谷歌学术搜索
L.羊，H.姜，M. Yan等人，“UHPLC-MS / MS定量与化学计量学为原料，葡萄酒处理，盐处理的基数的不同批次的比较分析结合牛膝”,分子第23卷，no。4，第758页，2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

期刊化学分析方法

用UHPLC-MS/MS方法比较了法Farfarae原和蜜制法Farfarae口服液大鼠体内8种有效成分的药代动力学

摘要

1.介绍

2.实验

2.1。化学制品

2.2。色谱和质谱条件

2.3。提取的制备R-FF和H-FF

2.4。制备的标准

2.5。校准曲线的制备

2.6。血清样品的制备

2.7。方法验证

2.8。药代动力学研究

3.结果与讨论

3.1。UHPLC-MS / MS条件的优化

3.2。方法的验证

3.3。药代动力学研究

4.结论

数据可用性

的利益冲突

作者的贡献

致谢

补充材料

参考文献

版权

更多相关文章

相关文章