文摘
植物被铺排的利息,因为它们的生物活性。从植物中提取或分数在生物可降解聚合物纳米粒(NP)的应用研究提供了许多优势。提取的封装或分数NP决定建立测试剂量。高效液相色谱法是一种计算这个参数。基于高效液相色谱分析方法量化己烷的分数l . frutescens根据我的开发和验证。不同浓度的己烷分数从叶子(hf)(100 - 600年做好准备μg / mL)。线性、检测极限、量化的限制,内部和interday精度参数测定。hf被nanoprecipitation封装技术和高效液相色谱分析的定量方面。该方法线性和精确的量化hf组件。NP大小是190 nm大小均匀分布。通过验证方法,确定组件的封装(),(),()和()是74、86和97%,分别。开发了一个简单的、可重复的和可再生的方法提出的量化在NP蔬菜材料加载的组件,使用模型的己烷分数l . frutescens叶子。
1。介绍
自史前时代以来,药用植物被用作治疗许多人类疾病(1,2]。最近,研究文章证明了一些植物提取物抗氧化生物活性(3,4,抗炎4),抗菌5,6),和抗癌7)活动。使用有机溶剂萃取过程中获得积极的植物材料(8),作为承运人的化验提取应用程序。然而,对于在活的有机体内管理、有机溶剂会导致毒性的生物(9]。
不同的航空公司纳米复合材料薄膜(10],微粒[11),和纳米粒子12,13药物输送系统)是一个不错的选择。尤其是高分子纳米粒子(NP)很有前景,因为运营商目前持续释放和保护活动(14)和定位到特定的器官(15,16]。在NP制备过程中有机溶剂必须消除。在天然产物研究封装了有益的影响。Arrabidaea奇卡是对于有治疗功效的植物在民间医学对于伤口愈合,炎症和胃肠绞痛。Servat-Medina等人研究了antiulcerogenic活动。答:奇卡hydroalcoholic提取成立于三聚磷酸chitosan-sodium NP。一个在体外研究人类皮肤成纤维细胞的生物相容性。在活的有机体内研究证明,答:奇卡hydroalcoholic extract-loaded NP增强其antiulcerogenic活动(17]。Kwon等也获得了类似的行为。他们调查了不同的水提物的活动积雪草的明胶NP加载。封装水提物提出了降低人类皮肤成纤维细胞的毒性。Extract-loaded NP显示更强的抑制酶活性影响真皮组织,通过小鼠皮肤通量,保留。这些结果显示水提物的潜在用途c . asiatica加载NP在化妆品行业18]。
以及药物封装、提取封装包括NP表征,加载(%),封装效率(% EE)。除此之外,被两个主要参数确定NP表征(19),在在体外和在活的有机体内研究中,重要的是要建立测试剂量治疗。紫外可见分光光度法用于extract-loaded NP量化(17,20.]。然而,低浓度的量化是有限的可怜的敏感性。高效液相色谱(HPLC)方法用于分离提取的标记化合物或为他们的后续的量化分数(21,22]。Sangthong Weerapreeyakul识别两个化合物(sulforaphene和萝卜硫素)萝卜l . var。caudatusAlef提取物。量化两个分子是通过验证的高效液相色谱法(23]。因此,开发和验证一种方法基于已知分子分离植物及其量化NP是有前途的。
然而,有植物较少研究Leucophyllum frutescens毛地黄的家庭,通常被称为“cenizo。“这种植物,这是布什新莱昂州的卓越,同时,在德克萨斯州,它被称为“布什晴雨表”由于其惊人的开花根据环境中的湿度和降水雨(24]。l . frutescens受到关注的反结核分枝杆菌活动。甲醇提取物的叶子对耐多药(MDR)提出了生物活性结核分枝杆菌压力(25己烷分数的)和两个新的活性化合物l . frutescens描述了对这些细菌(26,27]。我们提出了己烷部分加载NP为有前途的代理对耐多药(MDR)应变和NP管理系统包括知道分数封装。在这种背景下,本研究的目的是提出一个由高效液相色谱分析方法的开发和验证使用内部标记化合物的己烷的量化分数l . frutescens树叶在NP (hf)加载。
2。材料和方法
2.1。植物材料和试剂
l . frutescens在蒙特雷收集;n . l .甲醇(美国Tedia)甲酸(纯度:90%,微孔、美国),和乙腈HPLC-grade(美国j.t贝克)。纯化水从Milli-Q净水系统(美国微孔)。Poly-L-lactide酸(PLA) (PURASORB PURAC BV, Gorinchem,假日)NP-formed聚合物和聚乙烯醇(PVAL、科莱恩、墨西哥)作为稳定剂。其他溶剂使用的均为分析纯。
2.2。色谱分析
高效液相色谱法测定了用光电二极管阵列检测器(HPLC-DAD)(美国瓦里安9065年、9012年,ProStar 410)。一个Synergi™4μFusion-RP 80(150毫米2.0毫米4μ米列是使用0.2毫升/分钟的流量和维持在30°C。两种方法进行;方法1,流动相甲酸0.1% v / v (A)和甲醇(B)。梯度条件如下:逐步改变从45:55 (B)到100 (B)是在0-20分钟完成,然后100 (B)是维持20 - 35分钟。方法2,流动相是一个权力平等主义的洗脱45:55 (B)在40分钟。检测波长被设定为210、215、220和229海里。在210海里发现了山峰,基于最大波长峰值区域。
2.3。校准曲线的准备
的叶子l . frutescens(50克)在室温下干燥,粉碎,并提取与甲醇(350毫升)声波降解法(超声波清洗器,VWR交响乐,美国)。甲醇提取是蒸发减压(Laborota 4003控制,Heidolph)。与己烷液-液进行了分区。己烷分数从叶子(hf)蒸发减少压力。原液的制备,半固体的hf是称重和溶解在甲醇。然后,这个解决方案是透过一个0.45μm膜滤器(美国微孔)。浓度范围的解决方案准备工作从100年到600年μ克/毫升一式三份和过滤HPLC-DAD分析获取校准曲线。
2.4。方法验证
线性的方法验证,检测极限(LOD),量化的限制(定量限),和内部,interday精度根据国际协调会议(28]。建立线性、五个浓度水平的准备范围从100年到600年μ克/毫升一式三份,LOD和定量限的计算根据校准曲线 在哪里响应的标准偏差和吗校准曲线的斜率。一条线的剩余标准差回归的标准差拦截行回归可能用作标准偏差。最后,内部和interday精度测定分析三个浓度六个复制每一个,在一天和三个不同的日子。
一旦建立了色谱测定方法和验证,NP准备根据nanoprecipitation技术的过程由Fessi et al。29日]。简单,有机相制备溶解30毫克的解放军和3毫克的己烷分数3毫升的混合有机溶剂(丙酮:甲醇)。有机溶液添加到10毫升的水相含有PVAL (1%, w / w)和搅拌磁。有机溶剂在减压蒸发。NP表征进行了确定大小和粒径分布指数(PDI)动态光散射(DLS) (Zetasizer纳米ZS90,莫尔文仪器,英国)。NP的形态学观察范使用广达250 FEG显微镜“中心Technologique des微观结构”(CTμ克劳德·伯纳德•里昂大学1、法国)。扫描电镜样品的制备,一滴稀释水中悬浮体沉积在平坦的金属支架,在室温下干燥。样品终于与铂涂层阴极溅射真空下。样本扫描电镜下观察到加速10千伏的电压。加载封装(%)和封装效率(% EE)、NP分散离心机在25000 rpm(美国贝克曼库尔特爱兰歌娜64 r)和获得球冻干(美国LABCONCO冷冻干燥系统)。冻干NP在acetonitrile-methanol溶解。解决方案是由高效液相色谱分析量化参数:封装的山峰的%和% EE,根据以下:
3所示。结果与讨论
3.1。高效液相色谱的色谱测定方法的发展
在药用植物,有数百名未知组件。变化在同一草药材料(21)取决于采集站和植物的起源,以及其他因素(30.]。出于这个原因,确定色谱配置文件是一个有用的工具的植物提取物的质量控制样品(31日- - - - - -34]。色谱的高效液相色谱分析是对知识进行概要的植物样本21]。
l . frutescens小植物研究,展示了对结核病的使用是有前途的。通过这种方式,获得色谱配置文件使用的己烷分数l . frutescens叶子增加了关于植物的知识。方法1是获得色谱概要hf。图1(一)显示16峰值浓度的400μ克/毫升的分数和主要山峰有()- ()。方法2是单独的这四个主要开发高峰和量化的山峰(图进行验证1 (b))。在这两个色谱图每个峰对应于一个组件的一部分35]。方法2验证量化己烷分数中的组件加载NP。
(一)
(b)
(c)
增加关于植物的知识,寻找一些化合物中发现l . frutescens家庭叫毛地黄是执行;三个化合物槲皮素(36)、木樨草素和芹菜甙元(37),选择和高效液相色谱法分析了2。进行高效液相色谱分析和保留时间的影响,得到了每一个(图1 (c))。相比之下,这四个组件的保留时间在hf观察到相同的方法,peak-component ()(15.48分钟)将芹黄素(16.07分钟)。有必要通过光谱方法分析hf分配这种化合物的存在。
3.2。验证分析方法:线性、检测极限,量化的限制,内部,Interday精度
发达HPLC-DAD方法已经证明是简单的,敏感的,具体的,适合同时量化(38]。验证了知道的线性度和精度的色谱测定方法(方法2)量化的peaks-components hf NP加载。建立线性,至少5浓度是我推荐的28]。校准曲线的半固体在acetonitrile-methanol hf浓度范围从100年到600年μg / mL。曲线下的面积在每个浓度水平的每个peak-component分析获得图2。因此,回归方程,相关系数、LOD和定量限peak-component建立了(表1)。的验收标准给出了线性相关系数(28,39]。内容或活性成分的量化系数必须大于或等于0.99 [39]。
如表所示2,每个peak-component校准曲线的相关系数都大于0.99。LOD和peaks-components(定量限),(),()和()确定,53.73和162.83,60.00和181.80,44.27和134.15,101.47和307.49μ分别g / mL。Da Silva等人同时量化槲皮素和rosmarinic鼠尾草和咸酸(鼠尾草sp.和Satureja蒙大拿、职责)从校准曲线与标准化合物。LOD和定量限被发现是20和80年μ分别g / mL rosmarinic酸。槲皮素,30 - 90μg / mL,分别40]。在我们的研究中,高值已经确定由于LOD和定量限已建立价值观和对总hf的浓度。
内部,interday色谱测定方法测定的精度分析三个浓度六个复制每一个,在一天之内,三个不同的日子;为了获得他们的相对标准偏差,结果这些参数如表所示1。内部interday变化分别约9.34%和10.51%,分别。应等人使用当归,一个著名的传统中草药。多种化合物已经被分离出来并确认工厂。同时他们验证方法量化6个活性化合物存在于答:中国(阿魏酸、senkyunolide我senkyunolide H,松柏ferulate, Z / E-ligustilide,和Z / E-butylidenephthalide)从标准的混合物。量化方法的精度盘中相对标准偏差低于2.43%,interday低于5.00% (41]。
3.3。准备和己烷部分的描述l . frutescens在聚合物纳米粒子
Fessi等人是用于描述Nanoprecipitation技术NP准备。获得NP配方的大小与均匀分布(图189.70±3.80海里3)。扫描电镜用于可视化的形态。粒子进行评估的基础上,形状和interparticulate桥接。在扫描电镜观察下,亚微米粒子产生球面形状,显示一个同质粒度分布(图4)。之后,冻干hf加载NP的颗粒溶解在甲醇乙腈/高效液相色谱和解决方案进行了分析。曲线下的面积从每个peak-component获得的回归方程(表取代1),为了获得四个峰值在NP的浓度。因此,方程(2)被用来确定%和%每个peak-component EE(表2)。的封装peaks-components NP是44岁,74年,86年,97%的峰值(),(),()和(),分别。根据高效液相色谱峰的分离方法,第一个峰是疏水性越少,在NP代表最低的封装。最疏水峰在NP代表最高的封装。有研究报道,nanoprecipitation封装的方法是非常有利的疏水性化合物(42]。Dalpiaz等人提到,而PLGA与解放军,解放军亲水性较低(43]。在这项研究中,NP的方法制备聚合物以及NP-formed允许更高的封装的疏水性peaks-components百分比。
4所示。结论
l . frutescens是植物与潜在的使用。色谱概要文件的一部分特征提取或从植物获得的分数。在这项研究中,我们开发了一个色谱方法获得的色谱己烷的分数l . frutescens叶子。色谱法验证基于peaks-components在hf的存在,为了量化NP。hf加载NP暂停约190海里。NP-formed聚合物和nanoprecipitation方法有利于封装的疏水性成分l . frutescens提取。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关这篇文章的出版。
确认
作者欣然承认金融支持PRODEP-SEP网络、墨西哥、DSA / 103.5 / 15/14156, AIRD,法国(NANOBIOSA jeai - 2011), PN-CONACYT,墨西哥,2014 - 248560,和PAICYT-UANL,墨西哥。克劳迪娅Janeth Martinez-Rivas感谢CONACyT奖学金,墨西哥,没有。280112年。