文摘

本文描述了物理化学研究的装饰植物,黄雏菊属triloba(菊科)。为此,精油、输液,煎煮,hydroalcoholic浸渍不同天线部分获得黄雏菊属triloba进行了分析。用气相色谱-质谱分析鉴定的主要植物化学的成分被发现是α-pinene(干叶(46.0%)和花(40.1%)和β-phellandrene(精油干花序(26.09%))。Folin-Ciocalteu和槲皮素化验显示不同的总酚和类黄酮含量值的花瓣,树叶和种子的函数所使用的溶剂和提取过程。hydroalcoholic浸渍的花瓣被发现的最大酚和类黄酮含量(130.29±5.58毫克没食子酸当量/ g干燥蔬菜材料和30.72±槲皮素1.35毫克当量/ g干燥蔬菜材料、职责),也展现了较低的EC50值(0.32% (v / v)),通过应用DPPH⋅化验。提取方法应用比较,发现浸渍对酚类化合物的最有效,最有可能由于溶剂乙醇(70%)。water-alcohol混合物的使用导致了提高酚类化合物的萃取率(包括那些高分子量)比通过使用水作为萃取溶剂,在浸剂和煎。

1。介绍

几个世纪以来,草本植物被用作药物的来源。世界卫生组织(世卫组织)报告说,世界人口采取民间医药的初级卫生保健的需求(1]。在这种背景下,自然产品,如植物提取物、纯化合物或标准化的提取,为新药的发现(提供无限的机会2]。同时,蔬菜材料从古代用作调味品,饮料,香水和化妆品。这是因为植物材料合成生物活性化合物具有独特的性质导致从他们所谓的二次代谢产物代谢(3]。之间的四个主要类别的生物活性次生代谢产物(萜烯酚醛树脂,苷、生物碱)、酚类化合物(来自次生代谢的芳香族氨基酸)抗氧化,抗癌,抗诱变因素的活动,对人类健康特别重要的4]。他们也被认为是减少心血管疾病风险5]。流行病学研究证明了植物多酚的能力提供保护与发展的癌症,心血管疾病、糖尿病、骨质疏松症和神经退行性疾病(6]。多酚的酚组接受一个电子形成相对稳定的苯氧基自由基,破坏链氧化反应在细胞组件(7]。酚醛树脂代表简单酚类等多种化合物,酚酸,香豆素类、黄酮类化合物、芪,hydrolysable浓缩单宁,木酚素和木质素8]。应该注意的是,类黄酮是最重要的一个天然酚类。的另一个重要类化合物发生在植物材料是由萜类化合物,在生命系统的发展起着关键作用。他们中的大多数是挥发性物质,通常出现在精油萃取方法获得的。

不仅常年也培养研究植物的药理特性。培养植物,装饰种之间黄雏菊属存在于特定的或公共花园。原产于北美,黄雏菊属是一个家庭的开花植物菊科,发现在25个不同的多年生植物,每年或两年一次的物种。这种植物是最常见的品种黄雏菊属fulgida,黄雏菊属hirta,黄雏菊属laciniata,或黄雏菊属triloba。最后一个被报道在奥地利在1970年代,在罗马尼亚,遇到第一次Maramures和Neamt县(9]。

一些研究的生化性质黄雏菊属品种报告(10]。因此,从三个草本叶精油菊科家庭的成员,黄雏菊属fulgida,黄雏菊属hirta,Symphyotrichum novae-angliaehydrodistillation获得的,并通过气相色谱分析-质谱法分析。精油的主要成分黄雏菊属fulgida被发现是倍半萜烯碳氢化合物(germacrene D(30.1%)和δ-cadinene (17.8%);类似的成分被报道在叶油黄雏菊属hirta,δ-cadinene germacrene D为23.6%和16.2%。这些提取的叶油被发现是不活跃的抗菌活性[11]。另一项研究报告的化学成分、矿物质和抗氧化的效果黄雏菊属laciniata(12]。一般的组成部分黄雏菊属laciniata粗蛋白。矿物钾的含量最高,其次是钙和镁,暗示黄雏菊属laciniata是碱性物质。的内容总酚和类黄酮化合物和DPPH⋅自由基清除活性黄雏菊属laciniata也有相关报道。的化学简介黄雏菊属hirta建立了薄层色谱法(TLC)技术,通过对多酚类物质的总含量13]。作为对治疗行为属的物种黄雏菊属,他们是相对多样。这些植物的活性化合物或提取物具有抗炎效果(黄雏菊属hirta)[14,15),抗细菌(黄雏菊属subtomentosa)[16),antileukemic (黄雏菊属mollis)[17),止咳药(黄雏菊属fulgida)[18),抗氧化,抗菌,抗病毒,抗真菌,和细胞毒性活动(黄雏菊属laciniata)[19]。

我们所知,没有研究报告文学的化学成分和抗氧化活性黄雏菊属triloba。在这篇文章中,不同的天线部分黄雏菊属triloba被用来获得精油、输液、煎、和hydroalcoholic浸渍。固体植物材料(干叶和花序),干花序的精油,和获得水或hydroalcoholic提取物干花瓣,树叶和种子被色谱特征或/和光谱光度测量的方法。

2。实验

2.1。试剂

使用的所有化学药品均为分析纯。Folin-Ciocalteu试剂(硫酸锂12.2%,钨酸二钠二水合物2%,盐酸9.5%,磷酸6.9%,溴0.1%,水67%,钼酸二钠二水合物2%,和硫代硫酸钠0.3%);槲皮素,≥95% (2 - (3,4-dihydroxyphenyl) 3, 5, 7-trihydroxy-4H-chromen-4-one);没食子酸,> 99% (3、4、5-trihydroxybenzoic酸);和DPPH⋅(2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl)从Sigma-Aldrich购买(Steinheim,德国)。氯化铝无水碳酸钠,乙酸钾从默克公司(德国)购买。乙醇96% p.a.获得化学公司(罗马尼亚)。

2.2。植物材料的收集

黄雏菊属triloba收集2016年8月从特定花园放置在一个邻接的农村布加勒斯特,罗马尼亚(Branesti公社Islaz村,Ilfov县,纬度:44.46117°;经度:26.38724°;海拔70米;布加勒斯特距离6.92公里)。植物在布加勒斯特植物园,验证凭证标本的沉积(406406/30.03.2017)。集合后,植物是其主要分为天线组件:花序,花瓣、树叶和种子用清水彻底去除灰尘。然后,蔬菜在室温下干燥的材料被让到一边。植物的干组件被切成小块,放在纸袋,直到进一步的实验。

2.3。植物提取物的制备

输液、煎煮和浸渍被应用于三天线部分的植物,即花瓣,种子和叶子。输液和汤之前,重数量的干燥蔬菜材料(1 g)浸泡在冷再蒸馏的水的体积小,为10分钟。这个初步的过程使植物细胞扩张,从而释放活性成分在准备浸泡或煎煮。输液是准备通过增加50毫升的再蒸馏的开水湿植物材料。混合物覆盖着手表玻璃,站了15分钟。汤是由沸腾湿植物50毫升的水10分钟。在那之后,15分钟的混合物了一边。hydroalcoholic提取制备植物材料的浸渍0.5 g 50毫升的70%乙醇为7天,在黑暗的环境温度。然后,每个植物提取物通过滤纸过滤。滤液的定量转移到100毫升容量瓶,带到目标再蒸馏的水(在输液和煎)和70%乙醇(浸渍),得到提取物稀释。 Parts of the obtained filtrate extracts were stored at −45°C for further analyses. The essential oil was isolated from dried inflorescences, by hydrodistillation in a Clevenger-type apparatus, for 4 h, using a standard procedure [20.]。精油是干燥无水钠₂所以₄并存储在+ 4°C。精油是从植物的数量是用百分比表示(v / w),平均的值从五痛苦。

2.4。分析纯试剂的制备方案

500μg /毫升原液的没食子酸(GA)是由溶解0.0125 g GA在蒸馏水中,25毫升容量瓶中。工作50μg GA /毫升溶液被稀释了的股票的解决方案。股票槲皮素1毫克/毫升(Q)解决方案是由溶解0.0250 g问在96%乙醇和25毫升容量瓶中。工作的解决方案得到100μg Q /毫升的股票的解决方案,用96%的乙醇稀释。0.05% ethanolic解决DPPH⋅准备之前使用。

2.5。gc - ms分析

热的GC - ms分析进行了电子系统(集中GC色谱加上北极星问离子阱质量检测器)。一个DB-5MS毛细管柱(25 m×0.25毫米;0.25μm膜厚度)是使用氦载气(1毫升/分钟)。GC烤箱是60°C程序的初始温度为3分钟。温度提高到200°C的速度10°C /分钟,2分钟保持不变,然后增加到240°C的速度12°C /分钟和240°C举行2分钟(21]。注入器和检测器温度为250°C。电子碰撞电离模式是70 eV,并检测了在35 - 300阿姆河(全扫描模式)。组件的识别进行了使用Xcalibur®软件,NIST质谱库,和女士文献数据。保留指数(RIs)化合物的保留时间相对确定n烷烃为GC标准溶液(C8-C20)。单个组件的相对百分比计算基于GC峰地区不使用修正因素。gc - ms分析,hydrodistilled精油在己烷稀释(1:100)和1µL注入。Triplus HS Autosampler(热电子)是用于顶部空间分析、数量的1 g的花序或离开被引入样本瓶(20毫升大小)和硅橡胶密封隔膜和铝帽。包含植物的顶空瓶材料加热到80°C 10分钟,和500年μL顶部空间气体的注入到列。以同样的方式执行的gc - ms分析精油。

2.6。总酚含量测定(TPC)

吸光度测量都是在紫外可见光谱仪(Jasco Jasco v - 530年,日本),配备石英细胞(光路长度1厘米)。

的光谱光度测量的Folin- - - - - -Ciocalteu (fc)试验22)是用来确定总多酚的含量。整除(0.1 - -0.5毫升)的工作没食子酸溶液(50μg /毫升)投入的一系列5 mL-calibrated烧瓶内。然后,2.5毫升的10% Folin-Ciocalteu试剂是补充道。5分钟的混合物在黑暗中孵化。然后,2毫升7.8%碳酸钠溶液添加到每个样本,和总卷被带到5毫升蒸馏水。均质化后,混合物在黑暗中孵化前30分钟测量吸光度与空白溶液760海里(获得没有添加五倍子酸)。一个标准的校准曲线的浓度范围是1 - 5μg /毫升没食子酸。提取物中总酚含量的测定,每个稀释的整除提取是用来代替五倍子酸、和fc过程应用。总酚含量的没食子酸当量计算每克干蔬菜材料(mg GAE / g),通过应用校准曲线的回归方程一个= 0.0968C_遗传算法+ 0.0197R²= 0.9998,一个吸光度和C_遗传算法是没食子酸溶液的浓度(μg /毫升)。每个样本的光谱光度测量的测量进行了一式三份。

2.7。总类黄酮含量测定(交通)

类黄酮含量是决定spectrophotometrically,基地的基础上(3)类黄酮配合物的形成。槲皮素作为标准的类黄酮,和引用应用程序进行小修改23]。整除(0.1 - -0.5毫升)工作槲皮素的解决方案(100μg /毫升)或稀释样本提取和乙醇(2毫升酒精的混合物)介绍了一系列5 mL-calibrated烧瓶内。随后,氯化铝0.1毫升的10%,乙酸钾0.1毫升的1米的解决方案,和水被添加到每个样本总量的5毫升。混合均质,在室温下为30分钟。然后,对试剂空白吸光度测量在427海里(对于每一个样品,一个空白的混合物准备,没有添加AlCl₃)。植物材料的总类黄酮含量计算槲皮素的等价物每克干蔬菜材料(mg QE / g),通过应用校准曲线的回归方程一个= 0.0652C_问+ 0.0804R²= 0.9992,C_问槲皮素的浓度的解决方案(μg /毫升)。每个样本的光谱光度测量的测量进行了一式三份。

2.8。DPPH⋅自由基清除实验

的DPPH⋅获得草药提取物的自由基清除活性决定按照什等人轻微的修改(24]。整除的滤液提取(0.01 - -0.3毫升)与乙醇混合1.9毫升。然后,0.1毫升的0.05% ethanolic解决DPPH⋅被添加到每个样本的总体积2毫升。包含0.1毫升的0.05%的标准溶液DPPH⋅和1.9毫升乙醇也准备好了。混合均质,保持30分钟在黑暗中,在室温下。然后,吸光度测量是在517 nm试剂空白(对于每一个样品,一个空白的混合物准备不增加DPPH⋅)。的DPPH⋅解决方案是刚做好的,保存在冰箱里,直到使用。EC50值通过策划517海里的吸光度与浓度的提取方案。(%,v / v)浓度的样品溶液减少最初的吸光度DPPH代表EC50⋅50%。

3所示。结果与讨论

3.1。精油产量

平均含量的精油黄雏菊属triloba花序为0.300% (mL精油/ 100 g植物)。精油是淡黄色与特定的气味。

3.2。gc - ms分析结果

数量的gc - ms分析表明,hydrodistilled精油的挥发组分花序不同于干燥的植物原料(叶和花序)进行顶空萃取。表1显示了挥发性化合物的相对含量从树叶、花序,花序的精油黄雏菊属triloba在罗马尼亚,表示为总面积的百分比。因此,使用顶部空间,22个化合物中确定叶子占总数的99.0%确定组件,与α-pinene(46.0%)、β-phellandrene(24.6%)、桧烯(9.6%),和germacrene D(6.1%)为主要组件。的花朵黄雏菊属triloba组件包含33(98.6%),主要成分相同,但在不同的百分比:α-pinene (40.1%)、germacrene D(24.0%)、β-phellandrene(13.9%),和桧烯(9.7%)。总数确定组件的花序的精油是41岁,占总额的95.9%的地区。相同的组件是主要的精油的挥发性化合物,与β-phellandrene (26.09%)、germacrene D(21.6%)、α-pinene(16.3%),和桧烯(12.0%)。

gc - ms分析的基础上,我们可以得出这样的结论:黄雏菊属triloba是一个重要的α-pinene来源。这种碳氢化合物单萜具有抗焦虑药和镇静属性(25]。它也作为支气管扩张剂。据报道,这个萜烯的财产减少癌变肿瘤的大小(26]。

3.3。总酚和类黄酮含量

报道的主要部分的研究得出结论,多酚(类黄酮多酚类化合物的最大的家庭)的主要化合物是负责测试植物提取物的抗氧化活性(27]。表2介绍了TPC和薄膜电路获得提取物(输液、煎和hydroalcoholic浸渍不同的天线部分黄雏菊属triloba)。

最大TPC和薄膜电路值是通过浸渍的蔬菜材料煎煮和注入紧随其后。所有提取程序显示最大值TPC和交通的花瓣。比较注入和煎煮汤比注入更高效的多酚提取。这种行为可以解释如下。输液和汤都是热过程适合提取热稳定化合物导致的总酚含量差异煎和输液。更高浓度的总酚含量比注入煎,通过加热水生植物混合物在很长一段时间内(15分钟),可以解释如下:分解细胞成分以及水解单宁。复杂酚类单宁的降解以及酶或非酶的氧化过程会导致补充内容煎的酚类化合物。同时,在煎煮,发生美拉德反应,产生新酚类化合物(28]。

也比较的三个应用程序提取(输液、煎煮和浸渍),浸渍似乎更有效率比注入和煎煮提取多酚(70%乙醇浸渍被选中,成为最常用的溶剂从植物中提取酚类化合物)。这种行为可能造成的可能形成复杂的酚类化合物,具有多个酚组或在水分子的高度高于酚醛。似乎这些化合物溶于hydroalcoholic提取。更多nonphenol化合物的内容,如萜烯、有机酸、糖,可溶性蛋白质,在注入比浸渍可能干涉TPC化验。也可能造成的可能的复杂形成一些酚类化合物溶于包裹的浸渍提取混合物。这些酚类化合物可能具有多个酚组或者可能的酚醛树脂的分子量高于水提取物(23]。报道,water-alcohol混合物提取过程中使用会导致增加肿胀的植物材料,保证植物矩阵和溶剂之间的亲密接触,因此提高萃取率(29日]。此外,植物材料含有多种酚类化合物有不同数量的酚醛团体与不同的反应向Folin-Ciocalteu试剂(30.]。

黄酮类化合物,从文献中报道的数据,总类黄酮含量测定的主要分析一般基于吸光度的Al (III)类黄酮化合物31日- - - - - -34]。两者的区别主要是反应介质应用光谱光度测量的方法:(a)在NaNO的存在₂在碱性介质和(b)在CH的存在₃库克或CH₃COONH₄(没有亚硝酸盐)。在我们的工作中,使用了分光光度法测定没有亚硝酸盐。这最后一种方法只能用于确定黄酮醇的含量(槲皮素、芦丁、山柰酚、和莫林)和木樨草素(从黄酮家庭)[35]。TPC之间的相关性和交通,它被发现是重要的注入和浸渍(表3)。文献资料的基础上,这样的相关性表明,类黄酮代表的植物提取物中酚类的一个重要组成部分23]。结果在表2表明,注入和浸渍从花瓣和叶子似乎含有黄酮类化合物的重要东西。

3.4。自由基清除活性

如前所述,多酚和黄酮类化合物被认为具有相当的抗氧化特性主要是由于羟基的重要内容。这些物质能够作为激进的食腐动物,因为酚羟基是好H-donating抗氧化剂,清除活性氧和停止生产的新激进分子。稳定的DPPH⋅激进常被用来评估许多生物活性的自由基清除活性化合物。DPPH⋅属性接受一个电子从一种抗氧化剂。这种氧化还原反应会导致减少的紫罗兰颜色DPPH⋅激进。总反应antioxidant-DPPH⋅导致一个黄色的解决方案。一个低EC50值代表一个高清除活动。观察表4,从花瓣中提取得到的EC50值最低,最低的浸渍提取。关于EC50和TPC值之间的关系,一般来说,消极的线性相关性在文献报道。但是,并不总是有这两个分析参数之间的线性相关性。在我们的研究中,负线性关系获得的注资和浸渍提取(表5)。Cheynier等人认为,除了彻底清除,抗氧化活动也可以归因于其他不同的机制,如绑定的过渡金属离子催化剂或分解过氧化物(36]。同时,自由基清除活性多酚取决于他们的分子结构,分别可用性的酚醛氢和稳定的可能性产生的HO和激进分子通过氢捐赠(37]。

4所示。结论

获得的结果黄雏菊属triloba提取显示显著的抗氧化活性,尤其是浸渍的花瓣(结果运用Folin-Ciocalteu、总类黄酮和DPPH⋅化验)。同时,叶、花序,花序的精油黄雏菊属triloba被发现是富含单萜烃(尤其是α-pinene叶和花序和β-phellandrene germacrene D,在花序的植物精油)。进一步的研究将完成的特性黄雏菊属triloba。他们将集中在完成分析溶液的组成和hydroalcoholic黄雏菊属triloba提取和生化特征。

的利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突。