Stability-Indicating测定高效液相色谱法测定药品等物质的形式

文摘

验证stability-indicating方法测定药品等物质形式的辅酶Q10-like化合物。试验是通过使用一个反相液相色谱分析C18柱和检测器480海里。优化流动相组成权力平等主义的流速为1.0毫升/分钟和甲醇为3分钟。所表明的线性分析的范围3.0 - 8.0毫克/毫升的相关系数。检测和量化的极限是0.03和0.05毫克/毫升,分别。盘中和interday精度小于1.0%。精度方法的范围从98.6到101.5%,RSD < 0.6%。特异性试验没有干扰的平板电脑组件和分解产物由碱性、酸性、氧化、阳光和高温条件。这种方法允许准确、可靠的测定等物质在制药研究中药物稳定性试验。

1。介绍

等(2 - (10-hydroxydecyl) 5、6-dimethoxy-3-methyl-cyclohexa-2 5-diene-1, 4-dione)(图1)是一个综合模拟泛醌(辅酶Q10),一个已知的生理线粒体膜的化合物。等物质的出现作为辅酶Q10-like化合物表现出类似的抗氧化剂和电子链传输属性参与ATP的生成(1,2]。等物质的报道来提高能量代谢不足,缓解神经症状(3,4]。最初开发用于治疗认知障碍和老年痴呆症,等物质是作为一个孤儿药通过美国食品药物管理局(FDA)和欧洲机构弗里德希氏共济失调的治疗,利伯氏世袭视神经病变或杜氏肌萎缩症(5- - - - - -7]。报道方法测定辅酶q可用在生物体液的反相高效液相色谱法一步提取过程中,紫外检测,运行时间约20分钟(8,9]。我们报告第一反相高效液相色谱法stability-indicating方法评估等制药形式使用可见光检测,直接喷射,3分钟的运行时间。根据国际协调会议(ICH)稳定准则,该方法验证了强制氧化,碱性和酸性退化研究[10]。

2。材料和方法

2.1。试剂和化学物质

等物质的制药质量等级粉是由Inresa (Bartenheim,法国,很多PR140151B)。药品剂量平板电脑买来Intsel Chimos (Mnesis、圣克劳德、法国)。HPLC-grade甲醇是由默克公司(Lichrosolv,达姆施塔特,德国)。

2.2。设备

Dionex最终3000系统(热科学、Villebon苏尔伊薇特、法国)是用于检测。高效液相色谱系统包含一个集成的溶剂和脱气器阶跃恢复二极管- 3200,分析泵高压天然气- 3200 sd一个恒温器autosampler wps - 3000 tsl——一个恒温器柱室- 3000 sd移行细胞癌,和随钻测量二极管阵列检测器- 3000。数据采集进行了使用内联Chromeleon软件(v6.80 SP2)(热科学)。

2.3。色谱条件

洗脱液监测在480海里。色谱分离达到25°C使用Nova-Pak C18柱(水、Guyancourt、法国)4μ米粒子大小、内部直径4.6毫米和150毫米的长度。100%甲醇注入的流动相流速为1.0毫升/分钟。注入样品体积被设定为25μl .方法运行时间是3分钟,所有的实验都是一式三份。

2.4。股票的解决方案的准备

等股票的解决方案(100毫克/毫升)是由精确称重10 g和100毫升容量瓶转移。成交量由马克的甲醇。股票的解决方案是存储在2 - 8°C 5天。

2.5。样品制备

两个等45毫克平板电脑被碎玻璃砂浆中的细粉和5毫升的甲醇添加。暂停被转移到一个10毫升容量瓶和由10毫升甲醇达到最终等9毫克/毫升的浓度。从平板电脑的恢复等%。

2.6。制备校准标准和质量控制样品

校准标准为3.0,4.0,5.0,6.0,7.0和8.0毫克/毫升使用股票刚做好的解决方案。质量控制解决方案为3.5,4.5和6.5毫克/毫升无准备地就做好了准备。

2.7。分析方法验证

进行了验证研究根据我的指导方针(10]。特异性的方法验证、线性检测极限(LOD),量化的限制(定量限)、精度、准确性、鲁棒性,stability-indicating能力。

特异性是由分析色谱的平板电脑相比,那些获得等物质的标准溶液旨在确认没有成分干扰药物的定量。

线性度是由最小二乘线性回归常规使用化合物峰面积和浓度的标准解决方案准备工作在6个浓度水平(3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,和8.0毫克/毫升)。六个复制的每个浓度独立准备一式三份注入色谱仪。该方法评估相关系数的测定和截距值根据我的指导方针。

LOD和校准曲线测定方法定量限。解等物质的准备在线性范围和注射一式三份。平均峰面积对浓度的三个分析策划。LOD和定量限表示为3.3×Syx /和10.0×Syx /分别在Syx由于回归和剩余方差是均值线性回归曲线的斜率。

精度在盘中和interday精度评估。盘中精度取决于测量质量控制样品的3.5,4.5,和6.5毫克/毫升等物质,在同一天注射六次。中间(interday)精度估计通过注射质量控制样品准备在同一浓度不同的三天由不同的运营商。结果被报道的相对标准偏差(RSD)。

精度研究利用各级标准添加法:20、40岁,80年,100年,120%。等物质的平均恢复目标浓度的计算(4毫克/毫升)和接受了%。

确定健壮性、实验性的高效液相色谱条件故意修改检查方法的重现性。鲁棒性的评估是基于RSD值获得通过改变分析设置等权力平等主义的流量(1.1到1.3毫升/分钟),波长检测(481到483海里),温度分析柱(23到30°C),和流动相的组成(1和2%去离子水)。

2.8。强制降解研究

强制降解研究提供一些信息进行药物稳定性和验证等物质的特异性的量化分析。等物质的标准溶液是碱性降解加速,酸,氧化和直接接触阳光的条件。

执行碱性水解2毫升等股票的解决方案(100毫克/毫升)是在800年4毫升管与混合μL 1 N氢氧化钠(氢氧化钠)1 h和在黑暗中保持在50°C。反应时间后,这个解决方案是在室温下冷却和中和1 N盐酸(HCl)。解决方案是完成与甲醇达到目标前5毫克/毫升的浓度注入高效液相色谱系统。同样的程序被用于样品制备的盐酸酸水解使用1 N和1 N氢氧化钠中和在高效液相色谱法测定。

研究氧化降解2毫升等股票的解决方案是混合在一个4毫升管1毫升3%过氧化氢为48 h在黑暗中50°C。这个解决方案完成了甲醇达到目标前5毫克/毫升的浓度注入高效液相色谱系统。

光解的退化,2毫升等股票的解决方案是4毫升管和转让直接暴露在阳光下了5天。解决方案是完成与甲醇达到目标5毫克/毫升的浓度。

3所示。结果与讨论

3.1。分析方法

实现快速有效的分离,等物质被注入不同的流动相以不同的比例混合解决方案去离子水和甲醇。由于不溶性等物质在水里,各种化验表明,100%甲醇的比例更合适的测定和观察等物质洗脱1.70分钟。列温度被发现不是关键因素的分析。获得的最佳药物吸光度是在480海里,没有辅料干扰存在于商业的平板电脑。一个典型的色谱用现在的方法获得的图所示2。

3.2。方法验证

验证了该方法对于特异性确定其性能特征,线性,LOD、定量限、准确度、精度和鲁棒性。

3.2.1之上。特异性

特异性估计通过比较空白的甲醇溶液的色谱,平板电脑等物质的标准溶液,辅料解决方案根据测定方法(图3)。结果表明,没有干扰等物质的保留时间制定平板组件。

3.2.2。线性

等物质的线性范围在3.0至8.0毫克/毫升的间隔。意思是获得的线性回归方程= 13.093+ 0.581,峰面积和吗在毫克/毫升标准溶液的浓度。相关系数(=不合适(表0.9987)1)来确定等物质的浓度范围3.0 - 8.0毫克/毫升。


最初的浓缩的。	平均峰面积±SD	实际的浓缩的。	%化验
(毫克/毫升)	()	(毫克/毫升)	%化验

3.0	40.16±0.08	3.02±0.04	100.7
4.0	52.14±0.57	3.94±0.00	98.4
5.0	65.59±0.28	4.96±0.02	99.3
6.0	80.35±0.54	6.09±0.00	101.5
7.0	92.91±0.25	7.05±0.02	100.7
8.0	104.39±0.56	7.93±0.00	99.1
,

3.2.3。检测极限(LOD)和量化的限制(定量限)

LOD和定量限分别为0.031和0.047毫克/毫升,分别。

3.2.4。精度

盘中和interday精度的结果如表所示2。RSD值都低于1.0%浓度测试和证实了合适的盘中,interday精度的方法。


名义浓缩的。 (毫克/毫升)	盘中精度		Interday精度
名义浓缩的。 (毫克/毫升)	浓缩的计算。 (毫克/毫升), 平均数±标准差	相对标准偏差(%)	浓缩的计算。 (毫克/毫升), 平均数±标准差	相对标准偏差(%)

3.5	3.46±0.03	0.95	3.45±0.02	0.58
4.5	4.53±0.03	0.76	4.58±0.03	0.69
6.5	6.51±0.05	0.81	6.47±0.04	0.65

3.2.5。精度

平均恢复被发现(表98.6至101.5%3)。这些结果表明精度测定药品等物质的平板电脑。


标准 (毫克/毫升)	添加		发现(毫克/毫升)	%的复苏	标准偏差
标准 (毫克/毫升)	%	毫克/毫升	平均数±标准差,	的意思是	标准偏差

4.0	20.	4.8	4.86±0.02	101.45	0.43
4.0	40	5.6	5.52±0.03	98.67	0.55
4.0	80年	7.2	7.16±0.04	99.52	0.52
4.0	One hundred.	8.0	8.01±0.03	100.11	0.41
4.0	120年	8.6	8.62±0.03	100.34	0.34

3.2.6。鲁棒性

等物质的百分比复苏是好的在大多数情况下,除了流量为1.3毫升/分钟(表4)。


参数	修改	RT(分钟)	%的复苏

流量(毫升/分钟)	1.1	1.558	99.9
	1.2	1.425	91.2
	1.3	1.317	85.2

波长的检测(nm)	481年	1.71	101.7
	482年	1.70	101.3
	483年	1.70	98.2

列温度(°C)	23	1.72	100.7
	27	1.70	100.3
	30.	1.69	100.6

去离子水在移动阶段	1%	1.71	100.9
去离子水在移动阶段	2%	1.75	101.9

3.3。强制降解研究

如表所示5、碱性压力导致更快的影响等物质的降解与约17%的剩余等物质接触后48 h后酸压力,大约48%的pH值等物质的降解显示关键的影响(表等物质的稳定5)。在氧化条件下,15%的药物降解而在高温和阳光直射条件下,等物质被发现与退化低于10%(表更稳定5)。在环境温度,药物稳定至少15天。任何的产品退化条件(图中观察到的所有压力4;表5)。


压力条件	剩下的%	%退化	保留时间降解的产品

盐酸酸性压力(1 n, 50°C, 1小时)	51.8	48.2	- - - - - -
碱性压力(1 n氢氧化钠,50°C, 1小时)	16.6	83.4	- - - - - -
氧化应激(3%,50°C, 48 h)	84.6	15.4	- - - - - -
热应力(50°C, 8天)	99.3	0.7	- - - - - -
阳光直射(8天)	95.8	4.2	- - - - - -
环境温度(15天)	92.0	8.0	- - - - - -

没有检测到峰值。

(一)

(b)

(c)

4所示。结论

一个简单和快速stability-indicating高性能液相色谱测定方法的开发和验证的决心在制药剂型等。分析方法是特定的,线性的,精确,准确、稳健快速测定这种药物,可用于研究的稳定和降解动力学等。

利益冲突

本文作者确认的内容没有利益冲突。

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