高效液相色谱法的发展绝对量化和QAMS黄酮类成分的补骨脂L。 - raybet雷竞app,雷竞技官网下载,雷电竞下载苹果

文摘

的种子补骨脂l .(豆科)是一种常用的草药在东亚有很多有益的临床治疗效果。在这项研究中,一个简单、灵敏、准确,和具体的反相高效液相色谱(HPLC)法建立了量化的9类黄酮p .骨脂,包括isobavachin neobavaisoflavone bavachin、corylin bavachalcone, bavachinin, isobavachalcone corylifol A和4′-O-methylbavachalcone。基于这种方法,定量分析多组分的单一标记(QAMS),和相对校正因子(rcf)计算确定其他黄酮类化合物的内容。QAMS方法验证的准确性与外部标准方法的结果,通过比较以及可行性和适应性的方法应用于质量控制p .骨脂。9个化合物基线分离在60分钟的线性回归系数超过0.9991。QAMS的精度在92.89%和109.5%之间。RSD值在不同的注入量在2.3%和3.6%之间。QAMS的结果表明,这是一个方便和精确的方法来确定多组分特别是一些真实的标准物质是不可用的。它可以用来控制的质量p .骨脂。

1。介绍

补骨脂l .(豆科)是最受欢迎的传统中药之一,正式列入中国药典,广泛用于治疗冠状动脉疾病,骨质疏松症,细菌感染,白癜风、牛皮癣。中医理论说,它是在变暖肾和激活,促进灵感,和治疗腹泻(1,2]。此外,它也被用作健康产品和食品补充剂在我们的日常生活中。植物化学的研究p .骨脂透露,香豆素类、黄酮类化合物和单萜酚类是其主要活性成分(3- - - - - -5]。现代药理和临床研究表明,相关的化合物p .骨脂具有多种生物活性,如抗癌效应(6,7,抗氧化活性8],抗菌活性[9),抑制DNA聚合酶(10),预防糖尿病的11),乳头状瘤形成的抑制作用。特别是,p .骨脂提取物中含有大量的黄酮类化合物,他们的生物活性引起了更多的关注12]。例如,isobavachin有强有力的雌激素的影响,可以调节人体的内分泌失调从而达到缓解更年期综合症的影响(13]。Bavachin和corylin刺激体内成骨细胞的增殖,这可能是一个有用的治疗骨质疏松症(14]。Neobavaisoflavone结合痕迹在前列腺癌细胞(诱导细胞凋亡的影响15]。Isobavachin isobavachalcone显示,在微粒体强力的抗氧化活性,抑制脂质过氧化作用引起的耗氧量(16]。所有这些结果显示p .骨脂可能是一个潜在的有前途的药物实体可以开发治疗人类疾病。因此,开发一个简单的、敏感的和可靠的方法来评估药材的质量是必要的。

在中国药典、补骨脂素和isopsoralen被选为标记评估草药的质量和一些相关的准备工作。然而,这种方法只能确定的一些标记化合物而忽略其他同样重要的活性成分p .骨脂,这是不足以提供质量评估的化学信息。大量的研究表明,品种丰富的黄酮类化合物被广泛包含在这种植物,包括类黄酮、isoflavonoids,黄烷酮类和prenylated类黄酮。这些天然黄酮类化合物已报告拥有大量的生物活性。因此,一个全面的方法将开发评价中黄酮类化合物的含量p .骨脂这允许多个成分的测定。

在这项工作,一个简单的高效液相色谱法加上二极管阵列检测器(HPLC-DAD)方法建立了测定黄酮类化合物(如图1)p .骨脂。该方法已成功应用的识别和定量9天然黄酮类化合物,包括isobavachin neobavaisoflavone, bavachin, corylin, bavachalcone, bavachinin, isobavachalcone corylifol A和4′-O-methylbavachalcone。此外,neobavaisoflavone被选为标准开发QAMS方法,因为它是容易。此外,neobavaisoflavone相对稳定的内容p .骨脂(17]。相对校正因子(rcf)是由一个函数计算公式,其他黄酮类化合物的定量分析的内容,然后与外部标准方法验证的内容QAMS方法的准确性。QAMS方法,分析物(缺乏量化的参考标准)可以量化,只有少量的标准要求来计算定量RCF。目前,QAMS方法已申请质量评价的各种各样的中国草药,如Phellodendri对皮层,踝骨基数,五味子属对,人参,田七(18- - - - - -21]。从这个意义上讲,QAMS方法可能是一个新的方式来弥补缺乏标准。

以前,很多研究都集中在识别和描述的果实的成分p .骨脂女士通过使用高效液相色谱法,光谱,气相色谱法(GC),和胶束电动毛细管色谱法。然而,这些方法忽略了类黄酮的重要活性成分,是提供信息质量评价的不足p .骨脂。目前,类黄酮的方法特点p .骨脂从来没有被报道。在这项工作中,QAMS方法建立了测定多种黄酮类化合物p .骨脂第一次。

2。实验

2.1。试剂和材料

乙腈(美国TEDIA试剂公司,高效液相色谱年级),水净化与ep水净化系统从南京ep系统(南京,中国),甲醇(南京化学试剂有限公司基于“增大化现实”技术),和其他试剂均为分析纯。标准参考物质购自上海U-sea生物技术(上海,中国)。所有9标记成分的纯度是99%以上。化合物的结构如图所示1。

2.2。制备的标准解决方案

股票的解决方案的个人标准浓度为0.5毫克/毫升甲醇由溶解的化合物。工作解决混合物的标准被稀释前准备立即分析股票的解决方案,达到所需的浓度校准测量。股票和工作标准的解决方案都准备在深棕色容量的玻璃瓶和储存在4°C。

2.3。样品溶液的制备

13个批次的p .骨脂收集来自不同地区,如表所示1的身份验证,样品是由南京中医药大学的陈教授健胃。种子粉,粉是通过60-mesh筛筛选的。和0.1 g的粉是由与50毫升乙醇回流提取1 h。提取被冷却到室温和过滤,然后滤液蒸发干燥/水浴。残留物完全转移至容量瓶和稀释的10毫升。解决方案是透过一个0.45μm膜过滤器之前被注入高效液相色谱分析。示例解决方案都是储存在4°C。


数量	起源	批处理	制造商

S1	贵州	120521年	南京海昌中药片厂
S2	云南	1012928	南京海昌中药片厂
S3	云南	120327年	南京海昌中药片厂
S4	浙江	110717年	南京海昌中药片厂
S5	广西	121108年	南京海昌中药片厂
S6	云南	121104年	上海Lei云商中药片厂
S7	江苏	121001年	上海Lei云商中药片厂
S8	河南	120524年	上海Lei云商中药片厂
S9	河南	120521年	上海Lei云商中药片厂
S10	缅甸	120728年	上海通冀唐制药有限公司。
S11	云南	120521年	上海通冀唐制药有限公司。
S12	云南	120524年	亳州立法机构件工厂
向	江西	121108年	亳州立法机构件工厂

2.4。仪器及色谱条件

色谱分离实现了安捷伦1100高性能液相色谱配备爸爸检测器(美国安捷伦)和水域2695高性能液相色谱配备2998检测器(水域,美国)。的分离进行了Purospher C18柱(150毫米×4.6毫米身份证。,5μ米)以下的色谱条件下,注入体积是10μl .列温度保持在35°C。紫外线的波长检测被设定为250海里。流动相是由乙腈(A)和水溶液(B)与梯度洗脱系统(清廉分钟,10% - -45%;10 - 50分钟,45% - -80%;50 - 55分钟,80% - -90%;则高达55 - min, 90% -15%) 1.0毫升/分钟的流量。

3所示。结果与讨论

3.1。方法验证

3.1.1。校准曲线,检测的限制,限制的数量

校准曲线的绘制与一系列浓度的标准解决方案。是显示在表2,获得较好的9个化合物的校准曲线。高相关系数值()显示有良好的线性相对广泛的浓度。LOD和定量限9标记化合物是0.4780 - -2.805的范围内μ克/毫升-9.349和1.872μg / mL,分别显示,我们建立的色谱条件下的高灵敏度。


峰数量	被分析物	校准曲线		线性范围(µg / mL)	LOD (µg / mL)	(定量限µg / mL)

1	Isobavachin		0.9994	18.75 - -300.0	2.615	8.718
2	Neobavaisoflavone		0.9994	16.88 - -270.0	0.5610	1.872
3	Bavachin		0.9997	9.375 - -300.0	2.612	8.706
4	Corylin		0.9996	7.500 - -120.0	0.4780	1.594
5	Bavachalcone		0.9992	12.50 - -200.0	1.809	6.029
6	Bavachinin		0.9996	28.13 - -450.9	2.805	9.349
7	Isobavachalcone		0.9995	22.50 - -360.0	2.704	9.012
8	Corylifol一		0.9996	12.50 - -200.0	1.014	3.381
9	4′-O-Methylbavachalcone		0.9997	7.656 - -245.0	1.853	6.178

3.1.2。精度

检查方法精度盘中和interday可变性。盘中变异性是由注入相同的标准溶液在同一天连续6次。interday变异性进行了连续2天使用相同的解决方案。综述了在表获得的相对标准偏差值3。从结果,开发方法被发现精确的盘中变化相对标准偏差值在0.16%和1.4%之间和interday可变性RSD值在0.82%和2.8%之间。


峰数量	被分析物	盘中相对标准偏差(%)	Interday相对标准偏差(%)	可重复性相对标准偏差(%)	恢复(%)

1	Isobavachin	0.33	1。6	1。8	97.23
2	Neobavaisoflavone	0.18	2。6	1。0	96.43
3	Bavachin	0.20	0.82	1。3	95.61
4	Corylin	0.16	1。3	1。0	103.5
5	Bavachalcone	1。3	2。8	1。1	100.4
6	Bavachinin	1。4	2。5	1。1	97.79
7	Isobavachalcone	0.30	2。3	0.56	94.94
8	Corylifol一	1。4	2。5	0.64	95.52
9	4′-O-Methylbavachalcone	1。1	2。2	2。1	98.45

3.1.3。稳定性、可重复性和复苏

示例解决方案的稳定性分析在0、2、4、8、12、24小时在室温下。发现样品的解决方案是稳定在24 h(相对标准偏差≤1.8%)。证实该方法的重复性,6个独立准备解决方案相同的样本(S7)进行了分析。峰面积的相对标准偏差值的-2.1%,0.56%。经济复苏是由一个已知数量的个人标准添加到一定量(0.50 g)补样本(S7)。混合物是通过使用上述方法提取和分析。六个复制进行测定。9的复苏化合物见表3范围从94.94%到103.5%,相对标准偏差≤2.6%。

3.2。应用程序样例分析

随后应用于同时定量分析方法在13批9组件p .骨脂。标准的化合物和混合物的色谱p .骨脂来自江苏省l .如图2。9组件展出的内容表6。

(一)

(b)

3.3。定量分析的多组分单一的标记

Neobavaisoflavone被选为一个标准的其他黄酮类化合物的定量分析,包括isobavachin bavachin, corylin, bavachinin, isobavachalcone, corylifol a和4′-O-methylbavachalcone,它广泛存在于各种p .骨脂l和商用(为了消除干扰由于不满足分离内容和低bavachalcone corylin, RCF这些组件不是计算)。RCF是一个比例常数的计算公式,可以计算如下: 在哪里标准溶液的峰面积,是分析物的峰面积,标准溶液的浓度,被分析物的浓度。的价值计算了在不同的注入量和平均价值()是用来计算分析物的内容根据公式。的值在不同注入卷(1、2、4、6、8、10、16和20μL)被显示在表4。的值不同的列和仪器都显示在表中5。与绝对定量测定的结果和精度是列在表中7。


注入量	rcf值
l

1	0.712	3.03	0.859	1.94	0.734	1.38
2	0.702	2.95	0.852	1.94	0.745	1.42
4	0.699	2.95	0.849	1.92	0.745	1.34
6	0.687	2.91	0.833	2.00	0.776	1.43
10	0.672	2.89	0.827	2.00	0.774	1.46
16	0.651	2.80	0.803	2.01	0.780	1.47
20.	0.656	2.86	0.806	2.04	0.786	1.48
的意思是	0.683	2.92	0.833	1.98	0.763	1.43
RSD %	3.5	2。3	2。6	2。3	2。7	3.6

:;:;
:;:;
:;:。


仪器	列	rcf值
仪器	列

安捷伦1100	Purospher C18	0.683	2.916	0.833	1.98	0.763	1.46
安捷伦1100	Alltima C18	0.676	2.928	0.814	2.07	0.778	1.52
水2695	Purospher C18	0.672	2.956	0.799	2.02	0.774	1.44
水2695	Alltima C18	0.688	2.935	0.803	2.12	0.780	1.48


数量	内容(毫克/克)
数量	1	2	3	4	5	6	7	8	9

S1	- - - - - -	9.124	4.367	0.7310	2.478	8.251	8.013	6.616	- - - - - -
S2	- - - - - -	9.647	5.043	0.7800	2.368	12.18	11.61	7.749	- - - - - -
S3	- - - - - -	9.538	5.280	1.031	2.983	9.386	11.17	7.432	1.049
S4	6.847	9.677	5.623	1.610	4.040	9.178	12.605	6.997	1.818
S5	8.115	9.058	3.503	1.187	3.328	6.416	8.731	7.237	2.004
S6	4.846	8.202	5.570	2.011	6.741	7.707	9.729	6.624	2.582
S7	8.915	7.837	4.075	1.478	3.744	7.547	7.948	5.962	2.024
S8	8.411	14.66	7.026	1.452	4.260	10.94	13.68	9.726	5.393
S9	- - - - - -	10.29	4.517	0.6540	2.122	10.70	12.43	7.185	2.120
S10	- - - - - -	5.413	3.437	1.349	2.928	4.229	7.519	4.892	1.466
S11	- - - - - -	7.326	3.149	0.694	3.958	9.948	8.287	5.792	2.981
S12	- - - - - -	5.474	3.145	0.638	1.768	6.040	6.964	3.437	1.208
向	- - - - - -	8.281	3.142	1.231	2.921	6.367	7.120	7.247	1.479


数量	1		3		6		7		8		9
样本	QAMS准确性		QAMS准确性		QAMS准确性		QAMS准确性		QAMS准确性		QAMS准确性
样本	(毫克/克)	(%)	(毫克/克)	(%)	(毫克/克)	(%)	(毫克/克)	(%)	(毫克/克)	(%)	(毫克/克)	(%)

S1	- - - - - -	- - - - - -	9.393	102.9	4.229	96.84	8.092	99.86	6.750	102.0	- - - - - -	- - - - - -
S2	- - - - - -	- - - - - -	9.476	98.23	4.773	94.65	11.52	99.33	7.650	98.73	- - - - - -	- - - - - -
S3	- - - - - -	- - - - - -	9.665	101.3	5.195	98.39	11.41	102.1	7.541	101.5	1.064	101.5
S4	6.755	98.66	9.846	101.7	5.607	99.72	13.07	103.7	7.070	101.0	1.853	102.0
S5	8.682	107.0	9.740	107.5	3.383	96.57	9.231	105.7	7.809	107.9	2.168	108.2
S6	4.660	96.15	8.448	103.0	5.705	102.4	10.09	103.7	6.839	103.2	2.714	105.1
S7	9.329	104.6	8.045	102.7	3.349	96.92	8.028	101.0	6.080	102.0	2.124	105.0
S8	8.300	98.69	15.03	102.5	7.057	100.4	13.97	102.1	9.932	102.1	5.386	99.87
S9	- - - - - -	- - - - - -	10.31	100.2	4.252	94.13	12.61	101.5	7.136	99.33	2.116	99.82
S10	- - - - - -	- - - - - -	5.152	94.88	3.720	108.2	7.773	103.4	5.030	97.26	1.495	102.0
S11	- - - - - -	- - - - - -	7.159	97.73	2.925	92.89	8.077	97.46	5.640	97.38	3.015	101.1
S12	- - - - - -	- - - - - -	5.597	102.2	2.985	94.92	7.200	103.4	3.284	95.57	1.323	109.5
向	- - - - - -	- - - - - -	9.052	109.3	3.016	96.00	7.309	102.6	7.852	108.35	1.609	108.8

为了获得良好的分离,关键是选择一个合适的流动相洗脱模式,检测波长。在目前的研究中,不同的移动阶段进行梯度洗脱,包括acetonitrile-water和甲醇-水修饰符如乙酸、甲酸、磷酸在不同浓度。移动阶段进行了色谱峰的形状和信噪比()的分析。检测波长的选择根据最大吸收波长的混合标准的解决方案。在色谱条件下如前所述,所有9组件可以基线分离在60分钟。因为没有观察到显著差异峰的形状和不同的移动阶段,acetonitrile-water被选中,这是最简单的组合来实现可靠的量化这些组件。

4所示。结论

有很多报道的质量控制方法p .骨脂,它只关注几个成分的内容。然而,这些方法忽略了类黄酮的活性成分。在本文中,主要成分的高效液相色谱法同时测定的方法p .骨脂提供了一个强大的和理性的方式来保证这种草药的质量。

在此基础上,QAMS方法开发确定其他黄酮类化合物的内容。缺乏参考物质,QAMS方法还可以用来完成多个成分的定量分析,综合评价提供依据的草的质量。最后,与绝对定量测定的结果相比,QAMS的精度在92.89%和109.5%之间。RSD值在不同的注入量在2.3%和3.6%之间。QAMS的结果表明,这是一个方便和精确的方法来确定多组分当一些真实的标准物质是不可用的。它可以用来量化和控制质量p .骨脂。QAMS方法可能是一个新战略,突破瓶颈缺乏标准物质在植物化学的分析。然而,应用的可行性QAMS测定不同类型的组件仍在调查。

缩写

QAMS:	定量分析的多组分单一的标记
RCF:	相对校正因子
HPLC-DAD:	高效液相色谱法加上二极管阵列检测。

利益冲突

没有利益冲突。

确认

本研究支持的优先级的学术程序开发江苏高等教育机构(2011 zyx2 - 010),江苏大学自然科学重大项目(11 kja360001),江苏Qinglan项目,重要而特殊的项目中国科技部(2012 zx09304005)。

补充材料

的种子补骨脂L。(豆科)是一种常用的草药在东亚有很多有益的临床治疗效果。在这项工作,一个简单的高效液相色谱法加上二极管矩阵检测器(HPLC-DAD)方法同时测定的主要9的天然黄酮类化合物补骨脂L。

补充材料

引用

y·朱“补草药,”中药学:化学、药理学和应用程序学术出版社,页609 - 612,哈伍德,阿姆斯特丹,荷兰,1998年。视图:谷歌学术搜索
张炳扬。乔,张齐兵。汉族,J.-Z。歌et al .,“补骨脂的质量评估,”化学和制药公告,54卷,不。6,887 - 890年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
l·h·赵c . y .黄,z, b . g .香和l·h·梅,“指纹分析补骨脂l通过高效液相色谱法和质”色谱法B杂志,卷821,不。1,第74 - 67页,2005。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
p .长官,d . Agarwal, s . p . Garg“furocoumarins分离和鉴定的种子补骨脂L。”印度制药科学杂志》上,卷68,不。6,768 - 771年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
阮,L.-Y。香港、y Takaya和m .羽”的化学成分研究补骨脂L。”亚洲天然产物研究杂志》上,9卷,不。1,41-44,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
p·g·拉莎和r . Panikkar近年活跃的一部分补骨脂种子”,Fitoterapia5卷,第455 - 451页,1998年。视图:谷歌学术搜索
p·g·拉莎和k . r . Panikkar抑制化学致癌作用补骨脂种子”,民族药物学杂志,卷68,不。1 - 3、295 - 298年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
g .江宁w . Xinchu w·侯l .清华和b . Kaishun从中草药抗氧化剂-补骨脂L。”食品化学,卷91,不。2、287 - 292年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
h .桂太郎不。Tsukiyama、铃木a和m .小林“体外抗菌bakuchiol对口腔微生物的活动,“抗菌药物和化疗,45卷,不。11日,第3013 - 3009页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
n . j .太阳,s . h .哇,j·m·卡萨迪和r . m . Snapka”DNA聚合酶和拓扑异构酶ⅱ抑制剂补骨脂”,《天然产物,卷61,不。3、362 - 366年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
j . m . Krenisky j .罗·m·j·里德和j·r·卡尼”隔离和降糖药活动的bakuchiol Otholobium下毛竹(豆科),一个秘鲁的药用植物用于糖尿病的治疗,”生物和医药公告,22卷,不。10日,1137 - 1140年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
g . r . j . y . Peng风扇,和y . t . Wu”制备隔离的四个新和两个已知的叶黄酮类化合物Patrinia摘要汁液。逆流色谱法和评价的体外抗癌活动,“杂志的色谱,卷1115,不。1 - 2、103 - 111年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
x w .咚,y . j .风扇l . j . Yu和y z,“四自然prenylflavonoids和雌激素的合成活动,“档案der Pharmazie,卷340,不。7,372 - 376年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
f . d . Wang,和江z”,成骨细胞的增殖刺激的活动补骨脂类黄酮提取物和两个,“足底》,卷67,不。8,748 - 749年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
e . Szliszka z . p . CzubaŁ。a . Paradysz Sȩdek, w . Krol“强化TRAIL-mediated在前列腺癌细胞凋亡活性化合物neobavaisoflavone和psoralidin隔绝补骨脂”,药理报告,卷63,不。1,第148 - 139页,2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
h . Haraguchi j .井上y (k .弘水谷”抗氧化成分补骨脂(豆科),“植物疗法的研究,16卷,不。6,539 - 544年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
Z.-M。王,小时。高,X.-T。傅,W.-H。多组分定量王”,由一个标志中药质量评价的新方法,”中国《本草书没有,卷。31日。23日,第1928 - 1925页,2006年。视图:谷歌学术搜索
m .阴杨绍明。关铭孟,L.-Y。温家宝“多组分定量分析测定单一标记的生物碱Phellodendri amurensis皮层”,中国的传统和草本药物,42卷,不。6,1093 - 1096年,2011页。视图:谷歌学术搜索
F.-C。他,S.-X。李,Z.-Q。赵,j。盾,W.-Z。刘,R.-Q。苏,”四个lignanoids同时定量分析五味子属对多组分的定量分析单一标记。”Pharmacologica学报卷,47号7,930 - 933年,2012页。视图:谷歌学术搜索
h . Cai, j·陈,p . Li”同时测定四isoflavonoids踝骨QAMS基数,“中国《本草书,35卷,不。20日,第2717 - 2712页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
j·j·朱,z . m . Wang和黄懿慧旷定量方法使用一个标记中皂苷含量的同时测定人参和三七”,Pharmacologica学报,43卷,不。12日,第1216 - 1211页,2008年。视图:谷歌学术搜索

分析方法在化学杂志》上

高效液相色谱法的发展为黄酮类化合物的绝对量化和QAMS组件补骨脂l

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