发展的敏感和具体分析Vildagliptin制药配方由气相色谱分析-质谱法

文摘

一个敏感的和有选择性的气相色谱分析-质谱法(gc - ms)方法开发和充分验证的决心vildagliptin(维尔)在制药配方。gc - ms分析之前,维尔是有效derivatized MSTFA / NH₄我/β巯基乙醇为30分钟60°C。的获得O-TMS导数维尔发现通过选择离子监测模式使用诊断离子m / z223年和252年。诺龙被选为内部标准。gc - ms方法完全由以下验证验证参数:检测极限(LOD)和定量(定量限),线性,精度、准确性、特异性、稳定性、健壮性和强度。LOD和定量限被发现是1.5和3.5 ng毫升⁻¹,分别。gc - ms方法线性范围3.5 ng -300毫升⁻¹。内部和interday精度值小于≤3.62%。内部和interday精度值的范围0.26 - -2.06%。最后,gc - ms方法已成功应用于确定维尔在制药配方。

1。介绍

Vildagliptin(维尔)[(S) 1 - [N - (3-hydroxy-1-adamantyl)氨基乙酰基]pyrrolidine-2-carbonitrile]是一种新型口服抗糖尿病药属于一类dipeptidyl peptidase-4抑制剂,用于治疗2型糖尿病。它给出了单独或与二甲双胍联合治疗,磺酰脲类或thiazolidinedione [1]。

维尔(贸易名称:Galvus、Jalra Xiliarx)在全球许多国家批准并固定剂量组合与二甲双胍(贸易名称:Eucreas、Icandra Zomarist)可在医药市场(2,3]。

迄今为止,分析维尔单独和与二甲双胍的制药配方是由高效液相色谱(HPLC)和毛细管电泳(CE)加上紫外线(UV)或(PDA)光电二极管阵列检测器(4- - - - - -10]。CE的特异性和高效液相色谱的方法是使用保留时间确认和检查的谱峰纯度维尔(4,5]。维尔给出了弱紫外吸光度最大波长207 nm。因此,报告分析方法灵敏度和选择性较低。

高效液相色谱法主要是首选的药物制剂的质量控制,因为它的简单,成本效益,可在大多数实验室。气相色谱分析-质谱法(gc - ms)主要是用来分析挥发性药物和残留溶剂和分析一些弱的化合物或缺乏发色团组。气让很多优势高效液相色谱等效率高、灵敏度、特异性、分析时间短、体积小样本。

在这项研究中,我们提出了选择性的发展,敏感,充分验证了gc - ms方法分析维尔在制药配方。在此,维尔之前derivatized gc - ms分析。甲硅烷基化反应是用于衍生化。甲硅烷基化反应是优化调查以下参数:催化剂、衍生化时间和温度(11,12]。然后,优化的gc - ms方法充分验证。开发和验证gc - ms方法应用于确定维尔在平板配方。这个方法是很重要的,因为首先报道的gc - ms方法。

2。实验部分

2.1。化学物质

维尔从中央卫生研究院获得了土耳其。诺龙(是)请提供土耳其兴奋剂控制中心。二甲双胍,N-methyl-N -(三甲基硅烷基)trifluoroacetamide (MSTFA),β巯基乙醇和碘化铵(NH₄我从Sigma-Aldrich)被提供。所有其他化学试剂均为分析纯试剂级。

2.2。仪器和gc - ms条件

GC - ms分析了6890 N安捷伦GC加上5973 N质量选择检测器。5%苯methylpolysiloxane毛细管柱(30 m×0.25毫米和0.25身份证µ美国安捷伦科技m膜厚度)是用于色谱分析。注入进行了分流比的分裂模式10:1和1µL样本注入毛细管柱。烤箱温度程序如下。初始温度设定在200°C,然后温度增加到300°C 25°C的速度最小⁻¹,举行300°C 2分钟。总运行时间为6分钟。女士是在电子碰撞电离模式。选择离子监测模式进行监控维尔,。识别质量是m / z223年和252年O-TMS垂直注入逻辑的衍生品。离子m / z223年维尔和418是最丰富的离子。因此,这些离子定量选择。前进气的温度、离子源和接口280,230,和280°C。

2.3。制备的标准解决方案

股票的解决方案ng维尔(500毫升⁻¹)是由溶解维尔在甲醇:水(50:50 v: v)。为了准备的标准储备溶液(1000 ng毫升⁻¹),适量是溶解在甲醇。工作解决方案维尔ng(10毫升⁻¹)是由串行用甲醇稀释股票的解决方案。股票和工作解决方案保持在4°C的一个月。

2.4。衍生化试剂的制备

为了准备MSTFA / NH的股票的解决方案₄我/β巯基乙醇(100:2:6 v: w: v), NH 100毫克₄我和300µL (β巯基乙醇添加MSTFA 5毫升。这只股票的解决方案被稀释至所需浓度(1000:2:6 v: w: v) MSTFA。解决方案在黑暗中被储存在4°C。

2.5。制备三甲基硅烷基(TMS)醚维尔和衍生品

准备的TMS醚衍生物维尔,40岁µL的衍生化试剂(MSTFA或MSTFA / NH₄我/β巯基乙醇混合物)添加到包含垂直注入逻辑干残渣。这个解决方案是在60°C加热块的30分钟。

2.6。安慰剂的准备样品

gc - ms方法被证明测试的特异性安慰剂药片含有无水乳糖,硬脂酸镁、微晶纤维素、羧甲淀粉钠。为了准备安慰剂片,辅料首次被纳入100毫升瓶80毫升的甲醇:水(1:1、v: v)添加进瓶。解决方案的超声波浴15分钟。然后,它完成与混合的100毫升甲醇:水(1:1,v, v)。最后,它是0.22过滤µm膜过滤器。

2.7。方法验证

为了显示性能发达gc - ms方法,气相方法验证通过调查以下参数:特异性、检测极限(LOD)和量化(定量限),线性,精度、准确性、稳定性、健壮性和强度。

2.7.1。特异性试验

气相法测试如果有任何干扰,因为制药辅料的包含维尔活性成分配方。因此,安慰剂的平板电脑准备节中描述2.6并分析了gc - ms方法。此外,评价二甲双胍常用药物的干扰,标准节中描述的解决方案是derivatized二甲双胍2.5和gc - ms技术分析。诊断为维尔(离子m / z223年和252年),(m / z418)在色谱提取来自安慰剂样本和二甲双胍。

2.7.2。气相法和线性的极限

LOD和定量限取决于信噪比(S / N)为两个最强烈的诊断离子(m / z223年和252年)。精密度和准确度在定量限水平也被评估。线性研究的6个浓度水平,3.5(定量限)、10、50、100、200和300 ng毫升⁻¹。校准曲线被绘制峰面积比维尔是与垂直注入逻辑的浓度。

2.7.3。精密度和准确度

精密度和准确度进行评估内部和interday。盘中的准确度和精密度测定分析维尔准备在六个独立的标准解决方案系列三个浓度水平(150和250 ng毫升⁻¹),这些解决方案在同一天进行分析。

在interday准确度和精密度,维尔三个浓度水平的标准解决方案(ng 15, 150和250毫升⁻¹)准备六个不同天,每天的解决方案进行分析。注入气相方法的重复性也由注入十倍的标准维尔在150 ng毫升的浓度的解决方案⁻¹。精密度和准确度都表达的相对标准偏差(RSD)和百分比偏差,分别。

第2.7.4。稳定

稳定的ng维尔(500毫升的标准股票的解决方案⁻¹ng)和稳定性(1000毫升⁻¹)测试+ 4°C 30天。此外,为了检查autosampler O-TMS稳定性导数的维尔,O-TMS导数在三个浓度水平(ng 15, 150和250毫升⁻¹)被放置在autosampler 12小时。

存储后,维尔,标准储备溶液和O-TMS导数在autosampler gc - ms技术分析了12个小时。结果与获得的结果从刚做好的解决方案。

2.7.5。鲁棒性和强度

开发方法的鲁棒性和强度被Plackett-Burman实验设计评估。选择参数,设计水平,实验矩阵表所示1和2。的峰面积比值维尔被选为响应。

2.8。决心的Vildagliptin制药平板配方

开发的gc - ms方法的适用性评估通过分析平板配方包含维尔活性成分(GALVUS / 50毫克维尔/平板)。十的平板电脑均质砂浆。50毫克的量是100毫升容量瓶转入。80毫升的甲醇:水(1:1,v, v)然后添加到容量瓶的超声波浴15分钟。解决方案是100毫升的甲醇:水(1:1 v: v)。最后,它是0.22过滤µm膜过滤器。

3所示。结果与讨论

维尔不包含任何强烈的发色团群。因此,需要分析高效液相色谱法或后后precolumn衍生或使用探测器女士。因此,敏感和具体分析维尔也是可以实现的。

在我们的研究中,我们旨在开发一个gc - ms方法对其分析。维尔之前derivatized gc - ms分析。因此,它有足够的热稳定性和/或波动。维尔含有羟基和derivatized nh集团。为了derivatize维尔,甲硅烷基化反应是试过了。MSTFA用作衍生化试剂。结果表明,只有自由羟基的维尔derivatized及其O-TMS导数组成。相信nh群维尔是位阻,这样甲硅烷基化反应是不可能的分子。的质谱碎片O-TMS维尔给出了图的衍生品1。

为了优化衍生化反应参数,如催化剂、衍生化时间和温度。在优化的研究中,定量离子的维尔(m / z223)是监控和O-TMS导数的峰面积值进行了比较。

在这项研究中,使用MSTFA甲硅烷基化试剂和NH的混合物₄我/β巯基乙醇添加基催化剂增加产量的O-TMS导数。甲硅烷基化反应进行了单独使用MSTFA和MSTFA / NH₄我/β巯基乙醇与不同温度(室温、60和80°C)和时间间隔(30和60分钟)。结果表明,使用NH₄我/β巯基乙醇基催化剂的产量增加O-TMS维尔(图的衍生品2)。当结果比较,最好的结果是在60°C为30分钟。

诺龙被选中。这是有效的优化衍生化条件下derivatized维尔。给出了图的质谱1。

3.1。gc - ms方法验证

3.1.1。特异性试验

色谱得到安慰剂平板电脑和二甲双胍标准溶液进行保留时间的维尔,离子的监测m / z223、252(诊断离子维尔),和m / z418(诊断离子)。任何干涉因为辅料和二甲双胍表明没有被观察到的gc - ms方法是特定的(图3)。

3.1.2。限制的方法(定量限和LOD)和线性

LOD (S / G: 3)和定量限(S / G: 10)被确定为1.5 ng毫升⁻¹和3.5 ng毫升⁻¹,分别。精密度和准确度在定量限水平是4.03%,−1.42%,分别。校准曲线3.5 ng -300毫升不等⁻¹确定系数()值()大于0.99说明线性适合检测浓度范围。

3.1.3。精密度和准确度

盘中的结果准确度和精密度进行了综述在桌子上3。精确的值不超过3.62%,精度从−0.26 - 2.06%不等。注入气相方法的重复性计算为1.26%。

3.1.4。稳定

的稳定性结果ng维尔(500毫升的标准股票的解决方案⁻¹ng),(1000毫升⁻¹)表明,之间没有显著差异存储时间。因此,维尔,准备每月的标准解决方案。此外,它发现的O-TMS导数维尔autosampler 12小时内稳定。

3.1.5。鲁棒性和强度

为了评估开发方法的鲁棒性和强度,使用方差分析测试。因此,每个参数对响应的影响(峰面积比维尔是)测定。标准正态概率图的效果如图4。结果表明,选择的影响参数对开发方法并不重要(分析师,MSTFA的品牌,对衍生化时间,衍生化温度)。

4所示。测定Vildagliptin制药配方

为了显示gc - ms方法的可靠性,开发方法应用于确定维尔在平板配方(Galvus 50毫克/片)。样品制备是部分中描述2.5和2.8然后这些样品用气相色谱-质谱法进行了分析。平板电脑的内容从校准曲线计算。维尔在平板电脑的数量被发现(平均±S.E.,1。71% RSD) indicating that the proposed GC-MS method was reliable for quantitation of VIL in tablet.

5。结论

在这项研究中,我们报告一个gc - ms方法对维尔第一次的决心。维尔是有效derivatized MSTFA / NH₄我/β巯基乙醇和转化成O-TMS导数。衍生化过程既简单又一步。总分析时间需要6分钟提供垂直注入逻辑的高通量分析。离子m / z223年至252年期间,可以有效地用于诊断离子的决心维尔。因此,拟议的gc - ms方法会比另一个更具体的和敏感的方法使用紫外线或PDA检测报告(4- - - - - -10]。发达- ms方法可以被认为是敏感的,有选择性的,准确的,准确的,健壮的,崎岖的验证研究。该方法用于测定维尔在平板配方。这个gc - ms方法可以用于常规维尔在生物样品测定。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢土耳其兴奋剂控制中心和中央卫生研究院土耳其(安卡拉,土耳其)提供内部标准和vildagliptin标准,分别。

引用

1. j . d . Croxtall和s . j . Keam Vildagliptin:回顾其在2型糖尿病的管理,使用“药物,卷68,不。16,2387 - 2409年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. g·m·基廷,“Vildagliptin:回顾它的使用在2型糖尿病,”药物,卷70,不。16,2089 - 2112年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. t·福斯特和p . Bramlage”Vildagliptin DPP-4抑制剂的每天与或没有二甲双胍治疗2型糖尿病,”专家意见在药物治疗,15卷,不。9日,第1313 - 1299页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. a . m . Kashid d . a . Ghorpade p p . Toranmal和s . c . Dhawale”开发和验证的反相高效液相色谱法测定vildagliptin使用实验设计,“分析化学杂志,卷70,不。4、510 - 515年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . t .高岭土b . l . Piccoli n·m·沃尔帕托·e·e·s . Schapoval和m .草原“毛细管区带电泳测定vildagliptin (DPP-4抑制剂)在制药配方和与高效液相色谱法比较研究,“Pharmazie,卷69,不。2、86 - 91年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. A . t .高岭土b . l . Piccoli n·m·沃尔帕托和m .草原”同时测定方法使用毛细管区带电泳的固定剂量组合vildagliptin和盐酸二甲双胍涂布平板电脑”分析方法,5卷,不。20日,第5708 - 5701页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. n . Satheeshkumar m . Pradeepkumar s Shanthikumar, v . j .饶”的开发验证稳定性指示分析方法,同时,rp -盐酸二甲双胍和vildagliptin估计,“药物研究,卷64,不。3、124 - 129年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s . Pednekar r . Lokhande r . Sutar s Kolhal s检验和s . Gudekar“二甲双胍的同时测定,Sitagliptin Saxagliptin, Linagliptin vildagliptin, rp -多组分制剂,“国际制药科学审查和研究杂志》上28卷,第133 - 128页,2014年。视图:谷歌学术搜索
9. m . Attimarad s . h . Nagaraja b . e . Aldhubaib Nair,和k . n . Venugopala”同时测定的二甲双胍和三个gliptins制药配方中使用RP HPLC法:应用程序稳定性研究Linagliptin平板配方,”印度医药教育和研究杂志》上,48卷,不。4,45-53,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. t . Boovizhikannan和v . k . Palanirajan rp vildagliptin纯和平板配方,测定”药学研究期刊》的研究,7卷,不。1,第116 - 113页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. e . Ucakturk”开发的气相色谱谱方法分析人类尿液,sitagliptin”制药和生物医学分析杂志》上卷,74年,第76 - 71页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 大肠Ucakturk”,气相色谱-光谱法的发展和验证方法测定人血浆中二甲双胍,”分析方法,5卷,不。18日,第4730 - 4723页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2015 Ebru Ucakturk。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。