隔离和乙酸乙酯提取物的生物活性分析宏碁tegmentosum通过体外试验和在线筛选HPLC-ABTS⁺系统

文摘

的宏碁tegmentosum使用热水提取(3公斤),和冷冻干燥提取粉被分割先后使用二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(EA)、丁醇(n-BuOH),和水。EA的提取比例(1.24 g),五个酚类化合物分离由硅胶制成,十八烷基硅胶,交联葡聚糖LH-20柱层析法。基于光谱等方法¹核磁共振,¹³理化性质和LC / MS的化学结构的化合物被证实为feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)。此外,快速在线筛选HPLC-ABTS⁺系统的单个生物活性EA-soluble分数(5酚类化合物)。结果表明,化合物1和2第一次被孤立的吗答:tegmentosum。抗炎活动和在线筛选HPLC-ABTS⁺这些化合物的测定方法LPS-stimulated小鼠巨噬细胞是快速和高效的生物活性的研究答:tegmentosum。

1。介绍

传统治疗方法基于天然产物可以追溯到在五年早期文明的书面文件(1]。特别是,韩国传统和中国东方草药药物(OMHs)吸引了许多国家利益和接受一些副作用的优点,可承受性,和当地的可用性。此外,他们的长期历史临床实践和可靠的治疗效果让他们优良的天然生物活性化合物来源(2]。其中,宏碁(一个。)tegmentosum(在韩国槭树科,Sancheong-mok)是一种阔叶树分布在东北亚包括韩国、俄罗斯和中国(3]。在韩国,茎和叶答:tegmentosum一直在传统上用于治疗肝脏疾病如肝炎、肝癌、肝硬化、肝解毒(4]。以前的研究已经表明提取的干细胞答:tegmentosum拥有不同的药理特性,如抗氧化、抗炎、antigastrophatic, antiadipogenic,抗癌,细胞毒性的活动5- - - - - -7]。然而,植物化学的研究生物活性的成分和有效的方法答:tegmentosum没有被报道。

同时,不同的方法已经发展为提取有用的组件答:tegmentosum例如,索氏提取(SE),加热回流提取(产业)、超临界流体萃取(医药),超声波辅助提取(UAE)、微波萃取(美)8- - - - - -10]。水、甲醇、乙醇,乙酸乙酯(EA)是常用的溶剂从植物中提取的生物活性化合物材料和OMHs。五种化合物的识别和相对量答:tegmentosum测定质、核磁共振和在线筛选HPLC-ABTS吗⁺分析(1]。这些技术包括与高效液相色谱在线筛选邮报的专栏里分析涉及abt⁺激进的技术(11),允许生物活性化合物的光谱光度测量的监测。一般来说,DPPH (abt)激进的是另一个简单,快速在线检测方法从天然植物提取物的抗氧化剂12]。它结合了高效液相色谱的分析涉及到一个稳定的激进的物种[1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl自由基(DPPH)和2,2′-azinobis——(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸)激进的阳离子(abt)]在HPLC-DPPH (abt)方法(13,14]。此外,该方法成功地申请了天然生物活性化合物的筛选和识别复杂的混合物,特别是对于OMHs的提取15- - - - - -17]。五种化合物的化学结构经光谱等方法¹核磁共振,¹³理化性质和LC / MS (18]。在这项研究中,五个酚类化合物与热水提取的答:tegmentosumbychromatographic分离。利用光谱方法,这些化合物的结构测定feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)。此外,我们研究了其抗炎作用LPS-stimulated 264.7原始细胞。我们还调查了应用程序在线筛选HPLC-ABTS⁺生物活性筛选的分析找到一个更实际的方法对在线筛选HPLC-ABTS的使用⁺化验的山峰的快速精确定位色谱相应的生物活性化合物。

2。实验

2.1。试剂和材料

阀杆的答:tegmentosum从Yeongcheon传统草药市场购买(Gyeongsangbuk-do、Yeongcheon、韩国)。凭证标本都存入草药KM-Based草药药物开发银行集团,东方医学研究所。以下试剂用于自由基清除化验:abt⁺(2,2′-azino-bis-3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸),过硫酸钾,三氟乙酸(组织)购买的σ有限公司(美国)。高效液相色谱级甲醇甲醇和乙腈(ACN)购买的j·t·贝克(美国新泽西州Philipsburg)。的正己烷、二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(EA)和正丁基醇(n-BuOH)从Daejung购买化学(京畿道、Shiheung、韩国)。三重蒸馏水与0.2过滤μm膜滤器(Advantec、东京、日本)之前的分析。材料为细胞培养获得Lonza(瑞士巴塞尔)。有限合伙人,牛血清白蛋白(BSA)和3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)购买的σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。从eBioscience获得抗体的ELISA(美国圣地亚哥,CA)。五种化合物的化学结构如图所示1。

2.2。标准样品制备

高纯度分离化合物(高于> 95%)是由溶解2毫克的标准化学品feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)在10毫升的甲醇和调整浓度200 ppm。

2.3。abt⁺样品制备

2毫米abt原液含有3.5毫米制备了过硫酸钾和一直在黑暗中在室温下完成16 h让激进的一代,然后用水稀释(1:29,v / v)。

2.4。溶剂提取和纯化

干燥的样品(3公斤)的粉末答:tegmentosum加载(10卷)在热水提取系统。提取是由加热3 h在100°C (Gyeongseo器宇宙- 600、仁川、韩国)。那么,解决方案是使用标准测试筛子过滤(150μm, Retsch、汗、德国),冷冻干燥,保存在干燥器在使用前4°C。对于大量的抽取,20 g冻干样本加载(1:1,提取三次)和提取先后使用DCM, EA,n-BuOH。feniculin的内容(1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)答:tegmentosum在EA提取相当高(1.24 g)。然后,通过0.2样本过滤μ膜过滤网上筛选HPLC-ABTS之前⁺分析。提取和纯化过程答:tegmentosum如图2。

2.5。分析系统

核磁共振光谱得到使用瓦里安Inova 400 MHz和600 MHz NMR(美国瓦里安)。孤立的化合物feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5使用安捷伦1100 +)被证实viaLC-MS分析G1958(美国安捷伦)LC系统(表1)。开放使用硅胶柱层析法进行(Kieselgel 60、默克公司、德国)和以(ODS) Li-Chropre RP-18(默克公司、德国)。分子筛柱层析法进行使用交联葡聚糖LH-20(美国丙烯酰胺)。薄层色谱法(TLC)分析使用硅胶玻璃板块(Kieselgel 60 F_254年和RP-18、德国默克公司)和使用移动开发阶段由chloroform-methanol-water和染色使用10% H₂所以₄检测EA提取和纯的化合物。

2.6。网上筛选HPLC-ABTS⁺化验分析

答:tegmentosum提取被注入Dionex终极3000高效液相色谱系统(热科学)。在这个实验中使用的色谱柱是商用和RS-tech买来(0.46×25厘米,5μm C₁₈、大田、韩国)。注射体积是10μL,流动相的流速为1.0毫升/分钟。紫外检测器的波长是固定在210年,254年,280和320海里。移动阶段的组成是:99.9%水/三氟乙酸(99.9/0.1 %)卷和B: 100%乙腈。运行时间为60分钟,溶剂项目线性梯度法(90:60:40 A: B %卷,第70分钟:初始条件)(表2)。图3显示一个原理图的在线耦合爸爸的高效液相色谱(二极管阵列检测器)和abt连续流⁺化验。然后,在线高效液相色谱是连接到一个“T”abt的地方⁺是补充道。abt的⁺0.5毫升/分钟的流量在3000年使用Dionex最终交付泵。混合后通过1毫升循环,维持在40°C,使用多个波长吸光度测量探测器在734 nm(随钻测量)。数据分析使用Chromeleon 7软件。

2.7。细胞培养和药物治疗

264.7原始细胞从韩国细胞系银行购买(首尔,韩国)和生长在RPMI 1640中含有10%的边后卫和100 U /毫升的抗生素硫酸。湿润5%的细胞被孵化有限公司₂气氛在37°C。刺激细胞,改变了媒介用新鲜RPMI 1640中,和有限合伙人(200 ng / mL)添加存在与否的五个化合物(10、30、50和100μ米)24 h。

2.8。MTT测定细胞生存能力

使用MTT测定细胞毒性进行了分析。五个化合物添加到细胞和孵化24 h在37°C公司为5%₂。麻省理工的解决方案是添加到每一个细胞,孵化为另一个4 h。甲瓒融化在二甲亚砜(DMSO),然后是光密度在570海里使用ELISA读者阅读(M200无限,TECAN、Mannedorf、瑞士)。

2.9。测量没有生产

没有生产分析了通过测量亚硝酸盐的上层清液培养的巨噬细胞细胞。这些细胞被使用五个化合物与LPS刺激24 h。上层清液的混合着同样体积的格里斯试剂(naphthylethylenediamine盐酸盐磺胺1%,0.1%,和2.5%磷酸)和在室温下孵化(RT) 5分钟(19]。570纳米的吸光度是阅读。

2.10。测定TNF-α、il - 6和il - 1β细胞因子的生产

细胞被播种密度的5×10⁵细胞/毫升24-well文化板块和使用不同浓度的5化合物LPS刺激前30分钟。ELISA板(Nunc、鲁开德、丹麦)涂在一夜之间在4°C与捕获抗体稀释涂料缓冲区(0.1碳酸盐,pH值9.5)然后洗五次磷酸盐(PBS)含0.05%渐变20。非特异性蛋白质链接网站被封锁与试验稀释缓冲(PBS含有10%的边后卫,pH值7.0)> 1 h。样品和标准及时被添加到井。经过2小时的潜伏期在RT或一夜之间在4°C,探测器工作的解决方案(生物素化的检测抗体和streptavidin-HRP试剂)添加和孵化1 h。随后,衬底的解决方案(tetramethylbenzidine)添加到井和孵化前30分钟在黑暗中反应与停止的解决方案(NH就熄了₃阿宝₄)。光学密度在450海里(读19]。

2.11。统计分析

结果表示为均值±SE值实验的数量。统计学意义的每个治疗组相比,控制和由学生决定测试。每个实验至少重复三次产生类似的结果。值和和< 0.001被认为是重要的。

3所示。结果与讨论

3.1。高纯度分离和分析

的茎答:tegmentosum使用沸水提取,然后分区先后使用二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(EA)、正丁基醇(n-BuOH)和水(H₂O)。EA提取(1.24 g)应用于硅胶运费到付。4×10厘米),并使用氯仿- (CHCl筛选了₃₋)MeOH-H₂O [15: 3: 1 (1.2 L)→13: 3: 1 (1.3 L)→10: 3: 1 (1.2 L)→7: 3: 1(1升)→4:3:1(1升)→甲醇)。筛选了分数被薄层色谱监测生产12分数(OS1E-1-12)。分数OS1E-6(55.5毫克)受到了交联葡聚糖LH-20运费到付。1.5×45厘米,50%甲醇(180毫升)→70%甲醇(300毫升)→100%甲醇)的七个分数(OS1E-6-1-7),最终产生的化合物1(OS1E-6-2 6.0毫克)2(OS1E-6-4 5.9毫克)。分数OS1E-7(260.3毫克)受到了交联葡聚糖LH-20运费到付。1.5×44厘米,80%甲醇(400毫升)→100%甲醇)收益率10分数(OS1E-7-1-10)。分数OS1E-7-6(53.1毫克)受到了ODS运费到付。1.5×8厘米)和MeOH-H筛选了₂O[1: 6(900毫升)→甲醇)化合物3(OS1E-7-6-2 30.7毫克)4(OS1E-7-6-4 14.2毫克)。分数OS1E-9(237.5毫克)受到了ODS运费到付。2.5×8厘米)和MeOH-H筛选了₂O(1: 3(450毫升)→1:2(300毫升)→1:1(300毫升)→甲醇)的13个分数(OS1E-9-1-13)。分数OS1E-9-3(77.8毫克)受到硅胶运费到付。1.5×10厘米)和CHCl筛选了₃-MeOH-H₂O [10: 3: 1 (2.2 L)→7: 3: 1 (1.6 L)→4: 3: 1 (1.4 L)→甲醇)负担5(OS1E-9-3-2 60.3毫克)。基于光谱的方法,如¹核磁共振,¹³理化性质和LC / MS,化学结构的化合物被证实为feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)相比之下的光谱数据的引用。此外,网上筛选HPLC-ABTS⁺调查的分析方法快速、高效分离化合物的生物活性宏碁tegmentosum。化合物1,2,3,4,5开发在ODS TLC 10% H₂所以₄观察和预期的黄色或棕色的酚类化合物。

复合1(Feniculin)。黄色无定形粉末(甲醇);质m / z435.1 [M + H]⁺;¹核磁共振(400 MHz, CD₃开发部,)7.73 (1 h, d,J= 1.6赫兹,2′),7.55 (1 h,弟弟,J= 8.4,1.6赫兹,6′),6.88 (1 h, d,J= 8.4赫兹,H-5′), 6.39 (1 h, d,J= 1.6赫兹,H-8), 6.19 (1 h, d,J= 1.6 Hz - 6), 5.16 (1 h, d,J= 6.0赫兹,h′′), 3.89 (1 h,弟弟,J= 8.0,6.0赫兹,2′′),3.82 (1 h, H-5′′), 3.80 (1 h, m, H-4′′), 3.64 (1 h,弟弟,J= 8.0,2.8赫兹,H-3′′), 3.44 (1 h,弟弟,J= 13.2,3.2赫兹,H-5′′b);¹³理化性质(100 MHz, CD₃开发部,);见表3。化合物的特征数据1比较文学的价值和结合槲皮素和arabinopyranoside确认结构feniculin [20.]。

复合2(广寄生甙)。黄色无定形粉末(甲醇);质m / z435.1 [M + H]⁺;¹核磁共振(600 MHz, CD₃开发部,)7.52 (1 h, d,J= 1.8赫兹,2′),7.49 (1 h,弟弟,J= 8.4,1.8赫兹,6′),6.90 (1 h, d,J= 8.4赫兹,H-5′), 6.38 (1 h, d,J= 1.8赫兹,H-8), 6.20 (1 h, d,J= 1.8 Hz - 6), 5.46 (1 h, s、h′′), 4.32 (1 h, d,J= 2.4赫兹,2′′),3.89 (1 h,弟弟,J= 4.8,2.4赫兹,H-3′′), 3.861 (1 h, m, H-4′′), 3.494 (2 h tJ= 4.2,H-5′′);¹³理化性质(150 MHz, CD₃开发部,);见表3。¹化合物的核磁共振谱2显示一个类似的模式1。电喷雾质谱证实了结构m / z435.1 [M + H]⁺(21]。化合物1和2第一次被孤立于植物。

复合3((+)儿茶素)。棕色粉末(甲醇);质m / z291.0 [M + H]⁺;¹核磁共振(600 MHz, CD₃开发部,)6.83 (1 h, d,J= 2.4赫兹,2′),6.76 (1 h, d,J= 8.4赫兹,H-5′), 6.71 (1 h,弟弟,J= 8.4,2.4赫兹,6′),5.92 (1 h, d,J= 2.4 Hz - 6), 5.85 (1 h, d,J= 2.4赫兹,H-8), 4.56 (1 h, d,J= 7.2赫兹,2),3.97 (1 h, m, H-3), 2.50 (1 h,弟弟,J= 16.2,8.4赫兹,H-4a), 2.84 (1 h,弟弟,J= 16.2,6.0赫兹,H-4b);¹³理化性质(150 MHz, CD₃开发部,);见表3。

复合4((−)表儿茶素)。棕色粉末(甲醇);质m / z291.0 [M + H]⁺;¹核磁共振(600 MHz, CD₃开发部,)6.96 (1 h, d,J= 1.8赫兹,2′),6.79 (1 h,弟弟,J= 8.4,1.8赫兹,6′),6.75 (1 h, d,J= 8.4赫兹,H-5′), 5.93 (1 h, d,J= 1.8 Hz - 6), 5.91 (1 h, d,J= 1.8赫兹,H-8), 4.80 (1 h, br、2), 4.16 (1 h, m, H-3), 2.86 (1 h,弟弟,J= 16.8,4.8赫兹,H-4a), 2.73 (1 h,弟弟,J= 16.8,3.0赫兹,H-4b);¹³理化性质(150 MHz, CD₃开发部,);见表3。化合物3和4比较文献数据(+)儿茶素和(−)表儿茶素的结构鉴定22]。证实了该结构的存在m / z291.0 [M + H]⁺电喷雾质谱的积极模式。

复合5(6′-O-Galloyl红景天甙)。淡黄色油(甲醇);质m / z453.1 [M + H]⁺;¹核磁共振(600 MHz, CD₃开发部,)7.10 (2 h, br, 2′′′, 6′′′), 6.96 (2 h dJ= 8.4赫兹,2,6),6.65 (2 h dJ= 8.4赫兹,H-3 H-5), 6.65 (1 h, d,J= 8.4赫兹,H-5), 4.52 (1 h,弟弟,J= 11.4,2.4赫兹,6′′),4.45 (1 h,弟弟,J= 11.4,6.0赫兹,6′′b), 4.32 (1 h, d,J= 7.8赫兹,h′′), 3.95 (1 h, m, H-8a), 3.70 (1 h, m, H-8b), 3.55 (1 h, m, H-5′′), 3.42 (2 h tJ= 7.8赫兹,H-3′′, 4′′), 3.22 (1 h, t,J= 8.4赫兹,2′′),2.77 (2 h, m,第7);¹³理化性质(150 MHz, CD₃开发部,);见表3。¹核磁共振数据与文献值相一致(23]。

3.2。网上筛选HPLC-ABTS⁺化验分析

本研究调查了生物活性(使用abt⁺分析;彻底清除活动)和抗炎活动的五个独立测量的酚类化合物。所有的化合物1- - - - - -5在EA分数(每个产量;毫克)表现出抗氧化活动(表4)。此外,这种在线筛选HPLC-ABTS⁺调查分析方法快速、高效的生物活性答:tegmentosum并获得RS-tech(0.46×25厘米,5μm C₁₈、大田、韩国)。注射体积是10μL,流动相的流速为1.0毫升/分钟。紫外检测器的波长是固定在210年,254年,280和320海里。五个酚类化合物的特点是比较高效液相色谱UV-DAD最大吸收峰的样品与纯粹的隔离标准(图4)。测定抗氧化活性的在线HPLC-DPPH (abt)分析是基于吸光度下降在517和734海里postcolumn反应后的抗氧化剂与高效液相色谱分离与DPPH (abt)和抗氧化剂存在于样本就能轻松表示负峰。移动阶段的组成是:99.9卷%水/三氟乙酸(99.9/0.1 %)卷和B: 100%乙腈。运行时间为60分钟,溶剂程序使用了线性梯度法(90:60:40 A: B %卷,第70分钟:初始条件)。abt的⁺流量为0.5毫升/分钟。高效液相色谱法分离分析物显示与abt postcolumn反应⁺发现和减少使用随钻测量作为一个负峰在734海里。合并后的UV(积极的信号)和abt⁺淬火(负信号)色谱图的不同答:tegmentosum提取(200 ppm)给出的数字5和6。筛选了几个分数EA五种酚类化合物的提取检测feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5),给一个积极的信号在紫外探测器在210海里。其他化合物显示hydrogen-donating能力向abt(负峰)⁺激进的应用浓度。这些结果表明,该方法可以应用快速生物活性筛选,或者更准确地说,检测的自由基清除活性化合物,表明(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)表现出生物活性。6′-O-Galloyl红景天甙(5)表现出更高的生物活性,而feniculin (1)和广寄生甙(2(图)显示低生物活性的原因5)。保留时间(feniculin) (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)是10.700,13.884,15.928,24.217,和25.062分钟。生物活性似乎是大约五种酚类化合物的浓度成正比的提取物。高效液相色谱法分析五个化合物的最佳分离条件成功地建立了不同开放列治疗和溶剂净化步骤(图6)。本研究证实了可行性评估特定的生物活性的植物化学物质使用在线筛选HPLC-ABTS⁺测定方法(表5)。这个方法是成功申请天然生物活性化合物的筛选和鉴定答:tegmentosum。

3.3。质分析条件

图75显示了高效液相色谱法简介和质谱分离酚类化合物答:tegmentosum。质分析表明,化合物答:tegmentosum在高度纯形式的孤立。每个化合物溶解在甲醇浓度200 ppm,和质分析条件表中列出1。质分析代谢分析和代谢组学研究的是一种强大的工具,它可以准确地确定特定代谢产物的含量甚至在植物样品在较低水平。质分析以前确定的某些成分答:tegmentosum。比较紫外光谱、质谱和五种化合物的保留时间与标准化合物的数据导致他们明确的任务。同时分析基础上feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5),32.6,34.0,12.1,17.7,和21.3分钟,分别是与相对分子质量数据和响应。谱分析化合物feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)显示强烈的[M + H]⁺信号在435.1,435.1,291.0,291.0和453.1m / z值,分别。

3.4。筛选抗炎活动

3.4.1。五个化合物264.7原始细胞生存能力的影响

我们五个化合物的细胞毒性评估使用MTT试验确定最优浓度有效抗炎用最小的毒性。如图8(一个),所有的五个化合物并不影响细胞的生存能力高达100μ米,表明细胞没有毒性的化合物。

3.4.2。五个化合物对生产的影响在LPS-Stimulated生264.7巨噬细胞

我们评估五个化合物的影响没有分泌LPS-stimulated 264.7原始细胞。这些细胞被使用五个化合物在不同浓度LPS刺激前,测量,没有生产。作为一个积极的控制,我们雇佣了10μ地塞米松,作为抗炎剂广泛使用。所有的化合物,除了6′-O-galloyl红景天甙,并没有显示任何抑制作用LPS-induced没有生产(图8 (b))。

3.4.3。生产五个化合物对LPS-Induced炎性细胞因子的影响

五个化合物的抑制作用在炎性细胞因子的生产,另一个参数的炎症,是调查。在这项研究中,我们审查的影响五个化合物TNF-α,il - 6和il - 1β表达式。图9(一个)表明feniculin稍微压抑TNF-α生产的浓度为10μM(图9(一个))。然而,广寄生甙(+)儿茶素,表儿茶素(−)和6′-O-galloyl红景天甙没有任何抑制影响LPS-induced TNF-α生产。如图9 (b),符合TNF-α结果,feniculin稍微抑制il - 6生产的浓度为10μm .此外,广寄生甙抑制il - 6浓度生产30 - 50μm(+)儿茶素抑制il - 6生产30μ米或更多。(−)表儿茶素和6′-O-galloyl红景天甙没有显示任何LPS-induced il - 6分泌的抑制作用。然而,除了6′-所有的化合物O-galloyl红景天甙没有抑制il - 1β(图9 (c))。

4所示。结论

本研究表明,在热水提取的可溶性分数答:tegmentosum,EA-soluble分数拥有最高的生物活性和自由基清除自由活动。化合物的干树枝答:tegmentosum用热水提取和分区先后使用DCM, EA,n-BuOH和水。的内容有用的化合物答:tegmentosum非常高的EA提取(1.24 g)。五种酚类化合物分离由硅胶制成,十八烷基硅胶,交联葡聚糖LH-20柱层析法。孤立的化合物的化学结构是由光谱方法,如¹核磁共振,¹³理化性质和LC / MS和被证实为feniculin (1)、广寄生甙(2),(+)儿茶素(3),(−)表儿茶素(4),6′-O-galloyl红景天甙(5)相比之下的光谱数据的引用。EA的提取答:tegmentosum包含五个酚类化合物表现出最好的生物活性是通过在线筛选HPLC-ABTS进一步监控⁺测定方法。化合物1和2第一次被孤立,他们的抗炎活动进行评估。此外,网上筛选HPLC-ABTS⁺测定方法快速、高效的寻找生物活性化合物答:tegmentosum。此外,(+)儿茶素和6′-O-galloyl红景天甙等炎性介质生产表现出抑制活动TNF-α,il - 6和il - 1β细胞因子。总之,答:tegmentosum可以作为一个基本的材料在OMHs新药的开发。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

本研究达到KM-Based草药药物开发集团,KIOM。作者也承认的支持“药物功效增强使用生物转化研究草药”(K14050)项目。

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