文摘

原料、不同配方的食物和膳食补充剂伴侣要求控制的生物活性物质的含量高性能薄层色谱法(TLC),这里描述,提出了简单、快速检测和量化方法。使用薄层色谱测密度术,下面的生物活性化合物被确定和量化:绿原酸(2.1毫克/克),咖啡酸(1.5毫克/克),芦丁(5.2毫克/克)、槲皮素(2.2毫克/克)、山柰酚(4.5毫克/克)。获得的结果与TLC微咖啡因(5.4毫克/克)和可可碱(2.7毫克/克)显示无统计差异的内容总黄嘌呤(7.6毫克/克)。通过紫外可见分光光度法进行测定因此,薄层色谱的首选仍是一个技术简单、快速分析大量的样本以及初级筛选技术在植物分析。

1。介绍

伴侣茶(Sp。巴拉圭茶、港口。Erva-mate)由切割、干、空中部分或离开冬青属植物paraguariensisSt.-Hil。冬青科灌木。它包含methylxanthines,主要是咖啡因、酚酸、皂甙和用作日常代替咖啡(心理刺激、兴奋药)南部的巴西、阿根廷北部,东方巴拉圭和乌拉圭。除了对心血管系统有益的影响,具有显著的抗氧化能力,可用于肥胖(体重管理1- - - - - -3]。

薄层色谱法(TLC)通常代表了植物来源的样本的首选技术可以很容易地可视化结果。该技术已经成功地用于分析酒的黄酮和酚酸的含量,蜂胶,不同的药用植物4]。几项研究比较薄层色谱和高效液相色谱表明,没有统计这些方法之间的区别,由于较低的成本和好处是给薄层色谱(5,6]。

黄嘌呤为主要成分的确定是耗时滴定法(7]。虽然现在无处不在的类黄酮化合物,巴斯托斯et al。8)没有发现任何分析黄酮醇伴侣茶使用高效液相色谱技术。因此,这项工作的目的是识别和量化的多酚和黄嘌呤组件伴侣densitometrically使用效果盘子和比较结果与总多酚和黄嘌呤的内容基于紫外可见分光光度法。

2。实验部分

2.1。试剂

所有标准都是购买从西格玛奥德里奇(德国)和有机溶液Kemika(克罗地亚)。的样品伴侣粉(干天线部分)是来自圣安吉洛,RS,巴西。

2.2。标准的解决方案

股票的解决方案的酚酸(绿原,咖啡、阿魏、p香豆酸),类黄酮(柚苷配基,芦丁、槲皮素和山柰酚),和黄嘌呤(咖啡因、可可碱)是由溶解标准与甲醇(多酚)或水(黄嘌呤)获得浓度为1.0毫克/毫升。标准解决方案由与甲醇溶解,0.1毫克/毫升。

2.3。水溶液的巴拉圭茶

1.0克erva是100毫升的水里煮30分钟,过滤。50毫升这个解决方案的蒸发,残留物溶解在10毫升的甲醇。

2.4。水解的解决方案巴拉圭茶

0.5克巴拉圭茶是30分钟回流。用20毫升的丙酮、2毫升25%盐酸,hexamethylenetetramine 1毫升0.5%水溶液。得到的水解产物过滤后,原油部分再次与丙酮回流10分钟。滤液合并,与丙酮稀释至100毫升。20毫升的丙酮溶液混合着20毫升的水和提取一次15毫升和3 * 10毫升的乙酸乙酯。乙酸乙酯相结合阶段是40毫升的水清洗和过滤棉。滤液与乙酸乙酯稀释50毫升。这个解决方案是用于效果分析和光谱光度测量的总类黄酮的测定。

2.5。光谱分析

是由Christ-Muller总黄酮含量的方法,根据欧洲药典,酚酸和黄嘌呤的方法建议由国际办公室的可可,巧克力和糖糖果7,9,10]。短暂的类黄酮测定酸水解后(见部分2.4)作为解放苷配基在425 nm spectrometrically AlCl的复杂3在一个methanol-ethyl acetate-acetic酸介质。

酚酸为目的的决心0.2克伴侣粉和190毫升的50%乙醇回流水洗澡。总酚酸测定通过测量吸光度在505 nm之间形成复杂的酚酸和钠molybdate-sodium亚硝酸盐作为相当于rosmarinic酸。

水溶液的巴拉圭茶用于黄嘌呤的决心。黄嘌呤总确定后澄清与醋酸铅spectrometrically在272 nm相当于可可碱。

2.6。薄层色谱测密度术

氯仿:甲醇:甲酸在体积比为44.1:2.5:2.15是用作苷配基,流动相及乙酸乙酯:甲酸,乙酸:水体积比100:11:11:26用于苷(4,11]。系统用于黄嘌呤开发是乙酸乙酯、甲醇和水的体积比40:5.4:4 (11]。默克效果板块(硅胶60 F254年,10×20厘米)作为固定相。样本应用使用CAMAG Linomate V半自动采样器。开发效果板干燥后喷的分析多酚1% ethanolic AlCl的解决方案3h·62o .盘子记录在254和366海里。识别和量化进行了薄层色谱测密度术使用CAMAG薄层色谱扫描仪3,1.3.4 WinCATS软件版本。

2.7。统计分析

TLC微密度和光谱分析的结果相比,使用学生的t以及。统计分析是使用Microsoft Office Excel 2003执行。

3所示。结果与讨论

由Christ-Muller总黄酮含量的方法是3.0毫克/克(RSD = 0.5%, 根据博士欧元),确定酚酸。方法55.1毫克/克(RSD = 0.6%, ),和黄嘌呤IOCCSC方法7.6毫克/克(RSD = 0.7%, )。

生物活性成分的识别是基于保留因子,吸收光谱原位,如果适用,乐队与氯化铝喷涂后的颜色。识别参数表1和图1。

表1
识别参数的多酚和黄嘌呤:保留因子,乐队在366 nm,颜色和光谱后喷洒氯化铝(不适用于咖啡因和可可碱)。

图1
标准和确定绿原acid-overlapping光谱erva样本。

11.5色谱发展的时候,24日和12分钟。分别为苷配基、苷和黄嘌呤。八多酚的分析了芦丁和绿原酸,以及苷配基槲皮素、山柰酚、咖啡酸被确定和量化。两个黄嘌呤分析、咖啡因和可可碱,测定(图2)。量化是基于曲线下的面积使用五个乐队和不同数量的标准一式三份。提出了量化表的结果2。

表2
结果量化个人类黄酮、酚酸和黄嘌呤。
(一)
(一)
(b)
(b)
图2
色谱板(a)和三维色谱图(b)的咖啡因标准(6跟踪从左边和9)和样本伴侣(中部)。

尽管在过去的几年里高效液相色谱主要多酚的分析方法巴拉圭茶女士和详细分析了(12,13),我们还没有遇到TLC方法可用的主要来源。作为薄层色谱是一项非常简单的技术,我们试图识别和量化多酚成分,主要是类黄酮和酚酸的伴侣。巴斯托斯et al。8)没有检测槲皮素、杨梅酮和山柰酚输注从干伴侣叶子用高效液相色谱法。这可能是由于不恰当的选择为提取溶剂,提取时间不足,或可怜的水解苷苷配基被确定。因为它可以注意到从结果表2最常采用酸水解用于测定总类黄酮糖苷配基形式(Christ-Muller方法)没有提供完整的配糖体降解芦丁。

虽然先进技术等个人多酚的分离和量化质(13,14),我们使用简单的TLC方法与效果板来确定槲皮素和山柰酚巴拉圭茶在大量的2.2毫克/克和4.5毫克/克,分别。

薄层色谱分析的结果同意methylxanthines的总含量:5.4毫克/克的咖啡因和可可碱2.7毫克/克,而总黄嘌呤7.6毫克/克 。这些结果表明,薄层色谱法与微可以用于识别以及测定咖啡因和可可碱巴拉圭茶有记住,最常见的方法只耗时滴定测定(8]。

4所示。结论

根据获得的结果,可以得出结论:薄层色谱分析是一个适当的技术,个人多酚的分析以及黄嘌呤。个人methylxanthines对应光谱光度测量的内容确定总黄嘌呤。

薄层色谱法是现成的技术,它可以很容易地用于分析多酚和黄嘌呤的原料,不同配方的食物和膳食补充剂伴侣。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

承认

这项工作是财务支持的科学、教育和体育克罗地亚共和国(授予号。006-0061117-1237和006-0061117-1237)。