的分离独联体- - -反式细辛脑的菖蒲属tatarinowii通过制备气相色谱

文摘

制备气相色谱法(包括)方法是同分异构体分离的开发(独联体- - -反式细辛醚)的精油菖蒲属tatarinowii。石油主要是分馏硅胶色谱使用不同比例的石油醚和乙酸乙酯作为溶剂梯度洗脱。然后包含同分异构体的混合物的分数通过热解色谱进一步分离。不锈钢的化合物分离列挤满了10% ov - 101 (3 m×6毫米,身份证),然后是废水是分成两个气体流动。百分之一的污水传递到火焰离子化检测器(FID)检测和剩余的99%是针对馏分收集器。两个同分异构体收集90年之后单独注射(5 uL)的收益率178毫克和82毫克,分别。此外,所得化合物的结构被确定为独联体- - -反式细辛脑的¹H - - -¹³分别、光谱。

1。介绍

同分异构体是相当常见的从天然植物精油。独联体- /反式——或者β- /α-asarones是主要的活性成分菖蒲属tatarinowiiSchott,传统中药常用的提高学习和记忆的1]。细辛醚是已知的致癌物质(2,3]。实际上,的神经保护作用α细辛醚(4,5),β细辛醚(5- - - - - -11)已被深入研究,α细辛醚被发现比表现出更强大的影响β细辛醚(5]。此外,α据报道,细辛醚降低补药癫痫的发生率和持续时间由最大电休克(12]和pentylenetetrazole [13]。进一步的研究表明活动α细辛醚在各种动物癫痫模型14)和噪声应激效应(15]可能基本上占抗氧化性能。此外,hypolipidaemic [16- - - - - -20.)和放射防护效果(21的α细辛醚也被报道。除此之外,β细辛醚,有毒和杀菌效果,显示了潜在的储藏物害虫控制(22]。

另一方面,同分异构体通常有相似的质谱,这将使这些化合物的准确识别不可能只基于质量数据。例如,furanodienone可以完全转化为莪术酮在精油的gc - ms分析姜黄粉末(23]。和质谱furanodienone和莪术酮是非常相似的,这导致错误的识别furanodienone莪术酮没有参考化合物(24]。到目前为止,高效液相色谱法(25- - - - - -28和相29日- - - - - -32)是两种最常用的技术分析细辛醚。此外,细辛醚异构体也显示类似的质谱(33),这使这些化合物的识别困难时参考化合物。因此,分离和纯化的化合物的同分异构体分析目的是重要的。然而,传统的硅胶色谱通常不足以解决密切相关的物质和同分异构体33]。许多有机化合物气相色谱分离提供了更好的。因此,制备气相色谱法(包括)应该是一个有前途的替代或补充分离同分异构体的精油。是我们以前的报告(连续的研究34),包括申请的隔离顺式和反式-细辛脑的精油菖蒲属tatarinowii。

2。材料和方法

2.1。材料

精油的菖蒲属tatarinowii购买从江西霁西安FuDa自然医学石油工厂(江西,中国)。硅胶(100 ~ 200目和200 ~ 300目)柱层析法和硅胶(GF_254年)薄层色谱法(TLC)从青岛分公司购买海阳化工厂(分公司青岛海洋化工有限公司有限公司山东、中国)。石油醚(PE)和乙酸乙酯(EA)均为分析纯(有限公司重庆川东化工有限公司,中国)。凭证标本的菖蒲属tatarinowii石油沉积在制药学、化学与化学工程学院,重庆大学,重庆,中国。

2.2。样本Preparation-Silica凝胶色谱法

总之,53.6 g的精油菖蒲属tatarinowii是混合着100 ~ 200目硅胶(比例是1:1.2),然后混合样本遭受到一列(60厘米×6.0厘米,外径)挤满了800克200 ~ 300目硅胶和洗不同比率的PE和EA梯度洗脱溶剂。越高的极性部分分数筛选了PE: EA = 20: 1收集我们重复通过硅胶层析分离,直到纯细辛醚异构体的混合物(一个深紫红色的现场检测到TLC)。然后目标污水收集(约2克得到了细辛醚异构体的混合物)和浓缩前注入热解色谱系统。

2.3。热解色谱系统

热解色谱系统修改基于sc - 2000 GC仪器(Chuanyi分析仪有限公司重庆,中国)(34]。它配备了一个不锈钢列挤满了10% ov - 101 (3 m×6毫米,身份证),一个火焰离子化检测器(FID),一个特殊的废水分流与最低死体积,和一个自制的制备馏分收集器。上的数据被收集和分析hw - 2000色谱工作站(南京Qianpu软件有限公司,中国)。

高纯氮(N₂)作为载气的流量25毫升/分钟。进口和支撑材温度为230°C和250°C,分别。在220°C列温度是权力平等主义的。废水被分裂成两个流,一个(1%)对支撑材和其他(99%)馏分收集器使用一种特殊的气体污水分流。两个限制器阀是用来控制分流。为了供应足够的气流FID检测、辅助气体(N₂10 mL / min)说,之前到达探测器。5卷μL细辛醚异构体混合物注入。被列分离后,分数收集2毫升陷阱充满了乙酸乙酯。捕获时间和峰值保持时间同步。孤立的分数被毛细管GC和GC - ms分析。

2.4。GC-FID和gc - ms分析

纯度鉴定进行了sc - 6000 GC仪器(Chuanyi分析仪有限公司重庆,中国)。化合物分离的AC-5熔融石英毛细管柱(30 m×0.32毫米,0.25μ米,上海黄金交易所的)。进口和支撑材温度为250°C和270°C,分别。注入体积是0.1μl .载气是N₂。列温度维持在105°C 10分钟,和增加10°C分钟⁻¹到150°C,保持在150°C 1分钟,然后在5°C最小值增加⁻¹到180°C,最终230°C的速度10°C min⁻¹在230°C, 2分钟。

GC - ms进行跟踪超气相色谱仪器耦合DSQ II质谱仪和2.0.7 Xcalibur版本软件(美国热费希尔科学,波士顿,MA)。化合物分离的HP-5MS (30 m×0.25毫米,身份证)毛细管柱涂有0.25μ电影5%苯基甲基硅氧烷。列的温度维持在80°C 2分钟,然后增加8°C min⁻¹到220°C。分裂注入分流比为1:19岁,高纯氦作为载气的流量0.9 mL / min。谱仪是在电子轰击(EI)模式,扫描范围是10 - 900年阿姆河,电离能是70 eV,扫描速率为0.34 s /扫描。注射温度和电离源温度是300和230°C,分别。

3所示。结果与讨论

3.1。包括隔离细辛醚异构体

GC色谱细辛醚异构体混合物通过热解色谱FID检测记录在图给出1。它被用作基础的两个分数(F1和F2)集合由毛细管GC和GC - ms分析了系统评价的热解色谱的分辨率和收益率。90年之后注射,这是导致大量的178毫克(F1)和82毫克(F2)化合物在各自的陷阱,分别。

3.2。识别和收益率收集分数

毛细管GC色谱质谱的峰值收集的每一个部分在图2。指出两个同分异构体可由热解色谱分离,导致高纯度产品(图2)。实际上,同分异构体等常规方法难以分离的硅胶色谱法。如图3,这两个分离同分异构体(F1和F2)具有相同的保留因子(R_f)值和类似的颜色(深紫红色的)。因此,包括显示优势传统的硅胶层析分离和制备的不稳定的同分异构体。

此外,获得的分数被女士(图确定2),¹H和¹³C NMR谱(见附录),和分数1和2被确定为独联体- - -反式分别为细辛醚(图4)。

4所示。结论

制备GC在3 m×6毫米列使用支撑材达到高峰,废水分流和馏分收集器与适当的显示分辨率(分辨率(R_年代)= 1.49)和产量获得纯在毫克级别波动的同分异构体。

附录

核磁共振数据的独联体- - -反式细辛醚:分析AV500 NMR(力量、瑞士),溶剂:CDCl₃、内部标准:经颅磁刺激

独联体细辛醚(F1) [35- - - - - -37]
¹核磁共振(CDCl₃)δ:6.85 (1 H,年代6),6.54 (1 H,年代H-3), 6.49 (1 H,dd,J= 1.5,11.5赫兹,第7),5.77 (1 H,dq,J= 7.0,11.5赫兹,H-8), 1.84 (3 H,dd,J= 2.0,7.0赫兹,H-9), 3.90 (3 H,年代,2-OCH₃),3.84 (3 H,年代,5-OCH₃),3.81 (3 H,年代,4-OCH₃)。
¹³理化性质(CDCl₃)δ:151.6 (c - 4), 148.6 (c - 2), 142.5(颈- 1),125.9(即),124.9 (8),118.1 (c - 5), 114.2(其他),97.6(颈),56.7 (5-OCH₃),56.5 (2-OCH₃),56.2 (4-OCH₃),14.8 (C-9)。

反式细辛醚(F2) [35,37]
¹核磁共振(CDCL₃)δ:6.95 (1 H,年代6),6.48 (1 H,年代H-3), 6.65 (1 H,dd,J= 1.6,16.0赫兹,第7),6.09 (1 H,dq,J= 7.2,16.0赫兹,H-8), 1.89 (3 H,dd,J= 1.6,7.2赫兹,H-9), 3.90 (3 H,年代,2-OCH₃),3.88 (3 H,年代,5-OCH₃),3.84 (3 H,年代,4-OCH₃)。
¹³理化性质(CDCL₃)δ:150.8 (c - 4), 148.9 (c - 2), 143.5(颈- 1),125.2(即),124.5 (8),119.2 (c - 5), 98.1(其他),56.8 (5-OCH₃),56.6 (2-OCH₃),56.2 (4-OCH₃),18.9 (C-9)。

确认

这项工作得到了CQ CSTC自然科学基金项目(2010 bb5070),中国国家自然科学基金(21175159)和科技部国际合作项目(2010 dfa32680)。

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