文摘
客观的。验证HPV感染之间的联系和合并感染的存在(沙眼衣原体,阴道毛滴虫,淋病奈瑟氏菌马拉尼昂州的女性。方法。人乳头状瘤病毒dna检测是由嵌套PCR,使用引物PGMY09/11和GP + 5 / GP + 6。传统的识别性传播代理,使用以下引物PCR进行:KL1 / KL2 (沙眼衣原体),TVA5 / TVA6 (阴道毛滴虫),HO1 / HO3 (淋病奈瑟氏菌)。DNA-HPV阳性样本进行自动测序基因分型。结果。评估353名妇女中,204(57.8%)人乳头状瘤病毒dna,其中140(68.6%)表现出人乳头状瘤病毒/性传播感染,只在64年(31.4%)人乳头状瘤病毒。t .鞘突表现出积极的与人乳头状瘤病毒感染( )。女性宫颈病变是主要(327/92.6%);然而,最多的病变在妇女人乳头状瘤病毒/合并感染(18/8.8%)。多元回归分析表明,人乳头状瘤病毒只和相伴的人乳头状瘤病毒/ STI能够表明上皮病变的发生(R= 0.164;R2 = 0.027)。结论。研究结果表明,的存在t .鞘突可以促进人乳头状瘤病毒感染,和人乳头状瘤病毒/坚持协会可能会影响宫颈上皮内病变的发展,是宫颈癌的前兆。
1。介绍
人类乳头状瘤病毒(HPV)是一种最常见的性传播感染(性病)在世界范围内,在男性和女性感染世界上约80%的性活跃人群(1]。超过150个病毒类型已确定,至少13类型有可能造成持续感染和宫颈病变的进展(2]。
尽管大多数人乳头状瘤病毒感染病例无症状和瞬态,一些病毒类型,如人类乳头瘤病毒16和18、与风险增加发展中男性和女性的肛门-生殖器癌症,包括宫颈癌和阴茎癌(1]。在女性中,宫颈癌是第四个最常见的类型,有99%的病例与HPV感染有关(3]。
然而,高危HPV感染并不是一个足够的理由致癌的发展过程(4]。其它性传播感染(性病)也代表一个公共卫生问题,世界上每天有超过100万人感染,并可导致宫颈病变的进展(5]。他们通常导致妇女和症状的多样性与高发病率和死亡率在性活跃人群(5]。
HPV感染和其他微生物之间的关系起着重要的作用在宫颈病变的进展癌症(6]。人乳头状瘤病毒和其它微生物之间的相互作用,如沙眼衣原体,阴道毛滴虫,淋病奈瑟氏菌可能导致人乳头状瘤病毒引起的损害,以及持续感染和癌症进展(7- - - - - -9]。
与合并感染的存在相关联的主要因素是微生物引起的慢性炎症,可以作为发起人的致癌作用诱导的发生显著的细胞和分子的变化。炎症细胞增殖,招聘,增加产量的活性氧(ROS)在炎症过程中会导致损伤和抑制DNA修复(7]。这些变化引起的性传播感染使宫颈上皮细胞更容易激活癌基因突变,灭活肿瘤抑制蛋白,因此,促进人类乳头瘤病毒诱导的肿瘤病变的作用[7,10]。
准确的估计HPV和合并感染的患病率是有限的,尤其是在一般人群。然而,流行病学数据是必不可少的有效的策略发展的预防和早期诊断的人乳头状瘤病毒和其它性传播感染,以及预防宫颈癌。因此,我们试图评估HPV感染之间的联系和合并感染的存在(沙眼衣原体,阴道毛滴虫,淋病奈瑟氏菌)在女性参加公共卫生系统(SUS)在马拉尼昂州,巴西。
2。方法
2.1。研究设计
这是一个横断面和noninterventional研究353年的性行为活跃的女性妇科保健的公共卫生系统用于圣路易斯,马拉尼昂,巴西,2018年3月/ 3月/ 2019。所有个人回答基于验证仪器的半结构式问卷,评估社会人口特征、性行为、吸烟状况、和性传播感染的历史。
以下排除标准应用:孕妇产后45天或少于,曾经历了一次子宫切除术或每年的那天商量。这项研究是马拉尼昂联邦大学的伦理委员会批准(2.383.604数量)。所有参与者提供书面知情同意。
2.2。宫颈细胞学
得到了常规细胞学涂片与艾尔抹刀(ectocervical样本)和子宫刷(子宫样品),扩展在载玻片,用乙醇固定,使用巴氏染色技术。巴氏涂片细胞学检查是使用2001贝塞斯达报告系统报告。
2.3。样本收集和DNA提取
收集DNA样本收集并放置在HC2缓冲区(试剂盒、钙、美国),和冷冻−20°C到处理。/人乳头状瘤病毒DNA提取DNA是由使用QIAamp迷你和血液工具包(试剂盒、钙、美国)根据制造商的指示。总DNA分离,筛选了100毫升AE缓冲区,并存储在−20°C。中提取DNA是量化使用NanoVue系统(通用电气医疗集团生命科学,小都,英国)。
2.4。人乳头状瘤病毒检测
DNA的存在/ HPV检测使用嵌套与引物聚合酶链反应(PCR)嵌套集PGMY09/11(第一轮PCR)和GP + 5 / GP + 6(第二轮PCR)使用铂™Taq DNA聚合酶系统(英杰公司™,纽约,美国)(11]。所有样品都提交β球蛋白放大。
第一轮混合是由25μL最后的体积,包含10 pmol每个引物,10 x MgCl2反应缓冲区包含1毫米,10毫米核苷酸,1 U的Taq铂(表达载体),和100 ng基因组DNA (11]。放大周期由最初的变性2分钟95°C紧随其后40变性周期为40秒95°C,退火的40秒55°C, 40秒在72°C扩展。
第二轮(GP + 5 / GP + 6)由一个初始变性在95°C 4分钟紧随其后的是45变性的周期为45秒95°C,退火在40°C 1分钟,在72°C和扩展了1分钟。反应混合物是由25μL最后的体积,包含10 pmol每个引物,10倍反应缓冲区,MgCl2 1毫米,10毫米的核苷酸,2 u的Taq铂(表达载体),Milli-Q水,100 ng的基因组DNA (11]。
2.5。性病检测
的存在阴道毛滴虫,淋球菌,沙眼衣原体用聚合酶链反应(PCR)检测用引物(2013):建议TVA5/6, HO1 / HO3,分别和KL1 / KL2和SuperMix巴西系统(热费希尔、巴西)。
反应的最后一卷50μL, 41μL (SuperMix 10°pmol每个引物,和100 ng的基因组DNA。根据所使用的引物放大周期变化。放大的t .鞘突,反应发生在94°C,最初变性5分钟,45 94°C的周期为30秒,退火在47°C 1分钟和扩展为45秒72°C,和最后一个扩展周期在72°C 10分钟。放大的c . trachomatis,反应发生在94°C,最初变性5分钟,35周期为30秒94°C,退火在55°C 1分钟和扩展为45秒72°C,和最后一个扩展周期在72°C 10分钟。放大的n球菌,反应发生在94°C,最初变性5分钟,40 94°C的周期为30秒,退火在55°C 1分钟和扩展为45秒72°C,和最后一个扩展周期在72°C 10分钟。
2.6。人乳头瘤病毒基因分型
使用基因组DNA PCR产品放大净化净化设备(Sigma-Aldrich,密苏里州,美国),标签使用大染料终结者v3.1循环测序工具包(应用生物系统公司,培育城市,CA),并分析了使用ABI棱镜3130 xl基因分析仪(应用生物系统公司)。序列的编辑和分析使用4峰软件(Nucleobytes,阿姆斯特丹,荷兰)。人乳头瘤病毒基因型被确定使用BLASTn(基本的局部比对搜索工具,http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)。
2.7。数据分析
中给出的数据被认为是绝对比例,使用X2(卡方检验)或确切概率测试来评估人乳头状瘤病毒/性病感染之间的关系和社会人口和临床因素。评估与HPV相关的危险因素及其意义,所使用的优势比测试。验证的相关性和预测变量对宫颈病变的外观,二进制逻辑回归和优势比进行。95%置信区间进行分析,采用数据被认为是具有统计学意义值≤0.05。所有测试使用IBM SPSS统计®version 24.0进行。
3所示。结果
总共353名妇女(年龄平均39.75岁,SD±13.85)参加公共初级卫生保健包括在这项研究。人口资料(表1)是高中教育完全/不完整的女性(54.7%),自称棕色(61.5%),和有一个固定的合作伙伴(51.2%)。关于性习惯和风险因素,大多数女性初潮前13岁(57.8%),15岁后的第一个性交(62.9%),不使用避孕套在性交过程中(70.8%),有3个性伴侣在生活(62.3%),3妊娠(70.3%),声明为一个不抽烟的人(73.9%)。在参与者中,204例(57.8%)阳性DNA-HPV,其中140(68.6%)人乳头状瘤病毒和其它性传播感染(性病)和64(31.4%)人乳头状瘤病毒。女性表现出人乳头状瘤病毒/ STI合并感染,1 STI除了人乳头状瘤病毒被发现在88年(62.9%)(图1)。在妇女没有显示HPV, 59例(39.6%)呈现感染至少一个评估性传播感染的。在那些没有显示HPV感染,59例(39.6%)没有其他性传播感染,和60(40.2%)至少有1性病。
图2显示了人乳头状瘤病毒感染和性传播感染病例的分布根据病毒类型识别。有一个高流行的高致癌风险妇女人乳头状瘤病毒合并感染;然而,这个结果并不显著。女性表现出单一的HPV感染,20(31.3%)致癌病毒类型的低风险。
社会人口和社会经济数据方面,如年龄、肤色、收入和教育水平,类似女性只有HPV,妇女人乳头状瘤病毒/ STI合并感染,女性HPV -(表1)。尽管大多数女性低社会经济指标、月收入显示统计学意义值( ),表明女性小于1的最低工资已经呈现HPV /合并感染的风险更高。发现没有明显的统计学差异特征相关的性生活习惯之间的团体,如使用避孕套在性交过程中,合作伙伴的数量,初潮的年龄、首次性交。
优势比分析显示t .鞘突与HPV感染呈正相关( )(表2)。因此,参与者t .鞘突是2.081倍,现在的人乳头状瘤病毒感染与女性相比没有感染。同样,更年期是统计与HPV感染有关,除了一种因果关系。1.72,处于更年期的女性更容易患上HPV感染妇女相比,仍有月经周期。
性伴侣的数量和怀孕是保护性因素关于HPV感染的存在。这些数据意味着有更少的性伴侣的女性和怀孕0.033和0.301呈现人乳头状瘤病毒的风险较少,分别比女性拥有更多的合作伙伴和更多的怀孕。
关于宫颈变化,327名(92.6%)妇女没有宫颈病变巴氏试验发现,在那些人乳头状瘤病毒只有和那些人乳头状瘤病毒和其他性传播感染有关。尽管减少宫颈病变的研究参与者的数量,只有26(7.4%)、最大数量的变化在妇女人乳头状瘤病毒和合并感染(18/8.8%)。确定更改不典型增生鳞状细胞(ASC-US 10/2.84%),低度鳞状上皮内病变(LSIL 8/2.26%),和非典型鳞状细胞不能排除高档上皮内病变(ASC-H 6/1.70%)。
二元逻辑回归分析验证,HPV的孤立存在,n .淋病,t .鞘突,c . trachomatis和人乳头状瘤病毒/ STI与此同时为宫颈病变的发展因素(表3)。该模型包含这些预测是重要的(X2(5自由度)= 61.63; ,R2 = 0.260);然而,只有伴随出现的人乳头状瘤病毒/性病是一个显著的因素,导致宫颈病变发展(OR: 12.63;95%置信区间:4.750—-33.632)。相关的人乳头状瘤病毒和性传播感染与细胞的存在正相关变化,这意味着女性感染人乳头状瘤病毒的数量/性传播感染增加,宫颈病变的数量也增加了。此外,妇女人乳头状瘤病毒/性传播感染合并感染代表12.63倍,形成宫颈病变。
4所示。讨论
在这项研究中,数据从性行为活跃的女性被用来评估人乳头状瘤病毒的存在和其他性传播感染(性病),以及它们之间的关系对宫颈病变的进展。研究参与者被女性寻求基本卫生单位位于地区宫颈癌筛查的困难访问和社会脆弱性。
人口研究中HPV感染非常普遍,其中,人乳头状瘤病毒与另一个STI比独自HPV感染的更普遍。t .鞘突表现出积极的与人乳头状瘤病毒的存在,表明这种寄生虫增加女性呈现HPV感染的风险。美世和约翰逊(2018)建议产生的亚硝胺t .鞘突促进宫颈炎症,造成伤口,让人乳头状瘤病毒穿透宫颈上皮的基底层。其他的研究也表明之间的关系t .鞘突和宫颈上皮内病变的风险增加12- - - - - -14];然而,这一事实并没有观察到在目前的研究。
关于HPV分类、高致癌风险类型在女性更普遍合并感染(HPV /性传播感染),而低致癌风险类型通常被发现。这些数据表明,由于其侵略性的不同特点,病毒类型可能是导致其他性传播感染宫颈上皮细胞的存在,尽管这些数据没有统计学意义。在这种背景下,伴随女性由高危人乳头状瘤病毒感染和其它性传播感染,如t .鞘突,c . trachomatis,n球菌可能促进了更积极的宫颈微环境的变化,从而使免疫系统很难消除这些病原体。
研究旨在评估性传播感染的患病率在一般人群主要集中在艾滋病和梅毒的识别15- - - - - -17]。尽管许多研究旨在评估多种性病的患病率,只有少数试图评估之间的关联人乳头状瘤病毒和其他性传播感染与宫颈病变的进展(2,17]。因为目前全球30多个类型的性传播感染和不同方法检测这些病原体,在比较研究中我们需要小心。此外,研究人口的类型也不同,其中大部分是在孕妇,感染艾滋病病毒的妇女,性工作者,同性恋者,或注射毒品者(18]。
在南非进行的一项研究评估人乳头状瘤病毒和五个其他性传播感染的存在,也就是说,单纯疱疹病毒2型- 2),c . trachomatis,n球菌,t .螺旋体16 - 24岁之间的女性。他们发现,47%的女性性传播感染人乳头状瘤病毒和两个,36%表现出人乳头状瘤病毒和1 STI,只有17%人乳头状瘤病毒;然而,没有发现显著关联之间的感染(9]。
同样,Magana-Contreras et al。19评估人乳头状瘤病毒的流行和其他4性传播感染(c . trachomatis,加德纳菌属鞘突,尿道支原体,Ureaplasmaspp)。在意大利妇女寻求常规妇科保健。他们发现了人乳头状瘤病毒与1 STI(33.8%),和流行率最高的是归因于Ureaplasmaspp。19]。
在巴西的一项多中心研究散步流言et al。2)表示,HPV-isolated高于HPV感染/合并感染。女性报道人乳头状瘤病毒/合并感染,女性与继发感染是主要的,主要是由n球菌和艾滋病毒。尽管巴西女性人口进行的一项研究,结果不同于那些在我们的研究报告(2]。一个可能的解释可能是散步流言所使用的方法用于性病检测et al。2),通过参与者的自我报告,不得发生反映这些性病在面试的实际状态。
尽管关于HPV流行呈现相似的价值观和人乳头状瘤病毒/ STI协会,这些研究存在重要的差异。主要的差异是样本数量,STI评估的类型,使用的分子技术,可能有不同的特异性检测的病原体。因此,为了充分理解的影响多个STI HPV的持久性和宫颈病变的进展,有必要优化技术,允许更多的性传播感染的同时检测。
多重性传播感染有可能影响HPV感染,虽然文献数据报告c . trachomatis和t .鞘突主要感染HPV病毒。同样,研究报告c . trachomatis有助于高危HPV病毒的收购;然而,目前的研究没有观察到这两种病原体之间的关联(7,20.- - - - - -22]。我们建议有一个可能的合作多种微生物,导致细胞微环境变化,促进HPV感染。需要进一步分析来评估这些病原体的潜在的个人和他们的角色在HPV感染和病变进展。
更年期还演示了一个积极的与人乳头状瘤病毒的存在,以及原因/效果的关系。这意味着女性在更年期有1.72倍的可能有病毒感染,与女性相比仍有月经周期。更年期荷尔蒙变化所引起的可能导致潜在感染或复活,在女性活跃的性生活的情况下,导致收购新感染(23]。高患病率的女性拥有一个稳定的合作伙伴也报道不使用避孕套,在只与HPV感染妇女和妇女人乳头状瘤病毒/合并感染。尽管这些数据没有统计学意义,这可能造成了大量的人乳头状瘤病毒和性病在这个人口。女性在绝经期和稳定的合作伙伴往往认为他们是防止性传播感染,因此,不使用避孕套性交。此外,在婚外关系的发生无保护措施的性交可以支持性病的传播合作伙伴。
性伴侣的数量和平价象征着对HPV感染的保护性因素,这意味着更少的合作伙伴和更少的女性怀孕的风险减少感染人乳头状瘤病毒。高数量的性伴侣和性活动建立的早期发病的危险因素增加获取多种性传播疾病的风险在生活(24]。类似于目前的研究中,Mbulawa et al。24)报道称,至少有一个怀孕的妇女或从4到10的性伴侣在一生中更有可能有HPV感染。高的性伴侣数量增加了接触多种性传播病原体,证明筛查性传播感染和程序应该包括男性和女性意识。
多重回归分析验证,HPV感染,随之而来的人乳头状瘤病毒感染和其它性传播感染与宫颈上皮损伤识别研究参与者之间的子宫颈抹片检查。这意味着女性感染人乳头状瘤病毒的数量和性传播感染(c . trachomatis,n球菌,t .鞘突)增加,女性宫颈病变的数量。这些数据证实了以前的研究,表明多重感染的存在有利于HPV在宫颈上皮的持久性,从而影响病变的进展(12,23,25,26]。
然而,尽管高感染人乳头状瘤病毒和其他性传播感染人群的研究中,这些因素并没有反映在大量的宫颈病变。宫颈癌前病变,减少与人乳头状瘤病毒患病率高,t .鞘突,c . trachomatis,n球菌在评估的妇女中,支持的假设,尽管被配置为宫颈肿瘤形成的重要前体,人乳头状瘤病毒的存在仅为癌症的发展是不够的。其他因素如持久性和致癌病毒类型、病毒致癌基因的表达和病毒基因组整合在宿主细胞对宫颈致癌作用(也有重要的影响27]。
重要的是要强调持续HPV感染与HPV细胞学变化密切相关;然而,由于这是一个横断面研究,这些数据没有评估。从这个意义上说,虽然我们的发现表明HPV-STI合并感染的存在导致宫颈癌的发展变化,未来的研究是至关重要的调查这些合并感染的作用导致病毒的持久性和颈癌前期病变的进展(De Sanjose;Brotons;Pavon, 2018;道芭,2016;Verteramo et al ., 2009)。这种限制与纵向研究可以得到解决,从而评估妇女的能力,消除HPV病毒以及其他性传播感染在给定的时间内,对宫颈病变和随后的状态。
合并感染的存在与人乳头状瘤病毒已经被报道在其他的研究中,由于其与宫颈上皮内病变的进展。然而,微生物检测研究中也各不相同。在妇女人乳头状瘤病毒,合并感染的存在c . trachomatis,Ureaplasma体,阴道毛滴虫,淋病奈瑟氏菌是确定的主要性传播感染(7,8,17,22,24,28]。
在巴西进行的一项研究[1]试图评估人乳头状瘤病毒和132年合并感染女性的存在有或没有宫颈病变。他们确定了稳定的联盟,HPV感染,t .鞘突,加德纳菌属鞘突与宫颈病变的发生有关;然而,这项研究并没有评估的影响伴随的人乳头状瘤病毒和其他感染宫颈病变的发展。类似的研究由利马et al。8]证明了人乳头状瘤病毒与CIN(宫颈上皮内瘤),以及c . trachomatis和CIN,但随之而来的由这两种病原体感染与宫颈病变无关。
合并感染的存在可以降低免疫系统消除HPV感染的能力,除了支持宫颈病变的进展通过不受监管的病毒致癌基因的表达(29日]。性病也能导致一个慢性炎症过程,促进免疫介质的分泌增加活性氧的生产,因此,导致组织损伤和有利的条目和性能HPV病毒致癌基因(7]。
这些病原体也可以修改阴道微生物群的构成,导致宫颈微环境的故障30.]。结合HPV的存在和其他性传播病原体,遗传等因素,性行为,和卫生习惯不同在不同的国家和地区会影响阴道微生物群的组成(30.]。低经济地位和采用高风险的性行为可能会导致大量的人口研究中人类乳头瘤病毒感染和其它性传播感染。
5。结论
本研究提供信息在人乳头状瘤病毒和其他性传播感染女性协会在巴西东北部的分子检测这些病原体。东北地区,尤其是马拉尼昂,低社会经济利率,导致宫颈癌和性传播感染的高在这个人口。
研究结果表明,t .鞘突可能忙HPV感染,和人乳头状瘤病毒/ STI协会可能导致宫颈上皮内病变的发展,是宫颈癌的前兆。重要的是,我们的研究不能评估参与者之间的持久的HPV感染,这可能会导致一个更好的理解这些的作用性传播感染HPV感染的自然史以及前体癌症病变的发展。这些性传播感染,包括人乳头状瘤病毒,是一个重要的公共卫生问题,因为他们发展的多个相关泌尿生殖并发症,如不孕不育和癌症。虽然协会人乳头瘤病毒与宫颈癌之间建立,进一步研究关于HPV /性传播感染需要执行为了理解的多重和复杂的因素可能参与宫颈致癌作用。
数据可用性
文章中的数据是可用的。
附加分
简而言之,这项研究提供信息在人乳头状瘤病毒和其他女性STI协会在巴西东北部的分子检测这些病原体。我们的研究表明,t .鞘突可能会更青睐HPV感染和人乳头状瘤病毒/ STI协会可能会影响宫颈癌前病变的发展。
信息披露
投资者没有参与研究设计、数据收集和分析,决定发表,或准备的手稿。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项研究受到了基础研究和科技开发的支持马拉尼昂州(FAPEMA)。