表面的鞘磷脂酶的识别衣原体肺炎:可能的角色在进入宿主细胞

文摘

autoendocytosis我们最近提出了一个新颖的机制,对于某些微生物进入宿主,用一个关键的角色扮演的鞘磷脂的sphingomyelinase-catalyzed局部转换神经酰胺,的生物物理性质的差异这两个脂质提供驱动力。唯一要求微生物利用这样的机制是,他们应该有一个催化地活跃SMase在他们的外表面,而靶细胞应该在外部暴露鞘磷脂质膜的传单。为了可能的微生物的候选人,也可以利用这一假定的机制,我们进行了序列相似性搜索SMase。因为有趣的细胞和生化特征知之甚少的条目衣原体进入宿主细胞这些微生物是特别感兴趣的。SMase活性测定在体外从孤立的c .肺炎小学(EB)和溶解产物从尸体大肠杆菌细胞转染质粒表达CPn0300蛋白质序列相似性SMase。最后,预处理与外生SMase导致宿主细胞丧失的质膜鞘磷脂减毒EB的附件。

1。介绍

鞘磷脂酶(SMase鞘磷脂磷酸二酯酶,E.C.3.1.4.12)是一种水解酶,裂解从鞘磷脂胆碱磷酸基,产生神经酰胺。有趣的是,有一个广泛的细菌,病毒和寄生虫,神经酰胺需要以一种方式或另一种方式进入nonphagocytic细胞和引起感染,例如,淋病奈瑟氏菌(1),铜绿假单胞菌(2),金黄色葡萄球菌(3),Semliki森林病毒(4],辛德毕斯病毒[5),鼻病毒(6]。同样的,恶性疟原虫需要SMase感染的红细胞(7]。分子水平的机制仍然难以捉摸。假单胞菌和奈瑟氏菌属宿主细胞的激活SMase但是,例如,最剧烈的分枝杆菌(8),perfringens梭状芽胞杆菌(9),蜡样芽胞杆菌(10),单核细胞增多性李斯特氏菌(11),幽门螺杆菌(12),而钩端螺旋体interrogans(13),有内生SMase或sphingomyelinase-like蛋白质。

之前我们已经证明了局部显微注射后SMase矢量形成的神经酰胺浓缩在鞘磷脂囊泡含有巨大的脂质体膜模型(14]。更具体地说,“内部”囊泡的释放到巨大的脂质体或泡出芽后从其外表面被这种酶的作用外或内囊泡的传单,分别。为此,外生SMase已被证实在ATP-depleted诱导巨噬细胞和成纤维细胞挤压进入细胞质中大约400 nm直径从质膜小泡15]。有证据表明,萌芽和融合可能没有协助蛋白质如网格蛋白(16]。以上的机械基础形态过渡引起SMase很容易在形式的合理化鞘磷脂的截然不同的生物物理特性和神经酰胺。总之,在鞘磷脂是混相流体磷脂酰胆碱的影响,神经酰胺是横向隔离17,18]。因此,在行动的过程中SMase混合鞘磷脂/膜磷脂酰胆碱生成的神经酰胺变得丰富到microdomains [19]。在物理化学方面这是一个等温转变引发了一个酶反应,造成脂质转变从流体无序相相图(l_d)进入两相区,由l_d和固体命令(l_年代)阶段,后者被丰富的神经酰胺(20.]。

神经酰胺的横向隔离可能会导致一个有效的分子间氢键之间的小而弱水化神经酰胺headgroups [19- - - - - -23];他们紧侧包装成为允许损失后的空间排斥在headgroup层面上由于SMase乳沟的强水合胆碱磷酸一半。严密的包装是由链链进一步增强范德华相互作用和减反式→偏转异构化。神经酰胺是容易将促进宏观内陷形成的膜(14)通过膜-自发曲率,后者最终表现为反向的形成六角相H_二世由脂质(24,25]。因为每个分子的界面面积,为神经酰胺明显小于鞘磷脂(21),不对称的神经酰胺酶形成双分子层在外部或内部传单也导致两层之间的区别。这些特性,不同的区域相邻的单层传单和神经酰胺的负面自发曲率包含域,连同他们的高抗弯刚度提供驱动力的观测矢量形成囊泡膜的行动SMase [14]。产品扩散、域的形成和矢量萌芽到衬底泡内部也被认为当一个固定化SMase是作用于鞘磷脂含有巨大的脂质体膜(26]。后者研究证实,它是反应的分子性质的产品而不是lipid-protein交互本身这是提供驱动力。

促使SMase反应我们的上述后果表明,微生物窝藏这种酶外表面和接触的细胞外传单靶细胞的质膜上面会诱发相变与种族隔离的神经酰胺和潜规则包含“autoendocytotic”囊泡到的微生物的宿主细胞的细胞质(14]。因此,感兴趣的蛋白质序列数据库搜索可能识别微生物,这有可能利用这种机制。因为属的条目的特征衣原体到他们的宿主细胞这些微生物是特别感兴趣的。这些微生物有一个有趣的和独特的发育生长周期。总之,后者开始感染时,新陈代谢活动,相对较小(0.3μ米直径)基本身体(EB)附着于宿主细胞表面,这在某种程度上刺激吸收进入宿主内等离子体派生液泡膜称为夹杂物(27,28]。几个主机表面受体和配体的EB建议参与他们的依恋和内化29日- - - - - -33]。然而,条目的详细分子机制衣原体进入宿主细胞仍然难以捉摸。内化后几小时内EB区分成更大(约1μ米直径)和新陈代谢活跃网状机构(RB)。随后的复制和感染周期在2 - 3天完成,当细菌再次分化EB,从主机释放到细胞外的媒体(27]。传染性c .肺炎EB包含基因组DNA编码容量的大约1000个基因和耐环境压力,允许他们的生存以外的宿主细胞。

我们搜索在网上的假定的表面蛋白c .肺炎(34)为潜在SMase序列。更具体地说,我们一致的建议外膜蛋白的序列c .肺炎中性SMase引用的序列组(表1)。有趣的是,Tr|Q9Z8N8|Q9Z8N (CPn0300 omp85模拟)c .肺炎进球很好(73/100)T-coffee对齐,轴承的高度整体结构相似人类中性SMase sp|O60906|NSMA。后者的对齐和Tr|Q9Z8N8|Q9Z8N显示强烈的相似性在质子绑定和底物识别的sma材料领域。Tr的顺序|Q9Z8N8|磷酸Q9Z8N进一步包括一个通用绑定域(IMP脱氢酶/ GMP还原酶域),类似于碱性sma材料。这些研究都辅以SMase的示威活动c .肺炎海尔哥哥在体外。宿主细胞的质膜的预处理体内添加SMase减毒的入口和/或增长c .肺炎在这些细胞。

2。材料和方法

2.1。材料

Bodipy-sphingomyelin (Bdp-SM) Bodipy-ceramide (Bdp-cer)和Amplex红色装备获得的分子探针(尤金,或者)。上面的纯度验证了脂质薄层色谱法(TLC)对硅的acid-coated板块(默克公司,达姆施塔特,德国)开发与氯仿/甲醇/水(65:25:4卷)。Bdp-SM和Bdp-cer氯仿的浓度测定spectrophotometrically使用77000厘米⁻¹和91000厘米⁻¹分别为他们的摩尔消光系数。(³⁵S]半胱氨酸和蛋氨酸是来自Amersham生物科学。Proanalysis级溶剂来自默克,SMase金黄色葡萄球菌从σ,和其他化学物质标准的来源。

2.2。序列比较和比对

假定的外表面蛋白序列c .肺炎(34)与那些在我们SMase参照组(表1)。后者是随机选择从所有已知SMase序列,与高度的整体关于亚科和物种多样性。外膜蛋白c .肺炎,最好得分与该参考集团进一步一致成对的SMase参照群体最大的相似之处。随后,对齐的亚科SMase对齐对蛋白质的候选人。特别关注发布的保守功能重要的序列。T-coffee(版本2.88)被选为这个调查,因为它已被证明是更准确比ClustalW序列只有不到30%的身份(35]。这个问题主要关心的是尽管拥有相同的sma材料催化活性序列相似性较弱,包括其积极的网站(见部分4)。(蛋白质域包含了家庭数据库)主题(36]在CPn0300搜索算法可在Expasy (http://myhits.isb-sib.ch/)PROSITE数据库。

2.3。的制备c .肺炎海尔哥哥

霍奇金淋巴瘤细胞生长在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEMσ)含10%胎牛血清和20μg / mL庆大霉素,维持在37°C下5%的股份有限公司₂。c .肺炎隔离自动化Kajaani 6(转K6 [37大学教授),最初来自Saikku奥卢,芬兰)传播在霍奇金淋巴瘤细胞和净化。总之,感染细胞后收获和超声破坏细胞碎片被和细菌通过分离纯化葡甲胺diatrizoate梯度(38]。整除的纯化微生物被储存在蔗糖0.25−70°C, 10毫米磷酸钠,磷酸钾,4毫米和5毫米L-glutamic酸性,pH值7.5 (SPG),直到使用。对宿主细胞附件试验,细菌代谢标记与³⁵S]半胱氨酸和蛋氨酸(39]。感染滴度测定制剂的霍奇金淋巴瘤细胞培养和表示为包含形成单位/毫升(IFU /毫升)。当表示c .肺炎EB股与紫外线灭活(2 x 0.120焦耳/厘米²;交联剂cl - 508,英国剑桥Techne),不包含在细胞培养时活细菌。

2.4。测定鞘磷脂酶活动

两个不同的化验的EB SMase活动就业。模拟,因此,我们第一次使用荧光鞘磷脂Bdp-SM作为衬底和监控的出现相应的荧光通过TLC分析神经酰胺的反应。EB (20 - 30μL, 10⁹IFU /毫升)在抢断了50μM Bdp-SM玫瑰在0.5毫米,1.8毫米MgCl₂9毫米CaCl₂pH值7.4,或者,当表示,在抢断缓冲总量0.25毫升用给定的离子浓度。大约48小时后37°C和连续搅拌1.75毫升氯仿/水/甲醇(33:25:1、卷)是补充道。较低的氯仿相收集和干下氮气。残留物被溶解在40μ氯仿和20 LμL整除应用硅酸涂层板上。这些开发1、二氯乙烷/甲醇/水(90:20:0.5,通过卷)。用紫外光照和脂质斑点。Bdp-SM和Bdp-cer被当作标准。

EB SMase活动由半定量的测量也Amplex红试验(分子探针,尤金,或者),遵循制造商的指示。这种间接的方法是基于耦合的酶反应。更具体地说,胆碱磷酸SMase发布的一部分从鞘磷脂首先转化为胆碱和碱性磷酸酶的进一步氧化胆碱氧化酶甜菜碱和H₂O₂。后者与10-acetyl-3反应,7-dihydroxyphenoxazine (Amplex红色)在辣根过氧化物酶的催化反应,生成荧光resorufin,检测到。反应混合物(26)包含在SPG-buffer和总量的0.2毫升的5 mM10-acetyl-3 7-dihydroxyphenoxazine, 2.5毫米鞘磷脂,和2% Triton x - 100 (v / v),连同所需的上述酶的级联。反应是在37°C的开始c .肺炎EB(从0.5×10⁷3×10⁷IFUs,表示)。SMase从金黄色葡萄球菌(0.5毫米)和10μM H₂O₂被用作控制。荧光强度测量SPECTRAFluor加上读者(Tecan AG)、Hombrechtikon、瑞士)使用的激发和发射波长535 - 590纳米,分别。基于对比金黄色葡萄球菌SMase我们可以估计这种酶的活性在EB每IFUμ。

2.5。化验的c .肺炎内化

监控的依恋和内化c .肺炎汇合的霍奇金淋巴瘤细胞单层生长在玻璃盖玻片24-well盘子孵化了30分钟在无血清DMEM 37°C,进一步补充,当表示,与20或50亩/毫升金黄色葡萄球菌SMase。细胞被广泛用DMEM和接种立即洗净c .肺炎转K6或新陈代谢贴上标签c .肺炎转K6感染复数(MOI) 0.003 - -0.1。细胞在2100 rpm离心机在室温和在无血清DMEM培养37°C 1 h,其次是与血清DMEM洗涤。删除附加但不是内化细菌、细胞受到轻度治疗胰蛋白酶(40)和血清DMEM洗。细胞悬浮在PBS是混合着闪烁的鸡尾酒(Optiphase HighSafe3, Wallac,珀金埃尔默生命科学、图尔库,芬兰)和量化放射性液体闪烁计数器(1450 - microbeta Wallac,图尔库,芬兰)。监控内化的增长c .肺炎,接种文化进一步培养48 h在完成37°C DMEM包含0.5μg / mL环己酰亚胺膜固定后用甲醇和沾fluorescein-labeled抗衣原体包涵体衣原体抗体(Biorad大力神,CA)。夹杂物被计算在20个随机40 x领域/盖玻片。数据从三个平行井相结合来计算均值和标准差。

2.6。克隆CPn0300和c . muridarumTC_512

基因组DNA制备c .肺炎使用麦格纳纯紧凑的核酸隔离设备(罗氏应用科学)。放大了CPn0300 PCR和克隆到BamHI-XhoI pGEX-4T-3向量的网站(通用电气医疗集团生命科学,乌普萨拉,瑞典)。使用pGEX-specific引物测序克隆的质粒DNA验证CPn0300插入。重组质粒转化成大肠杆菌JM109和胃俞。相应的基因c . muridarum(TC_512)放大了PCR和克隆的SalI-NotI网站pGEX-4T-3向量。的表达CPn0300和TC_512与0.5毫米IPTG诱导。的大肠杆菌细胞被离心收获3小时postinduction(1500克,15分钟)和洗10毫米Tris-HCl (pH值8.0)包含0.1 M氯化钠和1毫米EDTA。细胞悬浮在25毫米Tris-HCl (pH值8.0)包含50 mM葡萄糖和EDTA 10毫米。鸡蛋溶菌酶添加到悬架(最终浓度100μ孕育了g / mL)和混合10分钟。10毫米Hepes-NaOH (pH值7.5)包含0.25蔗糖,1毫米EDTA,蛋白酶抑制剂鸡尾酒添加细胞悬液和混合的结果是用五次探测类型超声发生器在20 W 10分钟。SMase活动的细胞溶解产物进行了分析,利用Amplex红试验。评估生产重组蛋白,诱导细胞溶解产物进行sds - page分析。

3所示。结果

Amplex红试验被用来证实SMase活动c .肺炎和一个粗略的定量的酶活性(数字4(一),4 (b),4 (c))。公布的在这个方法中,胆碱磷酸headgroup SMase转换酶的级联耦合反应荧光最终产品从而使监测进展的水解反应荧光随时间的增加。基于活动的金黄色葡萄球菌SMase作为内部标准我们可以估计大约0.3 pU / IFU SMase活动。测量活动是细菌的数量成比例增加(图4(一))。9毫米Ca的存在^{2 +}增强活动(图4 (b)),而2毫米毫克^{2 +}略抑制(图4 (c))。减少活动测量EB维持5分钟60°C或90°C(图7)。

然后我们调查前如果宿主细胞的质膜鞘磷脂的水解体内添加SMase会影响细胞的感染c .肺炎。有趣的是,预培养霍奇金淋巴瘤细胞金黄色葡萄球菌SMase之前与EB的接种减毒细菌入口和/或增长。这种效果是成正比的SMase添加(图5(一个))。这个衰减也可能源于细胞的凋亡挑战由于SMase我们检查如果细胞预处理SMase激活caspase-3引起的。但是,没有这种酶的活性增加明显(数据没有显示)。这个结果证明凋亡的挑战形成的神经酰胺不能衰减的原因。有趣的是,我们不能看到衰减如果霍奇金淋巴瘤细胞小鼠感染衣原体,衣原体muridarum(数据没有显示)。上述实验中证实了放射性EB被用来量化培养细胞的内化,与肝素预防EB的绑定宿主细胞([41),图5 (b))。我们的数据从而表明鞘磷脂的可用性在宿主细胞的外表面可能代表的一个限制因素c .肺炎内化。

假定的c .肺炎外表面蛋白(34)被T-coffee对齐参考来自不同物种的鞘磷脂酶和亚科从细菌酶在人类中性鞘磷脂酶(表1)。只包含整个的这些蛋白质序列。T-coffee分数序列比对的1 - 100,70 - 100范围视为好值低于50时很穷,揭示缺乏相似。有趣的是,c .肺炎蛋白质Tr|Q9Z8N8|Q9Z8N (CPn0300 omp85模拟)73分。对齐的活性部位包含域序列相似性最高的三个中立的sma材料的CPn0300明显与人类中性SMase sp|O60906|NSMA(图1)。特别感兴趣的是相似的序列被认为与质子结合(42)和底物识别(43]NSMase蛋白家族,高度保守的histidine-proline循环(42(图)被发现在后者的域2)。对所选NSMase蛋白质亚CPn0300得分40,这是大致相同的相似NSMase面包酵母(sp|P40015|ISC1_YEAST)选择NSMase蛋白质亚科。两个人类酶,NSMase1 NSMase2,已确定,前者代表一个遥远的同族体的细菌sma材料(44]。比较这两个CPn0300 sma材料的c .肺炎表明,后者属于组1酶(图1)。有趣的是,是一个包含了大量的多序列比对和隐马尔可夫模型包括许多常见蛋白质域和家庭。的主题包含了IMP脱氢酶/ GMP还原酶(http://myhits.isb-sib.ch/cgi-bin/motif_scan)CPn0300开始被发现氨基酸67 - 388 (36]。

初步鉴定后CPn0300潜在SMase如果孤立感兴趣的研究c .肺炎EB拥有这种酶活性。这是第一次评估孵化纯化EB和鞘磷脂轴承共价链接Bodipy荧光团的n -链。经过48小时的孵化在37°C脂质被孤立在TLC和可视化UV-illumination(图3)。神经酰胺的形成是明显存在的c .肺炎EB和它的内容取决于细菌的数量增加,如图所示的目视检查通道的神经酰胺形成于大约33×10的存在⁶和66×10⁶IFUs(图3,车道B和C、职责)。

宿主细胞表面的重要性鞘磷脂的内化过程c .肺炎进行了研究。预处理的宿主细胞体内添加SMase下降的衣原体包涵体的形成c .肺炎感染。这一现象与SMase补充道。SMase 50亩/毫升、夹杂物的形成抑制了50%以上。预处理的宿主细胞SMase消耗上可用的SM霍奇金淋巴瘤细胞的质膜从而减少衣原体的摄入量。早些时候,艾伦和奎因(45]显示SMase水解后博鸿泰表面细胞,花了3小时才SM内容恢复正常在质膜上。他们还显示,无法访问的SM池(细胞内)不平衡与质膜池,即使长时间的潜伏期。相反,特里同x - 100治疗引起的细胞总博鸿泰鞘磷脂的几乎完全崩溃。

因为鞘磷脂酶活动c .肺炎以前没有报道,膜蛋白可能负责SMase活动进一步调查。

构建重组质粒的表达c .肺炎鞘磷脂酶编码序列肺炎,DNA使用CPn0300放大特定的引物。后PCR、PCR产物的大小被琼脂糖凝胶电泳验证。2387个基点的产品检测,如预期。PCR产品消化和结扎BamHI和XhoI pGEX-4T-3向量和重组质粒转化为大肠杆菌。从转换后的质粒DNA纯化大肠杆菌和消化BamHI、XhoI PstI。限制性内切酶分析表明CPn0300插入。这是进一步证实了使用pGEX-specific引物测序质粒DNA。最后,诱导细胞溶解产物表达CPn0300跑的sds - page显示生产glutathione-s-transferase(销售税)-CPn0300融合蛋白约110 - 115 kDs大小。大肠杆菌改变与父母pGEX-4T-3被用作控制GST表达式(数字6(一)和6 (b))。

鞘磷脂酶活性在细胞溶解产物用Amplex红试验测量。活动明显更高的溶解产物大肠杆菌表达CPn0300比普通向量或细胞溶解产物表达c . muridarumTC_512(图6(一)和6 (b))。这个数据一致性的事实是我们不能看到SMase预处理的抑制作用在霍奇金淋巴瘤细胞包涵体的形成当霍奇金淋巴瘤细胞被感染c . muridarum。

4所示。讨论

属衣原体包括几个speciesof小细胞生长的细菌,它可以在各种输入和繁殖人类细胞(46),包括专业和非专业的吞噬细胞,引起各种疾病在人类和动物宿主(47]。c . trachomatis引起性传播感染和致盲性沙眼,c . psittaci是一种病原体主要为鸟类和哺乳动物,只是偶尔会传染给人类。c .肺炎是一种常见的人类病原体引起呼吸道感染与动脉粥样硬化和冠心病等慢性病48,49),哮喘50),慢性支气管炎(51),反应性关节炎(52),和阿尔茨海默病(53]。

的可行性衣原体及其表面结构重要附件,这个微生物进入宿主细胞。绑定的c . trachomatis宿主细胞随温度介于0和37°C (54]。虽然UV-inactivated衣原体EB依然能够进入小鼠成纤维细胞(55),热处理(即。,5 min at 60 or 90°C) of EB reduces their uptake [54]。我们目前的研究表明紫外线灭活EB SMase活动(数据没有显示)和减少活动在热处理EB(图7)。据我们所知这是第一个报告衣原体EB的酶活性。SMase衬底,在真核生物膜鞘磷脂,是一个丰富的磷脂,是丰富的外层膜质膜(56)因此被入侵微生物很容易到达。观察到的瞬时外化的磷脂酰丝氨酸陪同的c .肺炎上皮、内皮细胞、粒细胞和单核细胞的细胞(57)能反映神经酰胺的积累在宿主细胞膜接触EB。有趣的是,PS的外层细胞表面的暴露在感染宿主细胞已经被报道恶性疟原虫(58),这种寄生虫SMase活动已经结束对红细胞的感染是必要的7]。除了它的角色在细胞凋亡59),神经酰胺已被证明是紧密联系的信号级联潜在炎症(1,2,4,5]。神经酰胺的前兆,鞘磷脂,有一个假定的角色在包涵体形成和胞内贩卖60]。似乎可行,通过增加细胞的神经酰胺水平影响宿主组织的存在c .肺炎可能会扰乱细胞和组织的代谢状态,从而导致二次障碍的病理生理学与衣原体感染。

一般来说,序列相似性不同sma材料如参照组(表1)是弱,尽管这些蛋白质具有相同的催化活性。因为这个SMase序列高可变性的身份使用严格的相似性搜索时容易忽视。然而,评估与游牧CPn0300(社区优化多个比对发现,看到Expasy,http://ca.expasy.org/)揭示了同等程度的序列相似性的核酸内切酶、核酸外切酶、磷酸酶sma材料领域之间大多数sma材料相同。完全符合N-SMase给最好的结果。有趣的是,还pfam_ls: IMPDH (IMP脱氢酶/ GMP还原酶域)主题存在于CPn0300, 67年和388年之间残留。这个领域属于常见的磷酸盐结合位点蒂姆桶总科,包括各种磷酸酯酶和脂酶(61年]。CPn0300因此似乎拥有一样的活跃领域网站碱性鞘磷脂磷酸二酯酶。人类中性sma材料的催化域属于核酸内切酶、核酸外切酶、磷酸酶家族(http://www.uniprot.org/uniprot/O60906)。的序列分析c .肺炎表明omp85 CPn0300同系物是一个可能的候选人负责SMase活动测量微生物。沿着这些线路SMase活动似乎可能被发现在其他细菌外膜蛋白质,尤其是omp85家族。然而,它是可能的,一些sma材料的内在SMasec .肺炎但进行从宿主细胞衣壳的顶部。任何情况下,我们的数据也支持这个观点酶活性参与宿主细胞膜的操纵c .肺炎重要的宿主细胞内在化与外在化。符合这个概念,omp85特定抗体可以抑制衣原体传染性在体外(62年]。虽然CPn0300的函数(34仍然难以捉摸,这假定的外表面之间高度保守的蛋白质的不同c .肺炎压力(63年]。omp85家族的蛋白质已经被证明有各种膜影响的角色。在大肠杆菌YaeT(直接同源的omp85)外膜组装的重要作用[64年]。PorB,衣原体的外膜组件,孔隙形成活动(65年];然而,这种活动没有发现衣原体omp85当纳入脂质体(62年]。

酶处理的膜脂质可以用于不同的用途22]。沿着这些线路最常见的人类病原体金黄色葡萄球菌分泌SMase [66年),这是裂解宿主细胞从而使微生物使用宿主组织营养。相比之下,的生命周期衣原体需要宿主细胞仍然可行,以便允许EB→RB转换和随后的主机内的复制。因此,只有相对低SMase活动足以避免过早引发细胞凋亡的主机,完成之前复制的入侵衣原体。因此,似乎可行EB-catalyzed神经酰胺的形成可能引发的死亡的主机完成后复制周期。最后,不同的机制可能是利用不同的条目衣原体以及加入不同的细胞类型。理解这些过程有助于阐明发病机理的衣原体感染和潜在的促进小说的发展意味着治疗干预。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

Oula Penate麦地那和帕沃·k·j . Kinnunen同样做出了贡献。

确认

支持Tuula a Penate麦地那猎户座研究基金会和马格努斯Ehrnroot基础。Juha t . Korhonen Riitta Lahesmaa, Mirja Puolakkainen支持芬兰科学院(MICMAN微生物和人类研究项目,项目没有。202491)。支持HBBG芬兰科学院和Sigrid Juselius基金会。作者感谢教授Kalle Saksela评论文章和劳拉Mannonen提供衣原体EB。作者感谢Kristiina索德伦德,阿奴Haveri Outi Rautio为熟练的技术援助。

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