的影响Triatoma dimidiata在调制的毒性鲁兹锥体墨西哥的菌株

文摘

恰加斯病的流行病学是复杂的。有不同的向量和水库和不同的临床表现。为了评估三种毒株的生物学行为是否孤立墨西哥东南部(H4人类隔绝,Z17隔绝Didelphissp和V隔绝t . dimidiata在通过向量)可以被修改t . dimidiata寄生虫血症曲线,无鞭毛体巢穴的数量,和死亡率感染血液trypomastigotes BALB / ct . cruzi进行了评估。菌株保存在连续通道从老鼠到鼠标和动物感染metacyclic trypomastigotes。寄生虫血症曲线明显不同(老鼠老鼠和triatoma小鼠组之间)菌株H4 Z17,和也观察到更少的无鞭毛体巢在心脏组织(数量和较高的应变H4之间的所有组织和Z17老鼠老鼠和老鼠triatoma)接种后45天。得出t . dimidiata在调制菌株毒力的影响t . cruzi在该地区。进一步研究昆虫的肠道在寻找一些蛋白质分子参与调节可能阐明这种寄生虫的毒性。

1。介绍

美洲锥虫病也称为恰加斯病的疾病仍然是一个公共卫生问题在整个拉丁美洲,据估计,1000万人感染鲁兹锥体(t . cruzi),其他2500万人被感染的风险1]。

病原体,t . cruzi,自然生物多形性与生化和分子分离株之间的差异,显示出巨大的差异在他们的行为在体外和在活的有机体内研究或许可以解释在疾病的临床表现出很大的差异(2- - - - - -4]。这些差异归因于许多环境因素等原因,宿主免疫力,毒性,致病性,通过不同物种的向量和主机。这些差异需要特征从clinical-epidemiological clinical-pathological的观点(4- - - - - -6]。

在墨西哥,当地分离株之间的异构性已经被报道,和疾病的发病和严重程度的差异在人类宿主归因于对感染的易感性,这种寄生虫,和/或向量7,8]。

在尤卡坦半岛,几项研究的生物行为孤立t . cruzi菌株从人间病例和水库已经执行。昆虫学、流行病学方面和生物行为的向量也被进行了4,9- - - - - -11]。

基于这些研究得到的数据,确定Triatoma dimidiata(t . dimidiata)的主要和有效的发射机t . cruzi流行地区的尤卡坦半岛,墨西哥,水库不同感染包括人类的存在有助于维护南美洲锥虫病。然而,尽管存在流行病学条件传染给人类,只有42例确诊为恰加斯病的急性和慢性心肌病阶段从1970年到1995年(12,13]。这是一个低数量的临床病例的情况在其他州相比,墨西哥和其他流行地区的世界。这些可能是由于各种原因如毒性的变化这种寄生虫通过向量,玛雅人口抵抗感染,或缺乏准确的流行病学研究。

本研究的目的是确定的角色t . dimidiata调制的毒性t . cruzi这或许可以解释在某种程度上在人类疾病的临床和流行病学特点从尤卡坦半岛。

2。材料和方法

2.1。寄生虫

三种菌株t . cruzi孤立在尤卡坦半岛,墨西哥,使用:H4(从人类分离),Z17(隔绝热源Didelphis marsupialis从向量)和V(孤立Triatoma dimidiata maculipennis)。

分离都是由连续的段落通过鼠标鼠标(对照组)和Triatoma鼠标(实验组)的生物特征。

2.2。昆虫

三组五仙女的第五阶段t . dimidiata被用于每个应变triatoma-mouse通行证。这一阶段被选中,是因为当昆虫饲料在实验室条件下,第四和第五阶段仙女饲料更长,并且拥有较高的容纳量,确保捕获的寄生虫。感染的锥蝽、老鼠感染每个菌株(由连续的段落mouse-mouse)以前与硫喷妥钠麻醉(40毫克/公斤)腹腔内(IP)和保存在一个盒子锥蝽为15到30分钟给他们。喂养后,锥蝽被放置在一个jar 30至60天成为寄生。一旦寄生,锥蝽在腹部压缩得到所有的粪便和寻找寄生虫;因此,有获得培养液trypomastigotes感染每一个老鼠实验的团体。锥蝽感染不同的隔离t . cruzi(H4、Z17和V)保持60天,然后用于感染的小鼠实验团体计价,triatoma老鼠。

2.3。动物模型

总共180 BALB / c 35克,8周的年龄雄性老鼠。BALB / c小鼠保持在12:12 h明暗周期和能获得食物和水adlibitum。

2.4。实验设计

小鼠被分为共有18组:9组实验条件“老鼠老鼠”和9组评估triatoma老鼠组。每组包含10个动物。有3株评估、H4 Z17,诉每个应变评估了一式三份。老鼠老鼠组,t . cruzi维护的隔离剂得到段落鼠标鼠标。从triatoma小鼠组、培养液分离获得维护通过鼠标triatoma和triatoma鼠标。

三组小鼠接种不同的隔离H4(人类),Z17 (Didelphissp),和V(向量t . dimidiata老鼠老鼠),直接在通道,以同样的方式3组小鼠接种与每个不同的隔离。小鼠感染的小鼠组,接种后二十天,老鼠流血而获得3×10的培养液⁵寄生虫/毫升血液trypomastigotes每个隔离的t . cruzi学习,和triatoma-mice组织感染,trypomastigotes获得感染t . dimidiata沮丧是调整到最后一个3×10的浓度⁵寄生虫/毫升与氯化钠溶液(0.85%)和EDTA(0.05%)、混合,然后指望纽鲍尔室。每个鼠标从18组形成接种IP有200μL的混合物6,14]。

2.5。生物特征

每个实验和对照组的毒性评估寄生虫血症曲线而言,组织入侵,并从受感染的小鼠组死亡率。确定寄生虫血症水平,血trypomastigotes量化在纽鲍尔室。体积为0.5毫升的外周血完成0.85%生理盐水和0.05% EDTA是来自每个老鼠的尾巴。寄生虫数进行每4天直到寄生虫血症的消失。

组织的入侵是由杜氏利什巢的存在在不同的组织器官评估(心脏、骨骼肌、肝脏和脾脏)后获得45 postinfection安乐死老鼠的一天。组织样本固定在10%福尔马林和加工使用的组织学部分5μ米厚的每个每个器官(5片);样品后来沾hematoxylin-eosin(他)和评估在搜索和量化的无鞭毛体巢40 x目标。死亡率被评估考虑自发的百分比死老鼠在所有时期的研究。

2.6。数据分析

数据获得的生物行为(寄生虫血症和无鞭毛体巢和死亡率曲线)之间的实验和对照组进行分析与统计——学生测试和单向方差分析与图基期末测验。价值意义决定了显著差异(15,16]。后小鼠的死亡率的接种菌株进行了分析软件SPSS v使用生命表16所示。为对比组(mouse-mouse和triatoma-mouse), logrank测试使用。

3所示。结果

H4应变mouse-mouse,寄生虫血症8 postinfection天开始,24天到达顶峰寄生虫血症负载为115×10⁵寄生虫/毫升;寄生虫血症水平相比显示出统计上的显著差异与其他评估组织()。的H4应变triatoma-mouse,寄生虫血症始于8天峰在14天寄生虫血症负载时44寄生虫/毫升(图1)。

感染Z17应变,从老鼠,老鼠寄生虫血症开始在12天达到峰值天32 postinfection寄生负载为295×10⁵寄生虫/毫升,triatoma-mouse集团,寄生虫血症开始在8天达到峰值13天postinfection寄生负载为149×10⁵寄生虫/毫升(图2),显示出统计上的显著差异是什么时候与Z17 mouse-mouse组一天20 postinfection (),但是持续时间的寄生虫血症组Z17 triatoma鼠标是短于鼠标鼠标。

V应变,mouse-mouse和triatoma-mouse组,寄生虫血症在12天开始postinfection峰值在28天。寄生虫血症负载postinfection从老鼠,老鼠是190×10⁵寄生虫/毫升,寄生虫和寄生虫血症负载从triatoma-mouse 170 /毫升(图3)。

研究菌株的毒力(H4、Z17和V)开始115天8和12之间的峰值,295和190×10⁵寄生虫/毫升老鼠老鼠组和12日至32岁的山峰的44岁的149和170×10⁵寄生虫/毫升triatoma老鼠群体。对于寄生虫血症,老鼠和老鼠之间的显著差异triatoma小鼠组织感染菌株H4 Z17。另一方面,V的应变,值不显著(0.06)。

无鞭毛体巢只有观察心脏组织。当比较这三个菌株(H4、Z17和V),产生的H4应变mouse-mouse最大数量的巢穴(与所有评价组相比p < 0.05)。在团体triatoma-mouse菌株H4和V,无鞭毛体巢穴的数量是28日和22日分别Z17应变,被数只有5的巢穴。减少统计不同(< 0.05)相比,老鼠,老鼠组和triatoma老鼠组之间(图4)。

H4应变为70%的死亡率记录(mouse-mouse)和100% (triatoma-mouse) Z17应变,60% (mouse-mouse)和90% (triatoma-mouse)和应变V, 50% (mouse-mouse)和80% (triatoma-mouse)。生存分析的显著差异被发现()。H4死亡率发生更快的菌株和Z17 mouse-mouse组(图5)。

4所示。讨论

恰加斯病是一种重要的流行在墨西哥原生动物感染。的主要病理特征之一,就像在其他国家,是心脏损伤。然而,尽管在尤卡坦半岛向量是广泛分布和寄生虫存在于几个水库哺乳动物,没有重要的临床报道原发性心肌病或死亡病例在该地区即使没有官方的控制策略向量。

克隆H4、Z17和V孤立于尤卡坦半岛地区显示出显著的差异在寄生虫血症水平培养液的寄生虫是通过向量t . dimidiata。应该指出的是,生物、生化、分子菌株t . cruzi已经被几个作者,以便每个应变特征共享这些方面可以代表一个组。由于异质性的菌株,t . cruzi有一个自然的多形性负责疾病的严重程度,当出现在人类宿主和其他哺乳动物5,17]。

目前的研究表明,生物和生化特征三个菌株(19科幻、21个科幻小说和科幻小说22日)持平后通过三种不同的锥蝽。维护他们的生化特征表明毒性可能是一个变量参数,但遗传模式是稳定的表型(18]。

不同菌株的存在发现的寄生虫从向量,水库、和地区的国家可能是负责任的寄生虫血症水平和某些器官的侵犯。这种变化在他们的行为可能是由于几个原因如环境因素、免疫力,毒性,致病性,恭敬的一步发射器和主机物种(3,19]。

在目前研究寄生虫血症及其持续时间减少triatoma-mouse组同样被瓦列霍et al。20.),即亚种群的相互作用锥锥猎蝽亚科的不同种类和数量的流行病学human-infecting在拉丁美洲锥虫。

实验小鼠的死亡率研究菌株感染metacyclic寄生虫(从一个向量)从墨西哥东南部的欧美的比别人更高之前报道墨西哥(8]。死亡率的降低速度观测triatoma-mouse组可能表明一个更低的毒性与mouse-mouse H4和Z17菌株相比的t . cruzi。

玻利维亚参考菌株(应变玻利维亚)鲁兹锥体(t . cruzi)演示了清晰的肌肉组织取向,然而不同克隆的可能关联不同的器官可能迁移到产生骨骼肌或心脏疾病(21]。类似墨西哥株显示取向对骨骼和心脏肌肉(8]在巧合的研究工作,然而这些特征在直接传递和应该注意的是,行为变化(主要是强度的毒性),当寄生虫通过矢量运算,在这项研究中。是重要的知道这些菌株的不同克隆的行为来评估他们的行为,因为他们通过向量(22]。

一项研究比较t . cruzi菌株从墨西哥和其他墨西哥菌株表现出显著差异在一些生物参数由Gomez-Hernandez et al ., (8),这表明其他墨西哥的种内的变化观察菌株可能与生物行为的差异体内。还被引用,克隆的基因型t . cruzi显著差异的传染性,展示之间的关联基因型多样性、取向和致病性20.]。

然而,在目前的研究中,当寄生虫血症水平相比,一个显著差异()菌株之间H4 Z17 mouse-mouse和triatoma-mouse团体之间被发现,和一个应变发生变化不显著(应变V隔绝一个向量t .二分的从研究区),表明研究菌株的生物学行为不同,这也许可以经过时被修改t . dimidiata向量和他们的毒性降低,部分解释为什么人类的病例的数量在尤卡坦半岛,墨西哥,面积较低。然而,由于慢性退化性疾病的特征,可能会有一个重要的情况下不适当诊断或确诊(人被感染的疾病,但在不确定的阶段没有明显的临床症状)。是非常重要和有趣点,也许某些菌株的行为是受到主要向量在每个流行区,在这种情况下t . dimidiata是唯一的识别向量的t . cruzi出现在该地区。这证实了一个很好的适应株的只有在该地区现有的矢量。在的情况下婴儿利什曼虫感染,毒性赤字由连续发生在体外文章结果从一个能力不足的原生动物分化成无鞭毛体形式22]。这低毒性是一个可逆的现象,因为串行通道在易感小鼠允许寄生虫恢复毒性表现型。在的情况下t . cruzi,当寄生虫中肠的向量,它被描述之间的交互消化酶的寄生虫,溶血素,凝集素和抗菌化合物涉及的防御反应机制,也许责任规范的发展t . cruzi锥蝽向量肠道,感染这种寄生虫的能力建立一个可以影响不同的血统(23];即使这些证据被发现Rhodnius prolixus。这些交互也可减少菌株的毒力,因为他们从向量,可能部分解释本研究的结果。

5。结论

本文证明了向量t . dimidiata在某种程度上可能会影响在调制的毒性t . cruzi菌株分离从墨西哥东南部的哺乳动物(尤卡坦半岛地区),导致需要进一步研究肠道的向量的一些蛋白质分子与寄生虫通过调节其毒性。进一步的研究评价和毒性特征t . cruzi菌株应包括实时PCR从灶台组织和关联的寄生虫血症在外周血和心脏组织。

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