Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola牙周病模型大鼠混合微生物感染的研究

摘要

Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola是表达与牙周炎发病机制相关的毒力因子的牙周病原体。在本文中，我们检验了假设p . gingivalis和t . denticola在毒性方面是协同的;采用大鼠混合微生物感染模型。各组大鼠均经口腔感染p . gingivalis或t . denticola或混合微生物感染7周和12周。p . gingivalis基因组DNA的PCR检测频率高于t . denticola．两种细菌均诱导IgG、IgG2b、IgG1、IgG2a抗体水平显著升高，提示刺激Th1和Th2免疫应答。放射学和形态测量显示，感染混合感染的大鼠比感染混合感染的对照组大鼠表现出更多的牙槽骨丢失。组织学显示连接上皮的根尖迁移，网嵴伸长和嵴牙槽骨吸收;类似牙周病损。这些结果表明p . gingivalis和t . denticola在牙周病大鼠模型中无协同毒力。

1.介绍

牙周炎是一种慢性免疫炎症性传染病，由含有大量牙周病原体的致病性生物膜引起牙周膜和邻近支持性牙槽骨的破坏，Porphyromonas gingivalis，梅毒denticola和Tannerella连翘通常在成人牙周炎病变的牙龈下生物膜样本中共分离[1- - - - - -5]．这种一致的共存表明，这些微生物物种之间可能存在着强烈的生态关系。此外，一些研究报告说p . gingivalis和t . denticola与慢性牙周炎病变密切相关[1，6- - - - - -8]检测颈动脉和主动脉粥样斑块[9]，显示营养之间的相互作用[10]，显示双峰共聚集[11- - - - - -13),绑定的p . gingivalis菌毛,t . denticoladentilisin [14]，以及协同生物膜的形成[15，16]．此外，两种物种都表达高胰蛋白酶样蛋白水解酶活性[17- - - - - -20.]除小鼠脓肿混合感染的协同毒力外[21，22]及肺炎动物模型[23].我们之前已经证明p . gingivalis和有核梭杆菌显示协同破坏软组织[24]．

相互作用的机制p . gingivalis和t . denticola作为龈下沟的一个联合体，它们是否在进展性牙周炎中表达协同致病潜力目前仍是谜[19]．最近，我们已经证明了这一点p . gingivalis，t . denticola,t .连翘有和没有f . nucleatum不仅作为一个与人类慢性牙周炎相关的联盟存在，而且还表现出毒性，导致大鼠口腔定植，诱导增强的IgG免疫反应，以及多微生物(三种或三种以上病原体)牙周炎的显著牙槽骨吸收特征[25]．

单微生物(单病原体)牙周感染使用p . gingivalis，t . denticola，t .连翘,或f . nucleatum已经在大鼠和小鼠中进行了研究[25- - - - - -30.]．越来越多的证据支持这一概念，即牙周病进展过程中牙龈下病原体成员之间的细菌相互作用是重要的。然而，目前还没有关于混合微生物(两种)牙周感染的研究报告p . gingivalis和t . denticola这项研究用细菌培养法检测了混合性牙周病p . gingivalis和t . denticola作为一个联盟，并检查了它们的定植/感染特征、牙周炎症参数、免疫反应模式、牙槽骨吸收诱导和毒力相互作用。

2.材料和方法

２.１.菌株和接种

本研究中使用的细菌是p . gingivalis381年和t . denticolaATCC 35404菌株在85%的厌氧条件下生长, 10%的，及5%  )C在Coy厌氧室中，如前所述[25，31]．的p . gingivalis381菌株的选择是由于其在成人牙周炎的牙槽骨吸收中已知的作用和已证实的在啮齿动物口腔定植的能力[25，27，28，32]．对于口腔单细菌感染，p . gingivalis(2 细胞/ mL:在CDC厌氧5%羊血琼脂平板上培养3天)或t . denticola(2 每mL细胞:在GM-1培养液中培养48-72小时作为对数相培养)，与等体积的无菌2% (w/v)低粘度羧甲基纤维素与PBS (CMC: Sigma)混合，[25，26，28，33]1毫升用于感染(每毫升细胞数）通过口服灌胃[25，26，28，33]．对于口腔混合微生物感染，p . gingivalis(2 细胞/ mL)，与等体积的t . denticola(2 混合1-2分钟，并允许这些物种之间的任何相互作用额外5分钟。加入等体积的无菌CMC 2% (w/v)，充分混合，1 mL (5 细胞的p . gingivalis毫升，5 细胞的t . denticola)以灌胃及肛门外敷方式给予。老鼠本质上是食虫动物，肛门敷药背后的原理是细菌会在粪便中，然后会回到口腔，从而建立一个口腔再感染的循环[28，34]．

２.２.大鼠口腔感染

雌性Sprague Dawley大鼠（8周龄，查尔斯河实验室，MA，美国）在佛罗里达大学的AALAC设施中被保持成群并被安置在微隔离器笼子中。本研究中使用的所有鼠感染程序均获佛罗里达大学动物保护和使用委员会批准。动物饲喂标准粉末饲料（TekLad Global 18%蛋白啮齿动物饲料2918，哈兰）和水。随意．所有大鼠饮水中每日给予卡那霉素(20 mg)和氨苄青霉素(20 mg)，连续4天[25，35]，用0.12% (v/v)葡萄糖酸氯己定(Proctor and Gamble, OH, USA)漱口液擦洗口腔[25，31抑制内源生物并促进随后的定殖p . gingivalis和t . denticola．大鼠随机分为两组()，单菌及混合菌接种以灌胃及肛门外敷方式给予[28，34接种16-24次，每隔4 - 6周接种4次。假感染对照组大鼠只接受2%无菌低粘度CMC。

2．3.口腔微生物取样

用无菌棉签在感染前后采集大鼠口腔微生物样本。所有感染大鼠于感染后第2周共采集4-6份感染后微生物样本。为了确定单感染和混合感染诱导的牙周病的毒力动力学和免疫反应，在第8周(16次接种的7周)和第13周(24次接种的12周)开始对大鼠实施安乐死。采集血液，将血清储存在C用于IgG抗体分析。处死大鼠，去除头骨，用高压消毒，并用牙周刮垢器机械卸除。随机选取的鼠颚()也悬浮在10% (v/v)缓冲福尔马林，脱钙，组织修剪，并用于组织形态测定和组织学。

２.４.监测细菌殖民化/感染

使用Wizard基因组DNA纯化试剂盒(Promega, WI, USA)从大鼠口腔微生物样品中分离DNA。标准的基因组DNAp . gingivalis,t . denticola按照上述相同程序从各自的24-72小时纯培养物中提取[25]随后，使用16S rRNA基因物种特异性PCR寡核苷酸引物和Bio-Rad热循环仪进行PCR，如前所述[25，31，35]．放大后;PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，用UVP BioDoc-It成像系统显示条带。提取的基因组DNAp . gingivalis和t . denticola为阳性对照，PCR时无模板DNA作为阴性对照。每次用标准DNA进行PCR检测，均可检测到0.05 pg的DNA (p . gingivalis30细胞;t . denticola将35到40个不同的PCR周期标准化，以产生数量最少（0.05）的可检测扩增物 pg）的模板DNA。

2．5．抗体分析

在安乐死时从每只老鼠身上采集血液。单细菌血清()或混合受微生物感染的老鼠(= 9)于7周(4例感染)和12周(6例感染)检测IgG、IgM、IgA和IgG亚类(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c)抗体浓度，采用标准ELISA方法[25，34- - - - - -36]．简单地，稀释感染大鼠血清(IgG: 1: 100, IgM、IgA和IgG亚类:1:20)孵育于任意一种井中p . gingivalis或t . denticola涂覆微滴度聚苯乙烯板(Costar，康宁，纽约，美国)室温下2小时。洗涤后，加入碱性磷酸酶偶联山羊抗大鼠IgG(1:20 00)、IgM和IgA (Bethyl Laboratories, TX, USA)(1:50 00)，在室温旋转器上再孵育2 h。底物(p -nitrophenylphosphate;Sigma, 1mg /ml)加入洗涤板，用3m NaOH终止反应。IgG亚类ELISA分析使用碱性磷酸酶偶联山羊抗大鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c (Bethyl Laboratories, TX, USA)(1: 500)。光密度(OD)在Onm, Bio-Rad酶标仪。用重量标准曲线定量测定感染大鼠血清抗体浓度。标准曲线由8只大鼠的IgG浓度(Sigma, St. Louis, USA)组成，涂布在微滴度聚苯乙烯板的孔上，进行检测和绘制，如上所述。

2.6。水平牙槽骨吸收的形态学分析

诱发的牙槽骨吸收模式(水平或垂直)p . gingivalis和t . denticola分别用形态测量法和x线摄影法测量。7周及12周的单一及混合微生物感染的口腔(= 6)在3% (vol/vol)过氧化氢中浸泡过夜，用0.1% (wt/vol)亚甲基蓝染色，用改进的形态测量法勾画牙釉质结(CEJ) [33，34]．所有磨牙的颊根和舌根表面的数字图像均在10以下立体解剖显微镜(stereo Discovery V8;颊尖和舌尖重叠后，以确保重现性和一致性。使用直线工具测量从CEJ到牙槽嵴(ABC)的每个象限内所有磨牙的水平骨吸收。用标定的直线工具跟踪CEJ和ABC的表面周长。AxioVision软件程序使用精确的尺子进行校准，水平骨丢失面积读数为mm²会立即印在数字图像上。使用了两名盲调查人员，所有的测量都由同一名调查人员在不同的时间进行了两次，测量的平均值分别为四个象限。

2.7。垂直牙槽骨丢失的影像学评估

将上颌和下颌骨放置在柯达6000数码传感器(CareStream Health, USA)上，并用牙蜡固定，牙齿轴线平行于传感器表面。在60kvp和15ma的曝光时间为0.08 s，采用正交投影几何获得磨牙远中面和近中面数码x光片。所有射线图像都导出到调谐孔径计算机断层摄影工作台，使用已知的解剖测量进行放大校准，直方图均衡。使用直线工具对从CEJ到ABC(即骨吸收)的每个象限内的每个磨牙的每个近端表面(每颗牙齿2个位置)的远端和近端进行垂直骨吸收测量，作为研究的主要结果参数。将mm的牙槽骨吸收汇总制成表格并进行分析，用于组内和组间比较[25，31，35]．

2.8。牙周组织的组织形态学分析

单微生物及混合微生物感染鼠颌(= 3)随机取出，用10%缓冲福尔马林固定。骨在免疫(贴片化学)脱钙28天C.脱钙组织被石蜡块包埋切片准备，用苏木精和伊红染色，用ScanScope CS系统(Aperio Technologies, Vista, CA)进行数字扫描。扫描的幻灯片使用ImageScope查看软件(Aperio Technologies, Vista, CA)进行查看。根据多态核白细胞(PMN)、淋巴细胞(淋巴细胞)、血管密度、连接上皮(JE)根尖迁移(根尖迁移)等参数，在连续切片或第10、20节检查各标本磨牙间龈上结缔组织炎症反应。网状嵴伸长(R)和牙槽骨吸收(ABR) [37]．单位面积(0.05 mm)的炎症细胞(PMNs和淋巴细胞)数量0.05 mm)的结缔组织面积[37].使用ImageScope软件，在放大倍数为的情况下，使用微网格测量JE的迁移、网脊的伸长和牙槽骨的吸收200.从CEJ到结缔组织附着的冠状部分的距离(根尖迁移)，从CEJ到网嵴的根尖部分的距离;从CEJ到牙槽骨嵴水平进行测量[37]．

2.9。统计分析

以牙槽骨吸收和IgG抗体数据为手段标准偏差(Prism 4, GraphPad软件)。PgydF4y2Ba值使用Kruskal Walis方差分析(Dunn 's correction for multiple comparison)和Mann-Whitney Student计算以及(37]．PgydF4y2Ba的值。05被认为有统计学意义。

3.结果

３．１．诱发牙周病

在单一或混合感染之前;我们检查了所有的老鼠p . gingivalis和t . denticola并观察到所有大鼠对这些口腔病原体的检测均为阴性。PCR结果显示了一个合适大小的扩增子p . gingivalis(600 bp)存在于感染单微生物接种后大鼠口腔微生物样本的DNA中(数据未显示)。在两种单细菌感染中，p . gingivalis均为PCR阳性()，在4 ~ 6次采样中阳性1 ~ 4次。感染大鼠50 ~ 83.3%，阳性p . gingivalis在6次抽样中的4次(2、3、4和6)中。相比之下,t . denticola(860 bp)从大鼠口腔微生物标本中分离的DNA扩增结果为阴性。被喂食的老鼠p . gingivalis+t . denticola混合感染显示72%(13/18)阳性扩增子p . gingivalis18只大鼠中只有2只扩增子呈阳性t . denticola。

３.２．血清抗口腔感染IgG抗体

提供口腔感染的额外文件，并证明对p . gingivalis和t . denticola在感染后7周和12周，我们评估了大鼠血清中病原体特异性IgG、IgM、IgA和IgG亚类(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgGc)抗体的水平(图)1)．在感染7周和12周的大鼠中，无论是单感染还是混合感染，诱导的IgG抗体应答模式是相同的。所有的老鼠p . gingivalis感染组均为7(图)1(一))和12周(图1 (c))表现出明显升高的IgG抗体()的水平，而对照组大鼠的水平。同样地，所有感染了t . denticola产生的IgG抗体显著高于()比假感染对照组大鼠在这两种情况下的水平(图7)高1 (b))和12周(图1 (e)) postinfection。然而,p . gingivalis感染引起的IgG水平显著升高(100倍)t . denticola单感染大鼠的感染大鼠血清IgG抗体水平与检测频率一致p . gingivalis在口腔微生物样本中有趣的是，所有的老鼠t . denticola12周时单细菌感染组(图1 (e))尽管我们无法检测到，但诱导了显著强烈的IgG免疫反应t . denticola口腔微生物样本中的DNA。

混合感染组大鼠血清IgG抗体均升高p . gingivalis和t . denticola与蒙羞对照组大鼠的水平相比(图)1).有趣的是，p . gingivalis+t . denticola7岁时感染(图1(一)和1 (b))和12周(图表1 (d)和1 (f))初次感染后引起的强100倍p . gingivalis特异性IgG免疫应答比较t . denticola免疫球蛋白的反应。混合菌感染大鼠中约90%(16/18)血清IgG升高p . gingivalis与假感染的对照组大鼠相比(图1(一))．同样，100%的混合微生物感染大鼠(18/18)血清IgG显著升高t . denticola与假感染的对照组大鼠相比(图1 (b)).没有p . gingivalis和t . denticola感染大鼠在感染7周和12周诱导IgA和IgM抗体(数据未显示)。

３．３．IgG亚型对感染的反应

因此，我们观察到p . gingivalis和t . denticola是大鼠的抗原，导致血清IgG抗体的显著水平。为了更充分地评估该抗体的特性，我们确定了IgG亚类在口腔感染后体液免疫反应中的分布。12周后p . gingivalis单一和混合微生物感染，IgG2b亚类水平()均高于IgG1和IgG2a抗体水平，且差异显著(PgydF4y2Ba< .05)，高于假感染对照组(图1 (c)和1 (d))．同样,在t . denticola单一和混合微生物感染，IgG2b亚类水平()均高于IgG1和IgG2c抗体水平，并显著高于假感染对照组()(数据1 (e)和1 (f))．此外,p . gingivalis诱导的IgG亚类抗体水平高于t . denticola．

3．4．牙槽骨丢失的形态学评估

以解决两者之间的潜在毒性p . gingivalis和t . denticola在大鼠牙周病进展中，我们检测了感染对上颌和下颌骨牙槽骨吸收的影响。单感染和混合感染均可引起颊部和腭部区域的牙槽骨吸收1；数字2)图中，感染病毒的大鼠的上颌骨和下颌骨骨丢失p . gingivalis，t . denticola,p . gingivalis+t . denticola显著增加(< .05)1)．所有感染组在患牙周病12周时的上颌和下颌骨骨丢失普遍大于患牙周病7周。此外，在颊面和腭面，下颌骨丢失普遍高于上颌骨丢失1)．p . gingivalis初次感染后7周和12周，单一感染导致腭-下颌水平骨丢失面积大于上颌骨。相反t . denticola单次感染通常引起腭部和颊部骨损失大于p . gingivalis初次感染后7周和12周，下颌骨的骨损失大于上颌。同样，在初次感染后7周和12周，混合感染引起的上、下颌骨、腭和颊面骨丢失比单感染更显著(见表)1)．此外，混合感染引起的下颌腭表面水平区骨丢失多于上颌。

3．5．近端牙槽骨丢失的影像学评价

为了证实我们的观察到的牙槽骨吸收，我们进行了上颌骨和下颌骨的x线分析。在牙周病发生7周(数据未显示)和12周时，单感染和混合感染导致上颌、下颌和近端牙槽骨吸收明显增加，与假感染对照组大鼠相比(< . 05)(图3.)．此外，垂直骨高度总体下降，伴有相关的周向角缺陷。此外，与任何单细菌感染和假感染对照感染相比，混合感染在上颌、下颌和总垂直骨丢失中显示出显著增加()(图3.)．

3.6. 组织学和组织计量学分析

为了确定感染方案是否引起了不同程度的炎症反应，从而增加了观察到的牙槽骨吸收，对感染大鼠的上颌和下颌骨切片进行了研究p . gingivalis和/或t . denticola在7和12周的牙周病检查连续水平1,10，和20的炎症。混合微生物感染大鼠比假感染对照组有更明显的组织学改变，特别是乙脑根尖迁移、网状嵴伸长、PMN密度、淋巴细胞浸润、血管密度和牙槽骨丢失(表)2；数字4)．假感染对照组大鼠表现为轻度炎症，PMN和淋巴细胞较少，无根尖迁移，网状嵴伸长小。同样，混合微生物感染导致乙脑根尖迁移显著()和牙周组织致密炎症p . gingivalismonoinfected老鼠。混合微生物感染大鼠在网脊伸长、PMN密度、淋巴细胞浸润、血管密度等方面与对照组无显著差异p . gingivalis和t . denticolamono-infected老鼠。p . gingivalis和t . denticola感染后的大鼠表现出明显的组织学变化，特别是乙脑根尖迁移、牙槽骨丢失、PMN密度、淋巴细胞浸润和血管密度均高于假感染对照组(见表)2；数字4)．此外,p . gingivalis感染的大鼠表现出明显的淋巴细胞浸润(< .05)及牙周组织血管密度(< .001)，与混合微生物感染大鼠比较(表2)．

4.讨论

本文明确地演示了牙周病中混合微生物感染的实验模型，记录了定殖/感染p . gingivalis / T。denticola在7周和12周时，口腔微生物联合(动力学)诱导牙周炎症，对感染病原体产生特异性的全身IgG免疫应答，刺激增强大鼠牙槽骨吸收。这些结果还首次记录了混合感染的毒性p . gingivalis+t . denticola在牙周病模型中。有人提出牙周健康向疾病发展过程中的细菌协同作用，但由于牙龈下菌群的内在复杂性，很少有研究证明细菌协同作用[8，38]．在之前的研究中[25，我们没有检查牙周炎症的早期诱导和评估腭和颊水平骨丢失。在这里，我们用牙周病7周和12周的模型证明了这种早期动力学。

大鼠单细菌感染提示p . gingivalis在7-12周建立慢性感染的研究中，表现出了在口腔定殖/感染的能力，每周4-6次交替感染计划(16-24次接种)。我们之前已经证明给老鼠15-16次p . gingivalis，在类似的实验间隔时间内，结果在口腔微生物样本中检测到一致的基因组DNA [25，31，35]．此外，在所有大鼠中观察到显著的IgG免疫反应和增强的牙槽骨丢失，表明这些大鼠被感染了，尽管大鼠的PCR反应为阴性t . denticola．我们认识到目前所有口腔微生物取样技术在样本收集程序中存在的局限性。

牙周病患者第7周和第12周的血清IgG抗体水平表明p . gingivalis与大鼠相比，在定植和/或高抗原性方面是高效的吗t . denticola．抗体反应显示了对每个感染物种的实质性特异性。然而，我们观察到血清中IgG抗体的升高t . denticola在里面p . gingivalismono-infected老鼠。虽然这种“非特异性”IgG抗体比假感染对照组的抗体多，但它大约是对同源IgG抗体应答的1000倍p . gingivalis感染．这可能表明这些细菌有一些共同的表位[25]．混合口腔感染p . gingivalis / T。denticola引起了血清IgG抗体的不同表现。这些改变的反应可能是由于较低的殖民化能力t . denticola在混合联盟挑战和/或在感染期间口腔内增殖能力下降，从而导致较低的抗原挑战，减少牙周炎症，没有强健的牙槽骨丢失或毒力协同作用。以下是主要的反应p . gingivalis感染的是IgG2b (T辅助型1)和IgG1亚类(T辅助型2)，其次是IgG2a (Th1)和未检测到的IgG2c抗体水平，表明在对细菌感染的体液免疫反应中刺激了Th1和Th2的活性。同样，以下是主要的回应t . denticola在大鼠中，单感染是IgG2b亚类，其次是IgG1、IgG2c和未检测到的IgG2a抗体水平，表明对口腔感染存在Th1和th2混合应答。相比之下，IgG1抗体滴度在小鼠中要高得多t . denticola感染(29]．尽管在感染7周和12周期间，细菌特异性IgG抗体水平很高，但在大鼠和之前的一些研究中，对牙槽骨丢失没有显著的免疫保护[39，40提示抗体保护的复杂机制。此外,p . gingivalis重组血凝素B免疫或免疫和感染大鼠诱导IgG亚类反应(IgG1 = IgG2a)IgG2bIgG2c)提示Th1和Th2混合反应，免疫大鼠的牙槽骨丢失较少，提示保护性免疫反应[41，42]．同样,免疫接种p . gingivalis全细胞诱导高滴度血清IgG2a (Th2)、中滴度IgG2b (Th1)和低滴度IgG1 (Th2)应答，并免疫RgpA-Kgp半胱氨酸蛋白酶p . gingivalis诱导高滴度血清IgG2a (Th2)反应，限制定殖，减少牙周骨丢失，表明大鼠具有保护性免疫应答[34]．

单次感染后，水平(腭面和颊面)和近端牙槽间骨吸收水平存在差异p . gingivalis和t . denticola由于样本位置的不同以及测量技术的不同，我们很难比较这些细菌个体之间牙槽骨吸收的大小。重要的是，在验证我们的假设时，口腔感染p . gingivalis / T。denticola与单一感染相比，近端间和水平牙槽骨丢失显著增加。这种骨丢失的增加可能与单个细菌的毒力表达增强有关，这是通过其细胞外有效蛋白酶的合作能力(p . gingivalisRgpA, RgpB, Kgp牙龈半胱氨酸蛋白酶t . denticola类胰凝乳蛋白酶、磷脂酶C、寡肽酶、内肽酶和囊化酶)通过细胞表面受体的特异性裂解和宿主防御蛋白的失活来影响宿主系统[18，20.].此外，混合感染p . gingivalis+t . denticola在小鼠肺炎模型脓肿形成和死亡中表现出显著的毒力协同作用[23及小鼠脓肿模型[21，22]．

5.结论

对数据的分析清楚地表明了以下几点：（i）在牙周病的7周期间（进入口腔上皮），人类口腔病原体在大鼠口腔中的单一和混合微生物定植/感染，（ii）产生反映口腔感染的特异性血清IgG抗体反应（早在7周）（全身宿主反应机制的参与），（iii）诱导混合感染大鼠水平和邻面牙槽骨吸收增强（局部感染的直接结果），(iv)诱发炎症反应(乙脑根尖迁移、网状嵴延长、嵴牙槽骨丢失、pmn)，这与已确定的牙周病特征一致，(五)未观察到协同毒力PgydF4y2Ba．gingivalis / T。denticola在大鼠牙周病模型中。这种混合感染模型将为进一步的研究提供机会，以澄清宿主反应的特征和改变，如牙周组织中的促炎细胞因子和基质金属蛋白酶，它们与混合感染中破骨细胞牙槽骨丢失有关。

致谢

作者感谢Howard Kuramitsu教授对这篇论文的批判性评论。这项工作得到了美国国立卫生研究院牙科和颅面研究所(NIDCR)的USPHS研究基金U24 DE016509 (R. Burne)和DE-015720 (L. Kesavalu)的支持。

参考文献

1. S. S. Socransky, A. D. Haffajee, M. A. Cugini, C. Smith, and R. L. Kent Jr.，《龈下菌斑的微生物复合体》临床牙周医学杂志，第25卷，第2期2，第134-144页，1998。视图:谷歌学者
2. s.s. Socransky和a.d. Haffajee，《牙周微生物生态学》，牙周病学2000，第38卷，第135-187页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
3. R. P. Ellen和V. B. Galimanas，《牙周感染的前沿螺旋体》，牙周病学2000，第38卷，第13-32页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
4. M. N.塞拉(M. N. Sela)，梅毒denticola在牙周疾病。”口腔生物学和医学评论，第12卷，第2期5，页399-413,2001。视图:谷歌学者
5. s·c·霍尔特和j·l·埃伯索Porphyromonas gingivalis，梅毒denticola,Tannerella连翘:“红色复合体”，牙周炎多细菌致病联合体的原型，牙周病学2000，第38卷，第72-122页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
6. T. kiigure, A. Saito, K. Seida, S. Yamada, K. Ishihara, and K. Okuda， "分布Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola免疫组化方法检测不同牙周袋深度的人龈下菌斑牙周研究杂志，第30卷，第2期5，第332-341页，1995。视图:谷歌学者
7. G. R. Riviere, K. S. Smith, N. Carranza Jr. et al，“之间的关联Porphyromonas gingivalis龈下菌斑中的口腔密螺旋体口腔微生物学与免疫学，第11卷，第5期。3，页150 - 155,1996。视图:谷歌学者
8. L. G. Simonson, K. T. McMahon, D. W. Childers，和H. E. Morton，“细菌的协同作用梅毒denticola和Porphyromonas gingivalis在多国人口中，”口腔微生物学与免疫学，第7卷，第5期2，页111-112,1992。视图:谷歌学者
9. F. Cavrini, V. Sambri, A. Moter等，“分子检测梅毒denticola和Porphyromonas gingivalis颈动脉和主动脉粥样硬化斑块的FISH检查:2例报告医学微生物学杂志第54卷第5期1，页93-96,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
10. D. Grenier，“两种疑似牙周病原体之间的营养相互作用，梅毒denticola和Porphyromonas gingivalis”,感染和免疫，第60卷，第2期12，页5298-5301,1992。视图:谷歌学者
11. D. Grenier，“双峰共聚集反应的演示Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola”,口腔微生物学与免疫学，第7卷，第5期5、1992年。视图:谷歌学者
12. P. E. Kolenbrander，《口腔微生物群落:生物膜、相互作用和遗传系统》微生物学年度回顾，第54卷，第413-437页，2000。视图:出版商的网站|谷歌学者
13. M.女川，K.石原慎太郎，K.奥田硕，《共聚之间》(Coaggregation between)Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola”,东京牙科学院公报第35期4，页171-181,1994。视图:谷歌学者
14. 桥本M.，小川S.，浅井Y.，高井Y.，小川T.， "之装订Porphyromonas gingivalis菌毛,梅毒denticoladentilisin。”《微生物学字母第226卷第226期2，页267 - 271,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
15. H. K. Kuramitsu, W. Chen，和A. Ikegami，“牙周病变细菌的生物膜形成梅毒denticola和Porphyromonas gingivalis”,牙周病学杂志》，第76卷，第2047-2051页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
16. M. Yamada, A. Ikegami, H. K. Kuramitsu，“协同生物膜的形成由梅毒denticola和Porphyromonas gingivalis”,《微生物学字母号，第250卷。2，页271-277,2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
17. S. C. Holt, L. Kesavalu, S. Walker，和C. A. Genco，“毒性因子Porphyromonas gingivalis”,牙周病学2000，第20卷，第2期。1，页168-238,1999。视图:谷歌学者
18. J. C. Fenno和B. C. McBride，“口腔密螺旋体的毒性因子”，厌氧生物，第4卷，第4期。1、第1 - 17页，1998。视图:出版商的网站|谷歌学者
19. R. J. Lamont和H. F. Jenkinson， "牙龈线下的生活:致病机制Porphyromonas gingivalis”,微生物学与分子生物学评论第62期4、1998年。视图:谷歌学者
20. J. Potempa, A. Banbula, and J. Travis，“细菌蛋白酶在基质破坏和宿主反应调节中的作用”，牙周病学2000，第24卷，第2期1，页153-192,2000。视图:谷歌学者
21. L.Kesavalu、S.C.Holt和J.L.Ebersole，“多菌复合物的毒性，梅毒denticola和Porphyromonas gingivalis，在老鼠模型中，”口腔微生物学与免疫学，第13卷，第2期6、1998年。视图:谷歌学者
22. M.Washizu、K.石原、K.Honma和K.Okuda，“病毒混合感染的影响Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola关于小鼠脓肿形成和免疫反应，”东京牙科学院公报，第44卷，第5期。3，页141-147,2003。视图:谷歌学者
23. R. Kimizuka, T. Kato, K. Ishihara, K. Okuda，“混合感染Porphyromonas gingivalis和梅毒denticola与单次感染相比，小鼠肺炎模型会引起过度的炎症反应。微生物和感染，第5卷，第15号，第1357-1362页，2003年。视图:出版商的网站|谷歌学者
24. J. L. Ebersole, F. Feuille, L. Kesavalu, and S. C. Holt，“牙周病原体引起的组织破坏的宿主调节:对混合微生物感染的影响Porphyromonas gingivalis和有核梭杆菌”,微生物发病机理，第23卷，第2期。1，第23-32页，1997。视图:出版商的网站|谷歌学者
25. L. Kesavalu, S. Sathishkumar, V. Bakthavatchalu等，“牙周病中多重微生物感染、免疫和牙槽骨吸收的大鼠模型”，感染和免疫，第75卷，第5期4，页1704-1712,2007。视图:出版商的网站|谷歌学者
26. P. J. Baker, L. DuFour, M. Dixon，和D. C. Roopenian，“粘附分子缺陷增加Porphyromonas gingivalis诱导的小鼠牙槽骨丢失感染和免疫，第68卷，第6期，第3103-3107页，2000年。视图:出版商的网站|谷歌学者
27. B. Klausen，“大鼠实验性牙周病的微生物学和免疫学方面:综述文章”，牙周病学杂志》第62期1，第59-73页，1991。视图:谷歌学者
28. E. Lalla, I. B. Lamster, M. a . Hofmann等，“牙周病原体口腔感染加速载脂蛋白e缺失小鼠早期动脉粥样硬化”动脉硬化、血栓形成与血管生物学，第23卷，第2期。8, pp. 1405-1411, 2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
29. S. F. Lee, E. Andrian, E. Rowland, and I. C. Marquez，“免疫反应和牙槽骨吸收的小鼠模型梅毒denticola感染。”感染和免疫第77期2, pp. 694-698, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
30. S. F. Lee, E. Andrian, E. Rowland, and I. C. Marquez，“免疫反应和牙槽骨吸收的小鼠模型梅毒denticola感染。”感染和免疫第77期2, pp. 694-698, 2009。视图:出版商的网站|谷歌学者
31. S.Sathishkumar，A.Meka，D.Dawson等人，“体外冲击波疗法诱导牙槽骨再生，”牙科研究杂志，第87卷，第2期7，第687-691页，2008。视图:出版商的网站|谷歌学者
32. R. T. Evans, B. Klausen, N. S. Ramamurthy, L. M. Golub, C. Sfintescu, and R. J. Genco，“两种菌株的牙周病变潜力Porphyromonas gingivalis在无菌的老鼠,”口腔生物学档案，第37卷，第2期10，第813-819页，1992。视图:出版商的网站|谷歌学者
33. J.-Y。李,n。咦,美国。金,js。崔S.-J。金,我。崔,”Porphyromonas gingivalis热休克蛋白疫苗可减少多种牙周致病菌引起的牙槽骨丢失。牙周研究杂志号，第41卷。1，页10-14,2006。视图:出版商的网站|谷歌学者
34. P. S. Rajapakse, N. M. O'Brien-Simpson, N. Slakeski, B. Hoffmann, E. C. Reynolds，“rgp - kgp蛋白酶黏附蛋白复合物免疫Porphyromonas gingivalis在大鼠牙周炎模型中防止牙周骨丢失。”感染和免疫，第70卷，第2期5，页2480 - 2486,2002。视图:出版商的网站|谷歌学者
35. L. Kesavalu, B. Vasudevan, B. Raghu等，“Omega-3脂肪酸对大鼠牙槽骨丢失的影响，”牙科研究杂志第85卷第1期7，第648-652页，2006。视图:谷歌学者
36. L. Kesavalu, S. C. Holt，和J. L. Ebersole，“缺乏体液免疫保护梅毒denticola小鼠模型中的毒力，”感染和免疫，第67卷，第5期第11页，第57 - 57页，1999。视图:谷歌学者
37. D. Ekuni, T. Yamamoto, R. Yamanaka, K. Tachibana，和T. Watanabe，“蛋白酶增加脂多糖在大鼠牙龈中的作用，”牙周研究杂志第38卷第2期6，页591-596,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
38. K. A. Brogden, J. M. Guthmiller, C. E. Taylor，《人类多重微生物感染》，《柳叶刀》，第365卷，第2期第1页，第2 - 3页，2005。视图:出版商的网站|谷歌学者
39. P. J. Baker, S. Carter, M. Dixon, R. T. Evans，和D. C. Roopenian，“血清抗体对口腔感染的反应先于但不能预防Porphyromonas gingivalis诱导的小鼠牙槽骨丢失口腔微生物学与免疫学，第14卷，第3期，第194-196页，1999年。视图:出版商的网站|谷歌学者
40. A. A. DeCarlo, Y. Huang, C. A. Collyer, D. B. Langley, J. Katz，“基于HA2域的牙周炎疫苗的可行性”，感染和免疫，第71卷，第71期1，页562-566,2003。视图:出版商的网站|谷歌学者
41. J. Katz, K. P. Black, and S. M. Michalek，“宿主对重组血凝素B的反应Porphyromonas gingivalis在实验性的大鼠模型中，感染和免疫，第67卷，第5期9、1999年。视图:谷歌学者
42. J. Katz和S. M. Michalek，“来自粘膜或全身组织的免疫T细胞对宿主反应的影响Porphyromonas gingivalis”,口腔微生物学与免疫学，第13卷，第2期2、1998年。视图:谷歌学者

版权

版权所有©2010 Raj K. Verma等人。这是一篇发布在知识共享署名许可协议，允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，但必须正确引用原作。