体外协同作用的左氧氟沙星+哌拉西林/ Tazobactam反对铜绿假单胞菌

文摘

使用左氧氟沙星体外协同测试(LVX) +哌拉西林/ tazobactam (TZP)是由浓度梯度法和time-kill化验(TKA) 31 fluoroquinolone-resistant独特铜绿假单胞菌隔离。基线测试方法显示协同为9/31(29%)的隔离,而TKA显示协同与14/31(45%)的隔离。当比较的基线测试方法和TKA,整合协同作用的结果,对抗,冷漠了24/31(77%)的隔离测试。

1。介绍

铜绿假单胞菌是一个主要的医院病原体,和有效的治疗代表一个巨大的挑战。铜绿假单胞菌菌株耐往往从不同的类抗菌药物,包括-lactams、氨基糖甙类和氟喹诺酮类原料药;一些菌株只有容易多粘菌素(1]。的耐药机制铜绿假单胞菌是由染色体和质粒基因编码不同的抗性酶(-lactamases,包括扩展频谱β-lactamases, "等);其他机制包括细菌壁渗透率下降,目标改变,活性药物流出(2]。

通常,治疗铜绿假单胞菌包括抗菌药物的组合。左氧氟沙星(LVX) +哌拉西林/ tazobactam (TZP)是一种antipseudomonal方案在许多医院使用。假定的好处是增加功效,实现协同杀戮和防止抗生素耐药性的出现,但数据是稀疏的。最近的一项回顾性队列研究表明减少28天减少重症患者全因死亡率(533的702名患者(75.9%))与monomicrobial菌血症由于需氧革兰氏阴性杆菌(包括铜绿假单胞菌)接受的组合内酰胺+ LVX或环丙沙星与内酰胺单一疗法(3]。这支持一个体内协同或相加作用内酰胺+氟喹诺酮类的组合。

描述了三种方法来检测体外协同作用:time-kill试验(TKA),棋盘,基线测试方法。早些时候在体外研究使用TKA和棋盘技术建议不同利率的协同LVX + TZP (17 - 83%) (4 - 6;H·琼斯和E Swiatlo,第41届美国传染病协会年度会议上,Abstr。230年,2003年)或哌拉西林4- - - - - -6)对铜绿假单胞菌。两个TKA伯吉斯的研究等。7,812)相似铜绿假单胞菌隔离和显示67 - 83%的协同作用。然而,只有4/12的隔离是抵抗LVX或TZP。另一个研究表明,琼斯和Swiatlo [测试了100]——相同的组合铜绿假单胞菌棋盘隔离的方法,显示17%的协同作用。德拉格et al。9)对耐棋盘和TKA方法执行铜绿假单胞菌,表现出协同作用在6/30(20%)和(75%)分离,分别。白色的研究等。10)和Bonapace et al。11)评估的使用浓度梯度法协同测试通过将琼脂的浓度梯度法带交叉形成,在十字路口90°角尺度之间各自的麦克风的有机体。在这项研究中被白人et al。10基线测试方法和TKA之间),该协议范围63 - 75%和协议之间的棋盘法和TKA 44 - 88%不等。相关性是依赖于细菌(大肠杆菌写明ATCC 35218,肠杆菌属下水道写明ATCC 23355,铜绿假单胞菌写明ATCC 27853,金黄色葡萄球菌写明ATCC 29213)和抗生素(头孢吡肟和头孢他啶测试结合妥布霉素或环丙沙星)。同样,在研究Bonapace et al。11之间的协议),浓度梯度法和TKA远程42 - 97%,30 - 67%的棋盘法和TKA,分别。这个研究包括了10株鲍曼不动杆菌和抗菌组合评估由trovafloxacin或妥布霉素结合头孢吡肟、哌拉西林。对抗很难发现他们的方法。这两项研究得出的结论是,使用一个基线测试方法需要执行额外的测试。

协同测试方法不是标准化的再现性和解释;因此,它是极其困难的从不同的研究比较这些方法的结果。在TKA协同作用,药物浓度是固定的,不随时间减少,他们将体内。同样,没有标准的抗生素浓度测试。接种物的大小和时间框架TKA添加更多的变化。24小时的时间参数可以限制或改变实验的结果如果再生发生一个或两个抗生素。再生可能由于subinhibitory浓度抗生素的使用。出现耐药亚种群可能占再生,或可能是由于细菌再生坚持瓶子的表面,随后在中公布。另一个因素是影响再生失活的抗生素体外。协同测试措施的TKA杀菌但耗时和劳动密集型的活动。

在棋盘技术,串行执行两种药物的稀释管或微量滴定井使用药物浓度等于,高于和低于中等收入国家的药物测试。棋盘法措施抑制活动。只有每一个采用在麦克风和更大的亚文化的增长将这种方法预测杀菌活性。因为TKA和棋盘测量不同的活动,研究结果显示可怜的协议10- - - - - -14]。在与这两种方法都是有限制的。在研究中通过Cappelletty和Rybak [13),耐药的协同作用的方法测试铜绿假单胞菌比较,和存在的问题进行了讨论。

第三个方法协同作用,浓度梯度法协同方法,相对较新。基线测试条的使用协同效应尚未标准化,但有可能是一个有用的决定协同的筛检试验。我们有进一步修改了浓度梯度法协同方法使用浓度等于对于每一个药物(15]。MIC-to-MIC放置的条似乎给一个更准确的扩散两种药物的影响(如果有的话),每种药物对其他相结合对有机体。这项技术是使用简单、容易和便宜。因为棋盘法和TKA费力而费时的(16),他们不是在临床实验室进行。没有批准的标准方法体外协同测试可用,浓度梯度法可以是一个替代方法研究抗菌组合的活动。

与最近发表的临床研究Al-Hasan et al。3]显示体内协同与常用antipseudomonal LVX / TZP组合,我们觉得增加体外协同数据,包括31成了高度耐药铜绿假单胞菌菌株,是表示。本研究的目的是双重的:测试LVX和TZP的协同活动铜绿假单胞菌,包括fluoroquinolone-resistant菌株和从两个不同的协同测试方法比较结果,TKA和浓度梯度法。

2。材料和方法

31个独特的临床基因fluoroquinolone-resistant截然不同铜绿假单胞菌分离收集从1999年10月到2003年6月从五个医院在新奥尔良地区。指纹识别的分离是由pulsed-field凝胶电泳,用标准Tenover et al。17),0 - 3乐队的区别是解释为无法区分。从下呼吸道隔离是有文化的,伤口、尿、血、耳,导管尖端和骨。所有菌株的鉴定和敏感性测试进行Vitek系统(哈泽尔伍德bioMerieux Inc .,密苏里州,美国)。敏感的百分比是阿米卡星(58%)、头孢他啶(29%)、头孢曲松钠(10%)、庆大霉素(16%)、imipenem (35%)、TZP (39%)、LVX(0%)、环丙沙星(0%)、和妥布霉素(74%)。铜绿假单胞菌写明ATCC 27853是用于质量控制。Mueller-Hinton肉汤(becton dickinson微生物系统,火花,医学博士,美国)是在实验室准备的。Mueller-Hinton II琼脂(尼古拉斯)板(becton dickinson)用于基线测试麦克风的决心和浓度梯度法协同方法。Trypticase大豆琼脂5%羊血板(正)是用于在TKA菌落计数。标准实验室powders-LVX(强生制药研发、冷藏间,PA,美国)和TZP(美国惠氏研究、珠江、纽约)——基线测试条(AB Biodisk、桑纳、瑞典)。

基线测试麦克风LVX和TZP确定后一式三份制造商的指导方针和所使用的意思。基线测试浓度范围(-32 g / mL)测试是0.002 LVX TZP为-256和0.016。临床和实验室标准协会(CLSI)解释标准(g / mL)铜绿假单胞菌应用:LVX2是敏感的,中间,耐药;TZP是敏感的,128年是耐药(18]。

2.1。协同测试

2.1.1。基线测试协同方法

基线测试协同方法(15)进行了一式三份,总结部分抑制浓度(FIC)计算每一组麦克风,和意思∑膜集成电路是用于比较TKA结果。培养液和条纹尼古拉斯板块为每个隔离为基线测试麦克风准备了一样。LVX和TZP基线测试条的尼古拉斯板被应用到不同的部分。琼脂是标志着之前确定相邻麦克风在每个基线测试地带。条被孵化后1小时在室温下。使用一个基线测试器,一个新的LVX地带是放在以前删除的面积TZP地带,LVX麦克风与马克的TZP麦克风。TZP条应用于回报的方式。这建立浓度比1每两个抗菌素的麦克风。结果结合椭圆读取了大约20个小时的潜伏期后35°C。评估的效果组合,每个抗生素的FIC计算在每个组合,和意思∑膜集成电路是用于TKA相比。高数值麦克风被转换为下一个双重的稀释。下面的公式用来计算膜集成电路:FIC LVX LVX =麦克风的组合/仅LVX麦克风;膜集成电路的TZP麦克风的单独TZP /麦克风TZP相结合;(3)膜集成电路膜集成电路的LVXTZP膜集成电路。协同作用被定义为膜集成电路0.5。对抗被定义为膜集成电路4所示。与ΣFIC交互0.5,但4被称为冷漠[16]。

2.1.2。Time-Kill化验

TKAs进行按照CLSI准则(19]。一个大约CFU /毫升剂在电镀后验证了重复使用螺旋铁甲工和扫描仪(螺旋生物技术,马里兰州贝塞斯达,美国)。每个隔离测试与LVX TZP单独和联合浓度等于平均基线测试麦克风。浓度等于平均浓度梯度法使用麦克风以便TKA结果可以直接与浓度梯度法相比,协同方法(使用每种药物)。当麦克风或者药物大于浓度最高的价值,最高浓度在TKA地带使用。在所有隔离进行菌落计数在0小时和24小时。执行连续稀释和电镀螺旋铁甲工,进而稀释和盘子样本,帮助减少抗生素结转的可能性。螺旋铁甲工/扫描仪,用于精确检测细菌计数低至20 CFU /毫升。

协同作用是定义为一个2菌落计数下降24小时后的组合与最活跃的单剂相比,和幸存下来的生物的数量必须存在的组合2CFU /毫升以下起始剂(16]。冷漠是定义为一个224小时在菌落数增加或减少的组合相比,单靠最活跃的药物。对抗是定义为一个2菌落计数增加24小时后的组合相比,最活跃的药物单独(16]。TKA结果不一致的基线测试协同作用的结果,是重复和确认初始TKA发现。

3所示。结果与讨论

基线测试麦克风的铜绿假单胞菌隔离LVX 8 -32克/毫升(抗)和TZP 4 -256年抗g / mL (61%)。协同作用被发现在9/31(29%)的隔离使用基线测试并使用TKA 14/31 (45%)。基线测试方法(六隔离是冷漠的膜集成电路:2、1、2、0.9、0.8,1)但协同TKA方法(日志₁₀变化:,,,,,)。一个隔离是协同与浓度梯度法(膜集成电路),但与TKA漠不关心(日志₁₀改变)。有良好的协议之间的协同作用浓度梯度法(32%)和TKA(37%)这两种药物耐药时。协议是好浓度梯度法和TKA之间(25%比58%)当TZP敏感基线测试之间的一致性和TKA高:24/31(77%)(见表1)但是因为没有黄金标准协同测试很难确定哪些方法更准确。没有任何证据表明在体外对抗。

至少有三个可能的原因可以解释结果浓度梯度法和TKA之间的差异。首先,我们的分离是高度LVX(100%)和TZP耐(61%),与中等收入国家通常超过基线测试地带检测极限;因此,我们经验的下一个双重的稀释使用膜集成电路计算。这很难解释结果,显然是一个基线测试方法的局限性。第二,当前基线测试膜集成电路标准协同只是进口棋盘为基线测试方法和可能需要调整。最后,TKA数据分析了基于CFU /毫升变化比较结合的效果最有效的药物的影响,而基线测试数据进行了分析与FIC指数比较浓度的药物单独和组合。

基线测试能够检测耐轻微的增长和阴霾的亚种。因为这两种药物的麦克风被解读为杀菌端点,这些耐药殖民地包括阅读时基线测试麦克风的端点。洛里显示细菌生长在一个表面上明显不同于细菌生长在液体介质(20.]。包括经济增长率的差异、依从性和对抗菌药物的敏感性,以及细菌的生化宪法本身的差异及其代谢物。一个主要的区别是在超微结构。证据表明,细菌在体内生长和产生疾病的表面而不是在体液(20.- - - - - -23]。超微结构相同的细菌在体内和体外生物生长在一个表面上支持理论,针对复制体内体外实验条件应进行可靠的媒体。

目前的研究,其中包括所有TZP-resistant LVX-resistant和61%铜绿假单胞菌菌株,表现出协同作用浓度梯度法(29%)和TKA(45%)和证实了先前的体外协同数据使用内酰胺/氟喹诺酮类的组合。以前体外协同作用研究显示17 - 83%的协同作用,取决于所使用的方法。

4所示。结论

一些体外协同LVX + TZP TZP-susceptible和TZP-resistant演示铜绿假单胞菌菌株,没有发现对抗。高一致性(77%)之间的浓度梯度法和TKA表明基线测试方法可能替代time-kill体外协同测试的研究铜绿假单胞菌LVX和TZP。浓度梯度法是使用简单,省时间,便宜,而且可再生的和TKA结果可比。体外协同作用可能会或可能不会转化为体内的协同作用。

确认

作者感谢Chupol Shariffskul迈克尔·Lacassagne和阿琳Lefebre,临床实验室科学家在路易斯安那州,公共卫生办公室/一般实验室,新奥尔良,洛杉矶,执行pulsed-field凝胶电泳分析铜绿假单胞菌隔离;Royanne Vortisch实验室援助;和帕特Pankey实验室管理。本研究支持格兰特Ortho-McNeil制药,Inc .,奥克斯纳诊所的基础。研究设计、数据分析和准备的手稿被作者完全执行。

引用

1. j·p·奥德柯克,j . a .北方g . s . Turett和j·w·Kislak”多粘菌素B肾毒性和有效性对院内抗多种抗菌素的革兰氏阴性细菌引起的感染,”抗菌药物和化疗卷,47号8,2659 - 2662年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. d·m·利弗莫尔”假单胞菌,名叫,水泵和碳青霉烯抗菌化疗杂志》卷,47号3、247 - 250年,2001页。视图:谷歌学术搜索
3. m . n . AI-Hasan j·w·威尔逊,b·d·塔•et al .,”$\beta$内酰胺和氟喹诺酮类抗生素治疗组合菌血症由革兰氏阴性杆菌引起的,”抗菌药物和化疗,53卷,不。4、1386 - 1394年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. c·m·弗林·d·m·约翰逊和r·n·琼斯,“左氧氟沙星体外药效单独或结合对多药耐药检测铜绿假单胞菌压力。”化疗杂志》,8卷,不。6,411 - 415年,1996页。视图:谷歌学术搜索
5. s . l . Pendland c·r·梅西克和r·荣格“体外协同测试左氧氟沙星、氧氟沙星和环丙沙星结合aztreonam,头孢他啶,或哌拉西林铜绿假单胞菌”,诊断微生物学和传染病,42卷,不。1,第78 - 75页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. e . Fodor e·豪伊杜和e·伊”的使用浓度梯度法来评估协同作用的抗生素对临床分离的组合假单胞菌。”,国际期刊的抗菌药物,25卷,不。2、183 - 184年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. d·s·伯吉斯,r·g·霍尔,t·c·哈丁“体外评价活动的两个剂量的左氧氟沙星和结合其他代理铜绿假单胞菌”,诊断微生物学和传染病,46卷,不。2、131 - 137年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. d·s·伯吉斯和美国Nathisuwan头孢吡肟、哌拉西林/ tazobactam庆大霉素、环丙沙星和左氧氟沙星和结合铜绿假单胞菌”,诊断微生物学和传染病,44卷,不。1,35-41,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. l·德拉戈e . De Vecchi l·尼古拉·a·科伦坡a . Guerra和m . r . Gismondo”活动的左氧氟沙星和环丙沙星与头孢吡肟、头孢他啶,imipenem, piperacillin-tazobactam和阿米卡星不同铜绿假单胞菌表型和不动杆菌。”,化疗,50卷,不。4、202 - 210年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. r . l .白色d·s·伯吉斯m . Manduru和j·a . Bosso”的比较三个不同的体外检测方法协同作用:time-kill,棋盘,和E测试,”抗菌药物和化疗,40卷,不。8,1914 - 1918年,1996页。视图:谷歌学术搜索
11. c . r . Bonapace r . l .白色l . v .弗里德里希和j . a . Bosso”评价抗生素协同攻击鲍曼不动杆菌:与E测试、time-kill和棋盘方法。”诊断微生物学和传染病,38卷,不。1,43-50,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. a . s .拜耳和j . o . Morrison”差距timed-kill和棋盘方法测定体外杀菌多重耐万古霉素和利福平与methicillin-susceptible和交互金黄色葡萄球菌”,抗菌药物和化疗,26卷,不。2、220 - 223年,1984页。视图:谷歌学术搜索
13. d . m . Cappelletty和m . j . Rybak”比较合作的方法测试的药物组合对耐药菌株铜绿假单胞菌”,抗菌药物和化疗,40卷,不。3、677 - 683年,1996页。视图:谷歌学术搜索
14. p h . Chandrasekar l . r .起重机和e·j·贝利”的活动比较体外抗生素组合与临床结果和电阻出现严重的感染铜绿假单胞菌nonneutropenic病人。”抗菌化疗杂志》,19卷,第329 - 321页,1987年。视图:谷歌学术搜索
15. g . a . Pankey和d s Ashcraft“体外协同环丙沙星和氟哌酸对耐环丙沙星铜绿假单胞菌”,抗菌药物和化疗卷,49号7,2959 - 2964年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. s . k .皮拉伊r . c . Moellering Jr .)和通用Eliopoulos“抗菌组合,”抗生素在实验室医学诉洛埃德。,页365 - 440,Lippincott威廉姆斯和威尔金斯,费城,宾夕法尼亚州,美国第五版,2005年版。视图:谷歌学术搜索
17. f . c . Tenover r·d·劳动r . v .戈林et al .,”解释染色体DNA限制模式所产生的脉冲场凝胶电泳:标准菌株打字,“临床微生物学杂志,33卷,不。9日,第2239 - 2233页,1995年。视图:谷歌学术搜索
18. CLSI,性能标准药敏测试:19信息补充宾夕法尼亚州韦恩、临床和实验室标准协会,美国,2009年,M100-S19 CLSI文档。
19. NCCLS,方法确定杀菌活性的抗菌药物;批准的指导方针,国家临床实验室标准委员会,韦恩,Pa,美国,1999年,M26-A NCCLS文件。
20. 诉洛”,在体外模拟体内条件:培养基的物理状态,”临床微生物学杂志,27卷,不。11日,第2406 - 2403页,1989年。视图:谷歌学术搜索
21. r·h·k·英格a .谢长廷和s·m·史密斯,”抗生素杀死细菌:细菌在液体表面和比较,增长和不生长,”化疗第41卷。。2、113 - 120年,1995页。视图:谷歌学术搜索
22. 诉洛和g . Satta体外和体内研究之间的差异,”抗菌药物和化疗,32卷,不。10日,1600 - 1601年,1988页。视图:谷歌学术搜索
23. h·史密斯,”关于细菌病原体在体内的行为的问题,”英国皇家学会哲学学报B,卷355,不。1397年,第564 - 551页,2000年。视图:谷歌学术搜索

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