耐药革兰氏阴性杆菌在外卖总医院,意大利

文摘

本研究旨在检测的样本中存在耐药革兰氏阴性细菌的好药的外卖巴勒莫大学总医院,意大利。抗生素耐药革兰氏阴性被孤立在2007年7月- 9月ffrom冷菜和食品接触表面和器具。菌株被提交给敏试验和子类型随机扩增多态性DNA (RAPD)。46个55(83.6%)食物样本17和14(82.3%)环境拭子文化为革兰氏阴性杆菌阳性耐至少一组抗菌药物。51 134抗生素耐药菌株,发酵83 non-fermenters,被恢复。发酵non-fermenters显示频率高达97.8%的耐抗生素的两个或两个以上的组和非发酵耐28.9%以上三组。分子类型检测34个不同的概要文件中发酵68 non-fermenters之一。抗生素耐药性发酵和non-fermenters中非常普遍。然而,RAPD的广泛异构模式似乎支持交叉污染的重要角色,而不是一些耐药克隆扩张隔离。贡献的同桌的革兰氏阴性殖民食品常见的细菌抵抗池不应该被忽视。

1。介绍

各种抗菌药物的耐药性迅速崛起和对公众健康构成重大挑战。全面了解最重要的传播路线抗菌素耐药细菌(ARB)压力和阻力编码基因序列是至关重要的有效控制和最小化问题(1]。

食物似乎是一个有效的源耐药细菌的收购由人类和耐药性基因,但这种接触的扩展和实际后果仍不够调查(2- - - - - -5]。此外,当发生和演化食源性耐药病原体入侵的各种社区和卫生保健相关的设置已经经常经验和深入研究,水平基因转移事件发生之间的共生体和病原体之间休共生体和人类共生的是迄今为止已知的不良4- - - - - -11]。

这种转移可能会最成功的主机时同时提交的选择性压力,一种抗菌物质参与生物耐药(1]。从这个角度来看,卫生保健相关的环境设置,ARB和阻力因素最有可能出现,基因的水平传播有更多的机会发生,和治疗失败和成本的后果可能更严重(1,12,13]。

医院食品服务系统被认为是最关键的部分之一,酒店行业,客户通常是一个弱势群体,和一个严格的、系统的监测食源性危害必须一致地应用(14]。

本研究旨在检测耐药革兰氏阴性细菌的好药的存在(MDR-GN)在食品样品交付通过镀服务大学总医院”Azienda Ospedaliero-Universitaria亲自到”(AOUP),意大利巴勒莫。食品接触的设备和器具表面医院承办酒席的食物的前提,切块,放入食物准备,个性化的托盘也抽样检查访问期间。抗菌药物敏感性和模式的遗传异质性MDR-GN进行评估。

2。材料和方法

2.1。设置

这个调查是进行大学总医院”Azienda Ospedaliero-Universitaria亲自到“(AOUP),巴勒莫,意大利,在2007年7月- 9月。在这家医院,食品服务外包给外部备办食物者谁是采用传统的烹饪和服务生产方案和镀餐分配系统。特别是,食物是被命令根据病人的选择提前24小时。承办酒席的核电站,饭菜也是镀组装,然后使用一个传送带食品操作者站在任何一方和服务适当部分板块。热菜是然后依次放入托盘被堆成预热柜,冷菜是放在单独的隔间,运输和交付之前到医院病房。

2.2。食物样本

研究的目的,只是凉菜,没有提交选择热处理。样品大约50克的每日收集收据从午餐餐在医院病房,通过他们从收到托盘类似于一个病人。样本立即放置在冷藏容器并将其保持在C直到转移到实验室进行测试(约15分钟)。当送到实验室,10 g每个食品样品的无菌加权到无菌兜包袋,然后90毫升的蛋白胨水补充道。样本单一化60秒和孵化24小时C。

2.3。食品接触表面和器具

检查和环境采样进行了2007年9月。食品接触表面和器具的承办酒席的前提下,使用拭子采样技术。每无菌棉拭子是用无菌盐水浸湿,pH值7.0,然后反复在每10 cmq表面积,滚。取样后,拭子被放置无菌10毫升的蛋白胨水在冷冻温度和转移到实验室。拭子后被送到实验室,每个包含拭子是涡管10秒,以确保混合的样本,然后孵化24小时C。

2.4。耐药革兰氏阴性的检测方法

MacConkey琼脂板是接种24小时0.2毫升的富集培养后获得连续的草坪隔夜孵化环境空气中c .四种抗生素磁盘包含amoxicillin-clavulanic酸(20/10μg)、头孢他啶(30μg)、庆大霉素(10μg)和萘啶酸(30μg),被放置在每个板孵化之前,如前所述[15]。

孵化后,盘子被检查,所有殖民地不同形态的成长为每个抗生素抑制光晕是革兰氏染色和纯洁的亚文化。隔离所有被测试提交生化筛查氧化酶和过氧化氢酶活性和葡萄糖发酵分为革兰氏阴性发酵或non-fermenters。一个完整的生化鉴定系统API 20 e或API 20 ne (bioMerieux, Marcy-l 'Etoile,法国)是应得的一些集群隔离和两个extended-spectrum内酰胺酶——(ESBL)革兰氏阴性发酵生产。生化鉴定物种水平的隔离被认为是无法提供有用的附加信息,因为从食物中获得的很大程度上是不可靠的结果,通常由商业表型系统隔离,包括API系统,根据最近的研究16]。

2.5。抗生素敏感性测试

易感性每个孤立的一组九抗菌物质是由磁盘扩散评估Mueller-Hinton琼脂板,根据临床和实验室标准协会(CLSI)指南17]。以下抗菌素进行测试:amoxicillin-clavulanic酸,Amc (20/10μg)、头孢噻肟、Ctx (30μCaz(30克)、头孢他啶μg),头孢曲松钠,Cro (30μg)、庆大霉素、Cn (10μ净(30 g)、netilmycinμg)、萘啶酸钠(30μg)、环丙沙星、Cip (5μg),四环素,Te (30μg)。

ESBL生产被减少易感性或抗性检测包含头孢噻肟的第三代头孢菌素和磁盘之间的协同作用,头孢他啶,头孢吡肟,aztreonam和磁盘包含amoxicillin-clavulanic酸(18]。

这项研究的目的,革兰氏阴性微生物对至少两个不同组的抗菌药物(amoxicillin-clavulanic酸、头孢菌素、氨基糖甙类,喹诺酮类、四环素)被定义为MDR-GN。

2.6。基因型分析的随机扩增多态性DNA (RAPD)

单菌落生长在固体媒体被无菌塑料尖和resuspended在100年μL无菌去离子水的微型离心机管。DNA提取由沸腾了停赛10分钟。快速旋转颗粒细胞碎片后,上层清液是用作后续放大或储存在DNA模板直到PCR应用C。

如前所述(执行RAPD19,20.]。PCR混合物含有200μ每个核苷酸,150 ng底漆,缓冲(10毫米Tris-HCl, pH值8.8;1.5毫米MgCl₂;50 mM氯化钾;特里同x - 100) 0.1%, 2 UTaqDNA聚合酶(Promega,麦迪逊,WI,美国),和1μL全细胞DNA总量的50μl .放大协议包括以下步骤:初始变性C 5分钟,其次是40变性(1分钟的周期C),退火(1分钟C)和扩展(C 2分钟),最后一个扩展步骤(C 10分钟)。

本研究中使用的引物ERIC2 (-ATGTAAGCTCCTGGGGATTCAC -)和M13 (-GAGGGTGGCGGTTCT -)。底漆ERIC2主要是使用,而M13是用于确认集群。

放大PCR产品分离用2%琼脂糖凝胶,用紫外线透照和拍照。1 Kbp或100个基点DNA梯(Promega)作为分子量。DNA指纹比较由不同时目视检查和考虑独特的至少一个乐队,乐队强度无关。

2.7。统计分析

EpiInfo数据分析的软件(版本6.0,疾控中心,亚特兰大,乔治亚州,美国)。频率分析进行卡方检验。交叉制表和卡方或Fisher精确测试阻力之间的关系进行确定和隔离的一些特征和食品加工耐药革兰氏阴性的隔离。对于一些统计分析,对抗生素的敏感性被归类为一个二分变量解释中间敏电阻。在所有分析,被认为具有统计显著性差异。

3所示。结果

3.1。检测ARB的食物和环境隔离

2007年7月- 9月期间,55食物样本和17拭子从食品接触表面和器具检查。46个55(83.6%)食物样本17和14(82.3%)环境拭子是文化为革兰氏阴性杆菌阳性耐至少一组抗菌药物。

共有115个不同的革兰氏阴性杆菌分离株对至少一个抗菌组确定从以下食品:22个来自18个样品的软奶酪,三个三个的样品切片火腿,20来自12个样品的火腿和奶酪混合菜,和70年从24个蔬菜样品。

分别19耐环境隔离,六从台面,离心机,水槽,和传送带新鲜蔬菜的清洗区,九从砧板,托盘,和刀子在蔬菜加工区域,和四个从切片机和食品接触表面在腌肉的工作区域。

3.2。表征ARB隔离

134年的革兰氏阴性隔离被归类为51发酵83 non-fermenters生化反应。耐药革兰氏阴性发酵与患病率non-fermenters四组没有显著不同的食品检查()。

流行的抗、中间或易感表型对抗菌药物测试在所有隔离如图1。电阻对萘啶酸(83.6%)和无(74.6%)非常频繁,紧随其后的是电阻,头孢噻肟(33.6%)和四环素(28.4%)。之间的显著差异检测发酵闽江所有抗菌药物耐药性的流行,但two-nalidixic酸和庆大霉素(表1)。此外,发酵明显更有可能表现出对环丙沙星的耐药性和四环素,而non-fermenters无,头孢菌素和netilmycin(表1)。

共有29个不同的电阻模式,12中发酵20 non-fermenters,分别确定。总结了模式及其分布表2。

数据2(一个)和2 (b)显示至少两个电阻的流行,至少三个,超过三组抗菌药物在所有隔离和分层发酵和non-fermenters之后。Non-fermenters显著相关()和更高比例的阻力比三组三个或更多的抗生素。

两种发酵隔离证明被修改后的双盘ESBL生产协同试验中被确认肠杆菌属下水道。

3.3。分子类型和集群ARB的隔离

耐药革兰氏阴性杆菌的分子类型与ERIC2 RAPD引物检测到34个不同的概要文件中51发酵68 83 non-fermenters(人物之一3(一个)和3 (b))。8个RAPD模式中发酵9 non-fermenters包括两到十隔离。17然而,15个集群包含两个或三个分离株,而只有两个RAPD patterns-F26 NF28,分别是归因于十发酵和八不发酵革兰氏阴性隔离。隔离分享F26和NF28 RAPD概要文件是生化鉴定,分别为克雷伯氏菌oxytoca和铜绿假单胞菌。

所有集群使用M13引物经。这两个ESBL阳性大肠下水道显示独特的RAPD概要文件。

集群分离显著()更有可能对三个抗生素组和不太可能()对超过三个抗生素组。没有发现协会之间的集群和抵抗抗生素组(至少两个)。在10k . oxytoca隔离与RAPD模式F26,八对Na, Cip和Te和两只Na和Te。八铜绿假单胞菌模式NF28有更多的异构阻力模式:三是Amc Cro Ctx Na,两个Amc Cro Ctz Na Te,每个Amc Caz Cro Ctx Na, Amc Ctx Na,分别Amc Na Te。

集群没有明显关联到任何食物产品()。

除了两个较大的,其余集群包括隔离恢复从食物样本间隔的时间从0,当他们的隔离是由不同的食品采样在同一日期,10天。10的隔离k . oxytocaRAPD模式F26已在七叶生菜沙拉和三道菜含有混合火腿和软奶酪分布在不同的日子。七个铜绿假单胞菌隔离RAPD模式NF28也在不同的采样天:他们分别五叶绿色沙拉、一个西红柿沙拉,和一个从一个基于软奶酪菜。之间的间隔时间的第一个和最后一个隔离是在50天。

4所示。讨论

食物的作用在人类暴露于耐药细菌的整体框架已经直到现在不够调查从公共健康的角度来看。许多研究把重点放在了抗菌素耐药性的贡献带来的危害的严重性食源性病原体和具体措施采用沿食物链最小化当前趋势的一些致病菌,如沙门氏菌,获得耐氟喹诺酮类和第三和第四代头孢菌素(21- - - - - -23]。然而,共生的细菌的问题作为一个潜在的风险直接机会生物和间接抗性基因的携带者只是部分探索到目前为止(11,24]。

提供额外的信息关于food-mediated暴露在革兰氏阴性ARB,我们调查了发生这些生物在餐饮食品加工前提和交付给住院病人。实际上,相当一部分的这些主题属于一个消费者的人口群,抗药性细菌的入侵和由于使用抗菌药物选择压力可能在一个支持性的交流环境和产生更严重的健康风险(12,13]。

比例高达83.6%的食物样品抗革兰氏阴性阳性的一个或多个组织的抗生素,与一个伟大的异质性的阻力模式和RAPD发酵和闽江模式。此外,这两种革兰氏阴性组显示频率高达97.8%的耐抗生素的两个或两个以上的团体。闽江,特别是耐28.9%以上三组。以前描述的数据大相径庭的抗性显著降低肠杆菌科与切碎的肉和蔬菜,但不敏感检测方法缺乏选择性培养基上的初步步骤(25,26]。因此,比较会固有偏见的预选的基础上我们的应变电阻至少一种抗生素。此外,在论文Bezanson et al。8],描述抗十抗生素oxidase-positive细菌从原始蔬菜沙拉,抵抗一些抗生素,如萘啶酸、氨基甙类抗生素,对革兰氏阴性不如我们的发现频繁。方法论的差异,主要在抗生素敏感性测试,包含一个浓缩的步骤在我们的研究可能有助于解释这种不一致。的另一个重要的角色可能是归因于我们的选择检查加工食品,因为定性/定量变化的共生的植物可能通过食物链的后续阶段发生在餐饮的前提。它是未知的,另一方面,抗菌素耐药细菌是否有选择性的优势在敏感的生存或繁殖食品加工厂,除了报道抗性抗生素和农药协会(27]。

特别关注的出现对萘啶酸的高患病率,少一个程度上,头孢噻肟。文献表明,萘啶酸由磁盘扩散阻力的方法可能是一个可靠的指标敏感性降低环丙沙星(28]。抵抗抗生素在我们这最后数据更频繁的在发酵革兰氏阴性,包括肠杆菌科,一个家庭氟喹诺酮类耐药性出现机会主义和病原体在医院和社区成员设置(3,21,22,27]。传播的-lactamases生产细菌和编纂序列进一步担心复杂的流行病学特征的耐药性(5]。检测出的比例非常高,抗头孢两ESBL-producing隔离的隔离大肠下水道由其他作者(隔离证实了以前的结果5]。

进一步发现值得考虑的大型异构RAPD模式,不包括克隆扩张作为一个可能的原因的食品中抗生素抗性的流行率很高。此外,识别一些集群的发酵罐和non-fermenter隔离间隔的时间范围在0到50天之间证明耐药生物的食品加工环境中的持久性,因此,良好的卫生习惯的潜在有效性最小化他们的扩散。

我们的研究也有一些局限性。首先,抽样进行了在一个食品餐饮的前提。因此,结果可能是深受工厂的卫生条件,及其普遍性可能有问题。此外,位置和水平的问题可转让性的抗性遗传因素尚未解决。内在的一些抗生素抗性,例如,AmpC介导的存在在各种-lactames或四环素抵抗肠杆菌科,有可能高估了multiresistance患病率。最后,没有证据寻找可能与殖民关系之间的隔离病人留在医院在研究过程中。

5。结论

基于我们的研究结果,贡献的共生体ARB革兰氏阴性殖民加工食品消费没有进一步的热处理或处理一个常见的电阻池不应该被忽视。这是一个令人不安的发现当考虑可能影响日常管理的耐药细菌的易感人群,特别是那些免疫系统缺陷或并发症和那些接受抗生素治疗。了解航线连接抗细菌和人类遗传抗性决定因素,包括食品车辆的作用,定义有效的策略来控制这个问题的关键。良好的食品卫生实践的一致和有效的应用是一个关键问题的预防和控制食品污染antimicrobial-resistant致病性和共生的细菌。

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