文摘

动脉高血压(啊)属于疾病遗传易感性遗传因素决定的必要性研究这种疾病发展的影响。建议一个食盐过敏动脉高血压潜在标记可能是alpha-adducin基因,因为它的蛋白质产品参与肾上皮离子运输监管。因此,这项研究的目的是调查之间的关系ADD1Gly460Trp-polymorphism和啊开发风险患者不同的风险因素在乌克兰人口。这项研究包括232名乌克兰人:120患者诊断动脉高血压几乎和112年健康个体。聚合酶链reaction-restriction片段长度多态性(PCR-RFLP)被用于分析ADD1Gly460Trp-polymorphism基因分型。的ADD1Gly460Trp-polymorphic动脉高血压发展的轨迹是一个重要的指标在乌克兰人口,但其他nongenetic在进一步的研究应考虑的因素。

1。介绍

动脉高血压(啊)是主要的可预防的危险因素的心血管疾病(心血管病)。其发病率约30 - 45%的总人口,随着年龄的增加。高动脉血压(BP)是引发和加速动脉粥样硬化的发展,显著增加冠心病的发病率,中风,心脏和肾功能衰竭(1]。

动脉高血压疾病遗传易感性,其发展取决于环境因素复杂的相互作用和影响个体的遗传标记疾病发生的风险,当然,并发症的形成。有nonmodifiable(性别、年龄、遗传和负担)和修改(超重和肥胖、吸烟、饮酒、高盐摄入,压力,等等)啊(风险因素2]。

遗传因素在啊发展发挥重要作用。因此,有很多研究关注啊风险基因检测,其表达产品可以直接或间接地影响到啊发生和pathogenetically相关心血管疾病的临床表现3- - - - - -5]。有一个单独的研究领域致力于研究基因的单核苷酸多态性(SNP)的角色,他们的产品很重要啊发病机理(4,6]。

目前遗传流行病学研究表明,adducin基因可能是一个重要的潜在的标志基因啊,尤其是对食盐过敏(7]。今天,有三个主要位点adducin家族基因与啊development-Gly460TrpADD1,C1797TADD2,A386GADD3(8,9]。

大量的人口研究显示Gly460Trp T等位基因之间的关联(ADD1基因)和啊发展10- - - - - -18];然而,在别人没有这个链接(19- - - - - -22]。应该注意的是,数据之间的关系ADD1Gly460Trp-polymorphism啊发生仍有争议和演示interpopulation协会的差异基因多态性变异啊发展的风险。许多研究表明基因型分布差异可以显著波动在不同民族(10- - - - - -22]。因此,这些或其他多态标记之间的关系和不同人群的啊发展是矛盾的,使每个民族和人口组显著(研究8,22- - - - - -24]。

这项工作的目的是探讨之间的关系的Gly460Trp-polymorphism alpha-adducin 1 (ADD1)基因和啊开发风险患者不同的风险因素在乌克兰人口。

2。材料和方法

2.1。研究人群

目前医院病例对照研究招收了232名乌克兰人,观察在苏梅地区医院和1日苏梅临床医院从2018年到2019年。所有参与者选择的医疗记录和诊断啊分为病例组和对照组的相对健康的控制没有啊。第一组涉及120例(46名男性和74名女性;平均年龄53.33±14.55 (±SD)),验证诊断二啊临床阶段。验证诊断和决心啊阶段与品位估计根据世卫组织标准(1999)(25)和欧洲心脏病学会(2007)(26]。对照组几乎包括112名健康的血压正常的个人(73男性和39岁的女性;平均年龄57.89±10.05)。排除标准研究小组的症状啊,内分泌肥胖、妊娠和哺乳期、急性传染病、慢性感染性疾病的恶化,肿瘤、精神疾病和神经系统疾病,全身性结缔组织疾病,急性脑循环障碍(3个月),病人拒绝参加研究。

在下一阶段,高血压患者被分成两个subgroups-with食盐过敏和聚合过程中疾病(表1)。Elijovich技术被用来确定类型的盐敏感性。这种方法的本质是坚持高盐饮食与进一步限制盐的摄入。坚持节食被日常评估尿钠排泄在高盐、低盐饮食用电解质分析仪“Ionometer3”(费森尤斯医疗账本AG)和有限公司,德国)离子选择性尿液电位法。有一个依赖盐饮食的特点:患者称为食盐过敏,如果从高盐低盐饮食后,收缩压(SBP)下降了超过10毫米汞柱;聚合后是否改变饮食,SBP没有减少超过5毫米汞柱;和个人的反常反应盐负荷和减少的变化在SBP切换到低盐饮食(27]。

表1
患者临床特点的不同啊。

人体测量数据(年龄、性别、体重指数、吸烟习惯)当时记录的选择研究。英国石油(BP)测量三次,最后两个的意思是用于分析。空腹血糖和血脂参数(总胆固醇、甘油三酯、高、低和低密度脂蛋白胆固醇,和等离子体的硬化指数)在诊断时进行记录。每日尿钠排泄患者进行诊断啊来确定类型的盐敏感性。

研究协议实施符合赫尔辛基宣言,伦理委员会批准苏梅州立大学的医学院。患者介绍研究协议和自愿的知情同意书。

2.2。基因分型

ADD1Gly460Trp-polymorphism决心执行使用聚合酶链reaction-restriction片段长度多态性分析(PCR-RFLP)。DNA分离出50µ整个静脉血的L根据制造商的标准协议使用«NeoPrepOne hundred.DNA_Blood»(新第三纪)。放大反应混合物(总量25µ5 L)组成的µL FastDigest绿色缓冲(10 x)(美国热科学™),0.5µL混合核苷酸(包含每个脱氧核苷酸的10毫米)(美国热科学™),0.75 U DreamTaq DNA聚合酶(5 U /µL)(美国热科学™),0.1μ每个引物的l, 2µL DNA,和去离子水的总量。PCR进行了使用Thermocycler GeneAmp PCR系统2700(美国热费希尔科学)。底漆核苷酸的结构和聚合酶链反应阶段如表所示2。

表2
底漆核苷酸序列和PCR条件。

反应混合物(总量2µ包括0.8 L)的限制µL CutSmart缓冲区(新英格兰生物学实验室),0.2µl分96我(新英格兰生物学实验室)和去离子水的总量。样品被孵化温度37°С20 h。

水平电泳(10 V /厘米)在2.5%琼脂糖凝胶的溴ethidium解决方案(10毫克/毫升)是用于基因分型。歧视的基因型进行了使用透照器(“成功率”,俄罗斯)。G等位基因的存在在66124的位置ADD1基因(NG_012037.1)导致的分裂扩增子(252个基点)分96年i-restrictase 225 bp和27个基点的分成两部分。T等位基因的存在导致防止限制,和原始片段(252个基点)保存(图1)。


图1
的结果ADD1rs4961-polymorphism基因分型。M:分子标记;英国石油公司:碱基对;1、3、4、5、6:GG基因型;2、8:GT基因型;7:ТТ基因型。
2.3。统计分析

社会科学软件统计软件包(SPSS 25.0版本,芝加哥,美国)申请结果的统计分析。提出了连续变量均值±SD,和分类变量作为绝对和百分比值。卡方检验(χ2)测试是用于比较的频率等位基因,基因型和其他分类变量。小动物——一张长有学生的t以及用于比较平均值(初步验证根据Shapiro-Wilk正常数据分布的测试)。等位基因频率分布的对应哈迪温伯格平衡进行了使用计算器哈迪温伯格平衡(https://wpcalc.com/en/equilibrium-hardy-weinberg)。的框架中使用的二进制逻辑回归是隐性的,占主导地位,overdominant和添加剂遗传模型分析之间的关联ADD1rs4961-polymorphic变异和发展啊。调整了年龄、性别、身体质量指数(BMI)、吸烟习惯,年级啊,啊在家族史是应用于提高结果的可靠性。«性»和«BMI»反是;探讨了添加«模型效果修饰符的遗产继承∗∗性»和«模型BMI»独立变量逻辑回归,分别。所有 值是双尾;的值 被认为是重要的。

3所示。结果

统计上显著的差异显示在食盐过敏和抗盐性患者( )和体重指数( )。另一方面,子组比较没有显著不同年龄、烟民数量,和实验室测试结果( )(表1)。

的频率ADD1Gly460Trp基因型和等位基因和信件的主要和次要的等位基因的分布哈迪温伯格平衡总结在表3。控制和主要组没有显著偏离哈迪温伯格平衡(预期PHWE= 0.452,PHWE分别为= 0.494)。

表3
分布的ADD1相比rs4961-polymorphism等位基因和基因型组。

的分布ADD1Gly460Trp基因型和等位基因分析表明,120啊患者中,91(75.8%)的G等位基因纯合性,3(2.5%)有T等位基因纯合性,和26(21.7%)杂合的。的频率啊病人的G等位基因是0.87,T是0.13。98 (87.5%)GG基因型,13例(11.6%)有GT基因型,1例(0.9%)几乎TT基因型在健康的个体。的G和T频率分别为0.93和0.07,分别。卡方检验(χ2)测试没有透露的分布的区别ADD1Gly460Trp基因型和等位基因控制和病人啊 );相反,在统计上有显著差异建立了等位基因频率( )。

二元逻辑回归常被用来估计啊发生取决于风险ADD1Gly460Trp基因型(表4)。风险啊发展小等位基因携带者(GT + TT)(或高с= 2.231;95%СІ= 1.109 - -4.487)比主要等位基因纯合性(GG) (Рс= 0.024)。同时,GT基因型啊发展风险高于GG基因型在overdominant和添加剂继承(或模型с= 2.106;95%СІ= 1.022 - -4.341;Рсoverdominant = 0.043;或с= 2.154;95%СІ= 1.044 - -4.444;Рс添加剂= 0.038)。调整后的协变量(年龄、体重指数、吸烟习惯),一个重要的协会仍然在主导模式下(或а= 2.138;95%СІ= 1.014 - -4.509;Ра= 0.046)。然而,在调整了性,主要模型失去了统计学意义(Ра= 0.261)。

表4
的分析ADD1rs4961-polymorphism与动脉高血压发生。

下一阶段是研究Gly460Trp-polymorphism基因型分布,考虑一些啊风险因素。

统计上显著的差异被发现在基因型的分布( )和等位基因( )不同性别的个体(表5)。因此,48例(64.8%)受试者GG基因型,23和GT基因型(31.1%),3例(4.1%)和TT基因型是女性啊;次要的等位基因频率为0.19。同时,有43(93.5%)的男性GG基因型和3与GT基因型(6.5%);轻微的等位基因频率为0.03(没有男性与TT基因型)。

表5
的ADD1rs4961-polymorphism等位变异频率与不同的科目啊风险因素。

啊患者被分成组与正常和高体重指数显示显著差异在个体基因型分布与不同BMI指数( )(表5)。因此,40例(64.5%)受试者GG基因型,与GT基因型19例(30.7%),3例(4.8%)患者TT基因型是啊BMI≥25公斤/ m2。啊患者BMI˂25公斤/ m2有以下GG的分布、GT和TT基因型:51例(87.9%),7(12.1%),分别和0 (0%)。小等位基因频率在第一组是第二组的0.2和0.06曾在统计上有显著差异的分布( )。

的分布G / G, G / T, T / T基因型食盐过敏患者明显不同于聚合患者( )(表5)。基因型分布是41(66.2%)、18(29%),3例(4.8%)为食盐过敏患者和50例(86.2%),8例(13.8%),分别为抗盐患者和0 (0%)。小等位基因频率在第一组是第二组的0.19和0.07曾在统计上有显著差异的分布( )。

没有在统计上有显著差异ADD1Gly460Trp基因型( )和次要的等位基因( )分布在主题与吸烟习惯。

二进制逻辑回归常被用来估计啊发生患者不同的性别取决于风险ADD1Gly460Trp基因型(表6)。没有统计学意义啊开发风险在不同基因型在每个继承模型(Pc> 0.05)。然而,在调整了协变量(年龄、体重指数、吸烟习惯),一个重要的链接显示在女性(或占主导地位的模型а= 2.787;95%СІ= 1.022 - -7.6;Ра= 0.045)。因此,性可以被定义为一个风险啊发展修饰符(P一个int= 0.049)。它证实了视图啊发展风险较高的女性T等位基因的存在。

表6
之间的关联分析ADD1rs4961-polymorphism动脉高血压发展不同性别的个体。

回归分析后,患者啊发展不同的风险ADD1Gly460Trp基因型决定根据BMI(表7)。一个重要的联系ADD1rs4961-polymorphic变体和啊了患者BMI≥25公斤/ m2在所有的模型继承。小T等位基因(GT + TT)航空公司被发现有更高啊开发风险比G等位基因(GG)航空公司(Рс= 0.001)下(或占主导地位的模式с= 4.408;95%СІ= 1.859 - -10.454)。同时,GT基因型有明显高于啊比overdominant下GG基因型(或开发风险с= 4.07;95%СІ= 1.649 - -10.046;Рс= 0.002)和添加剂(或с= 4.312;95%СІ= 1.74 - -10.689;Рс= 0.002)模型。协变量调整后(年龄和吸烟习惯),一个重要的协会(或仍在每个模型的继承а= 3.527;95%СІ= 1.442 - -8.625;Ра= 0.006为主导模式;或а= 3.418;95%СІ= 1.342 - -8.704;Ра= 0.001 overdominant模型;或а= 3.582;95%СІ= 1.402 - -9.154;Ра加性模型= 0.008)。应该注意的是,体重指数是一个风险修饰符啊发展之前Pcint= 0.017;Pcint= 0.025;Pcint分别为= 0.021)和协变量调整后(P一个int= 0.027;P一个int= 0.032;P一个int分别为= 0.028)。然而,没有明显关联因素进行调整后,性在所有的模型继承(Ра> 0.05таP一个int> 0.05)。

表7
之间的关系的分析ADD1根据BMI rs4961-polymorphism和动脉高血压的发生。

食盐过敏啊发展的评估取决于风险ADD1Gly460Trp基因型表所示8。小T等位基因(GT + TT)运营商有食盐过敏啊发展风险高于G等位基因(GG)航空公司(Рс= 0.013)下继承(或主导的模式с= 3.201;95%СІ= 1.285 - -7.977)。同时,GT基因型有明显高于盐敏感比overdominant下GG基因型(或开发风险с= 2.557;95%СІ= 1.013 - -6.455;Рс= 0.047)和添加剂(或с= 2.774;95%СІ= 1.083 - -6.952;Рс= 0.033)模型。协变量调整后(年龄、吸烟习惯、啊年级,家族史和啊),一个重要的协会仍然主导(或下а= 3.141;95%СІ= 1.221 - -8.08;Ра= 0.018)和添加剂(或а= 2.756;95%СІ= 1.056 - -7.196;Ра= 0.038)模型。调整性和BMI后,失去了重要的协会在所有的模型继承(Ра> 0.05)。

表8
之间的关联分析ADD1rs4961-polymorphism和盐敏感事件。

下一个分析阶段是研究基因型和等位基因的分布啊患者不同性别和盐敏感的开发风险评估。的分布ADD1Gly460Trp-polymorphic变异提出了表9。GT, GG和TT基因型分布在食盐过敏女性组25(54.4%)、18(39.1%),3例(6.5%),而在聚合女性组23例(82.1%),5例(17.9%),分别和0 (0%)。有统计上显著的差异在两种基因型( )和等位基因( )分布在这些对比组。在男性,在基因型和等位基因分布没有显著差异显示( )。

表9
分布的ADD1rs4961-polymorphism等位基因和基因型之间的男性和女性。

二元逻辑回归分析表明,小T等位基因的存在(GT -和TT基因型)有更高的风险比GG基因型(或盐敏感发展女性с= 3.864;95%СІ= 1.251 - -11.935;Рс= 0.019)。同时,GT基因型有明显高于盐敏感发展比GG基因型在添加剂模型(或风险с= 3.312;95%СІ= 1.058 - -10.369;Рс= 0.04)。协变量调整后(年龄、吸烟习惯、啊年级,家族史和啊),统计上显著的链接仍然主导(或下а= 5.213;95%СІ= 1.36 - -19.99;Ра= 0.016)和添加剂(或а= 4.445;95%СІ= 1.151 - -17.165;Ра= 0.03)的模型继承(表10)。然而,没有明显关联因素进行调整后,BMI在所有的模型继承(Ра> 0.05)。

表10
之间的关联分析ADD1rs4961-polymorphism和盐敏感发生在女性。

4所示。讨论

Adducin heterodimeric蛋白是细胞的细胞骨架,由3个子单元(α,ß,γ)。α-和gamma-adducins在几乎所有的组织,而beta-adducin是大脑组织中高度表达,位于红血球膜胞质蛋白。Adducin有各种生理过程的重要类型。Alpha-adducin是一个主要的膜离子运输监管机构。它促进血影蛋白肌动蛋白附件,能与钙调蛋白结合,生长的基质蛋白激酶C和a,并调节Na+- k+腺苷三磷酸酶活动(传输通过肾上皮细胞钠离子和钾离子膜)。α-和beta-adducins的结构特征是存在protease-resistant氨基端地区protease-sensitive亲水性分子[c端地区15,28]。

各种蛋白质亚基是由不同的基因编码(ADD1,ADD2,ADD3)三种不同的染色体上。可变剪接的存在决定了不同adducin亚型;然而,并不是所有的变量都被今天的完全描述。的adducinα亚基基因(ADD1)(NCBI)位于4号染色体的短臂在16.3段。它由16个外显子(34 - 1892 bp) [29日,30.]。

Gly460Trp-polymorphism (rs4961)是研究最多,功能很重要ADD1基因多态的网站。rs4961-polymorphism的本质是鸟嘌呤的替代胸腺嘧啶在1378位置ADD1 mRNA (NM_001119.4)。反过来,它会导致更换的甘氨酸,色氨酸在第460多肽链的位置(24]。

Cusi等人首次建立了联系ADD1为法国和意大利(Gly460Trp-polymorphism啊发展10]。1998年,得到了一致的数据由美国日本玉城丹尼等人。后,中村等人进行了一项大规模的研究涉及丰富的患者4基因啊预测研究。作者得出结论,ADD1Gly460Trp-polymorphism是一个独立的遗传标记啊发生在日本人口(12]。T等位基因之间的关联和啊发展了俄罗斯人(15),中国(14),日本(11),马德拉群岛的居民(18突尼斯(),16],北非[13,亚洲人口(17]。我们获得的结果也表明之间的关联ADD1Gly460Trp-polymorphism啊发生在乌克兰和展示T等位基因频率越高食盐过敏患者啊。然而,应该注意的是,为协变量调整后,统计上显著的链接仍然只在女性群。小T等位基因携带者公布啊发展更高风险。

然而,之间的关系ADD1Gly460Trp-polymorphism啊发生并没有发现患者的重要啊,也就是说,印度的居民(22)、韩国(21),日本(19),美国(20.]。

调查可能的ADD1作为啊遗传标记有实际意义。Cusi et al。10)在第一工作已经显示出更高的T等位基因频率在食盐过敏患者啊。他们还描述了这种多态性和高血压之间的联系及其后减少盐摄入量减少。2002年,Psaty et al。31日),后来Citterio et al。32描述,T等位基因的患者(GT和ТТ基因型)后,血压显著降低不同氢氯噻嗪利尿剂的应用程序。我们获得类似的结果对于保护小T等位基因聚合的价值啊。然而,应该注意的是,性和BMI也是很重要的因素,确定盐摄入量的敏感性降低高血压患者。

adducin基因调节血压,主要是通过影响Na+- k+atp酶活性和改变肾小管的重吸收钠(30.]。在活的有机体内adducin是PKC的衬底、PKA Rho-associated激酶(28),参与细胞信号转导。此外,adducin与其他膜骨架组件和膜蛋白交互影响离子运输,特别是Na+运输(Na+渠道,Na+- h+交换,Na+李津+countertransport, Na+- k+cl- - - - - -协同转运)33,34]。α——或者β-adducin点突变会导致高血压,从酪氨酸激酶磷酸化模式更改的PKA网站。变异的α-adducin变异已被证明与Src-SH2交互领域,增加Src Src-dependent Na的活动和磷酸化和活动+- k+- - - - - - atp酶(35]。

几项研究已经批准下高血压大鼠的血压正常化rostafuroxin影响(抗高血压药),镇压了α-adducin和Src-SH2域交互和扰乱了Src激活和Na+- k+atp酶磷酸化(36]。之间的联系ADD1Gly460Trp-polymorphism和响应rostafuroxin治疗已被证明在临床研究奇亚拉Lanzani集团(37]。

有一个高科学界的兴趣ADD1参与啊。最近进行了荟萃分析研究高血压风险之间的关系和基因多态性。2010年,刘等人。8和Ramu矿等。22]报道缺乏关联α-adducin Gly460Trp-polymorphism啊。与此同时,廖et al。23和金等。24)支持的假设T等位基因携带者啊发展中亚洲人群的风险更高。结果的模糊性可以由几个原因来解释。首先是啊异质性及其民族特色。大量的研究证明Gly460Trp-polymorphic变体之间的联系和亚洲人口啊,虽然其他人群的数据是不同的。其次,高血压是一种多因素疾病,大多数研究没有考虑环境因素(地理位置、气候、饮食、生活方式),也与高血压有关的风险。此外,一个潜在的限制可能是小样本大小和无法包括所有目前的荟萃分析研究。

一方面,ADD1是一个重要的基因啊候选人,另一方面,获得的数据是有争议的。我们的研究结果显示,性别是一个重要的rs4961的修饰符ADD1基因型影响发展啊。之前的研究建立了由基因型无关紧要性交互rs4961的白人人口调查。然而,研究人员发现,Gly460Trp多态性与C1797T多态性的交互ADD2在所有的女性会增加高血压的风险(相对风险调整,RR = 2.35, )和绝经后的科目(RR = 2.92, ),而不是男人。此外,T等位基因的女性rs4961和C1797位点有明显高于血浆肾素活性相对于CC运营商,而相反的效果观察。因此,作者假设啊rs4961影响发展的性别差异可能与肾素-血管紧张素-醛固酮系统(38]。

另一个潜在的机制来解释观测中存在的性别二态性分布沿CpG甲基化模式ADD1启动子区域。它被发现的中国人口ADD1CpG甲基化水平与原发性高血压(EH)与甲基化程度女性明显高于男性。进一步分析表明,低甲基化水平CpG1二核苷酸与雌性呃的风险增加,而不是男性。相比之下,较低的CpG2-5甲基化程度更高的呃风险只在男性中(39]。类似的结果在最近的研究对埃及人而言。作者推测,一个较低的水平ADD1CpG甲基化导致更高的表达α-adducin和Na+- k+atp酶导致更强烈的Na+再吸收和嗯发展,因此40]。因此,还需要进一步的研究来证实这些假设。

值得注意的是,这项研究有一些局限性。比较组应该扩展到确认结果。应该注意的是,只有三个变量的调整(年龄、体重指数、吸烟)是用于回归分析。此外,随着Gly460Trp-polymorphic轨迹的影响啊发展,其他的重要性,nongenetic因素(性别、体重指数、等等)。更重要的是要确定ADD1基因表达水平,根据其多态变量,建立Gly460Trp-polymorphism所必需的功能价值。由于性别二态性的存在,有必要估计rs4961的相互影响和C1797 SNP啊发展以及调查的CpG岛的甲基化水平ADD1启动子区域。

5。结论

因此,ADD1Gly460Trp-polymorphism被发现增加啊风险和食盐过敏啊乌克兰人口发展。进一步的研究是必要的确认结果,建立其他nongenetic因素的作用啊发展,这取决于Gly460Trp-polymorphism基因型。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。