发生的白色念珠菌在牙周炎

文摘

背景。牙周疾病是由于微生物群之间的不平衡和免疫防御。酵母的作用在这些疾病的发病机理进行了研究。本研究旨在评估的发生白色念珠菌在牙周炎。材料和方法。五十个受试者招募了研究(15健康个体和35牙周炎科目)。牙周检查,所有患者斑块进行抽样。白色念珠菌识别是基于文化,直接考试,和聚合酶链反应。是由SPSS统计分析20(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。结果。百分之二十的病变组织存在白色念珠菌这是略高于健康组(7%),表明,在正常情况下,酵母不容易生长在龈下的网站。然而,健康和牙周炎组之间无显著差异( )被发现。我们的研究结果也表明的存在白色念珠菌既不是性别和年龄相关的研究团体。结论。这项研究的结果表明白色念珠菌发生在牙周炎。需要更多的研究来阐明这酵母在不同阶段的潜在作用和形式的疾病。

1。介绍

在假丝酵母物种,白色念珠菌是最普遍的酵母与健康和病理相关的口腔条件(1,2]。事实上,这种机会主义者微生物共生微生物区系属于人类消化道的健康,但是可以成为致病的影响下或当地有利的因素。

牙周炎是一种全球口腔疾病与一个非常复杂的发病机理,包括生态失调和宿主免疫反应comaintain牙周疾病易感个体的发生条件(3,4]。临床上,牙周炎涉及附件损失在牙齿,形成牙周袋,和骨破坏5,6]。几项研究已经提出与牙周疾病相关的微生物群落的异质性。事实上,各种微生物物种,包括革兰氏阴性厌氧菌组织在一个复杂的生物膜,已经与牙周炎的发生和发展相关(7]。Porphyromonas gingivalis,Tannerella连翘,梅毒denticola一起,被称为“红色情结”Aggregatibacter actinomycetemcomitans已经被确认为最periopathogenic细菌与全球不同形式的牙周炎(7,8]。最近,一些研究还讨论了病毒的可能作用[9,10)和酵母在牙周炎发病机理(11,12]。因此,随着疾病的突破,牙周袋成为大量的微生物包括的插座白念珠菌(6,13,14]。然而,这种酵母的作用在牙周病的发病机制仍不清楚。本研究的目的是评估的存在白色念珠菌在牙周炎。

2。材料和方法

2.1。研究人群

五十对象是从临床牙周病学部门,咨询中心和牙科治疗,“Ibn Sina拉巴特的大学医院,摩洛哥(CCTD-CHIS拉巴特)。

研究批准获得从穆罕默德五世大学的研究伦理委员会,摩洛哥拉巴特(道德协议号102/19)。所有受试者知情并签署知情同意。

入选标准包括患者一般健康良好,18岁以上,至少有20个牙齿,并没有收到任何牙周治疗期间或抗生素药物至少前6个月前研究。排除标准包括患者矫正治疗下,那些吸烟或咀嚼任何其他类型的烟草,糖尿病患者,那些症状口腔念珠菌病和/或一直在抗真菌治疗,以及孕妇和哺乳妇女。

2.2。方法

2.2.1。牙周检查

前牙周检查,所有患者签署知情同意表格。评估临床变量被修改牙龈指数(GI)、菌斑指数(PI) (15),囊袋深度(产后抑郁症),临床附着丧失(CAL)。囊袋深度和附件损失测量使用标准牙周探针(Hu-friedy,芝加哥,IL)、每齿在6个地点,即。distolingual distobuccal颊,近中颊的,舌,mesiolingual,牙齿不包括第三磨牙。一组口中标准化intraoral射线照片获得了从每个病人。

基于临床参数,x光照片信息,和病人的年龄,我们来到了临床诊断分类的基础上,美国牙周病学会(AAP) (16]。

在健康的牙周组织,因此,没有附件,没有牙周袋,没有骨质流失,牙周探测≤3毫米,而牙周炎被定义为在牙齿之间的临床附件丢失检测到至少2不相邻的牙齿或颊的存在或口头卡尔≥3毫米与中饱私囊≥3毫米可检测至少在2牙齿,但不是与non-periodontitis-related原因(即有关。,深龋齿,卡尔第二磨牙的远端网站和相关位置不正或造成第三摩尔提取,通过边际牙周膜牙髓学的病变排水,垂直根断裂)。此外,牙周炎患者按阶段和等级分类的基础上,分类。阶段定义根据严重程度(主要是牙周破坏和periodontitis-associated牙齿脱落)和管理的复杂性(口袋的深度,infrabony缺陷,牙齿移动,分叉状态,和咀嚼的干扰)。等级的牙周炎估计基于直接或间接证据的发展速度在三个类别:缓慢(甲级)、中度(B级)和快速发展(C级)。

2.2.2。斑块抽样

龈下的生物膜池从四个网站收集的样本(每个象限一个站点)在每一个病人。我们选择最深的网站在每个象限口袋深度等于或大于5毫米(产后抑郁症≥5毫米),临床附着丧失≥2毫米,在探索出血。

斑块抽样是通过引入一个消毒吸水纸点(30毫米直径)到牙龈沟20秒钟(确定影响公司;首席执行官197)。样品被放置在2毫升无菌磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为传输介质,并立即转移到实验室进行分析。

2.2.3。酵母文化

样本处理和讲究的。他们分散镀到sabouraud氯霉素介质隔离的酵母。盘子被孵化在non-CO 37°C₂大气(24至48小时17,18]。盘子被检查每日为酵母的增长。

识别是基于殖民地和细胞形态。白色念珠菌殖民地Sabouraud氯霉素介质上的奶油白色和光滑19)(图1)。

在直接检查:假丝酵母酵母表现为椭圆形、卵形的或长,可能初露头角的元素(20.)(图2)。

纯酵母殖民地的文化识别和确认后白色念珠菌通过聚合链反应。

2.2.4。的识别白色念珠菌通过聚合链反应

基因组DNA提取如下:4至6酵母殖民地悬浮在1毫升无菌0.9%氯化钠。使用商用BIOLINE提取了DNA提取工具包(隔离II基因组DNA装备,美国)根据制造商的指示。超小型电子管是离心10分钟的5000克。然后,上层清液取出来洗一次2毫米EDTA (pH值8)和离心10分钟5000 g。浮在表面的丢弃而产生的颗粒。提取的DNA是储存在−20°C,供以后使用。

分子识别的识别和纯化酵母菌株是通过使用以下特定的引物白念珠菌检测,生成500个碱基对的扩增子(转发:5′-TGCTTCAGTGTCAGTTATACCT-3′,

反向:5′-ACTGCTCAAACCATCTCTGG-3′) [20.]。

在25日进行PCR扩增μ包含上述引物(10 L反应混合物μ每个),100 ng中提取DNA, 100μM的四种脱氧核苷三磷酸腺苷(dATP, dCTP、dGTP dTTP), 0.5 U (taq DNA聚合酶,5毫米的缓冲区。

PCR扩增参数如下:1分钟的初始变性在95°C,紧随其后的是35周期15秒的变性在95°C, 20秒的杂交50°C,和一个伸长的15秒72°C,最终伸长的3分钟在72°C。PCR产品1%琼脂糖凝胶电泳分析的Dna梯200个基点(Bioline)和可视化使用紫外线透照器系统礼盒(Syngene™)。

2.2.5。统计分析

统计分析与统计程序SPSS 20(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。为每个组,连续变量与正态分布提出了均值±标准差(年龄、牙周袋深度和附件损失),和分类变量有百分比。皮尔逊卡方检验进行比较的变量之间的两个独立的团体,和学生的t测试进行比较的独立样本。使用的统计显著性阈值 。

3所示。结果

五十个受试者接受参与研究,充分符合入选标准。37例(74%)在这一人口是女性,和13(26%)是男性。平均年龄为31±11年。十五个人年龄在21岁到52年健康,和35例年龄在18岁到62年被确定为牙周炎;然而,两组之间没有统计上的显著差异。研究人口的人口和临床特点进行了总结表1。

牙周炎组子组确定了关于分期和品位。因此,病人被诊断为牙周炎二期或三期和年级B或c统计分析显示牙周炎之间没有显著差异第二和第三阶段的平均年龄。然而,在患者年龄较低等级C牙周炎与那些年级B相比,差异具有统计学意义(表2和3)。

酵母的生长殖民地被记录为正增长,作为一个积极的载体。在17个积极的文化,高度隔离被确定为白念珠菌通过PCR(一个健康的主题和7牙周炎患者)(图3)。

的存在白念珠菌研究了牙周炎人口根据牙周状态。不同组之间未发现显著差异(表4)。

分析存在的白色念珠菌牙周炎组子组之间没有任何统计差异既当比较阶段II和III(分别为33.3%和17.2%, )也当比较成绩乐队C(分别为21.0%和18.7%, )。

4所示。讨论

Microbial-flora-associated牙周炎非常复杂和不断研究了多年。然而,它应该强调,即使在牙周细菌被认为是作为主要代理病机、其他微生物,例如,病毒和酵母,越来越多地参与微生物牙周疾病的病因。

白色念珠菌,在口腔最常见的酵母,可以隔离在健康受试者无任何临床表现。一般在舌头(1]。然而,许多研究报道在牙周组织的健康。在目前的研究中,7%的患者牙周健康的存在白念珠菌在龈下的斑块。这些结果高相比,那些报道Urzua et al。21),据报道3.57%的患病率在人口28健康受试者(21]。与此同时,Canabaro et al。22)报道,14.28%的20检查健康受试者酵母是积极的。其他的研究显示变量发生(16%到36%)白念珠菌龈下的斑块的健康牙周膜(11,23- - - - - -25]。在免疫活性的主题,白念珠菌存在的微量组分口腔生物膜(26]。也有人建议龈下的地区,它的存在可以瞬态(27]。然而,它也存在于牙周口袋,及其在牙周致病作用还不清楚。

在目前的研究中,20%的牙周炎患者阳性白念珠菌。几乎相同的结果被Dahlen[发现28),报告发病率为17%,表明该酵母比健康的人更常见于牙周炎患者。然而,这两个组之间未发现显著差异( )在目前的研究。

相对较少的研究分析的可能作用白色念珠菌在牙周炎23,24,27]。MatićPetrovićet al。25)报道,没有影响牙周袋深度的龈下的酵母。然而,应该指出,意味着探测深度在他们的研究为2.89±0.944牙周炎患者相比,2.02±0.524,意味着健康的牙周膜科目的探测深度。

许多研究表明酵母亚种的龈下的殖民之间的联系,包括白色念珠菌,存在严重的牙周炎(6,28]。Jarvensivu et al。29日)显示,人口患病率16% 25慢性牙周炎患者。白念珠菌仍然是最常见的真菌病原体发现牙周炎患者(21,22]。在目前的研究中,根据牙周疾病的新的分类,牙周炎组包括2在舞台上杰出的基于子组病例定义:II期和III期。无统计差异被视为II期和III期之间,无论是年龄还是存在的白色念珠菌。当比较牙周炎组根据年级,两个子组是杰出的,一个年级B组和C级组。平均年龄的显著差异被发现在两组之间。事实上,C级牙周炎患者年轻,牙周炎发展的速度估计是快速与B组相比牙周炎患者。然而,这些级子组之间没有显著差异时考虑的存在白色念珠菌。因此,目前的研究表明,的存在白色念珠菌牙周炎组似乎不相关或年级阶段。尽管如此,这些结果必须谨慎考虑,因为小研究的人口规模。此外,所有包括患者受试者在医院寻求治疗的结构。因此,进一步的精心设计的研究,包括一个更大的人口规模,需要评估和理解的真正贡献白色念珠菌在修改后的微生物与牙周炎有关。

的作用白念珠菌在牙周炎发病机理尚不清楚。事实上,这种酵母可以改变口腔微生物,因此,显著影响细菌殖民化(30.,31日]。Coadherence之间白色念珠菌和一些细菌可以帮助复杂的生物膜的形成与混合物种的影响,因此,微生物发病机理;在[26,32,33),也建议白念珠菌促进细菌入侵宿主细胞的厌氧细菌等p . gingivalis由厌氧细菌感染,从而引发疾病。

此外,白念珠菌可以长耗氧或厌氧(34),这也许可以解释他们的存在在深牙周袋(22,35]。其他的研究报道,白念珠菌能够坚持的上皮细胞和诱导炎症(36]。白念珠菌可能有一些毒性因素如天门冬氨酰蛋白酶(SAPs),磷脂酶和胞外酶,干扰局部免疫反应的抑制多形核中性粒细胞phagotocytosis和间接诱导炎症反应(24,36,37]。

当比较的存在白念珠菌关于性别,分别为19%和8%,男性和女性的酵母是积极的。这些结果与由雷诺et al。24)显示,20.3%的患病率女性相比,男性的8.2%。然而,正如先前所显示的,Canabaro et al。22),的存在白色念珠菌不是性别相关( )。

5。结论

白色念珠菌在这项研究出现在牙周炎患者。然而,研究组之间没有统计学差异被发现。即使所扮演的角色白念珠菌在牙周疾病尚未确立,这酵母被认为是一个重要的病原体在这种疾病的进展和持久性。因此,这将是有趣的研究深度的毒力因素进行体外研究更好地理解这种酵母的潜在作用在这个病理,尤其是在耐火牙周疾病。

数据可用性

所有数据用来支持这个研究的发现都包含在这篇文章。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项工作是支持的“全国中心任职等技术,摩洛哥(CNRST),“在批准号PPR16/2016。资金没有参与该研究的设计、数据收集和分析,决定发表,或者准备手稿。

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