乳酸菌酵母和乳酸菌crispatus没有细胞毒性影响HN5口腔鳞状细胞癌细胞系

文摘

背景。口腔环境非常复杂的正常菌群,包括各种各样的细菌乳酸杆菌。研究表明口腔微生物菌丛口腔癌的发展有着重要的影响。鳞状细胞癌占90%以上的癌症在口腔。乳酸杆菌被称为一个最新的癌症预防和治疗的方法。先前的研究益生菌对口腔癌症细胞的影响是非常有限的,而且只有两种乳酸菌不存在于正常的口腔微生物区系研究。由于未知的影响乳酸杆菌在口腔癌,本研究旨在探讨两种的影响乳酸杆菌的口腔口腔癌细胞。方法和材料。上层清液的影响乳酸杆菌,即酵母和crispatusHN5-cancer细胞进行了研究。MTT法研究的影响乳酸杆菌抑制癌细胞的生长。结果。结果表明,这些乳酸杆菌不会阻止口腔癌细胞的发展。此外,结果表明,酸性介质最影响减少口腔癌症细胞的生长。结论。由于不同的效果乳酸杆菌在不同癌症类型,两个的效果乳酸菌crispatus和乳酸菌酵母在其他口腔癌症细胞系可能不同于已经在这项研究报道。

1。介绍

鳞状细胞癌(SCC)占超过90%的口腔恶性肿瘤(1]。有许多口腔鳞状细胞癌的危险因素如酒精和烟草使用、地理变异、遗传易感性、饮食、免疫状态、致癌病毒,辐射,口腔卫生不良,和环境因素1,2]。鳞状细胞癌患者的存活期仅在过去的二十年里已经从1950年的40%上升到59%。因此,这种癌症预后不良和低存活率。尽管许多关于癌症的分子机制的科学进步,没有明显的进展在鳞状细胞癌患者的治疗和存活率1,3]。此外,控制口腔鳞状细胞癌是困难的甚至在治疗后,因为它有一个倾向多原发性癌(4]。目前的治疗方法包括传统治疗癌症有许多副作用尽管没有显著的结果。因此,现代药理学寻求治疗副作用较低和高功效。乳酸杆菌是一种细菌,这种细菌被发现在大多数的身体包括口腔粘膜组织。这些细菌有几株与不同分布在各社区根据不同的条件。它们影响基因的表达包括癌基因和肿瘤抑制基因。近年来,他们在癌症预防作用已经明显注意到。研究表明,乳酸杆菌可以抑制肠道癌症的功能。大量研究已经证明了他们的角色在预防结肠癌5,6]。因此,在这项研究中,我们调查了两个著名的物种的影响乳酸菌被称为酵母和l . crispatus。

2。材料和方法

2.1。第一阶段:培养口腔鳞状细胞癌

HN5鳞状细胞癌行从巴斯德研究所购买。这种癌症细胞系获得舌鳞状细胞癌的一个73岁的人。细胞在DMEM培养基培养含有15%葡萄糖,10%热灭活胎牛血清(表达载体),1.5%玫瑰(表达载体),和1%的青霉素和链霉素(表达载体)。细胞单层文化保持在37°C湿润有限公司5%₂孵化器,镀24小时治疗之前,允许他们的坚持。

2.2。第二阶段:培养乳酸杆菌

酵母应变4-17和l . crispatus应变SJ-3C-US培养在德曼Rogosa夏普(夫人)肉汤(默克公司;在37°C pH值6.5)微量需氧的条件下24小时。细菌培养过夜。在适当的时候观察细胞沉积和细菌的数量达到10⁹CFU /毫升,他们被放置在一个冷藏5000 rpm离心机15分钟在4°C。上层清液是一个0.2毫米膜过滤器过滤,消除残留的细菌及其残余。得到的上层清液pH值测量,然后过滤,保存在冰箱里。评价乳酸合成的影响酵母和l . crispatus和pH值改变细胞,上层清液的乳酸水平检查使用乳酸草毒死工具包(草毒死实验室)。

2.3。第三阶段:MTT试验

HN5细胞从巴斯德研究所获得的细胞库,与传统的培养方法。HN5细胞第一次离心机和统计;然后,100年μL的DMEM培养基含有15%的边后卫和细胞密度增加到96 - 10000细胞的平底微型板块。换句话说,乳酸杆菌上层清液在不同浓度添加到癌细胞。微型板块是孵化48小时;然后,200年μL(5毫克/ 10毫升MTT的解决方案是添加到每个。盘子被孵化为另一个4个小时。最后,甲瓒染料晶体沉积在细胞的细胞质溶解增加100μL DMSO的好,颜色强度由ELISA记录在570海里。夫人和MRSPH被用作控制。是一个女士乳酸杆菌无文化的媒介。MRSPH也是一个乳酸杆菌无培养基是富含乳酸酸化测量乳酸积累在环境的影响乳酸杆菌成长。

细胞生存能力是衡量使用以下方程:

2.4。第四阶段:统计分析

在SPSS分析v.15.0.1 (SPSS Inc .,芝加哥,IL)。Mann-Whitney测试是用来计算的IC50细胞接触乳酸杆菌。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。的影响酵母和l . crispatus上层清液HN5细胞生长

在这项研究中,抑制作用的酵母和l . crispatusHN5口腔癌细胞MTT法评价。图1显示了MTT试验的结果。IC50计算为每个环境的细胞暴露于(表1)。IC50介质浓度,杀死细胞的50%。下表1,IC50 MRSPH是最低的。换句话说,最高的增长抑制观察MRSPH环境(图2)。正如我们所知,MRSPH培养基,酸化。因此,酸培养基对癌细胞有最致命的影响。根据获得的值(图3),夫人的抑制作用和MRSPH(控制媒体)培养基对癌细胞的生长比进行了研究乳酸杆菌。换句话说,虽然增加的乳酸杆菌浓度,增加肿瘤细胞的生长抑制作用,抑制这增长更多的控制环境。因此,增加细菌的浓度没有抑制癌症细胞的生长的主要因素。所以,酵母和l . crispatus没有抑制HN5口腔癌细胞的发展。

4所示。讨论

癌症是细胞的异常生长。不受控制的细胞增殖和抗程序性死亡是癌细胞的主要特征。因此,因素导致癌细胞死亡(凋亡或坏死)可以被看作是抗癌药物(7,8]。鳞状细胞癌的发生与多种因素有关,和这恶性肿瘤是一种多因素疾病,环境和遗传因素扮演的角色(1]。口腔环境是一种特殊的环境由于其不断接触外面的环境身体,牙齿的存在,其复杂的正常菌群。有超过700种细菌在这种环境下。超过一半的人没有文化。有些细菌参与龋齿和牙周疾病等口腔疾病。特定种类的口腔细菌的存在系统性疾病,如细菌性心内膜炎、肺炎、小儿骨髓炎,低出生体重婴儿,和心血管疾病也被证实。然而,研究人员没有口腔微生物菌群的信息。口腔微生物构成可能受到多种因素的影响,包括口腔健康、遗传、年龄、性别、压力,和饮食9,10]。口腔癌症细胞在不断接触的微生物菌丛的嘴。因此,癌症细胞和微生物菌丛的嘴可以相互影响。Bjarnsholt等人的研究得出结论,口腔卫生不良导致细菌生物被膜的形成,而这生物膜的贡献在口腔癌11]。

在萧等人的研究,增加一些口腔细菌的增长之间的关系引起的口腔卫生不良和口腔癌的发展强烈成立(12]。吴等人发现,口腔卫生不良的因素之一是导致口腔癌患者的不良预后13]。很明显在文献中微生物菌群的口腔癌患者的口腔是完全不同的从健康个体14]。因此,研究目前的研究等非常有效的在决定确切的关系。口腔微生物菌群包括各种类型的细菌如葡萄球菌、链球菌、棒、丝。不同类型的乳酸杆菌也存在于口腔。乳酸杆菌最早出现在口腔环境中从年的童年和中发现大量唾液,粘膜,背表面的舌头,硬腭,牙齿表面和牙菌斑,甚至在更小的数字15]。之间的关系进行了大量的研究乳酸杆菌和龋齿。最重要的特征乳酸杆菌是他们的能力产生酸和成长,在酸性环境中生存的能力。最新的结果确定乳酸杆菌作为二次侵略者而不是龋齿发起者。有许多不同类型的乳酸杆菌龋齿。的存在酵母和l . crispatus也被证明在成人龋齿(16]。

除了口腔,乳酸杆菌存在于人类消化系统的其他部分和主机有有益的影响。的消费乳酸杆菌(益生菌)导致的生产范围广泛的发酵产品,如高浓度的短链脂肪酸(17]。研究表明,乳酸杆菌有抗癌的效果,他们通过各种机制引起这种效应诱导免疫反应和抗增殖等属性。看来毒性作用的原因之一乳酸杆菌癌细胞是在癌细胞线粒体呼吸的高水平活动过程与正常细胞相比,它提供了一个适当的条件开发这些微生物破坏癌细胞。除此之外,可以说,形态差异和癌症和正常细胞的细胞毛孔数量是其他因素来证明他们在癌细胞的细胞毒性的增加(18]。

口腔鳞状细胞癌的调查也表明,微生物可以影响放疗、化疗和免疫治疗。此外,这些治疗是影响微生物内容(19]。各种实验室研究已经进行使用乳酸杆菌治疗各种癌症,特别是乳腺癌,结肠癌、宫颈癌(20.]。然而,研究的影响乳酸杆菌在口腔鳞状细胞癌已经很少,仅限于两个特定菌株乳酸杆菌,syzygii醋菌和sp a。。syzygii醋菌对口腔粘膜分泌物也会显著为辅,影响癌细胞,这已经大大减少对正常细胞的影响(21]。乳酸菌SP.A-2也增加了细胞凋亡和细胞死亡在舌癌细胞22]。当然,这些研究的结果应用需要更详细的研究这些特定物种的代谢产物的分子机制乳酸杆菌。应该注意的是,这两个乳酸杆菌不认为是口腔的微生物菌群。在目前的研究中,两个细胞毒性的影响乳酸杆菌它们存在于口腔(包括唾液,舌头的表面)以及分析了龋齿。

酵母是一种口服吗乳酸杆菌这是自然存在于口腔。这乳酸菌已经显示出较高的抗氧化性能以及其他种类的人类口腔乳酸杆菌(23]。在老鼠身上发现的预防效果酵母在结肠直肠癌。这乳酸菌结合其他一些乳酸杆菌引起细胞凋亡增加,降低大肠癌细胞增殖。的重要保护正常的结肠细胞的毒性作用乳酸杆菌癌症细胞。因此,酵母已被建议作为一种生物疗法在结肠直肠癌24,25]。保护正常的结肠细胞的毒性作用乳酸菌是一个了不起的点。因此,酵母已被建议作为一种生物疗法在结肠直肠癌24,25]。

酵母CQPC08已被证明增加抗癌细胞因子g - csf和gm - csf的浓度,从而阻止舌癌引发的免疫力降低。这乳酸杆菌也提高了活动的超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和丙二醛浓度减少组织样本的舌癌的动物模型,从而击败了氧化应激损伤的组织(26]。

l . crispatus是另一个乳酸菌在治疗癌症的一个可能的作用。在最近发表的文章,将这种细菌注入小鼠造成被诊断出患有乳腺癌肿瘤大小减少和改善生存。研究的结果乳酸菌已经证明这种细菌的抗增殖效果的乳腺癌mda - mb - 231细胞系。这乳酸菌也引起了一群癌症相关基因的表达减少叫cancer-testis抗原(CTA)在乳腺癌细胞27]。因为这些基因的表达与癌细胞的入侵和更糟糕的病人的预后,l . crispatus减少相关的表达式可以造成一种很有前途的新方法治疗某些癌症。在另一项研究中,提到细菌上层清液减少HPV E6癌基因在宫颈癌细胞的表达。这一点是非常重要的潜在治疗口腔人乳头瘤病毒引起的癌症和子宫颈28]。它已被证明l . crispatus对宫颈癌细胞有细胞毒性影响,减少HPV病毒致癌基因和细胞cycle-related基因(29日]。因为人类乳头状瘤病毒的病原学的原因很大一部分宫颈和口咽癌的1),研究表现的影响l . crispatus宫颈癌可能为进一步研究铺平道路的控制和治疗口咽癌。

这项研究的结果表明酵母和l . crispatus没有抑制HN5口腔癌细胞的发展。换句话说,尽管随着浓度乳酸杆菌对细胞的毒性增加,这些结果持续不到夫人和MRSPH媒体的影响。证明的影响乳酸杆菌抑制癌细胞的生长,生长抑制的存在乳酸杆菌必须超过媒体文化。获得了最高的癌症细胞增殖抑制酸性培养基。Taherian等人发现乳酸杆菌对不同类型的肿瘤细胞有不同的影响。换句话说,减少的表达与预后不良相关的基因(如S6K1)一直在各种不同类别的癌症(30.]。这凸显了需要识别和注意每个肿瘤的特定遗传特征采用的治疗方法。

因此,我们建议这些评估的影响乳酸杆菌在不同类型的口腔鳞状细胞癌。值得注意的的影响乳酸杆菌是他们对各种类型的癌症细胞毒性影响是不同的。另一个重要的一点是,有些口咽癌与人类乳头瘤病毒直接相关。组织学,这些口腔癌有完全不同的临床和预后特征与其他口服癌(31日]。由于特定的效果l . crispatus减少hpv相关癌基因的发病率,这已被证明在先前的研究29日)的一项研究,旨在调查的影响l . crispatus强烈建议在HPV-induced口腔癌细胞系。

下一步后,本研究调查的影响乳酸杆菌和口腔细菌HN5细胞系获得一个精确的列表乳酸杆菌或其他细菌产生致命影响口腔癌细胞或有效的癌症的发展。因为之前的研究的影响乳酸杆菌在口腔癌仅限于只有两个研究中,还需要其他的研究和建议。

总之,我们演示了两种无显著影响乳酸杆菌菌株SCC细胞系。本研究的实验设计以来简单,这项研究没有充分评价的影响酵母和l . crispatus口腔鳞状细胞癌行体外。因此,我们建议进一步的实验来评估这两个菌株的可能影响基因的表达乳酸杆菌。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从博士Sepideh Mokhtari称。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

引用

1. b·w·内维尔·d·d·达姆c·艾伦和j . Bouquo口腔颌面病理学桑德斯,费城,宾夕法尼亚州,美国,第3版,2009年版。
2. m·e·阿克巴里美国Atarbashi Moghadam, f . Atarbashi Moghadam, z . Bastani,舌头在伊朗人口的恶性肿瘤,”伊朗癌症预防杂志》上,9卷,不。4篇文章ID e4467 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. p . k . Tsantoulis n . g . Kastrinakis公元Tourvas, g . Laskaris和v . g . Gorgoulis“口腔癌症的生物学的进步,”口腔肿瘤,43卷,不。6,523 - 534年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. s . Atarbashi-Moghadam a . Lotfi s Poornaghi, Mokhtari称,“两国的颊粘膜鳞状细胞癌成年男人:案例与文学评论表示,“口腔颌面病理学杂志》上,23卷,不。增刊1,第90页,2019。视图:谷歌学术搜索
5. m·沙玛,p .长官,S S沙玛,和r . Radhakrishnan”分子入侵口腔癌前的变化,”口腔颌面病理学杂志》上,17卷,不。2、240 - 247年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. p v Kirjavainen h . s . El-Nezami s . j . Salminen j . t . Ahokas和p·f·a·赖特,“口头管理可行的益生菌的影响和奶制品乳酸杆菌对小鼠淋巴细胞增殖,”《免疫学和医学微生物学,26卷,不。2、131 - 135年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. r . s . Wong“细胞凋亡在癌症:从发病到治疗,”实验和临床癌症研究杂志》:气候研究,30卷,不。1,页87 - 2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. k·塔里克和k图,“结直肠癌致癌作用:审查机制”,癌症生物学和医学,13卷,不。1,页120 - 2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. j . a . Aas b . j .贴纸l . n .斯托克斯。奥尔森,和f . e . Dewhirst”定义口腔的正常菌群,”临床微生物学杂志,43卷,不。11日,第5732 - 5721页,2005年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. 松原Samaranayake和v . h . .“正常口腔菌群和口腔生态系统。”北美的牙科诊所,卷61,不。2、199 - 215年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. t . Bjarnsholt k . Buhlin y . f . Dufrene et al .,生物膜Formation-What我们可以从最近的进展美国新泽西州霍博肯市威利在线图书馆,2018年。
12. J.-R。萧,c c。Chang W.-T。李et al .,“口腔微生物之间的相互作用,生活方式的因素和基因多态性在口腔鳞状细胞癌的风险,”致癌作用,39卷,不。6,778 - 787年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. l . j . Wu林,f . Chen等人“小说口腔癌预后指数在福建省”中华刘兴宾雪,39卷,不。6,841 - 846年,2018页。视图:谷歌学术搜索
14. m·k·慕克吉h . Wang Retuerto et al .,“口腔舌癌Bacteriome和mycobiome协会”,Oncotarget,8卷,不。57岁,97273 - 97289年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. Mahasneh和a . Mahasneh“益生菌:一种很有前途的牙齿健康,”牙科杂志,5卷,不。4、2017年p。26日。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. c . Badet和n . b .送到“生态口腔中的乳酸杆菌:回顾文献,”开放的微生物学杂志,卷2,不。1,38 - 48,页。2008。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. l . Kopp-Hoolihan“预防性和治疗性使用的益生菌,美国饮食协会杂志》上,卷101,不。2、229 - 241年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. a·e·阿里和MirzaieH。NoorbazarganA。阿訇Kashtali”土著益生菌干酪乳杆菌的细胞毒性效应细胞提取细菌在结肠癌细胞系(HT29)和伯灵顿,Bcl2凋亡基因表达分析,“Armaghan Danesh2017年,卷。21日。视图:谷歌学术搜索
19. a .萨米Elimairi, c·斯坦顿,r·p·罗斯和c·a·瑞恩“微生物的作用在口腔鳞状细胞癌洞察microbiome-treatment轴,“国际分子科学杂志》上,21卷,不。21日,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. z努里·f·Karami, n . Neyazi et al .,“双重anti-metastatic和anti-proliferative活动评估两种益生菌对海拉和HT-29细胞系,”细胞杂志(Yakhteh),18卷,不。2、127 - 134年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. z机构负责人、f . Pouralibaba和a .雅里Khosroushahi,”醋菌属的预防效果对鳞状细胞癌syzygii益生菌的物种,”牙科研究杂志》上,牙科诊所,牙科的前景,11卷,不。4、208 - 214年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. g . Zhang j .张x王et al .,人类舌鳞状细胞癌的细胞凋亡细胞(CAL-27)由乳酸菌Sp。a代谢物收录了,巴西,2014年。
23. a . Chooruk s Piwat, r . Teanpaisan”各种口服乳酸菌菌株的抗氧化活性,应用微生物学杂志,卷123,不。1,第279 - 271页,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. Kahouli, m . Malhotra威斯特法,m . a . Alaoui-Jamali和s·普拉卡什,“设计和验证的l . fermentum-L口头管理活跃。嗜酸的益生菌配方使用结肠直肠癌Apc最小/ +小鼠模型,”应用微生物学和生物技术,卷101,不。5,1999 - 2019年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. a亚莎和d . Gayathri乳酸菌酵母的协同影响,乳杆菌和长春新碱1,2-dimethylhydrazine-induced结直肠老鼠致癌作用,”实验和医学治疗,3卷,不。6,1049 - 1054年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. r . j . b . Liu Zhang et al。,“预防效果的乳酸菌酵母CQPC08 4-nitroquineline-1-oxide诱导C57bl / 6小鼠舌癌,”食物(瑞士巴塞尔),8卷,不。3,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. r·阿扎姆s Ghafouri-Fard m . Tabrizi et al .,“嗜酸乳杆菌和乳酸菌crispatus文化上层清液cancer-testis基因的表达下调表达的mda - mb - 231细胞系,”亚洲太平洋癌症预防杂志》上,15卷,不。10日,4255 - 4259年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. e . Motevaseli r·阿扎姆,s M Akrami et al .,“乳酸菌的影响crispatus和乳酸菌rhamnosusculture浮在表面的自噬基因的表达和人乳头状瘤病毒E6 E7致癌基因的海拉细胞,”细胞杂志(Yakhteh),17卷,不。4、601 - 607年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. K.-D。王,D.-J。徐,B.-Y。王,D.-H。燕,z Lv, J.-R。苏,“抑制阴道乳酸菌上层清液对宫颈癌细胞的影响”益生菌和抗菌蛋白,10卷,不。2、236 - 242年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. z Taherian-Esfahani, a Abedin-Do、z .努里·r·Mirfakhraie s Ghafouri-Fard和大肠Motevaseli乳酸杆菌不同调节mTOR和Wnt /β连环蛋白通路在不同肿瘤细胞系,”伊朗癌症预防杂志》上,9卷,不。3,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. 美国c . Megwalu m . m . Chen y,诉红利,”代理口咽癌HPV状态在癌症数据库研究中,“头部和颈部,39卷,不。12日,第2500 - 2494页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2021 Sepideh Mokhtari称等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。