一个新的包含甲硝哒唑缓释材料和强力霉素治疗牙周疾病和高:制定和体外测试

文摘

背景。几个本地管理抗菌剂研究文献中作为辅助或主要治疗牙周炎和peri-implantitis相互矛盾的结果。客观的。本研究的目的是双重的:(1)包含甲硝哒唑缓释材料的配方和强力霉素;(2)一个在体外其抗菌性能评价与浮游生物膜物种参与牙周和高的疾病。方法。强力霉素(10毫克/毫升)和甲硝唑(20毫克/毫升)被纳入hydroxyethylcellulose-polyvinylpyrrolidone-calcium polycarbophil凝胶。3毫升的凝胶透析对杜尔贝科13天的磷酸盐。抗生素释放3、7、10、13天决心光谱方法。实验凝胶的抑制活性进行了测试答:actinomycetemcomitans,美国杂志,p .微米,大肠corrodens琼脂扩散试验,一个失活生物膜测试,共焦激光扫描显微镜研究(样品形貌)美国杂志20天。结果。13天之后,释放强力霉素为9.7%(3天= 1.2毫克;7天= 0.67毫克;10天= 0.76毫克;13天= 0.29毫克),而甲硝哒唑67%(30毫克,6.8毫克、2.5毫克和0.9毫克每隔相同的)。琼脂扩散试验强调了制定凝胶有效地对抗微生物测试312 h。定量分析所有菌株的生物膜的形成和样品形貌美国杂志高速增长减少了13天。结论。的在体外功效新制定的凝胶被证实对浮游生物和细菌生物被膜的13天。含有甲硝哒唑缓释凝胶和强力霉素最优最终粘度和mucoadhesive属性。可以说,其就业可能是有用的治疗牙周和高的疾病,传统的治疗似乎不成功。

1。介绍

牙周疾病是一组炎症条件影响牙齿的支持结构破坏的牙周韧带,牙槽骨的吸收,和迁移的交界沿着根与合成表面上皮形成的口袋里。牙周袋提供了理想的环境潜在的病原微生物的生长和扩散。

当前选择牙周治疗包括去除牙齿表面的细菌存款,将微生物生物膜对牙周健康,减少毒性成分和调节宿主反应。而因此几种治疗方法临床医生,可用传统的扩展和根滑行(SRP),结合适当的菌斑控制,仍然是主要的治疗方法选择临床医生(1]。SRP的功效的一部分的非手术治疗慢性牙周炎通用一致性的结果,建立了基于改进的可衡量的端点,包括临床依恋水平,探测深度、探索出血,龈下的微生物区系的变化(2- - - - - -7]。虽然人们普遍认为非手术执行口袋/根清创术是一种有效的治疗方法,它从文学也很明显,各种病人,与因素可能影响治疗对治疗的反应或其长期稳定(2- - - - - -4]。此外,SRP适度雄厚的技术要求可能高,耗时(8),导致不完整的清创术(9),而不是消除物种可以穿透上皮细胞和牙龈结缔组织的牙周组织10]。一个环境类似于牙周袋,可比即使更严重的炎性浸润的形态学和免疫组织化学特性,是由牙科植入物周围的破坏性的过程称为peri-implantitis [11,12]。peri-implantitis nonsmoothable表面的存在和植入的踏板损害洁净表面的能力,可能会阻碍有效的非手术清创术的植入物感染,减少治疗潜在的(13]。

因此,抗生素和防腐剂也被用于治疗中度到重度牙周病(14,15]随着peri-implantitis [16,17]。然而,实现所需的高剂量的全身抗生素治疗浓度在目标网站导致增加副作用的认识,包括过敏、胃肠道功能紊乱,抗生素耐药性的发展(18,19]。

在过去的25年,本地交付,抗感染药物已经用于尝试治疗牙龈炎和牙周炎引起的局部细菌感染8,20.,21]。

本地交付抗菌疗法的基本原理是,当地的给药途径可以完成,与系统性的管理路线相比,药物治疗要高100倍剂量龈下的地区(22,23]。然而,为了实现一个积极的影响牙周参数,本地应用程序必须满足三个条件:(1)达到目标的行动;(2)达到治疗浓度;和(3)持续足够的时间(8,24]。此外,牙周袋的环境带来了两大挑战当地交货代理人:(1)细菌在生物膜组织增加阻力比浮游形式(25)和(2)观察牙龈沟液内细胞激素的存在(GCF),大大增加药物的间隙在口袋里。实验证据表明,目前当地交付药物确实无法满足上述标准,在某些情况下,由于缺乏亲和力的或缺乏足够的抗菌能力抵消生物膜的形成(8,24,26]。使用了一些抗生素在牙周治疗(21]。

强力霉素是一个著名的广谱抗生素,抗菌活性对龈下的微生物区系。在其属性中,一个显著特征是能够绑定到牙本质表面和实质,维护抑菌浓度对大多数periodontopathogens有用(27]。在体外测试表明,Porphyromonas gingivalis,普氏菌媒介物,弯曲杆菌腹直肌,梭菌属nucleatum易受强力霉素浓度的6.0μ克/毫升(28]。其它疑似牙周病原体有对强力霉素的敏感性从0.1到2.0不等μ克/毫升,在生物膜,必要的最低抑制浓度(麦克风)至少50倍(29日- - - - - -33]。除了其抗菌活性,强力霉素的抑制性影响特别是对多形核neutrophil-derived和bacterial-derived胶原酶(基质金属蛋白酶(MMP)已报告,(34,35]。

介绍了甲硝哒唑在1960年代用于治疗阴道滴虫病(36,37]。最近,它已被使用在急性坏死性溃疡性龈炎(ANUG)。甲硝哒唑用于治疗牙周疾病,因为它是由义务厌氧细菌积累(18,38]。灭滴灵显示是有效的Aggregatibacter actinomycetemcomitans,普氏菌媒介物,Porphyromonas gingivalis,Tannerella forsythensis,普氏菌nigrescens(39,40),链球菌肝病杂志,Parvimonas微米,Eikenella corrodens(41- - - - - -44]。不同的交付系统提出了甲硝哒唑和调查一些积极的结果20.,24,45- - - - - -47]。

四环素和灭滴灵被报道是有效治疗牙周疾病(48,49]。

盐酸强力霉素被选为本研究其活动对假定的牙周病原体及其抑制胶原酶的能力(50,51]。

灭滴灵和强力霉素已基本采用papulopustular酒渣鼻(52)和盆腔炎性疾病(53]。强力霉素既在抗菌剂量和subantimicrobial剂量。在牙髓学,一个当地的抗菌膏结合甲硝唑和二甲胺四环素(二甲胺四环素与强力霉素抗菌性能)是主要用于“消毒”牙根牙齿坏死(54,55]。

到目前为止,我们所知,没有商用产品,情侣的释放强力霉素和甲硝唑持续一段时间。

因此,本研究的目的是双重的:(1)控释材料的配方含有甲硝哒唑和强力霉素(遇到/阿霉素凝胶);(2)一个在体外其抗菌性能评价与浮游生物膜物种参与牙周和高感染。

2。材料和方法

本研究是在实验室进行的实验医学,坎帕尼亚大学的Luigi Vanvitelli那不勒斯,意大利。

研究大致分为两个阶段:(我)药理阶段:配方控释材料能够吸收和释放所选的活性化合物;在体外测试,以评估药物释放时间和方法(2)微生物相:在体外测试评价控释材料的抗菌活性与浮游生物膜的物种

2.1。药理阶段

2.1.1。Mucoadhesive配方制备

不同mucoadhesive聚合物和比例的初步测试中使用的化合物。为他们准备了凝胶进行评估在体外药物释放和流变行为(数据没有显示)。凝胶与适当的平衡above-examined参数选择微生物评估(图1)。

测试配方是由溶解hydroxyethylcellulose (Natrosol 250 - hhx默克制药,达姆施塔特,德国),聚乙烯吡咯烷酮(Polyvidon 25默克,达姆施塔特,德国)和polycarbophil钙(β制药有限公司纽黑文,美国)在溶液杜尔贝科的磷酸盐(DPBS, 0.0095米,pH值7.2)(Lonza、米兰、意大利)机械搅拌(10分钟。在200 rpm),所以最终的解决方案包含3% (w / w) hydroxyethylcellulose 2% (w / w)聚乙烯吡咯烷酮和1% (w / w) polycarbophil钙。矩阵凝胶形成后,doxycycline-hyclate (Doxy-h) (Calbiochem,达姆施塔特,德国)和灭滴灵(遇到)(Farmalabor、巴里、意大利)被添加的浓度为10毫克/毫升,20毫克/毫升,分别搅拌直到均匀。这种凝胶从而获得被储存在4°C。

2.1.2。在体外测试来评估药物释放的时机

评估的时间和方式发布的抗生素,3毫升溶液凝胶包含2药物(20毫克/毫升和10毫克/毫升,分别)在上述比例。凝胶被引入一个透析管,配备透析膜(11.5毫米直径,切断1 kDa),(光谱/穷,牧场Dominquez,美国)和透析40毫升DPBS缓冲区(pH值7.2)在不断搅拌(100 rpm) 37°C。透析持续了13天与外部介质的变化3^{理查德·道金斯}7^th,10^th,13^th的一天。

释放两个抗生素透析媒介是由分光光度计(紫外可见DU640贝克曼,帕洛阿尔托,CA,美国)通过读取吸光度(以前在272 nm和320 nm Doxy-h实验确定和满足,分别);在重复测量进行实验对透析凝胶组成的一个空白,没有附加的抗生素(安慰剂)。得到释放的定量测定抗生素使用校准曲线与吸光度与抗生素的浓度(r> 0.9浓度范围10 - 2000μ克毫升⁻¹)。的r值是基于两次试验法的可靠性和指示的重复性测试成绩随着时间的流逝,当测量的标准误差降低了1%。

为了避免体积的变化,光谱光度测量的阅读后,样品再次引入透析的船。每个测试是重复的一式三份。

2.1.3。流变测量

流变测量进行了使用一个振荡流变仪(自然史MCR301,安东洼地,德国)配备了平行板的几何形状(板直径25毫米,0.5毫米的差距)和珀尔帖效应的温度控制。特别是,流动曲线和粘度曲线(剪切应力和动态粘度和剪切速率,分别)测定25°C /剪切率从0.1到400°s⁻¹。测量运行一式三份。

2.2。微生物相

2.2.1。菌株和文化条件

Aggregatibacter actinomycetemcomitans(ATCC3718),链球菌杂志(ATCC10556),Parvimonas微米(ATCC33270),Eikenella corrodens (ATCC23834)被选中(SRL LGC标准,意大利米兰)。所有菌株都经常生长在脑心浸液肉汤(BHI) (Oxoid、米兰、意大利)或BHI琼脂板(Oxoid、米兰、意大利)和孵化24小时37°C的罐(桶GasPak系统,正欲& Co . Cockeysville,医学博士,美国)在空气中补充公司为5%₂,90% N₂,5%的H₂(桶GasPak二氧化碳系统信封,正欲& Co . Cockeysville,医学博士,美国)美国杂志,p .微米,和大肠corrodens与4 - 10%公司或微量需氧的气氛₂(洗液CampyPak & Co .)正欲Cockeysville,医学博士,美国)答:actinomycetemcomitans。

2.2.2。琼脂扩散试验满足/阿霉素凝胶

龈下的细菌生长在选择性培养基,在标准条件下孵化。对于每个菌株,五个殖民地收集,接种到嗨,和孵化37°C微量需氧的大气中18个小时(答:actinomycetemcomitans)或在厌氧条件下(美国杂志,p .微米,大肠corrodens)。

细菌密度与麦克法兰标准(麦克法兰1 = 3×10⁸CFU毫升⁻¹)(BioMerieux,佛罗伦萨,意大利)。简单,1毫升细菌悬液,浊度相当于1.0麦克法兰标准,用于均匀接种刚做好的巧克力琼脂板(Oxoid、米兰、意大利)。过度暂停了吸管,和盘子被干30分钟在房间的条件。13毫米直径的先后,一个空白磁盘(& Co .)正欲Cockeysville医学博士,美国)被放置在琼脂板的中间和涂布与安慰剂或遇到/阿霉素凝胶(20毫克/毫升和10毫克/毫升,分别)。琼脂板被孵化在厌氧或微量需氧的37°C条件24日,48岁,72,96,120,144,168,192,240,312 h。测试遇到的抗菌活性/阿霉素凝胶在很长一段时期,每个磁盘(与凝胶不充电)被每日在新的巧克力琼脂板接种如上所述。细菌生长抑制区测量的直径以毫米统治者在两个垂直的位置精度可达到0.5毫米为每个样本由三个独立的观察者。空白光盘浸渍与安慰剂作为消极的控制。每个测试进行了一式三份,至少重复三次。

2.2.3。生物膜钝化测试

二百毫升/阿霉素凝胶或安慰剂是放在无菌埃普多夫的底部,然后2毫升的BHI添加顶部没有搅拌的凝胶和孵化37°C。三天,收益率汤含有抗生素收集发布一个吸管,让底层的凝胶层不受干扰的。两毫升新鲜的BHI添加再次和孵化在37°C。肉汤样本收集如上所述后3、7、10、13、20天用于评价遇到的抗菌功效/阿霉素凝胶在生物膜的增长。洗脱媒体包含了/阿霉素凝胶或安慰剂在4°C储存在冰箱里,直到进一步的使用。

生物膜试验,答:actinomycetemcomitans,美国杂志,p .微米,大肠corrodens在嗨和孵化培养37°C或微量需氧的厌氧条件。一夜之间文化被稀释在新鲜的BHI或BHI收集如上所述(100年的比率1:文化/ BHI)抗生素后释放了/阿霉素凝胶。执行同样的步骤也与细菌生物膜接种安慰剂。200年μl注入BHI从而获得接种到96孔平底无菌聚苯乙烯微型板块(型号580 BioRad)和孵化24 h在厌氧气氛37°C。提高生物膜的形成,微型板块涂以20%(卷/期)人类唾液碳酸盐缓冲(50毫米碳酸钠,pH值9.5)。唾液样本收集,获取知情同意后,从健康成人志愿者被要求不要吃之前收集之前2 h。唾液捐助者也要求用水轻轻冲洗嘴巴前抽样,以减少细菌污染。样品随后被过滤。五分钟后涂层的微型板块、唾液被和井干下层流。生物膜的形成是由结晶紫的修改量化分析O’toole描述和科特勒(56]。简而言之,biofilm-coated井微量滴定板的清洗与200年的两倍µl (PBS去除浮游细胞和风干了45分钟。每个井是200年然后沾µl 1%的水结晶紫溶液45分钟。板块与200年被冲洗µl无菌蒸馏水去除多余染料和干燥的空气。生物膜的量化是增溶的结晶紫的混合乙醇和丙酮(80:20 v / v),确定样品的吸光度在570/655 nm(型号580 BioRad)来确定生物膜的形成。生物膜的生长与安慰剂作为消极的控制。每个测试进行了一式三份,至少重复三次。每个菌株在每个时间点的吸光度值(3、7、10、13和20天)比较与负控制学生的t以及和方差分析(方差分析)为对比组。被认为是意义 。

2.2.4。共焦激光扫描显微镜(样品形貌)研究

只有在执行样品形貌的研究美国杂志作为一个确认上述失活生物膜的考验。

一夜之间的文化美国杂志稀释1:20新鲜BHI或BHI抗生素从见面后收集/阿霉素凝胶,加入12-well微型板块(配角;美国康宁公司,纽约)包含玻璃罩唾液涂以20%碳酸盐缓冲。包含细胞悬浮液的微型板块孵化16 h在厌氧气氛37°C。确定生物膜的形成和生物膜内细菌的生存能力3、7、10、13和20天,现场/死BacLight染色工具包(分子探针,尤金,俄勒冈州,美国)作为推荐的制造商(25]。组件包括两个荧光核酸染色SYTO9 propidium碘。SYTO9穿透可行的和不能存活的细菌,而碘化propidium穿透细菌细胞膜受损和淬灭SYTO9荧光。死细胞吸收碘化propidium发出荧光红,而可行的细胞发出荧光绿。生物膜染色检查下样品形貌(蔡司510元,Thornwood,纽约,美国)使用20 x 63 x油浸物镜。使用的激发和发射波长检测SYTO9 488和543海里,分别。Propidium碘很兴奋在520海里,其排放监测,620海里。结果栈使用共焦图像分析软件,然后处理它们使用一个成像软件(专业+图像软件媒体控制论,罗克维尔市,医学博士,美国)。分析了每个样本一式三份和测量重复三次。

3所示。结果

3.1。流变测量

这种凝胶配方的粘度曲线是在图2。假塑性行为证明:粘度与剪切速率的增加下降(流动指数的值等于0.40±0.05)。特别是,粘度从113±2减少到0.8±0.1 Pa·年代剪切率从0.1提高到400年代⁻¹。

3.1.1。发布模式的药理成分

释放后发现(图13天是9.7%3(图)和67%4分别)的初始剂量Doxy-h和灭滴灵。

释放Doxy-h在以下时间间隔3天= 1.2毫克;7天= 0.67毫克;10天= 0.76毫克;13天= 0.29毫克,而灭滴灵的释放在同一时间间隔3天= 30毫克;7天= 6.8毫克;10天= 2.5毫克;13天= 0.9毫克。

3.1.2。分析抗菌功效的认识/阿霉素凝胶

遇到的抑制活性/阿霉素凝胶实验测试答:actinomycetemcomitans,美国杂志,p .微米,大肠corrodens。容易遇到/阿霉素凝胶对所有测试菌株是列在表中1。结果48和72 h是类似于在24小时。株,细菌生长抑制的平均直径表示一个合理的琼脂扩散对浮游细菌的抗生素和抑制活动至少312 h比消极的控制。

分析生物膜形成的抑制/阿霉素凝胶研究使用答:actinomycetemcomitans,美国杂志,p .微米,大肠corrodens。生物膜抑制72 h后312小时(图70 - 80%5从消极的控制)和明显不同。满足/ 20天后阿霉素凝胶失去了功效。

链球菌肝病杂志生物膜使用CLSM510也检查了。媒体包含甲硝唑和强力霉素的抗菌效果洗脱后遇到报告/阿霉素凝胶图6。获得的生物膜的显微图在BHI筛选了3、7、10、13天显示高减少生物膜增长。在20天,生物膜生长没有抑制。

4所示。讨论

本研究主要集中在开发的凝胶形成能力,结合两种不同的抗生素(灭滴灵和强力霉素),自缓释能力。此外,目标是实现一个凝胶与mucoadhesive属性,表现出适当的粘度为了syringeable和容易交在口袋里。

各种浓度和配方测试后,我们开发了一个混合的材料代表一个可接受的妥协之间的附着力和生物相容性57,58]。纤维素和聚丙烯酸酯的选择作为凝胶材料的一部分,是出于他们的一类属性(59,60]。

流变分析表明所选配方展出的剪切稀化(假塑性)行为显示降低粘度随着剪切速率(图2)。后者是一个可取的属性视图的应用程序:高剪切率下的低粘度值允许挤压通过一根针(易于管理使用注射器),而高粘度低切变率下,如注射后,延长居留在牙周袋(61年]。此外,注射系统允许降低治疗成本相比,设备需要时间来被放置在目标站点和担保;此外,它还允许填满口袋从而达到大部分的病原体。邦萨尔et al。62年)制定不同chitosan-based凝胶(带在甲硝唑和左氧氟沙星),增加粘度的结果在mucoadhesive属性的增加,所以,最好的mucoadhesive配方不是syringeable通过21-gauge针了。壳聚糖含量的增加也增加了抗菌凝胶的释放的时候,即使它不超过几个小时。

凝胶制定必须有能力口袋内的结合和释放活性抗菌活性的药物选择。结合抗菌药物的输送系统和单一的政府更有效扩大抗菌谱的行动;然而,它也很难获得,如果分子大小和表面性质的不同,在这种情况下。这两种抗生素使用,Doxy-h和灭滴灵,纳入凝胶的浓度10毫克/毫升,20毫克/毫升,分别。这些浓度选择的基础上发表的数据在0.25 - -6.0的麦克风μ8 g / ml和0.1μg / ml,分别28,32]。迦得et al。63年也开发了一种固体脂质微粒封装5% w / w盐酸强力霉素(DH)和20% w / w甲硝哒唑(MT)治疗牙周疾病。体外释放的测试显示,高达80%的药物被释放2至8小时,保持一点点残余率高达80小时。在最近的研究中,药物纳入凝胶的浓度大于最低要求(大约1600和2500倍Doxy-h和灭滴灵,分别)。这种“过度充盈”凝胶弥补潜在损失的观察牙龈沟液内细胞激素引起的凝胶和唾液。此外,在活的有机体内,部分降解抗生素由于牙周袋的温度和pH值是可能发生。(64年,65年]。也考虑增加麦克风时使用抗生素在活的有机体内对组织形式的细菌生物膜(28,31日,66年]。

在体外试验表明这两种抗生素的控释的凝胶被添加,如图3和4。事实上,13天之后,有一个释放9.7%的透析媒介Doxy-h(图3)和67%甲硝唑(图4),差异可能由于测试化合物的分子量{171.2 Da (C₆H₉N₃O₃;Doxy-h ca n . 443-48-1)和512.9 Da (C₂₂H₂₄N₂O₈·HCl 1/2 (H₂O) 1/2 (C₂H₆O);ca n . 24390-14-5)}及其结构差异。然而,每个实验发布的抗生素凝胶的数量总是大于麦克风在文献中报道的抗菌效果,在浮游细菌和生物膜的形式。的确,在前三天,有一个高版本的抗生素(破裂释放),1.2毫克和30毫克,分别为Doxy-h和灭滴灵,而较慢的释放在下列介质的变化。可能,高释放在第一次3天可以部分归因于过度的滞留在制定和部分抗生素的抗生素的外表面凝胶。灭滴灵的情况下,这可能是放大了的大小分子有一个大约三倍比Doxy-h低分子量。对于牙周应用程序,效果都是破裂释放的担忧可能是有用的实现所需的麦克风,而持续的发布需要维护药物浓度。邦萨尔et al。62年)验证一个初始破裂释放在第一个六到七个小时其次是缓慢和持续释放到48 h。大约70 - 80%的甲硝唑和左氧氟沙星在6小时内被释放,从最胶粘剂和syringeable配方。特别是在我们的研究中,高初始数量的抗生素在头几天发布不妥协凝胶在更长时间内的抗菌功效,作为药物释放仍然足够高,以确保抗菌活性。此外,破裂效应可能是有利的,因为它是已知的抗生素的效率往往取决于最初的感染部位的药物浓度(67年]。

在这项研究中,释放Doxy-h透析媒介中,13天后,被发现是0.3毫克,而对于灭滴灵,版本高于0.9毫克或约1.5和3倍最少在文献中报道的那样,需要灭活细菌负责牙周炎(57,60]。在13天,释放抗生素没有完全筋疲力尽了。最后,本研究的结果表明,所使用的配方允许一个方便的释放的药物同时表现出粘度适合注入能力,因此代表遇到一个有吸引力的系统/阿霉素交付在牙周或高的口袋里。

研究中使用的细菌毒性multispecies社区参与牙周疾病。特别是,大肠corrodens(68年)的毒性增强美国杂志这是先锋殖民者(69年),p .微米是最常见的分类群在口腔生物膜的形成(70年]。通过微生物试验,结果证明了的敏感性a . actinomycetemcomitans美国杂志,p .微米,和大肠corrodens满足/阿霉素凝胶的浓度20毫克/毫升+ 10毫克/毫升。事实上,生长抑制发生早在24小时后保持48,72,96,120,144,168,240,和312小时(13天),因此维护一个在体外效率杀死牙周病原体。

其他的研究表明,生物膜组织的渗透和活动影响抗生素,降低杀菌作用的影响(29日- - - - - -33]。在这项研究中,生物膜的失活的定量结果显示减少其形成后遇到的管理/阿霉素凝胶13天对所有压力测试。

此外,正如被生物膜的共焦显微镜美国杂志,有杀菌作用的/阿霉素凝胶和一个明确的破坏生物膜长达13天。只有20天之后的管理抗菌凝胶,有重组聚集的生物膜。

结果的基础上在体外研究中,我们认为,释放的两种不同的抗生素controlled-delivery凝胶是可以实现的。虽然是努力工作,类似于体内牙周环境的条件,本研究的体外性质已经被认为是一个极限。因为牙周的性质和幼童腹壁薄弱的复杂性和高感染,包括需氧和厌氧细菌,和复杂的组织,很难预见所有凝胶的临床使用的限制将会出现。然而,它似乎是合理的计划有效性临床研究的基础上对浮游生物膜的种类和长时间的效果。

5。结论

凝胶配方在当前的研究中获得积极成果上面所示的两个阶段的实验。事实上,牙周病原体的初步测试灵敏度满足/阿霉素凝胶和延长释放的测试是积极的。成就的最低抑制浓度(MIC)发生在第一个24小时,并保持不变至少13天。抑制增长也发生通过应用见过/阿霉素凝胶通过应用第一个细菌和细菌或导致最大增长,然后随后应用凝胶,这可能意味着这些测试遇到/阿霉素凝胶可以有效的细菌已经存在或试图在口袋凝胶后管理。考虑到本研究的局限性,未来,这两个在体外和在活的有机体内研究建议。

数据可用性

数据用于支持本研究的结果中包括这篇文章但任何额外的信息是可用的要求从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究是财务支持Regione坎帕尼亚(意大利)。

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