的抑制作用肠球菌都有效WB2000挥发性硫化合物生产Porphyromonas gingivalis

文摘

口腔厌氧菌产生的挥发性硫化合物(vsc)是主要负责口腔恶臭化合物。肠球菌都有效WB2000被公认为一个antiplaque益生菌细菌。在这项研究中,的影响大肠都有效WB2000 VSC生产Porphyromonas gingivalis评估,抑制口腔恶臭的机理研究。p . gingivalis写明ATCC 33277年培养的四个乳酸细菌,包括大肠都有效WB2000。随后,p . gingivalis写明ATCC 33277、W50 W83,两个临床分离培养的存在与否大肠都有效WB2000, vsc的排放在培养基由气相色谱法测定。的数量p . gingivalis写明ATCC 33277在混合文化大肠都有效WB2000 6 h,降低和减少的速度高于其他乳酸菌混合文化。5个的数量p . gingivalis压力与出口增速下降在混合文化大肠都有效WB2000。甲硫醇的浓度是低花培养基p . gingivalis和大肠都有效WB2000文化相比p . gingivalis一个人。因此,大肠都有效WB2000可以降低口腔恶臭通过抑制的增长p . gingivalis和中和甲基硫醇。

1。介绍

口腔恶臭是主要由硫氨基酸代谢引起的厌氧细菌存在于口腔(1]。主要负责口腔恶臭化合物挥发性硫化合物(vsc),如硫化氢(H₂,甲硫醇(CH₃SH)和二甲基硫醚;这些化合物是由一些periodontopathic细菌。的确,Porphyromonas gingivalis,梅毒denticola,Tannerella连翘,普氏菌媒介物产生大量的H₂年代和CH₃SH (2]。

益生菌,定义为生活有利于微生物宿主的健康管理在充足(粮农组织/世卫组织2001年),被认为扮演一个角色在维护口腔健康3]。Enterococci是兼性厌氧的革兰氏阳性球菌,形成的胃肠道正常菌群的一部分,动物和人类。他们也经常发现在发酵的食物,如奶酪和肉(4]。肠球菌都有效和粪肠球菌是最临床相关属的成员肠球菌。传统上,他们被认为是低级的院内感染的病原体但已成为重要的原因(5]。临床使用的大肠都有效和粪大肠在食品发酵和益生菌需要小心安全评价(6]。

大肠都有效已报告菌株抑制由生龋齿的细菌生物膜的形成在体外(7,8]。此外,前一个双盲随机试验中,受试者使用牙膏含有清洁他们的牙齿大肠都有效WB2000或安慰剂为4周显示改善唾液流,唾液缓冲能力,积累(血小板9]。本研究旨在调查的影响大肠都有效WB2000 VSC生产p . gingivalis和口腔恶臭的抑制机理大肠都有效WB2000。

2。材料和方法

2.1。菌株和文化条件

在这项研究中使用的菌株是列在表中1。肠球菌都有效WB2000,以前分类粪链球菌(10),是由Wakamoto制药提供。的选择性培养基p . gingivalis,正欲由布鲁氏菌的琼脂(Le Pont de Claix法国)补充5%马血,氯高铁血红素(5μg / mL),维生素K (1μg / mL)、庆大霉素(50μg / mL)。乳酸细菌培养在提单琼脂(Nissui、东京、日本)。菌株在37°C厌氧培养40 h和悬浮在无菌生理盐水在560 nm (OD光学密度_560年1.0)p . gingivalis和一个OD_560年0.02为乳酸菌。

2.2。共培养的p . gingivalis和乳酸菌

使用100细菌进行共培养μL (p . gingivalis暂停,100μL乳酸细菌悬液,和10毫升新鲜GAM肉汤(Nissui、东京、日本)补充0.7%葡萄糖,氯高铁血红素(5μg / mL)和维生素K (1μg / mL)在37°C厌氧。可行的细菌计数的培养基测定在6、12、24、48小时适当的琼脂培养基上37°C厌氧48 h。

2.3。测量的挥发性硫化合物

VSC的浓度在花中p . gingivalis培养的存在与否大肠都有效WB2000 24和48 h后测量。整除(0.2毫升)花了培养基的添加到5毫升锥形管,密封,室温下孵化了5分钟。然后,0.5毫升的收集和测量了气相气相色谱法(模型GC2014,日本岛津公司作品,京都,日本)。

3所示。结果

3.1。乳酸菌对增长的影响p . gingivalis写明ATCC 33277

可行的数量p . gingivalis写明ATCC 33277下降到低于检出限6 h后在混合文化大肠都有效WB2000(图1(一))。在混合文化与其他三种乳酸菌(唾液链球菌JCM·5707唾液l .CIP 103140,这种l .JCM·1112)可行的数量p . gingivalis写明ATCC 33277下降到低于检出限12 h。在混合文化p . gingivalis写明ATCC 33277,大肠都有效WB2000增长更迅速比与其他三种乳酸菌混合文化,及其增长趋于稳定在6 h(图1 (b))。

3.2。的影响大肠都有效WB2000在不同的生长p . gingivalis菌株

的影响大肠都有效WB2000 5的增长p . gingivalis写明ATCC baa菌株(写明ATCC 33277,写明ATCC 53978 - 308, 2 - 1,和7 - 1)是评价。所有的数量p . gingivalis压力下降到低于检出限在24和48 h在混合文化大肠都有效WB2000(图2)。相比之下,的数量大肠都有效在24小时WB2000到达了一个高原。

3.3。的影响大肠都有效WB2000 VSC生产p . gingivalis菌株

vsc的浓度在培养基测定气相色谱(表2)。H的水平₂产生的年代p . gingivalis压力低于CH₃SH。H的浓度₂年代在混合培养基高于介质中p . gingivalis是有教养的,除了两个来自混合文化的媒介p . gingivalis临床分离株(2 - 1和7 - 1)大肠都有效WB2000后48 h。相比之下,CH₃SH在混合培养基浓度低于从文化的媒介p . gingivalis孤独,除了来自混合文化的媒介p . gingivalis菌株(W50和2 - 1)大肠都有效WB2000后24 h。CH的水平₃SH在花中p . gingivalis培养48 h的存在与否大肠都有效WB2000图所示3。尽管CH₃上海生产的p . gingivalis应变依赖,CH₃SH浓度显著低于花来自混合文化的媒介p . gingivalis菌株和大肠都有效WB2000比媒介文化的后者微生物。

4所示。讨论

益生菌作用的假设机制在口腔中(1)参与绑定口腔微生物的蛋白质,(2)影响斑块的形成及其复杂的生态系统的竞争和干扰interbacterial附件,(3)参与底物的代谢,和(4)生产的化合物,抑制口腔细菌(11]。大肠都有效据报道抑制由生龋齿的细菌生物膜的形成(7,8]。Kumada et al。8报道一种蛋白质,由链球菌抑制生物膜的形成。此外,我们先前的研究表明大肠都有效抑制生长的一些变形链球菌(7]。在这项研究中,大肠都有效WB2000抑制的增长,以及减少CH₃上海生产的,p . gingivalis。一个研究唾液l .TI 2711年报道,pH值较低(≤6.0)和乳酸的存在(40 - 50更易/ L)诱导p . gingivalis死亡(12]。的pH值大肠都有效WB2000培养基是4.4经过24小时的潜伏期(数据没有显示)。的增长率大肠都有效WB2000高于其他乳酸菌,表明这种生物迅速抑制的增长p . gingivalis。

p . gingivalis菌株产生CH₃SH和低水平的H₂年代,先前报道(13]。大肠都有效WB2000抑制CH₃上海生产的p . gingivalis但没有抑制生产的H₂在当前的研究中。一些益生菌产生vsc的半胱氨酸和蛋氨酸(14]。GAM汤用在当前的研究中含有半胱氨酸,因此大肠都有效WB2000可能产生H₂年代。乳酸链球菌抑制了增长和H₂年代,CH₃SH, CH₃原理图₃的生产p . gingivalis(13]。以确定是否大肠都有效WB2000专门抑制CH的生产₃SH,应该使用不同的媒体和文化条件。此外,未来的研究需要评估p . gingivalis菌株产生高水平的H₂年代。

除了大肠都有效和美国酸奶已报告,其他生物抑制口腔恶臭。唾液链球菌K12的抑制的增长Solobacterium moorei产生H₂年代和参与口臭(15,16]。唾液乳杆菌WB21和这种l .在临床试验中已报告抑制口腔恶臭(17- - - - - -19]。唾液l .WB21减少的数量梭菌属nucleatum和无处不在的唾液中的细菌19]。

大肠都有效WB2000被用于日本传统医学(强Wakamoto®)治疗肠胃不适,及其对干眼是最近报道的影响20.]。此外,牙膏含有的效果大肠都有效WB2000菌斑控制(已被调查9]。本研究的结果表明大肠都有效WB2000可以降低口腔恶臭通过抑制的增长p . gingivalis和中和CH₃SH的效果大肠都有效口腔恶臭WB2000将调查在未来临床试验涉及牙膏的使用。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究的部分支持由年轻科学家(没有的补助金。16 k20707)和科研补助金(26463203和26463203号)从教育部,文化、体育、科技、日本。

引用

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