文摘

牙酸蚀病或釉质脱钙作用是一个重要的临床问题。苹果酸性饮料被认为增加潜在的牙酸蚀病。这个的目的在体外研究旨在探讨丁香精油的效果(CEO)及其活性原则苹果汁的牙齿脱钙作用。首席执行官在gc - ms分析表明丁香酚含量高(58.29%)和eugenyl醋酸(19.10%)。牙齿标本随机分为5组:控制,CEO,丁香酚,eugenyl-acetate和氟化物。标本暴露24 h和分析了钙内容用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)。数据分析使用的学生t以及()。CEO,丁香酚,eugenyl-acetate显著减少牙齿脱钙作用的只有17岁的苹果汁,24日和21球型投手⁻¹,分别。人类红细胞溶血活性研究排除的可能性进一步相关的细胞毒性。观察到,首席执行官和其两个铅分子抑制脱钙作用和/或促进造成的补充矿质苹果汁。测试化合物的效果似乎是截然不同的氟化物治疗。首席执行官可能,因此,服务是一种很有前途的兼职氟化物治疗根面龋在微创治疗。

1。介绍

随着人类进化有剧烈的变化发生在饮食模式。我们消费变得更加精致的饮食增加获得现成的果汁和高频率的零食。也有大量的碳酸饮料和果汁饮料的消费增加1]。最近以来,已经有相当多的强调“健康食品和健康饮食。“果汁已经广泛推广和提倡“健康饮料。“然而,声称果汁安全不足导致牙齿是未经证实的报告在文献[2]。苹果汁是全球消费但普遍认为是无辜的,他们的影响。苹果果汁含有酸和糖能溶解牙齿的硬结构(搪瓷和任何暴露根),使牙齿的内在部分暴露,导致灵敏度。果汁都是含有减少和nonreducing糖的混合物(果糖、蔗糖和葡萄糖),根据类型不同浓度和成熟水果的地位。等甘味,加上酸性性质,导致果汁被引用作为小孩蛀牙的风险因素(3]。沃尔什表示,黑暗的可乐饮料是最严重的罪犯时,牙酸蚀病;一些高酸性的果汁可以做损害你的牙齿比其他软饮料(4]。在过去的几十年里,牙齿脱钙作用已经成为主要的问题在所有年龄组。果汁的侵蚀破坏已经承认了很长一段时间是明显不同的研究(5]报告牙齿脱钙作用由于过度果汁消费。酸性食物和饮料会影响自然牙齿,和慢性接触常常会导致牙酸蚀病的发展,磨损和腐蚀。有兴趣决定增加果汁的一些物理和化学性质,如内源性pH值、酸度、和总可溶性固体含量(TSSC),以及他们对牙齿的影响侵蚀或牙齿脱钙作用。的酸性成分可能表示可滴定酸度而言,这是一个测量的重量百分比酸存在于一个解决方案。的一个重要策略关于预防性治疗牙齿侵蚀和衰变是防止牙酸蚀病或促进软化牙(补充矿质6]。因此,存在一个明确的需求更有效治疗牙齿侵蚀。天然产物作为几千年的民间药物和新型治疗代理人承诺来源(7]。大多数天然产物的研究领域的口腔健康都集中在他们的抗菌活动(8,9]。很少报道天然产物的影响或植物化学物质抑制牙酸蚀病或牙齿硬组织脱钙作用过程10]。

丁香(气味清香植物)是历史悠久的药用价值;然而,它的药用特性只在“阿育吠陀药物使用。“丁香精油的主要酚类成分,丁香酚,和醋酸eugenyl已被证明改变树脂复合材料的一些物理性质,如表面粗糙度不良影响(11- - - - - -13),横向强度(14),和表面硬度12,15]。然而,丁香油会导致严重的问题,如喉咙痛、呕吐、细胞毒性、肾脏失败,和/或损害肝脏,痉挛,呼吸困难,如果用于高剂量和其他人。因此,在本研究小剂量显示至少这种油已经使用细胞毒性的影响。

当前的研究测试假说,丁香精油及其领导积极分子可能抑制脱钙作用所导致的牙齿最广泛使用的苹果饮料,它提供了一个潜在的小说自然治疗牙齿问题。此外,用气相色谱-质谱分析和分析了丁香精油的溶血活性测试油,,导致分子包括排除这些化合物的细胞毒性。

2。材料和方法

商用丁香种子受到hydrodistillation Clevenger装置3 h。精油(挥发部分)分离和储存在4°C。丁香酚和醋酸eugenyl购买Sigmae奥尔德里奇(美国)。无机化学试剂均为分析纯,采购从大肠默克公司(印度)。

试点调查知道这果汁是最常见的消费在一般人群中,这表明,在商用果汁最常吃苹果,番石榴,荔枝果汁。在这三个中,苹果汁比番石榴汁酸性(pH = 5.5)和荔枝汁(pH = 5)。因此,苹果汁被认为是在这个研究。

2.1。生化的特性

确定内生pH值、助教和血糖水平进行样本的商用苹果果汁。每个分析一式三份。数据是由一个校准检查收集的,记录在一些具体图表。

苹果汁的内在pH值测量前消费。苹果汁的pH值确定用酸度计(配偶C832多参数分析仪)直接放置到解决方案。50毫升的果汁是放置在一个烧杯,酸度计电极都沉浸在果汁,和阅读记录。录音的室温。

可滴定酸度的金额是0.1 N KOH溶液所需的产品达到中性pH值或pH值。苹果汁的滴定酸度测定根据官方分析化学家协会所采用的方法(16),10毫升整除的稀释产品是滴定(10%解决方案的示例)0.1 N KOH溶液直到物质达到了pH值为7,对应的端点酚酞。酸度计读数进行(配偶C832多参数分析仪)。当达到这个值是,花了KOH成交记录和酸性物质的百分比计算使用以下方程,结果被表示为柠檬酸的百分比, 在哪里V= KOH体积;午睡= KOH基地的正常浓度;F=正常校正系数;每克meq-g = miliequivalent柠檬酸;示例=体积的药。这个过程被重复3种不同的苹果饮料的容器。此外,果汁是化验后一式三份60分钟的剧烈搅拌去除任何碳化。

减少糖类(如葡萄糖),nonreducing糖(如蔗糖)和总糖测定方法采用官方分析化学家协会(16),和g / mL表达的结果。

还原糖
还原糖的测定,5毫升的苹果汁在50毫升蒸馏水稀释。这个解决方案在水浴加热5分钟,冷却和过滤后,它的体积已经完成100毫升蒸馏水。接下来,费林10毫升的解决方案是混合3滴1%蓝色亚甲基。这个混合物是变暖的毯子下滴定与先前准备示例解决方案,直到现在还原糖在样例减少完全费林的解决方案中,所展示的颜色从蓝色变为无色,砖红色沉淀的形成。还原糖的计量单位是表示为克葡萄糖每100毫升的样品和还原糖的百分比计算由以下方程: V=体积(mL)的样品溶液,Cf =费林解决方案的校正因子,=体积的样品用于解决方案的准备,和=体积的样品溶液用于滴定。

总糖
在这个分析,nonreducing糖与盐酸酸进行酸水解。这些糖类转化为还原糖,进一步进行滴定,减少了费林的解决方案,根据相同的方法用于测定还原糖。结果表示为克糖每100毫升的样品。

Nonreducing糖
nonreducing糖被减去估计从总糖和还原糖增加这个值的转换因子葡萄糖蔗糖(0.95)。结果表示为每100毫升的样品克蔗糖。

2.2。gc - ms分析

丁香精油进行详细的gc - ms分析用日本岛津公司2010气相色谱仪装有一个AB蜡列如前所述[17,18]。氦是用作载气。0.1 mL模式样本注入离了。精油的化学成分,表所示1,确定了通过比较色谱峰的保留时间与真实使用WILEY8化合物。自由和NIST05s.LIB。

2.3。饮料接触的牙齿

的在体外苹果汁的脱钙作用潜力评估使用提取人类恒牙。的在体外模型被选中,因为完整的牙齿表面暴露在饮料和观察的模型允许侵蚀在合理的时间内。苹果饮料的影响健康的牙齿是如前所述取决于Ehlen [19),做了一些调整。短暂,烧杯满心50毫升的苹果汁,和准备新鲜的牙齿从志愿者悬浮在饮料总共24小时在室温下不断搅拌通过使用一个磁性搅拌棒。比较分析、丁香油和醋酸铅分子eugenyl和丁香酚也介绍了果汁。潜伏期后,分析了果汁钙内容用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)方法根据标准的参考方法20.]。汁的牙齿,但是,不同于普通饮酒行为的果汁,但时间间隔和频繁使用这果汁是足以引起牙齿侵蚀或脱钙作用。消除国际米兰——和intraoperator偏差,数据分析“盲目”由第三方技术人员不知道采购样品的来源。

2.4。丁香油的抑制作用及其导致的牙齿脱钙作用的分子的苹果汁

找出丁香精油的抑制作用及其两个铅分子牙齿脱钙作用的苹果汁,我们增加了0.05%(至少有毒浓度)的丁香油及其导致分子苹果果汁。氟化解决方案的测试解决方案包含1000 ppm,氟化钠作为积极的控制来防止牙齿脱钙作用。牙齿被停职的测试化合物添加饮料24小时在室温下不断搅拌用磁力搅拌棒。钙含量用电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)方法根据标准的参考方法20.]。

2.5。溶血性试验

溶血性活动是前面描述的(21]。的溶血性活动丁香精油、丁香酚和醋酸eugenyl测定人类红细胞。收集健康个体的人类红细胞管包含EDTA抗凝。的红细胞被离心收获10 m在2000 rpm 20°C和PBS洗了三次。颗粒,PBS加入收益率10% (v / v)红细胞/ PBS悬挂。悬架被稀释10% 1:10在PBS。从每一个暂停,100μ我是100年增添了一式三份μL的一系列不同的稀释在埃普多夫管测试化合物在相同的缓冲区。氟作为积极的控制。总溶血Triton x - 100年达到了1%。管是孵化1 h在37°C,然后离心10 m在2000 rpm 20°C。的上清液,150年μL被转移到一个平底的微量滴定板(美国iMark BIO-RAD)和吸光度测量spectrophotometrically 450海里。溶血百分比计算由以下方程:

3所示。结果

3.1。gc - ms分析

丁香精油的gc - ms分析如表所示1和图1。11个化合物代表100%的石油,主要成分是丁香酚(58.29%)和eugenyl醋酸(19.10%)。

表2总结的结果在体外调查的酸度(pH),滴定酸度(TA)、还原糖(RS), nonreducing糖(NRS)和总糖(TS)测试的平均值果汁。有显著差异的样本为降低苹果汁,nonreducing和总糖。

3.2。脱钙作用效应的苹果汁

分析显示一致的意义学生- - - - - -t)增加钙吸取从牙齿学科孵化后测试了苹果汁。ICP-OES措施相比,仅在钙果汁含量有显著差异(与牙)和果汁孵化(),明显表现出牙齿脱钙作用的测试汁(图2)。然而,样本处理丁香精油及其两个铅分子显示显著减少钙含量与对照组相比。1000 ppm氟化物作为积极控制抑制脱钙作用的苹果汁,观察到抑制脱钙作用只有15毫克L⁻¹的钙。有趣的是,丁香精油观察到减少牙齿的苹果汁的脱钙作用只有17毫克L⁻¹。同样,丁香酚和醋酸eugenyl也观察到抑制脱钙作用24和21 mg L⁻¹,分别。之间没有统计上的显著差异氟化物和丁香油治疗组。三个测试的化合物,丁香油显示主要的脱钙作用抑制醋酸eugenyl和丁香酚紧随其后。

3.3。溶血性活动

丁香油、丁香酚、醋酸eugenyl和氟化物对人体红细胞在图所示3。0.2% v / v,丁香油,丁香酚,醋酸和eugenyl显示48,41岁和57%溶血而氟化物浓度显示,100%溶血。在0.05%的测试化合物的浓度,有深远的影响造成的脱钙作用苹果汁,只有11、7,和19%的观察溶血。这表明丁香精油及其导致的分子细胞毒性较低的活动。

4所示。讨论

pH值和缓冲不完全解释的侵蚀势苹果果汁,矿物含量、浓度的有机酸(磷酸、柠檬酸)、和混合的能力去除钙矿物表面都是相关的。然而,pH-expressing酸含量、缓冲能力和酸性离子可用于酸性饮料的整体媒介效果更重要生产侵蚀,没有酸环境规定的其他离子并不活跃。表2显示出低的pH值苹果汁,注册pH值低于临界pH值5.5,牙齿脱钙作用发生。这些结果值得注意的低pH值反映苹果果汁非常酸,因此都可以导致牙齿脱钙作用(图2)。这表明苹果果汁不仅是高度酸性当他们第一次接触到牙齿,但是他们也需要大量的alkaline-stimulated唾液中和。苹果汁的化学成分有很高的酸缓冲能力和活动(pH)远低于临界pH值5.5。但当占任何额外的钙释放,所有测试样品中的钙是持续和显著提高钙含量相比,仅在苹果汁(负控制)。牙齿侵蚀、化学溶解的钙,是反映在增加钙的含量在所有的测试样品。然而,使用0.05%丁香油,丁香酚,醋酸eugeyl停止钙溶解后由苹果汁飕飕声(如图2)。1000 ppm氟化物作为积极控制氟被发现有效地减少侵蚀所产生的各种代理(22]。能够很好的证明,氟的anticariogenic效果发生通过两种主要机制:抑制牙酸蚀病当氟化物存在在水晶表面酸形成低溶解度和增强补充矿质的挑战外表类似于耐酸矿物氟磷灰石(FAP) remineralized晶体(23]。氟化物在这项研究中采用积极的控制,发现有效的过程中造成的牙酸蚀病苹果果汁。氟化物治疗抑制牙齿脱钙作用(图2)。

本研究中使用的丁香精油主要由丁香酚和醋酸eugenyl。这些酚类化合物是有效的抗氧化剂具有抗菌特性,当地的防腐剂,麻醉(24,抗炎和immunostimulating效应(25]。当与氧化锌混合时,丁香酚形成一个材料在牙科恢复和修复应用程序。然而,这些化合物的影响牙酸蚀病和软化牙硬组织不太好理解(26]。基于获得的数据在我们的研究中,丁香油和其两个活动原则可能会积极影响苹果汁的牙酸蚀病过程中通过不同的机制。在这项研究中,clove-oil-treated牙齿脱钙作用对减少控制。氟化所表现出的类似的效果,这是一个众所周知的脱钙作用的抑制剂。这样的潜在抑制侵蚀牙齿的丁香油及其领导分子也可能是由于相同的方式是由氟化。然而,更高浓度的氟化物是不可取的,因为它将是不可接受的毒性也影响感官品尝属性(27]。排除的可能性有关丁香油及其衍生物的细胞毒性,对人类红细胞溶血的活动进行了研究。人类红细胞的毒性研究提供了一个方便的工具化合物,因为它们容易获得,膜性能是众所周知的,他们的溶菌作用很容易监控通过测量血红蛋白的释放(28]。的在体外溶血性试验可能是衡量的筛查工具在活的有机体内毒性宿主细胞(29日]。丁香油的比较研究及其主要原则,丁香酚和醋酸eugenyl常规使用氟化表明,这些测试化合物大大减少细胞毒性。

基于获得的数据在体外研究中,我们认为,丁香精油及其两个铅分子抑制脱钙作用和/或可能促进补充矿质由于苹果酸性饮料。测试的脱钙化合物的抑制氟化似乎是不同的治疗。回答问题的存在在活的有机体内丁香精油的功效及其导致的分子。未来的研究走向这个目标,基于动物模型,可以解决这些问题。

承认

作者要感谢Ajai Kumar先生,高级工艺助理如果贾瓦哈拉尔·尼赫鲁大学的盛情帮助。