文摘

客观的。细菌检查已经完成根管治疗过程中。在目前的试点研究,开发的新方法,使用荧光试剂和膜过滤器,用于检测和量化的细菌感染牙根,以评估治疗的结果。方法。6感染根管根尖周的病变从5受试者包括在内。知情同意是获得所有对象(年龄范围,23 - 79年)。收集样本感染根管治疗开始时(称为# 25第一),结束治疗的第一天(称为# 55第一),和下一个约会一天(称为# 55秒)。然后,细菌数(CFU)测量使用荧光试剂(4′,6′-diamidino-2-phenylindole和碘化propidium)并通过Bioplorer聚碳酸酯膜过滤器。结果。样本的均值±SD的CFU“# 25第一” 。随着根管治疗的进展,CFU下降 (# 55第一) (# 55秒)。结论。在目前的试点研究,快速检测和量化的细菌感染牙根是成功执行使用荧光试剂和膜过滤(Bioplorer分析)。

1。介绍

我们已经了解到,由微生物群在感染根管各种口腔细菌,尤其是厌氧细菌(1- - - - - -5),并有可能导致治疗的失败,如持续的牙髓学的病变的形成。因此,细菌检查治疗感染根管的过程中被执行,以评估治疗的结果,导致预后良好(6,7]。然而,检测细菌在感染根管的情况下利用文化和/或分子生物学技术相对比较耗时,因此这些方法或许应该修改供临床使用。此外,目前还不清楚是否剩余的少量细菌牙根的影响复发的根尖周的牙周炎。

最近,一个快速的方法检测和量化的细菌在食品和/或化工产品,使用荧光试剂和膜过滤,开发在日本(8,9]。这项技术使我们能够计算活细菌细胞的数量区分生活和死亡的细菌细胞的样本在半个小时。然而,量化的方法尚未应用于样品的根管感染。

因此,在目前的初步研究中,我们应用新的开发方法使用荧光试剂和膜过滤检测和量化的细菌感染牙根和比较其数据的培养方法。

2。材料和方法

2.1。主题

主题与根尖周的牙周炎(五个女性;年龄23 - 79年),曾参加分工的牙髓,东北大学医院,是本研究(表随机选择1)。根尖周的牙周炎被诊断为临床特征的基础上,例如,灵敏度(温柔)冲击/闭塞和radiographical发现,像前面描述的那样1]。选择牙齿临床上没有明显的边缘泄漏,有足够的日冕结构适当隔离橡胶坝,并免费牙周袋深度超过4毫米。基于历史,所有受试者医学健康,收到任何抗生素采样前的3个月。知情同意是来自所有科目,本研究研究伦理委员会批准的东北大学研究生院牙科,日本仙台。

表1
受试者的临床特征。
2.2。抽样

橡胶坝是孤立的每一个齿,最重要的领域是与碘甘油牙科消毒剂消毒昭和(昭和Yakuhin Kako、日本)和70%乙醇。日冕访问腔是准备消毒与无菌生理盐水灌溉下高速钻。髓室时,无菌# 25 k文件(GC、日本),和运河长度决定使用一个顶点定位器(Root ZX;盛田昭夫、日本)。牙质样本(称为# 25)收集从一个顶端运河提起密集运河无菌k文件的大小。第一次抽样后,清洁和塑造的根管进行无菌k的文件(从# 25 # 55)替代灌溉3% H2O2当即和Antiformin JP牙科(日本Yakuhin有限公司,有限公司,日本),和牙质示例(称为# 55)再次收集。然后,一个intracanal药剂,氢氧化钙糊(UltraCal XS, Ultradent产品Inc .)、美国)应用到下一次约会(一个星期),和日冕访问腔和一个临时的水泥密封(磷康;贺利氏Kulzer日本,日本)。

在根管闭塞,每个牙临床状况评估,并确认没有临床症状的根尖牙周炎如上所述。牙齿被隔离橡胶坝,和最重要的领域是消毒如上所述。临时水泥被免职,intracanal药剂与无菌生理盐水冲洗的运河和k文件。立即与杜仲胶根管闭塞,封口机之前,象牙质样本(称为# 55秒)再次收集。闭塞后,牙齿被暂时填充玻璃离子交联聚合物水泥(富士第九;GC)。

2.3。由Bioplorer量化的细菌

每个文件截止的消毒钢丝钳是放置在一个无菌和endotoxin-free管(美国BD),并立即转移到实验室。每个样本都悬浮在4.0毫升无菌,endotoxin-free盐水(大冢制药有限公司、日本),涡流和分散的1分钟。细菌的量化的过程Bioplorer描述其他地方(8,9]。总之,每个1.0毫升的样品放置和固定在聚碳酸酯膜过滤(0.4μ孔隙大小)(FJ-VKF03;Koyo Sangyo、日本)的愿望,100年后添加 L渐变的80 (0.1%)(FJ-VKR05;Koyo Sangyo)提高滤过率。膜过滤器(一式三份)是100年沾 L (4′, 6′-diamidino-2-phenylindole (DAPI;1.0 g / mL) (FJ-VKR01 Koyo Sangyo)(用于生活和死亡的细菌细胞由于其疏水性和细胞膜渗透率)2分钟,然后沾着100人 L (propidium碘(π;2.5 g / mL) (FJ-VKR03 Koyo Sangyo)(只死细菌细胞由于其细胞膜离子财产和不渗透性)。随后,活细菌细胞的数量被Bioplorer监测和计算(Koyo Sangyo),自DAPI与DNA反应产生发光(460海里)的紫外线激发光(375海里),虽然它是π与DNA反应(620海里)的绿色激发光(525海里)。

2.4。细菌通过文化的量化

剩余的1.0毫升样品与聚四氟乙烯分散均质机。连续稀释10倍(0.1毫升)被传播到CDC厌氧菌的表面5%羊血琼脂(BD)板(复制)和孵化的厌氧手套箱(Hirasawa、日本)37°C为7天,如前所述[1,3,4]。在孵化后,菌落(cfu)统计。

2.5。统计分析

Wilcoxon测试是用来确定细菌计数的统计显著性由Bioplorer和文化决定的,和双向因子方差分析是用来确定数据的统计学意义的“# 25第一,”“# 55第一,”和“# 55秒。“一个 值< 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

均值±SD细菌计数(CFU)“# 25第一”的样本 和 分别由Bioplorer和文化(图1)。随着根管治疗的进展,CFU下降 (# 55第一) (由Bioplorer # 55秒)分析。同样,CFU样本的“# 55第一”和“# 55秒”分析文化相比,减少“# 25第一,“尤其是,几乎没有细菌样本中检测到“55 #第二”的文化(图1)。


图1
意味着细菌计数(cfu)样本(病例1到6)# 25第一(初的治疗),# 55第一(治疗)的第一天结束时,和# 55秒(在下次约会一天)Bioplorer和文化。

4所示。讨论

通过采用改进的厌氧手套箱系统,据报道,厌氧细菌感染的根中主要运河,从而表明感染牙根可能是厌氧的环境1- - - - - -5]。因此,临床检查的细菌感染根管的治疗过程中应认真执行,被关心厌氧细菌和厌氧条件。然而,常规细菌培养过程的根管,包括孵化在厌氧条件下,比较耗费时间和临床似乎有点不切实际。

另外,细菌感染的检测和量化牙根与分子生物学技术被应用来评估治疗的结果(10,11]。因为需要几个小时的技术检测和量化的细菌(尽管相对比文化)的方法,这些方法或许应该修改供临床使用。在目前的试点研究,新方法,开发在日本,使用荧光试剂和膜过滤器,应用于细菌的检测和量化的根管感染。方法成为可能量化样本中细菌感染牙根在大约20分钟,表明该方法用于临床细菌检查过程中当评估治疗感染根管治疗的结果。

利用Bioplorer, , 和 样品的细菌被量化的开始治疗(# 25第一),结束治疗的第一天(# 55),和下一个约会一天(# 55秒),分别。类似的趋势减少量化的细菌中可观察到的文化(图1)与之前的研究结果相一致12- - - - - -18]虽然Bioplorer被发现的数量高于文化。差异可能是由于unculturable细菌的存在以及口腔感染根管腔(19- - - - - -21]。

在所有的情况下,在目前的研究中,密闭的牙根杜仲胶和封口机进行常规临床条件评估和确认后没有根尖牙周炎的临床体征,如前所述[22]虽然数百的细菌检测到Bioplorer(和几乎没有细菌检测到文化)。目前的研究显示所有的病例预后良好闭塞后2 - 5个月完成(数据未显示),这表明少量细菌,即使他们仍然在牙根,可能影响复发的根尖周的牙周炎虽然需要进一步的研究包括长期临床观察来验证这一命题。

总之,在目前的试点研究,专注于方法论的确认关于临床样本使用的准确性和可靠性,当感染牙根,检测和量化的细菌感染牙根发现执行快速使用荧光试剂和膜过滤(Bioplorer分析)。

确认

t .佐藤,k山木和n .石田份额第一作者。本研究支持的科研补助金(22592112,22592112,22592112,23792201)从日本促进社会科学。