文摘

本研究进行评估的效果的口服乳铁蛋白(LF)和乳过氧化物酶-包含平板牙周条件(法律流程外包)。七十二慢性牙周炎患者被随机分配接受牛低频和LPO-containing平板电脑(测试组,)或控制平板电脑(对照组,)每天12周。牙周参数和龈下的菌斑的细菌的水平,人类和牛低频,观察牙龈沟液内细胞激素和内毒素(GCF)进行评估基线,1周、4周、12周。GCF水平显著差异观察牛低频测试和对照组之间在整个研究()。然而,临床和细菌学的参数值证明两组之间的比较1周- 12周。因此,口服的低频和LPO-containing平板电脑的影响可能是弱在这项研究牙周和细菌学的概要文件。

1。介绍

治疗牙周疾病的基本要素之一是消除或控制periodontopathic细菌。这是主要由机械完成策略包括口腔卫生技术和扩展/根平原(1),偶尔会在网站中耗费时间和无效的仪表的困难(2]。因此,各种本地交付抗菌药物已建议作为一个辅助方法(3,4]。然而,这些抗菌药物被证明产生一些当地的副作用(3,5),这意味着需要antiinfective产品使用更安全。

乳铁蛋白(LF)是一个80 kda铁扎铁传递蛋白家族的糖蛋白,是唾液的组成部分以及牛奶、流泪,二次颗粒的中性粒细胞(6]。如果已被证明有各种各样的生物属性,例如,抗菌、抗病毒、抗氧化活动(7,8]。它也表明,低频显示针对periodontopathic细菌的体外抗菌活性,包括Porphyromonas gingivalis,普氏菌媒介物,和Aggregatibacter actinomycetemcomitans(9- - - - - -12]。特别是的增长p . gingivalis强烈抑制即使低浓度(13.6吗米)的低频(12]。最近,我们的体外研究表明牛低频的抑制性影响生物膜的形成p . gingivalis和p .媒介物(13]。我们还表明,口服牛如果减少这些periodontopathic细菌的数量在牙周炎患者龈下的斑块(14]。

乳过氧化物酶(法律流程外包)是一种哺乳动物的血红素过氧化物酶家族的成员,是一个组件的唾液,牛奶,流泪,和其他外分泌分泌物(15]。法律流程外包催化氢peroxide-dependent氧化的硫氰酸hypothiocyanate,表现出抗菌性(15]。它也记载,口腔细菌的生长和生存能力降低法律外包thicyanate-hydrogen过氧化系统[16,17]。

最近,低频和LPO-containing平板电脑被证明展览对细菌的抑制作用可能在唾液和口腔恶臭18]。因此,我们进行了一项双盲,随机,对照试验在牙周炎患者评价低频的功效和LPO-containing平板电脑在牙周参数,和水平的龈下的菌斑细菌,和牛和人类的低频,观察牙龈沟液内细胞激素和内毒素(GCF)。

2。方法

2.1。学科和临床评估

总共有七十六人被称为清水牙科诊所都招募了2008年10月至2009年7月在这项研究中。从所有参与者签署知情同意了;的格式研究回顾和研究伦理委员会批准新泻大学牙科学院(没有。20-R23-08-08, 2008年8月25日)按照《赫尔辛基宣言》1975年和2000年修订。临床牙周评估由作者的一个训练和校准检查(如美国)那些蒙面小组作业。前的校准进行了研究与5个志愿受试者在新泻大学牙科学院。临床测量的重现性是通过计算指数,值为0.857时获得临床依恋水平(CAL)的区别毫米。所有参与者在以下牙周临床评估测量:齿数,菌斑指数(PlI) [19),牙龈指数(GI) (20.),探测深度(PD)、卡尔、菌斑控制记录(PCR) (21探索,出血(BOP) (22]。PlI,胃肠道、防喷器和PCR测定四个地点周围每一个牙齿,而PD和卡尔评估使用CP-12探针(Hu-Friedy,芝加哥,IL)在6个地点周围的每个牙齿:mesio-buccal, mid-buccal, disto-buccal, mesio-lingual mid-lingual, disto-lingual。测量PD记录精确到毫米,和每一个观测接近0.5毫米圆形较低的整数。每个临床参数的平均值为每个单独的用于统计分析。医疗和牙科记录以及所有参与者的吸烟情况也检查标准问卷。两个受试者被排除在本研究根据以下排除标准:(1)的存在系统性疾病(如糖尿病、肾、肝、或肺部疾病),药物,和怀孕,(2)在不到20牙齿,显示对牛奶的过敏反应(3),(4)抗生素治疗前3个月内,(5)牙周治疗前6个月内,和当前吸烟者(6)。结果,七十四例(33男性和41岁女性,年龄32 - 73年)与慢性牙周炎被选为这个研究。

2.2。研究平板电脑

测试平板电脑(森永奶粉产业有限公司,东京,日本)含有11.1%(重量/体重)低频,0.2%的法律流程外包,2.7%葡萄糖氧化酶,3.0%葡萄糖、柠檬酸三钠的脱水3.5%,柠檬酸1.6%,30.0%的赤藓糖醇,7.5%木糖醇,麦芽糖醇36.0%,0.3%的味道,l-menthol 0.2%, 2.0%蔗糖脂肪酸酯,2.0%甘油脂肪酸酯。森永的组成控制平板电脑(牛奶工业有限公司,有限公司,东京,日本)麦芽糖醇83.9%,淀粉11.1%,0.5%着色材料,0.3%的味道,l-menthol 0.2%, 2.0%蔗糖脂肪酸酯,2.0%甘油脂肪酸酯。低频(森永奶粉产业有限公司,东京,日本)和法律流程外包(Biopole, Gembloux,比利时)纯化牛牛奶,而葡萄糖氧化酶(Sumizyme PGO, Shin-Nihon化工、爱知、日本)是源于青霉菌chrysogenum。这些测试和控制平板电脑是圆形的直径12毫米和6毫米厚度和重量也相同(900毫克),味道,质地,和外观。

2.3。研究协议

本研究进行了双盲,随机对照设计在12周(12 W)。所有人被随机分配到口服一片含有牛低频(100.0毫克/选项卡)和牛法律流程外包(1.8毫克/选项卡)在测试组(在对照组()或一个控制平板电脑每天12 W),三次。一个独立的研究协调员(森永奶粉产业有限公司,东京,日本)生成一个随机分配序列使用电脑生成的随机代码和标记包包含测试或控制平板电脑主题数字。分配序列隐藏直到干预完成。12周的定量测试或控制平板电脑为分布式基线。所有科目都指向一片在口腔主餐后5分钟,让它溶解。此外,他们被指示不要改变他们的口腔卫生方案,包含低频不采取任何食品和饮料,而不是使用漱口水和牙膏含有低频和法律流程外包在整个研究期间。无论是专业的预防还是刷牙之前,实验期间执行指令。牙周临床参数和唾液样本,龈下的斑块,观察牙龈沟液内细胞激素和(GCF)获得所有受试者基线,1 W, 4 W, 12 W。考试那天,所有的参与者进行了临床评估和采样相同的预约时间(10点到11点,下午15:30 14:30,或19:00至20:00),两个或三个小时后主餐后刷牙,平板电脑的摄入量。一般情况是由面试评估在每一次考试。 Teeth, oral mucosa, and tongue were also examined visually. After the baseline examination, one subject in the control group did not undergo any examinations at 1 to 12 W, and another subject in the test group was lost at 12 W. Finally, 72 subjects (37 in the test group and 35 in the control group) were subjected to the clinical, bacteriological, and biochemical analysis. The flowchart of all participants through each stage of the clinical trial is shown in Figure1。

2.4。样品收集

临床测量后,唾液,龈下的牙菌斑和GCF样本。全唾液收集到无菌15毫升塑料管子石蜡咀嚼刺激5分钟(23]。能整除的是由唾液样本和存储°C到使用。采样地点的选定患病的两颗牙的PD 4到9毫米/主题与无菌棉花卷孤立。与无菌Supragingival斑块被绿皮南瓜,没有动人的边际牙龈。龈下的菌斑样本然后被插入两个无菌纸# 40点(加拿大本拿比DiaDent集团(国际)连续进入牙周袋10秒钟。本文分被置于无菌3.6毫升塑料管道和存储°C到提取基因组DNA。完成后5分钟后龈下的斑块抽样,GCF收集来自同一网站与滤纸条(Periopaper Proflow合并,鬼哭神嚎,纽约)(24]。条被放在口袋里,直到感觉到轻微的抵抗,并固定,持续30秒。每一条漩涡大力在1毫升的0.05米Tris-HCl缓冲区(pH值7.5)包含0.1%的牛血清白蛋白和0.1%的叠氮化钠和保持在4°C。GCF样本然后离心机g 5分钟,上层清液储存在−80°C到化验。

2.5。微生物学检查

的定量分析p . gingivalis和总细菌是入侵者+方法(25),它结合了聚合酶链反应扩增和入侵者检测。总之,从存储中提取细菌的DNA样本的唾液和龈下的斑使用DNA血液迷你包(QIAamp、试剂盒、希尔登,德国)。的引物p . gingivalis是基于16 s rrna序列的一个区域如下:正向引物(5′-GCGCTCAACGTTCAGCCT-3′)反向引物(5′-CACGAATTCCGCCTGCC-3′)。主探测器和入侵者益生元是基于序列在放大区域如下:主要调查(5′-CGCGCCGAGGGGCAGTTTCAACGGC-3′)和入侵者益生元(5′-GCCGCCGCTGAACTCAAGCCCT-3′)。同样,引物、探针和益生元的总细菌设计如下:正向引物(5′-GGATTCGCTAGTAATCG-3′)和反向引物(5′-TACCTTGTTACGACTT-3′),主要调查(5′-CGCGCCGAGGCCGGGAACGTATTCACC-3′)和入侵者益生元(5′-TGACGGGCGGTGTGTACAAGGCA-3′),分别。入侵者+ 15 -反应进行l混合物包含特定的引物,50M deoxynucleotide三磷酸(d-NTP), 700 nM主要调查,70 nM入侵者益生元,2.5 U Taq (AmpliTaq Stoffel片段,应用生物系统公司,促进城市,CA),和Cleavase XI入侵者核心试剂盒(基因组DNA、行波管、麦迪逊、WI)。反应混合物在50°C 2分钟,预热和两步聚合酶链反应进行了35周期为1秒(95°C和63°C 1分钟)。carboxyfluorescein的荧光值测量的波长485 nm(激励)和530海里(排放)。检测确定的极限稀释的细菌DNA,和交叉点上的标准曲线是由健康点的方法。细菌的数量计算从标准曲线和表达为日志₁₀拷贝/毫升和日志₁₀拷贝/网站的唾液和龈下的斑块样本,分别。作为细菌计数的检测极限是3日志₁₀(= 1000)/毫升或网站,数的最小值被表示为1000样本的限制。根据检测极限,唾液和龈下的斑块的数量(百分比)样品在基线p . gingivalis检测证明16(43.2%)和测试组26例(35.1%),和14(40.0%),对照组25例(35.7%),分别为。的定量分析p . gingivalis和总细菌进行了三次在每个样品确认结果的再现性。

2.6。测量低频和内毒素水平

牛的浓度测定唾液和GCF中低频一个夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和antibovine低频多克隆抗体和辣根peroxide-conjugated antibovine低频抗体(Bethyl实验室,Inc .,蒙哥马利,TX)。水平的人类如果唾液和GCF样本来衡量一个夹心ELISA测定反人类的低频多克隆抗体(Dakopatts、斯特鲁普、丹麦)。微量滴定板在波长405 nm读两个低频水平自动标(MTP-32、电晕电气有限公司,日立、日本)。牛的浓度和人类如果被表示为克/毫升唾液样本和ng /网站GCF样本,分别。牛低频测量的灵敏度是10 ng / ml和人类低频测量是50 ng / ml。

唾液和GCF的内毒素水平测量的鲎变形细胞溶解产物测定使用商用设备(Endospecy ES-24S集,Seikagaku Biobusiness公司,东京,日本),根据制造商的指示。所有的试剂,吸管技巧和微量滴定板热原质是免费的。coloriometric变化反映内毒素水平测量的波长540 nm使用自动标(MTP-32、电晕电气有限公司,日立、日本)。表示为内毒素浓度,相当于USP标准单元和欧盟(EU) /毫升/网站的唾液和GCF样本,分别。检测下限为0.002欧盟/毫升。测量牛和人类的低频和内毒素在每个样本进行三次确认结果的再现性。

2.7。统计分析

事后样本量估计/功率计算测试数量的基础上p . gingivalis在龈下的斑块显示超过26患者两组将满足统计力量,以下假设:α水平的5%,预期效果大小的0.81,0.8统计功率、双尾假说。测试和对照组之间的差异在人口和临床参数值被Mann-Whitney评估测试,并由卡方或确切概率法对分类变量,而细菌计数和内毒素水平和低频被学生的评估t以及。分析个人的单位人口参数(年龄、性别、吸烟情况、牙齿的数量),PCR,总细菌的数量p . gingivalis在唾液,唾液牛和人类低频和内毒素水平,而网站PlI,胃肠道,防喷器,PD,卡尔,总细菌的数量p . gingivalis在龈下的斑块,GCF的牛和人类低频和内毒素水平。所有的结果根据意向处理分析原则。统计学意义是。

3所示。结果

在基线,我们没有发现显著差异在任何人口和临床牙周参数值之间的测试和控制组织(表1和2)。牛在唾液和GCF低频水平测试组明显高于对照组()(数据2(一个)和2 (b))。然而,没有观察到显著差异在任何临床牙周参数1 W - 12 W两组之间(表2)。人类唾液和GCF的低频水平也比较两组之间(数字2 (c)和2 (d))。

总细菌和的数量p . gingivalis在唾液和龈下的斑块两组之间没有明显不同(数字3(一个)来3 (d)),除了一个重要的组间差异总唾液中细菌的数量在基线()。内毒素水平也被证明是比较两组之间在12 W-observation时期(数字3 (e)和3 (f))。

一般情况是通过采访对象在每次考试。没有不良事件观察到所有的参与者在研究期间。一个主题在对照组被撤回1 W,测试组的另一个主题是丢失在12 W。这些主题也证实撤军之前表现出不一般的症状。此外,异常影响牙齿、齿龈、口腔黏膜、舌上没有观察到视觉检查。

4所示。讨论

在这个临床试验,共有七十二名参与者(37在测试组和对照组35)受到了临床,细菌和生化分析。根据报道的数量的变化p . gingivalis在测试和控制组织(龈下的斑块(平均数±标准差):和(日志₁₀/ paperpoint]在我们之前的研究14),受试者每组所需的数量计算因果样本量估计/功率计算测试,使用以下假设:α水平的5%,和0.81的预期效果的大小,0.8统计功率、双尾假说。观察到超过26患者在两组中的每一个,当随机分配,满足统计力量。

这项研究的结果没能证明测试片的口服含有牛低频和法律事务外包可有效改善临床和细菌学的参数值,尽管测试组显示显著减少PlI得分1 W的变化,与对照组相比(数据没有显示)。这些结果不同于其他研究的结果表明牛的体外antibiofilm活动低频(13),和抗炎效果的低频和法律流程外包26,27]。这些观察结果可能部分归因于不够集中的低频的抗菌活性。牛的GCF浓度低频测试组的计算是1.8到3.2g / ml,的基础上,假设2l (GCF是获得24]。这些低频水平显示浓度下8 - 31所示g / ml,牛的antibiofilm活动如果被证明是有效的p . gingivalis(13]。因此,建议口服含有牛低频的平板电脑(100.0毫克/选项卡)和牛法律流程外包(1.8毫克/选项卡)在本研究中会明显影响临床牙周状况和唾液和龈下的牙菌斑的细菌的数量。最近的研究证明,相同的牛低频成分和法律事务外包给一些periodontopathic细菌数量影响不大,在唾液定量聚合酶链反应,这是按照我们的结果,但终端限制片段长度多态性(T-RFLP)检测到一个片段的数量显著降低复制在测试组相比,对照组(18]。因此,综合分析T-RFLP菌斑的细菌在未来将会是很有趣的研究。

测试和对照组显示弱的牙周炎症水平下降的趋势(GI和防喷器)和破坏(PD和卡尔)和总数量的细菌和p . gingivalis在龈下的斑块。这些观察结果可能部分解释的抗菌活性蔗糖脂肪酸酯和甘油(28,29日),作为润滑剂添加测试和控制平板电脑。另一个可能的解释与注意力偏见(霍桑效应)发生在本研究中的患者(30.,31日]。我们的研究结果表明,PCR分数和总细菌数在两组倾向于减少,尽管实验协议不包括任何口腔卫生指导之前或在基线。记录,许多因素包括注意力偏见导致大规模安慰剂效应、随机、对照试验(31日]。此外,最近的一项研究表明,口服的平板电脑本身可能刺激唾液分泌,可能影响牙周条件(32]。

除了牛低频和法律事务外包,还有不同的内容之间的测试和控制平板电脑。葡萄糖氧化酶和葡萄糖被添加在测试平板电脑,导致生成的过氧化氢所必需的法律流程外包系统[33]。同样,柠檬酸三钠的脱水和柠檬酸作为缓冲盐测试平板电脑使溶剂略酸,导致酶活性的法律流程外包的最优条件。测试平板电脑还含有木糖醇、赤藓糖醇等糖醇。据报道这些糖醇表现出潜在的抑制作用在体外生物膜的形成34- - - - - -36),暗示一些对牙周状况的影响。然而,这些糖醇的浓度用于测试平板电脑远低于这些报道研究[29日,37,38]。因此,可想而知,上述组件的平板电脑不会影响临床和细菌学的概要文件。

我们执行的个人和网站分析在这项研究中,为更好地理解的功效测试平板电脑在牙周参数,龈下的菌斑细菌,和牛和人类如果观察牙龈沟液内细胞激素和内毒素(GCF)牙周疾病的网站。然而,网站分析在个人网站或牙选择,这可能是影响病人的个人特征。因此,它可能是必要的,当解释我们的结果与谨慎。

低频和法律流程外包是唾液的组成部分,从牛牛奶提纯测试平板电脑。其他组件测试的平板电脑也在安全健康。所有这些作品都被允许被包括在商用食品和饮料在日本。我们的研究结果表明,口服的平板电脑显示没有异常一般不良事件和口腔疾病。因此,预计牛低频和LPO-containing平板电脑将使用更安全,而非商用antiinfective产品。

5。结论

临床研究的结果表明,口服的低频的效果和LPO-containing平板电脑可能会缺乏牙周和细菌学的概要文件。

确认

作者感谢Hirotsugu Oda,森永奶粉产业有限公司,有限公司,和Nozomi高桥,清水牙科诊所,其援助的生化和临床评估。这项工作是财务支持的森永奶粉产业有限公司,有限公司,座间,日本。Drs。若林史江、山和储备是森永的全职员工。没有其他的作者声明任何与本研究有关的利益冲突。