脂质体系统作为抗病毒剂伊维菌素的人们

文摘

RNA病毒感染可导致严重发烧等疾病的发病与出血、multiorgan失败,和死亡率。的出现和再度出现RNA病毒继续构成显著的公共健康威胁全球发病率越来越高的特别注意黄病毒、登革热、西尼罗河病毒和黄热病病毒。开发新,因此有效的抗病毒药物是急需的。伊维菌素,一个已知antihelminthic药物,已经显示出强有力的影响在体外在黄病毒解旋酶,与电子商务₅₀值为黄热病和submicromolar EC subnanomolar范围₅₀登革热、日本脑炎和蜱传脑炎病毒。然而伊维菌素是阻碍其应用的药代动力学问题(溶解度小,高细胞毒性)。克服这些问题我们工程不同成分的脂质体作为伊维菌素运营商描述和测试几个细胞系细胞毒性。工程脂质体的细胞毒性低于伊维菌素单独和他们有显著提高所有登革热污点抗病毒活性的测试(1,2,S221)。在当前的研究中伊维菌素被证实是一种有效的潜在的抗病毒药物和脂质体作为药物载体,显示调节药物的活动。一起结果代表一个有前途的起点为未来改进的伊维菌素抗病毒和交付。

1。介绍

几个新兴RNA病毒已过去几年内国际流行的原因。四种登革热病毒(DENV)血清型有显著扩大了近年来地理分布。数十亿人面临风险,超过5000万例,和12500 - 25000人死亡,每年DENV被认为是一个新兴的病原体在越来越多的国家1]。特别是,存在四个DENV (DENV 1, 2, 3, 4)血清型复杂疫苗的设计,因为不完整的保护一个血清型可能影响疾病的结果一旦感染了不同的血清型,通过过程称为抗体介入疾病增强[2]。

因为没有具体的抗病毒治疗可用于黄病毒,目前迫切需要抗病毒药物。

黄病毒包膜病毒(3)与长串积极意义RNA基因组约11 kbs。有超过80种不同的黄病毒(4),其中大部分都是重要的人类病原体,如黄热病病毒(YFV),西尼罗河病毒(西尼罗河病毒)和其澳大利亚Kunjin病毒变体(KUNV),乙型脑炎病毒(JEV)、蜱传脑炎病毒(TBEV),圣路易斯脑炎病毒(SLEV)和DENV。c端域的非结构蛋白3 (NS3)一个ATP-dependent解旋酶的活动,保持病毒复制,因此是一个很好的目标为设计病毒复制的选择性抑制剂治疗(5]。

Mastrangelo et al。6)确定了广泛使用antihelminthic药物伊维菌素作为一个分子能够抑制NS3解旋酶活动的几个黄病毒在体外在submicromolar浓度。最重要的是,伊维菌素是一种选择性抑制剂YFV[复制的6),尽管效率会降低,其他黄病毒如DENV JEV, TBEV。伊维菌素是目前临床试验在人类,DENV治疗,在泰国Mahidol大学(7]。

伊维菌素是22日的普通名称23-dihydroavermectin B1, avermectin家庭的半合成衍生物。它是一种有效的endo - ectoparasitic剂与广泛的活动;其临床使用大大公认的科学的最高奖项,被2015年诺贝尔医学和生理学奖授予威廉·c·坎贝尔和SatoshiŌmura发现avermectin [8]。

的药代动力学行为avermectin取决于给药途径,制定使用,动物物种,主机的病理生理状态。是建立皮下注射伊维菌素是最有效的途径管理药物生物利用度的羊、牛、羊相比,口服和局部管理(9]。

制药技术已应用于开发不同的药物制剂和交付系统优化伊维菌素的药理的可用性。最有前途的方法改善配方在于创新交付系统使用运营商定义的物理化学性质,如脂质体、微乳液、聚合物胶束。

尽管伊维菌素的功效已经建立在人类对一些寄生虫疾病,这种化合物的抗病毒特性尚未开发,主要是由于其复杂的化学结构,无法轻易化学改性。缺乏适当的配方可以提高细胞内化的伊维菌素减少的不利影响药物(10]。

根据这些考虑,当前论文报告工程的发展为可能的临床使用伊维菌素脂质体配方。特别是,这项研究描述了生产与伊维菌素和脂质体的特征之后,后续的测试在不同的细胞系抗病毒活性和细胞毒性。

我们的结果表明,伊维菌素,通过脂质体时,降低了细胞毒性,与此同时,抑制与EC DENV复制₅₀值仅在微摩尔的范围提高伊维菌素的性能。

2。实验部分

2.1。化学物质

2.1.1。脂质体的制备

从大豆高纯磷脂酰胆碱(PC) 90% (Phospholipon类脂90克、德国);德国胆固醇97%(丙烯酰胺);dimethyldioactdecylammonium溴化(DDAB)(英国Sigma-Aldrich);dimethyldioctadecylammonium氯(DDAC)(英国Sigma-Aldrich);和伊维菌素(英国Sigma-Aldrich)。截留效率的测定进行了琼脂糖4 b(法玛西亚,乌普萨拉,瑞典)和等张Palitzsch缓冲区(pH值7.44)如前所述11]。使用薄层色谱分析、碘(丙烯酰胺,德国)。

2.1.2。细胞毒性测试

从Sigma-Aldrich 2′-c-Methylcytidine (2-cmc),英国。所有其他的试剂和溶剂从Sigma-Aldrich,英国,分析级。

2.2。脂质体的制备和表征

脂质体是由一个小修改的乙醇注入过程(11]。通常,伊维菌素在乙醇可溶性(最终浓度50毫米)和不同的卷混合ethanolic解决PC 30 - 180毫米,加上胆固醇(10毫米)或DDAB(5 - 10毫米),为了获得最终所需的伊维菌素浓度。500年μL的ethanolic解决方案由一个注射器注射泵(500μL / min)到4.5毫升的重蒸馏的水在磁搅拌(300 rpm)。

脂质体的大小分析光子相关光谱(pc),低温透射电子显微镜(cryo-TEM)分析,和封装效率进行测定(如前所述)(11]。

2.3。细胞和病毒

所有的细胞系都种植在37°C在湿润的气氛中5%的有限公司₂加上100年的中等U青霉素/毫升和100年μ克/毫升链霉素。

非洲绿猴肾上皮细胞生长在118(维罗- 118)IMDM(生命技术)补充10%或1%胎牛血清的边后卫。小鼠单核巨噬细胞细胞进展期(原始264.7)是生长在DMEM(生命技术)补充10%或2%的边后卫,2毫米谷酰胺,消息灵通的20毫米,0.075 g / L碳酸氢钠,丙酮酸钠1毫米。非洲绿猴肾上皮细胞F (Vero-F)和婴儿仓鼠肾(博鸿泰)细胞在DMEM培养(生命技术)含有10%或2%的边后卫。肝癌细胞(Huh-7)生长在DMEM(生命技术)含10%胎牛血清(FCS)。

从早期的登革热感染登革病毒菌株获得的和结果(伊甸园)在新加坡学习12)使用以下基因库加入数字:DENV 1 (EU081230)和DENV 2 (EU081177) [13,14]。鼠标采用应变Sujan博士提供的DENV 2 S221请Shresta (La Jolla过敏和免疫学研究所,CA)。所有的病毒株都生长在C6/36细胞。病毒股票被空斑实验效价和储存在−80°C。

2.4。细胞毒性决定

2.4.1。亚甲蓝试验

细胞被播种(2×10⁴在96 -孔板细胞/)没有(控制)或伊维菌素的存在(或2-cmc作为参考抗病毒化合物)在不同浓度(0.2 - -25.0μ米)。经过4天的细胞培养在37°C(维罗35°C - 118),每个媒介了。200年μL 70%的乙醇添加到所有井和隔夜孵化后删除。50μL(过滤1% (w / v)亚甲蓝在PBS被添加到每个。1 h多余染料后删除。细胞层,仍然与亚甲蓝染色,在显微镜下检查。井进行分析给出一个分数(高价值:白色;低价值:蓝色)。

2.4.2。MTS试验

细胞毒性测定使用MTS [3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 5 (3-carboxymethoxyphenyl) 2 - (4-sulfophenyl) 2 h-tetrazolium)测定。这一目标,细胞被播种(5×10⁴在96 -孔板细胞/)没有(控制)或在伊维菌素在不同浓度(0.2 - -25.0μ米)。经过4天的细胞培养在37°C MTS /吩嗪methosulphate (PMS)股票的解决方案(2毫克/毫升MTS (Promega)和46个g / mL PMS (Sigma-Aldrich)在PBS pH值6.0 - -6.5)在MEM稀释1/20(技术)。每个好,75μL MTS / PMS的解决方案是添加和光学密度(OD)在498 nm 2 h后阅读。细胞生存能力的百分比计算(OD_治疗/ OD_CC)100年,OD_CC是未经处理的细胞无毒性的OD和OD吗_治疗是未感染的细胞治疗化合物。

2.4.3。CC₅₀计算

半最大细胞毒性浓度(CC₅₀)被定义为可行的细胞的化合物浓度减少50%,这是基于非线性回归计算剂量反应s形曲线画在GraphPad棱镜。

2.5。抗病毒试验在人类Huh-7 DENV病毒感染细胞

10⁵细胞被感染DENV 1 DENV 2或DENV 2鼠标改编S221应变0.3莫伊,在伊维菌素单独或伊维菌素脂质体配方中包含1 h。接种物被抛弃,取而代之的是维护媒体包含相同的化合物和保持48 h。2天后,细胞形态学观察显微镜下之前收集上层清液用于定量测定血小板。病毒效价没有药物治疗通常达到超过10⁵空斑形成单位/毫升,代表标准的感染水平Huh-7细胞(15]。

2.5.1。电子商务₅₀计算

最大有效浓度(EC的一半₅₀)被定义为化合物的浓度,降低了病毒效果50%,它是基于非线性回归计算剂量反应s形曲线画在GraphPad棱镜。

3所示。结果与讨论

3.1。脂质体的制备和表征

脂质体的制备是通过注射乙醇由于这种方法允许单步形成脂质体的尺寸分布窄,没有退化或脂质氧化或药物。我们使用了“控制”的ethanolic解脂质注入方法是注入水阶段通过注射泵控制利率,允许精确的乙醇在水中扩散。乙醇与水的混合的确是关键的一步导致脂质分子自组装,推动形成脂质体(11]。

为了优化脂质体配方伊维菌素(图1(一)),我们的角色进行了探讨不同实验参数对脂质体的特征,如(一)脂质成分,(b)类型的阳离子表面活性剂,(c)电脑内容,(d)伊维菌素含量。

表1报告的完整组合产生的脂质体与一个独特的识别代码为每个配方。

脂质成分和药物浓度的影响也被研究。图2总结了光子相关光谱(PC)的测量结果中性脂质组成的脂质体(PC /胆固醇(a))和阳离子脂质(PC / DDAB (b))。不同数量的伊维菌素的影响(从0.1到1.0毫米)脂质体的维度也显示在图2。

结果清楚地表明,阳离子脂质体小于相应的中性配方;例如,包含1.0毫米伊维菌素具有阳离子脂质体身高是72纳米,而中性的身高是193海里。这种效果是由于分子或物理交互结合DDAB引起的膜流动性的增加。事实上阳离子脂质可以促进静电相互作用的带电头组。这些相互作用可以促进大小减少减少脂质双分子层的曲率半径由于phospholipid-cationic头组联系。

由于脂质体的性能,如药物释放或细胞吸收,由形态特征的影响,准确的微观特征是强制性的任何生物之前评估。电脑测量结果相比cryo-TEM提供的分析。这种技术使脂质体体系结构的成像评价脂质体的形态与估计的大小。cryo-TEM图片报道在图3证明两个空((一),(c))和ivermectin-loaded脂质体((b)、(d)),“控制”获得的乙醇注入,球形。数量有限的oligolamellar囊泡的存在中性脂质体样本(通常是2 - 4片晶)是显而易见的((a)和(b))。显微图像证实,阳离子脂质体一般小于中性的和几乎完全由单膜囊泡直径大小小于100纳米(同意电脑分析)。

作为进一步的表征,PC内容对脂质体的影响维度ivermectin-loaded脂质体被认为是产生。图4表明,增加个人电脑从3毫米到9毫米引起的增长身高是中性脂质体从65纳米到193纳米,阳离子脂质体,从30到72 nm。

伊维菌素脂质体的装载效率是由尺寸排阻色谱法。作为一个例子,ivermectin-loaded洗脱剖面的脂质体(# PC9-Ch1-ive1.0),获得琼脂糖4 b层析后,如图5。洗脱图显示了一个好看的峰值。高峰(实心箭头所示)包含ivermectin-loaded脂质体;没有免费检测伊维菌素峰,表明几乎所有的伊维菌素与脂质体。伊维菌素的存在在脂质体被记录了紫外光谱的峰值对应的分数在253海里。

因此,伊维菌素加载收益率估计通过比较孤立的吸收在253纳米脂质体与伊维菌素标准的解决方案。伊维菌素的产量加载对脂质体准备3毫米和9毫米电脑几乎是高于98%(数据没有显示)。这些结果表明,高脂质体加载功效达到伊维菌素脂质体由“控制”时乙醇注入法。

3.2。伊维菌素和脂质体的细胞毒性

伊维菌素的细胞毒性测试,不同细胞系和几个浓度的药物治疗(0.2 -25μ米)。伊维菌素对博鸿泰和原始细胞显示了CC₅₀< 1.5μ(博鸿泰CC₅₀= 1.5μ米,生CC₅₀= 0.8μM;表2)和维罗- 118,Vero-F, Huh-7更高(维罗- 118 CC₅₀= 5.7μ米,Vero-F CC₅₀= 23.6μM, Huh-7 CC₅₀= 7.3μ米,表2)(图6(一))。2-cmc相比,已知病毒聚合酶抑制剂(16)(图1 (b)伊维菌素是细胞毒性(图10倍6 (b);表2)。

为了验证伊维菌素由脂质体的细胞毒性,我们测试了# PC9-Ch1-ive1.0, # PC9-Br1-ive1.0, # PC9-Br0.5-ive1.0, # PC18-Br1-ive1.0,和相应的空脂质体(# PC9-Ch1, # PC9-Br1, # PC9-Br0.5 # PC18-Br1;表1Vero-F(图)7维罗- 118(图)8),博鸿泰(图9),和生(图10)细胞系。伊维菌素脂质体显示减少细胞毒性相比自由伊维菌素细胞系。最高的效果是维罗与CC - 118所示₅₀减少5倍(从5.7μ超过25.0米μ米)。在博鸿泰和原始细胞# PC9-Ch1, # PC9-Br1,和# PC9-Br0.5减少了伊维菌素细胞毒性3倍(从1.5μ米至4.3μ从0.8米,μ米至2.2μM,分别地。),# PC18-Br1-ive1.0完全noncytotoxic测试数量(表内2)。# PC3-Br1-ive0.1, # PC3-Ch1-ive0.1、# PC3-Cl1-ive0.1 # PC9-Ch1-ive1.0, # PC9-Br1-ive1.0,和相应的空Huh-7脂质体进行了测试。# PC3-Br1-ive0.1没有细胞毒性测试浓度范围(从0.12μ米至10.0μ米)而细胞毒性约10.0μM是观察别人48 h后的孵化。

总之所有的工程脂质体仅比伊维菌素的毒性更小而空白脂质体对细胞没有影响细胞毒性。

降低细胞毒性是几种可能的结果因素还不完全清楚。最重要的是使用水溶剂溶解的脂质体代替有机溶剂的伊维菌素溶液化的必要条件。

3.3。伊维菌素和脂质体DENV抗病毒活性

伊维菌素的抗病毒活性,空白脂质体,伊维菌素脂质体是化验在体外在不同的病毒株,即DENV 1 (EU081230) DENV 2 (EU081177), mouse-adapted应变DENV 2 S221 [13,14]。登革热病毒引起系统性感染以来,特别是肝脏是涉及人类的在体外测试、Huh-7细胞被代表的一个标准细胞系,通常用于登革热感染的细胞试验。

Bassissi et al。17]表明,微小的差异制定可以改变等离子体动力学和伊维菌素的功效在兔子,皮下注射0.3毫克/公斤的ivomec(商业制定伊维菌素)或伊维菌素脂质体。为了测试这一发现,在体外抗病毒活性的免费伊维菌素与不同的脂质体配方包含药物。抗病毒试验确定了通过添加病毒和伊维菌素、伊维菌素脂质体在同一时间。尤其重要的是要强调的常规设置常用抗病毒化验确实cotreatment(即。要测试,添加复合与病毒);此后药物/病毒培养液移除,进一步增加化合物为48 h孵化。

通过这个实验方法,信息的抗病毒活性化合物(包括直接和间接作用)将获得。不同的顺序将提供初步的见解以及化合物是否充当病毒进入抑制剂(预处理)或病毒复制抑制剂(后处理)。由于伊维菌素已被证明作用于病毒解旋酶NS3 [6)和/或NS5-importinα/β(18),是理想的测试不同配方的伊维菌素cotreatment化验如本文所述。

尤其是政府的伊维菌素脂质体配方产生更高和更快的吸收。这一发现表明,脂质体的使用可以改善在活的有机体内伊维菌素的功效[17]。数据11和12报告的活性脂质体制剂对DENV 1, 2, S221 Huh-7细胞系。

所有三个脂质体制剂对DENV测试1 (# PC3-Ch1-ive0.1, # PC3-Cl1-ive0.1 # PC3-Br1-ive0.1(数字(11日),11 (b),11 (c)分别地,EC)减少₅₀相比,伊维菌素(图11 (d)),最好的结果观察# PC3-Br1-ive0.1,导致抗病毒效果(从3.7的相当大的增加μ米至1.3μM;图11 (c))。的脂质体制剂对DENV 2似乎更有效。结果(普通线,数字11 (e),11 (f),11 (g))建议增加脂质体打包伊维菌素的功效。# PC3-Ch1-ive0.1(图11 (g)减少EC)导致~ 2倍₅₀(从2.6μ米至1.3μ米,表3)相比,伊维菌素(图11 (h)),而# PC3-Br1-ive0.1和# PC3-Cl1-ive0.1(数字11 (e)和11 (f)从2.6)显示伟大的改善功效μ米至0.3μ米(EC减少5倍₅₀)。较低的细胞毒性(> 10.0μ(0.3米)和重要的抗病毒活动μ米),# PC3-Br1-ive0.1展示了未来成为一名优秀的候选人在活的有机体内实验。图11也显示了脂质体制备的结果S221鼠标调整应变(虚线)。在这种情况下,脂质体相比没有显著改善自由伊维菌素。各自的空白脂质体对细胞系没有影响。

为了分析更高浓度的伊维菌素(1.0毫米),我们测试了脂质体# PC9-Ch1-ive1.0和# PC9-Br1-ive1.0和各自空脂质体(里面没有伊维菌素)(图12)Huh-7感染DENV 2。空白脂质体对病毒复制,除了没有任何影响磷脂酰胆碱浓度> 300μm .感染细胞的剂量反应曲线用伊维菌素脂质体治疗转移到左边对空白脂质体,确认伊维菌素脂质体能够减少斑块数量,因此活跃的病毒。包含1毫米的脂质体伊维菌素EC稍微有所下降₅₀相比免费的伊维菌素(表3在EC),但没有显著差异₅₀对前面的测试脂质体(PC3-Br1-ive0.1 #, PC3-Cl1-ive0.1 #和# PC3-Ch1-ive0.1)包含1.0毫米伊维菌素。

总之我们暂时属性抗病毒活性的增加(EC₅₀DENV 2)从2.6μ米至0.3μ米,包含伊维菌素脂质体可以与细胞膜融合,促进细胞内药物的吸收。这个假说是由带正电的脂质体(即这一事实。,those containing the cationic surfactants DDAC and DDAB) such as #PC9-Cl1-ive0.1 and #PC9-Br1-ive0.1 are the formulations displaying the highest antiviral activity (EC₅₀0.3和0.6μ米,职责)。

4所示。结论

我们表明,伊维菌素,通过脂质体时,减少细胞毒性最多5次。他们可以有效地抑制与EC DENV复制₅₀值仅在相同范围的伊维菌素,甚至在几个配方改善活动。伊维菌素在水溶液中溶解的可能性由于使用脂质体作为药物载体是一种新的一步其药物动力学问题的解决方案,特别是它的高细胞毒性。这也可以放大伊维菌素的光谱的活动。

伊维菌素的重要改进活动加载与离子成分脂质体创建了一个有前途的未来发展的起点这些人们一天可能是可能的解决方案缺乏对黄病毒的药物。

缩写

DENV 1 - 4:	登革病毒的类型1 - 4
YF:	黄热病
西尼罗河病毒:	西尼罗河病毒
Cryo-TEM:	低温透射电子显微镜
电脑:	光子相关光谱法
电子商务50:	一半的最大有效浓度
CC50:	一半的最大细胞毒性浓度
薄层色谱:	薄层色谱法
的边后卫:	胎牛血清
FCS:	胎牛血清
我:	感染复数
:	最大血清浓度的药物达到指定的舱之后身体的药物管理。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是支持的FP7健康- 2010银合作项目(没有之下。260644)和60°制药,LLC (CRADA10262012)。作者感谢博士Sujan Shresta提供DENV 2 S221站。要感谢约翰Neyts教授和博士德克Jochmans (KU鲁汶,鲁汶,比利时)酒店在病毒学实验室和宝贵的建议。要感谢Isha Raj博士论文的语言编辑和批判性阅读。

引用

1. n Vasilakis s c·韦弗,“人类的进化历史和登革热出现,”病毒研究进展卷,72年,页1 - 76,2008。视图:谷歌学术搜索
2. m·g·古兹曼和g . Kouri”登革出血热积分假说:确认观察,1987 - 2007,”事务皇家热带医学和卫生学会的,卷102,不。6,522 - 523年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. r·j·库恩w·张,m·g·罗斯曼et al。“登革热病毒的结构:对黄病毒组织,成熟,和融合,“细胞,卷108,不。5,717 - 725年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. b . d . Lindenbach和c . m .大米,“黄病毒分子生物学,”病毒研究进展卷,59岁,23 - 61,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. m . Bollati k·阿尔瓦雷斯,r . Assenberg et al .,”黄病毒结构和功能NS-proteins:药物设计的观点,“抗病毒研究,卷87,不。2、125 - 148年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. e . Mastrangelo m . Pezzullo t . De burghgraeve et al .,”伊维菌素是一种黄病毒复制的有效抑制剂专门针对NS3解旋酶活动:新老药的前景,”抗菌化疗杂志》,卷67,不。8,1884 - 1894年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. 2015年,https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02045069。
8. 2015年10月,http://www.nobelprize.org。
9. m . Alvinerie e . Escudero肯尼迪。经,c . Eeckhoutte和p . Galtier该药口服和皮下后的药物动力学政府绵羊,”兽医研究卷,29号2、113 - 118年,1998页。视图:谷歌学术搜索
10. a·冈萨雷斯铁角砾岩,a . m .萨哈冈普列托m . j . Diez Liebana, n . f·马丁内斯·m·塞拉维加和j·j·加西亚Vieitez,”伊维菌素的药物动力学和交互人类一个本文”aap杂志,10卷,不。1,42-46,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. e . Mastrangelo玛兹泰利,j . Fabbri et al .,“交付苏拉明通过脂质体系统抗病毒剂,”ChemMedChem,9卷,不。5,933 - 939年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. j·g·h·低,e。Ooi t Tolfvenstam et al .,“早期登革热感染和结果(伊甸园)——研究设计初步研究发现,“医学科学院新加坡上,35卷,不。11日,第789 - 783页,2006年。视图:谷歌学术搜索
13. 2016年3月,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/EU081230。
14. 2016年3月,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/EU081177。
15. 渡边,k . w . Chan g .陶氏e·e·Ooi j·g·低,和s . g . Vasudevan”优化celgosivir治疗登革热病毒感染小鼠模型的血清型1和2:寻找一个窗口为潜在的治疗效果,”抗病毒研究卷。127年,10 - 19,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j . Rocha-Pereira d . Jochmans y . deb, e . Verbeken m . s . j . Nascimento, j . Neyts”病毒聚合酶抑制剂2′-c-methylcytidine抑制诺沃克病毒复制和防止norovirus-induced腹泻和死亡率在老鼠模型中,“病毒学杂志,卷87,不。21日,第11805 - 11798页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. f . Bassissi、a . Lespine和m . Alvinerie”评估伊维菌素脂质体配方的兔子一个皮下政府后,“寄生虫学研究,卷98,不。3、244 - 249年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. m . y . f .泰j·e·弗雷泽陈家强w . et al .,“核本地化的登革病毒(DENV) 1 - 4非结构性蛋白5;保护所有4 DENV抑制剂伊维菌素的血清型,”抗病毒研究,卷99,不。3、301 - 306年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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