文摘
背景。神经激肽1受体(NK1R)是一种很有前途的生物标志物和治疗目标在乳腺癌。本研究旨在调查NK1R在乳腺癌组织的表达水平及其与扩散指数的关系以ki - 67,病人的临床病理的特点,和总体生存率。方法。NK1R免疫组织化学表达和ki - 67测量164年乳腺癌石蜡包埋组织的四分子亚型(42 HER2-enriched, 40鲁米那,42岁腔的B,和40三重阴性)。NK1R半定量的得分,而ki - 67通过肿瘤细胞总数的比例与核染色。最优截止值NK1R和ki - 67被截止评估者。皮尔逊卡方( )和费舍尔的确切测试被用于比较之间的染色分数组。kaplan meier与生存率较用于生存分析方法。方差分析和学生的 - - - - - -测试组进行比较。结果。共有164名患者被纳入研究,代表女性与浸润性导管癌。NK1R表达高水平的调查病例的34%左右。意思是ki - 67水平约27%和41.5%的样本有很高的ki - 67 ( )。NK1R表达水平与肿瘤级别更高( )和高ki - 67 ( )。NK1R表达负面影响总体存活率在二级肿瘤( )。结论。NK1R导致细胞增殖和在乳腺癌预后与负相关。这些发现显示的潜在作用NK1R作为乳腺癌的治疗目标。
1。介绍
乳腺浸润性导管癌也称为浸润性导管癌是最常见的乳腺癌约占80%的乳腺癌病例(1]。一般的假设是,乳房肿瘤发生是一个渐进的过程,始于上皮异常增生形成之后,导管原位癌(DCIS),乳腺癌的早期形式,可以转换后的浸润性癌,最后转移性疾病(2]。然而,知识是缺乏哪些DCIS病例可能过渡到乳腺浸润性导管癌由于有限的信息在乳腺癌的潜在的分子机制进展(2,3]。
乳腺癌是一种异质性疾病在组织学、生物、病理和分子水平(4]。发展的分子分析方法如基因阵列测试辅助乳腺癌分子亚型分为四个主要的分类,预测预后和预测治疗反应(5]。这些分子亚型基于雌激素受体(ER)的表达水平,孕激素受体(PR),和人类表皮生长因子受体2 (HER2),它们是:鲁米那,腔的B,官腔(三重阴性),和HER2-enriched肿瘤(5]。然而,目前的分类系统是不足以解释高intertumor intratumor异质性的乳腺癌的临床表现和治疗反应(4]。因此,细化破译分子和生物分子亚型的组件是临床上重要的和将改善癌症治疗的乳腺癌患者的分层。
神经激肽1受体(NK1R)是一个G-protein-coupled受体和P物质的生物中介速激肽活动(6]。NK1R正在调查中作为一个潜在的生物标志物和治疗目标在乳腺癌等癌症(7- - - - - -11]。NK1R是过表达在不同类型的癌症7,12),并与一些致癌过程如血管生成有关,增殖,凋亡和转移7,13,14]。此外,击倒的NK1R基因或治疗癌症细胞与NK1R拮抗剂如aprepitant施加多个antitumoral效应(7,9,15- - - - - -17]。
尽管广泛研究NK1R癌症的作用,不足可用的信息是关于乳腺癌的作用和表达水平。因此,我们研究的目的是调查NK1R的表达水平在四种不同的乳腺癌分子亚型及其与核扩散活动的关系以ki - 67指数和临床病理参数和总体生存率。
2。材料和方法
2.1。病人
这项回顾性研究进行了病理学系的阿卜杜拉国王大学医院(KAUH)在伊尔比德,乔丹。164例乳腺癌石蜡包埋组织被纳入本研究。情况下代表女性浸润性导管癌患者接受手术切除的第四阶段我在2007年和2019年之间,没有接受化疗或放疗手术前。从病人的医疗临床病理的回顾性收集数据图表。代理使用临床病理的分子亚型的定义如下:(1)HER2-enriched:呃消极,负面公关和HER2阳性(2)鲁米那答:ER阳性,公关积极、HER2阴性,和低ki - 67 (< 14%)18](3)腔的B(3正):ER阳性,公关积极、HER2阳性,任何ki - 67 (18](4)三重负面:ER阴性,公关负数,HER2阴性
2.2。组织微阵列(TMA)建设和TMA幻灯片准备
乳房组织的癌变区域选择和标记相同的苏木精和伊红(H / E)幻灯片和TMA块采样。八个组织阵列块构造包括整个164核心利益除了控制核心。脑组织被用作NK1R积极控制,结肠组织被用作ki - 67,积极控制和正常乳腺组织作为消极的控制。
2.3。免疫组织化学染色(包含IHC)
自动Ventana板凳马克超包含IHC /伊什染色模块(美国亚利桑那州图森市Ventana有限公司)与ultraView普遍轻拍(3一起使用diaminobenzidine)包含IHC检测方法(美国亚利桑那州图森市Ventana有限公司)2μm TMA幻灯片的组织部分。
100年μl每个主要的目标蛋白质的抗体NK1R (1: 50, ab219600;RRID不可用,Abcam、剑桥、马、美国)和ki - 67(克隆30-9 prediluted, # 790 - 4286, RRID: AB_2631262, Ventana,图森市AZ)。
2.4。包含IHC染色评估、分析和得分
发现都是由两个独立的病理学家解释没有先验知识的临床数据。光学显微镜(日本奥林巴斯公司)被用来可视化幻灯片。十视觉领域选择每个幻灯片和检查40 x放大,和图片是通过个人电脑数码相机(奥林巴斯DP74,日本)。
免疫染色的程度是半定量的检测。的表达水平NK1R基于奥尔雷德8-unit评分系统使用积极染色细胞的比例和染色的强度。积极彩色肿瘤细胞的比例从1%到100%不等,这是得分如下:0,0%反应细胞;1、< 1%反应细胞;2、反应细胞1% - -10%;3,11% - -33%的反应细胞;4、34% -66%反应细胞;5,> = 67%反应细胞。染色强度得分如下;0,没有染色; 1, weak staining (light yellow); 2, moderate staining (yellow brown); and 3, strong staining (brown). After that the two scores were added together for a total score (TS) with eight values, cytoplasmic, nuclear, and membranous staining for NK1R was evaluated. The Ki-67 index was obtained by the percentage of total number of tumor cells with nuclear staining. All brown-stained nuclei were counted as positive regardless of staining intensity.
2.5。统计分析
数据收集在一个Excel数据库从Windows 10(美国微软公司,微软,WA)和SPSS统计软件系统(美国)IBM SPSS统计23日是用于统计分析。最优截止值NK1R和ki - 67被截止评估仪(19),在线应用程序,用于定义最相关的预后标记来区分的分界点和总体生存率。患者分为两组,那些表达水平高于截止点高,否则低组。
描述性统计。皮尔逊卡方( )测试或确切概率法是用来比较组之间的染色分数。方差分析和学生的 - - - - - -测试组进行比较。提出了连续变量 ,而分类变量提出了数字和百分比。生存结果,定义为从诊断时死于任何原因或过去的联系,估计与卡普兰Meier分析和对比组的生存率较。统计显著性被认为是如果 。
所有程序中执行当前的研究机构审查委员会批准在约旦科技大学(28/116/2018)按照1964年赫尔辛基宣言及其后来的修正案。
3所示。结果
3.1。乳腺癌患者的临床和病理特征
共有164名患者被纳入研究。所有情况下代表女性与浸润性导管癌。患者的平均年龄 年(极端:28 - 82)。详细的病人和肿瘤特征显示在表中1。关于肿瘤体积使用椭球模型公式计算: ,在哪里 , ,和代表三个垂直的直径。
NK1R的表达式和ki - 67乳腺浸润性导管癌的被包含IHC检测。使用了奥尔雷德8-unit NK1R表达的半定量的得分。代表图八总分的频率图所示1(一)。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
一百零八个样本(65.9%)负表示NK1R ( ),TS的2 3%,10.4%有TS的TS的4 4.3%,TS的5 14.0%,2.4%有总分6。没有7或8例TS。意思是ki - 67水平约27%。
使用在线截止仪,最优截止值NK1R和ki - 67是一个总分1 NK1R和表达水平的22% ki - 67。因此,我们定义NK1R患者 或ki - 67 NK1R或ki - 67高表达组。有108名(65.9%)患者NK1R NK1R患者56例(34.1%) 。有96名(54.5%)患者 %,68(41.5%)的患者 %。代表图像包含IHC NK1R和ki - 67所示的数据1 (b)- - - - - -1 (h)和2(一个)- - - - - -2 (c),分别。
(一)
(b)
(c)
3.2。NK1R和临床病理参数之间的联系
作为显示在表2,没有关系NK1R表达水平与年龄、乳腺癌分子亚型,肿瘤体积,TNM阶段,pT阶段,pN阶段,远处转移,腋窝淋巴结转移或lymphovascular入侵,呃,公关和HER2状态,DCIS的历史,家族病史,或类型的疗法。之间存在显著相关NK1R表达水平与肿瘤级别( , )。44(78.6%)的患者56 NK1R表达高三级肿瘤,其余二级肿瘤。此外,低NK1R表达式与低ki - 67指数( , );108年七十一例(65.7%)患者低NK1R表达式ki - 67年较低的表达式。
3.3。NK1R表达之间的联系和生存的结果
我们下一个调查NK1R表达水平总体存活率的影响。之间没有显著差异低和高表达组所有病例集中在一起(图3(一个), )。然而,由于NK1R表达与肿瘤级别,我们进一步研究了这些组织的整体存活率的影响。产生负面影响的NK1R表达式被认为在二级肿瘤(图3 (b), )但不是在三级肿瘤(图3 (c), )。我们也调查了NK1R表达对整体存活率的影响,ki - 67指数;然而,两组之间没有显著差异( ,图4)。
(一)
(b)
(c)
(一)
(b)
4所示。讨论
NK1R可能是一个有用的预后标记提供线索和对治疗的反应,可能代表一种新的治疗目标在乳腺癌。一些研究可以探索NK1R表达式和调查其在乳腺癌预后价值(12,20.- - - - - -22]。本研究回顾性评估的表达NK1R 164例乳腺浸润性导管癌病例的四分子亚型。此外,NK1R表达式之间的关系和细胞增殖以ki - 67指数和临床病理参数和总体存活率进行了测试。
我们观察到NK1R高在大约34%的情况下。NK1R之间的重要关联发现表达水平和肿瘤年级( )和ki - 67指数( )。NK1R表达式被发现高三级肿瘤(78.6%)相比,二级(21.4%)和一级(0.0%)。在研究Garcia-Recio et al ., NK1R正表达分析病例的94%(318个样本)21]。Davoodian等人的研究表明,NK1R表达式是积极的在所有的30例分析(22在88%左右),突出分析了组织在另一项研究由黄等。23]。表达率的变化可能是由于不同的组织学类型的乳腺癌病例分析,除了不同的样本大小。另一种解释是存在两种亚型NK1R,完整的长度(NK1R-FL)和截断(NK1R-Tr)。后者的特点是缺乏96残留在其胞质,这可能降低效率对脱敏和内化24]。目前还不清楚如何NK1-FL或NK1-Tr功能与肿瘤发生和其特定的生物功能在肿瘤的形成和发展。然而,先前的研究表明,NK1R-FL表达水平明显降低在乳腺癌细胞系和肿瘤组织和显著的过表达在正常乳房组织,而NK1R-Tr形式是乳腺癌细胞和组织中高度表达25,26]。高NK1R-Tr显著的基因表达与TNM阶段,呃,公关状态,和ki - 67表达,而NK1R-FL并不与任何临床病理的相关变量除了淋巴结状态(25]。虽然在我们的研究中,我们应用一个非特异性主要抗体结合受体的细胞外领域从而检测这两种亚型,未来的研究应该关注调查的两个亚型识别他们的微分表达式和在乳腺癌患者预后价值。
和谐我们的结果,先前的一项研究揭示了重要的NK1R表达与肿瘤级别之间的联系,但是微分表达式三年级没有报告的研究(23]。在另一项研究中,高NK1R表达明显二年级和三年级乳腺癌组织但成绩分析显著统计学差异不是执行(12]。这些发现表明NK1R乳腺癌患者的预后价值。
我们所知,这是第一个研究报告积极联系NK1R免疫组织化学表达在乳腺癌和ki - 67指数。类似的发现报道在口腔鳞状细胞癌(13和恶性牙原性的肿瘤27]。因此,治疗脑部肿瘤动物模型,胰腺癌,肝母细胞癌与NK1R拮抗剂导致显著减少ki - 67阳性细胞(28- - - - - -30.),因此前面的证据支持一个致癌效应的NK1R通过促进肿瘤细胞增殖16,31日]。
我们的生存分析显示出明显的负面影响NK1R表达水平对整体二级肿瘤患者的生存。这个结果支持NK1R作为治疗目标的潜在作用在乳腺癌;因此,未来的研究必须专注于识别的潜在机制这种蛋白在乳腺癌的作用。
作为一个结论,在这项研究中,我们能够确定NK1R的表达水平在乳腺浸润性导管癌的四分子亚型:HER2-enriched,鲁米那,腔的B,三重阴性肿瘤。高NK1R表达水平与肿瘤分级和高ki - 67指数高。此外,NK1R表达对总体生存有负面影响二级肿瘤。从本研究的结果,我们可以提出一个角色的NK1R负在乳腺癌预后标志。然而,更大的患者群的分析更复杂的研究是必需的,而关注像包含IHC便宜和实用的应用方法。此外,未来的研究必须关注调查目标蛋白质的基因表达,以便发现生物标志物和基因签名。
缩写
| NK1R: | 神经激肽1受体 |
| HER2: | 人类表皮生长因子受体2 |
| DCIS: | 导管原位癌 |
| 呃: | 雌激素受体 |
| 公关: | 孕激素受体 |
| TMA, | 组织微阵列 |
| 包含IHC: | 免疫组织化学。 |
数据可用性
在生成的数据集和/或分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
摩诃s Al-Keilani负责概念化,方法,正式的分析,撰写初稿,项目管理,和资金收购;穆罕默德·a . Alqudah负责调查资源,写评论,和编辑;和Rana Elstaty负责调查和数据管理。
确认
这项研究是由约旦大学的院长以来,研究科技(格兰特号码:2018266)。