的高和低风险的人乳头状瘤病毒DNA检测存档从埃塞俄比亚妇女乳腺癌组织

文摘

背景。人类乳头状瘤病毒(HPV)参与了宫颈癌的的发展,口腔和喉咙,肛门,阴茎,外阴或阴道,但它没有被认为是乳腺癌的一个原因。最近,许多调查乳腺癌病毒感染有关。高危人乳头状瘤病毒类型,主要是人乳头状瘤病毒类型16,18日,31日,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,56岁,58岁的和59岁,是建立在人类致癌物。在这项研究中,我们旨在检测19高风险和9低风险的人类乳头瘤病毒从存档在埃塞俄比亚妇女乳腺肿瘤组织。方法。在这项研究中,75名乳腺癌患者Tikur Anbassa专业医院在亚的斯亚贝巴(埃塞俄比亚)包括在内。HPV检测和基因分型是通过使用小说Anyplex™II HPV28检测化验据英国大学医院,瑞典。的Anyplex™II PCR系统检测到19高危人乳头状瘤病毒类型(16,18岁,26岁,31岁,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,53岁,56岁,58岁的59岁,66年,68年,69年,73年和82年)和9低风险的人乳头状瘤病毒类型(40 6日,11日,42岁的43岁,44岁,54岁,61年和70年)。包含IHC p16是使用一个自动化的系统,完成了Dako Autostainer链接。结果。75个有效测试,两人发现HPV阳性(2.7%)。情况下呈阳性的高风险HPV16基因型,另一是积极为高风险HPV39和低风险的HPV6。细胞周期蛋白p16表达高度在高风险的情况下积极HPV16,但它不是HPV39阳性表达。结论。人乳头状瘤病毒的流行在埃塞俄比亚乳腺癌患者低,但所扮演的角色在埃塞俄比亚乳腺癌患者乳腺癌致癌HPV不能根据这些观察评论。

1。背景

人类乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的的发展,口腔和喉咙,肛门,阴茎,外阴或阴道,但它没有被认为是乳腺癌的一个原因。然而,越来越多的调查乳腺癌与病毒感染有关,包括人乳头状瘤病毒(HPV), eb病毒(EBV),鼠乳腺瘤病毒(MMTV),和人类巨细胞病毒()血巨细胞病毒1]。人类乳头状瘤病毒(人类乳头瘤病毒)nonenveloped DNA病毒属于乳头家族(2,3]。超过170的人类乳头瘤病毒类型已确定(3),其中大部分影响生殖道上皮细胞,上呼吸道的粘膜和皮肤(2,3]。人类乳头瘤病毒是分为高风险和低风险,根据其致癌潜力。高危HPV类型致癌;然而,低风险的类型并不是致癌但引起良性肛门-生殖器疣和复发性呼吸道乳头瘤样增生(3,4]。高危人乳头状瘤病毒类型,主要是人乳头状瘤病毒类型16,18日,31日,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,56岁,58岁,59岁的建立为人类致癌物,而HPV68可能是致癌(5]。16型和18型人乳头状瘤病毒是最常见的高危类型和负责> 70%的宫颈癌病例(5]。人类乳头瘤病毒是具有三个功能代码的存在在他们的基因组区域:E地区编码病毒功能,早期L地区负责后期病毒功能,和控制区域(LCR) [2]。尽管人类乳头瘤病毒是已知负责宫颈癌的发展,人类乳头瘤病毒感染通常无症状,大多数性活跃人群感染HPV一生中至少一次(3]。最近的一项系统回顾和再分化任等人研究了37个病例对照研究包含3607例乳腺癌病例和1728例对照广泛的国家比较高风险的人类乳头瘤病毒在乳腺癌的患病率比良性乳房或正常乳腺(6]。在他们的研究中,任正非等人显示增加乳腺癌风险如果积极与人类乳头状瘤病毒(HPV) ( ,95%置信区间4.25 - 9.12; )。任等人还显示三种高危HPV(人乳头状瘤病毒类型16,18岁和33)乳腺癌(成正比6]。同样,罗森等人在2015年进行的一项再分化显示HPV是四倍的患病率在乳腺癌(21.5%)高于对照组(5.1%)(7]。

在另一项研究中,它已经表明,女性HPV-associated宫颈病理风险增加来自同一人乳头状瘤病毒类型HPV阳性乳腺癌这意味着可能的联系和乳腺癌致癌作用8]。只有一个发表的研究到目前为止完成评估人乳头状瘤病毒在非洲大陆的流行。本研究从卢旺达9)是在47个存档formalin-fixed进行石蜡包埋组织检测和基因型人乳头状瘤病毒DNA。他们人乳头状瘤病毒的患病率在46.81%的病例报道。本研究中最常见的基因型HPV16(77%),其次是HPV33(14%)和HPV31 (9%) (9]。

在埃塞俄比亚,根据一项研究,超过6000每年新诊断宫颈癌病例和人乳头状瘤病毒的原因是大多数情况下(10]。2014年的一项研究发现,最常见的基因型宫颈癌患者在埃塞俄比亚HPV16,其次是HPV52, HPV56, HPV31 [11]。2013年另一个研究也发现HPV16最常见的基因型,其次是HPV52, HPV58, HPV18 [12]。到目前为止,没有发表的研究来评估乳腺癌病例中HPV的角色埃塞俄比亚。因此,在这项研究中,我们旨在检测19高风险和9低风险的人类乳头瘤病毒从归档乳腺肿瘤组织看流行在埃塞俄比亚妇女第一次。

2。材料和方法

2.1。病人和样本特征

参与者参与这个研究以前发表的调查在我们工作描述的分子分类和确定分布在埃塞俄比亚妇女雄激素受体在乳腺癌(13,14]。病人和样本特征总结如下。研究最初招募了114例病理证实乳腺浸润性癌访问Tikur Anbessa专业医院(TASH)在亚的斯亚贝巴(埃塞俄比亚)治疗。获得书面知情同意后,参与者的年龄、肿瘤分级、收集阶段的疾病和病理类型的医疗记录。Formalin-fixed石蜡包埋(FFPE)组织样本来自小胡子和圣保罗医院年医学院(SPHMMC)活检的病理实验室因为一些测试在这个医院。所有FFPE块分段和圆)染色和评估据英国大学医院,瑞典。TMA是免疫组织化学评估,构建和肿瘤核分子测试被从主捐赠者块和转移到无菌埃普多夫管。组织核心样品PCR TMA大师自动化系统(3 dhistech有限公司,布达佩斯,匈牙利)样本核用于PCR分析。病理学家为代表的部分个人侵入性肿瘤与肿瘤细胞的百分比抽样的组织PCR。0.6来看打孔切片对应标记区域被从石蜡块。 For each patient, two biopsy cores were taken from the same tumor.

2.2。DNA提取

DNA分离每个肿瘤标本的组织核心样本。恶性肿瘤细胞的存在是评估在所有样本的评价幻灯片与苏木精和伊红染色())。基因组DNA (gDNA)分离出肿瘤核使用QIAamp DNA迷你包(试剂盒),包括蛋白酶K治疗(试剂盒)其次是净化使用QIAcube自动化系统(试剂盒)。DNA浓度测量使用Nanodrop nd - 1000 (Nanodrop技术)。gDNA样本存储在4°C。

2.3。多路实时聚合酶链反应

多路复用定量实时PCR是据英国大学医院完成的。实时PCR扩增都使用了Anyplex™II HPV28检测试验(Seegene说,首尔,韩国),按照制造商的协议,在CFX96实时Thermocycler (Bio-Rad、大力神、钙、美国)。的Anyplex™II HPV28检测试验是一种新型的多路实时PCR试验,允许同时扩增,检测和差异化目标核酸的28人乳头状瘤病毒类型和内部控制(IC)。的Anyplex™II PCR系统检测到19高危人乳头状瘤病毒类型(16,18岁,26岁,31岁,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,53岁,56岁,58岁的59岁,66年,68年,69年,73年和82年)和9低风险的人乳头状瘤病毒类型(40 6日,11日,42岁的43岁,44岁,54岁,61年和70年)。

2.4。免疫组织化学的p16

免疫组织化学(包含IHC) p16是使用一个自动化的系统,完成了Dako Autostainer链接。Formalin-fixed石蜡部分被削减时用水4微米和水化。燥热引起抗原决定基与FLEX TRS减检索检索进行缓冲了20分钟。过氧化物酶阻断后,特定的单克隆抗体(源和稀释:p16克隆g175 BD - 405,美国和稀释1/25)应用在室温20分钟。FLEX +兔设想系统用于检测。轻拍色原当时申请了10分钟。幻灯片是复染色mayer苏木精5秒钟,然后脱水和盖玻片。幻灯片进行扫描Pannoramic 250数字扫描仪(3 d HISTECH有限公司,布达佩斯,匈牙利)和图像中使用软件程序“CaseViewer”(3 d HISTECH有限公司,布达佩斯,匈牙利)。消极的控制被包含在运行。

2.5。统计分析

使用SPSS统计分析为windows版本21。连续的数据报告 或数字(比例)。斜分布报告为中值与最小和最大价值。

3所示。结果

3.1。病人

有114名参与者FFPE用于这项研究。只有75例HPV的pcr实验有效的结果。在诊断的75例病例平均年龄是42年(SD12),平均年龄40岁(范围22 - 75)。大多数的参与者(40%)< 40岁。大约31%的参与者≥50年和28%的40至49岁。

3.2。组织病理学特征

75年的肿瘤,7%是1级,2级,29%和33%的三年级。阶段如下:阶段1 - 20%;阶段2 - 31%;阶段3 - 35%,阶段4 - 1%。最常见的组织学类型提出了表1浸润性导管(60%),小叶类型仅为5%(表吗1)。

3.3。人乳头状瘤病毒检测

114年的肿瘤,只有75检测到内部控制;因此,其余的被拒绝。75个有效测试,2是积极的(2.7%)。情况下呈阳性的高风险HPV16基因型,而另一个是积极为高风险HPV39和低风险的HPV6。

3.4。p16疣状

强大的p16的表达中检测出阳性HPV16但没有发现的情况下双阳性HPV39 HPV6。p16的表达在我们的军团是总结表2。免疫组织化学染色的p16在图展示了两例患有乳腺癌1。

4所示。讨论

在这项研究中,我们研究了19个高危人乳头状瘤病毒类型的存在(16,18岁,26岁,31岁,33岁,35岁,39岁,45岁,51岁,52岁,53岁,56岁,58岁的59岁,66年,68年,69年,73年和82年)和9低风险的人乳头状瘤病毒类型(40 6日,11日,42岁的43岁,44岁,54岁,61年和70年)。Anyplex多元qPCR技术检测和基因分型人类乳头瘤病毒的利用。我们发现高危HPV DNA 2/75(2.7%)的研究参与者来自埃塞俄比亚的乳腺癌患者。来自不同国家的研究人员报道了一个总体发病率的2 - 74%的人乳头状瘤病毒在乳腺癌中提出论文劳森et al。15]。我们的观察是一致的两个不同的研究从中国彭et al。(2%)和李et al。(2%)16,17]。人乳头状瘤病毒在乳腺癌的患病率的变化在不同的国家可能与地理差异的存在在HPV感染(15,18]。罗森等人表明,低利率的国家HPV-associated乳腺癌宫颈癌似乎高,反之亦然。因此,他们认为在乳腺致癌HPV可能不会发挥重要作用;然而,他们建议人类乳头瘤病毒的可能性可能参与一些但不是全部乳腺癌[15]。同样,劳森等人指的是所做的功Grulich et al。19]表明,乳腺癌的发病率是不增加免疫功能低下的患者(艾滋病毒感染患者或器官移植受者)作为一种间接支持证据和次要角色的HPV在乳腺癌(15,19]。人乳头状瘤病毒的流行在我们的研究中(2.7%)比卢旺达研究明显不同(47%),这可能是由于真正的人乳头状瘤病毒的流行病学分布差异两国也可能归因于变异的方法应用到每个研究[9]。

来自不同国家的各种类型的人乳头状瘤病毒已确定与HPV16报道最常见的HPV其次是HPV18和HPV33 [6,15]。在我们的研究中,人类乳头瘤病毒类型乳腺癌样本中发现HPV高危HPV16 DNA阳性1例(1.2%)和高风险HPV39在另一个案件中(1.2%)。的主题积极高风险HPV39也积极为低风险的人乳头状瘤病毒类型6,虽然低风险HPV6尚未涉及癌症但是尖锐湿疣的主要原因2,20.]。

此外,在我们的研究中发现的高风险HPV39并非在任何24所回顾的研究发现劳森等。然而,这是主要的高危HPV检测在最近的英国研究萨尔曼et al。15,21]。

p16(细胞周期蛋白)检测到表达都患有乳腺癌和消极的情况下在我们的军团。有证据表明强烈的表达而不是低或中等p16的表达与HPV相关生物活性和高p16的表达可以作为代孕人乳头状瘤病毒的转录活动的指示(7]。在我们的研究中,肿瘤的高危HPV16强烈p16阳性,这可能支持以前的观测由其他研究人员,HPV16可能致癌作用的发挥积极作用的一小部分乳腺癌[8,15,16]。

5。结论

人乳头状瘤病毒的流行在埃塞俄比亚乳腺癌患者低,但所扮演的角色在埃塞俄比亚乳腺癌患者乳腺癌致癌HPV不能根据这些观察评论。

数据可用性

在这项研究中使用的所有材料是可用的,并且可以提供必要的。

伦理批准

这项研究是第一个伦理审查委员会批准的生物化学,然后批准的机构审查委员会(IRB)健康科学学院,亚的斯亚贝巴大学。伦理批准也从圣保罗医院年医学院获得收集存档FFPE组织样本登记的病人。这项研究也是国家研究伦理审查委员会批准在埃塞俄比亚科技部。

同意

写,从每个病人知情同意了。

信息披露

这个手稿的预印本上传在研究广场中,并可在预印本平台https://www.researchsquare.com/article/rs-29468/v1(22]。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

如参加了研究设计和数据收集和协调数据管理、实验室工作,统计分析。如还写了最初的手稿。DS参与研究设计、数据收集和数据管理。可和CK参与研究设计,实验室工作,和数据管理。GLL参与实验室工作。其余的调查人员参与数据分析和手稿准备。DS贡献作为研究工作的高级主管在埃塞俄比亚。可在监督工作和CK瑞典的高级科学家。所有作者都阅读和批准了手稿。

确认

我们承认小胡子和SPHMMC病理学实验室促进访问存档FFPE组织。我们承认AHRI促进研究的不断指导和提供行政支持π。我们承认密歇根大学的国际生殖健康中心(CIRHT)项目安排相关培训π在美国。我们也愿意承认据英国大学在瑞典,允许π实验室访问行为分析。我们承认Endegena Abebe和Sisay Addisu AAU(博士生)支持的一些样本的集合。我们也承认艾琳Embretsen-Varro和安娜Gotrilin-Eremo据英国大学医院的技术支持。我们也感谢博士Maheteme贝克勒和艾莎博士在SPHMMC Jibril便利地获取在这项研究中所使用的一些组织块从SPHMMC病理学实验室。这项工作是由亚的斯亚贝巴大学研究生学院的专题研究小组“乳腺癌在埃塞俄比亚clinico-epidemiological表征”和Armauer汉森研究所(AHRI)。AHRI支持这项研究通过融资获得瑞典国际发展合作署(SIDA),瑞典。

引用

1. d . Joshi和g·c . Buehring”病毒与人类乳腺癌?仔细观察分子的证据,“乳腺癌研究和治疗,卷135,不。1、1 - 15,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. p . t . Wang,王l . et al .,“人类乳头瘤病毒感染在乳腺癌的作用,“医学肿瘤学卷,29号1,48-55,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. d·博达a . o . Docea d·卡利纳et al .,“人类乳头状瘤病毒:理解与致癌作用的联系和推出新的研究途径(审查),“国际肿瘤学杂志,52卷,不。3、637 - 655年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. r·k·Orosco s Kedarisetty美国赫克特,d . c . Chang c·s·科菲和p . a . Weissbrod”预测高风险和低风险的口腔人乳头状瘤病毒感染在美国,“的喉镜,卷126,不。6,1365 - 1372年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. n .穆尼奥斯f . x博世,s . de Sanjose et al .,“流行病学与宫颈癌相关的人类乳头瘤病毒类型分类,“《新英格兰医学杂志》上,卷348,不。6,518 - 527年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 曾任,k, l .μc . Wu j .黄和m . Wang“人类乳头瘤病毒感染会增加乳腺癌的风险:一场大规模的系统性回顾和荟萃分析的病例对照研究中,“腺手术,8卷,不。5,486 - 500年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. w·k·格伦·j·s·劳森,d . Salyakina et al .,“人类乳头状瘤病毒和乳腺癌,”在肿瘤领域,5卷,p。277年,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. w·k·格伦·j·s·劳森,d . Salyakina et al .,“人类乳头状瘤病毒识别之前在乳腺癌患者宫颈肿瘤,”在肿瘤领域,5卷,不。298年,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. t·哈比亚利马纳m . Attaleb j·b·Mazarati y Bakri,和m . El Mzibri”的人类乳头状瘤病毒DNA检测肿瘤从卢旺达的乳腺癌患者,”乳腺癌,25卷,不。2、127 - 133年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. m . Begoihn a . Mathewos a Aynalem et al .,“Ethiopia-predictors宫颈癌的晚期诊断和长时间的时间,“传染性病原体和癌症,14卷,不。1,2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. s . r . Leyh-Bannurah c . Prugger m . n . de通力h .他和r . j . Lelle“宫颈人乳头瘤病毒患病率和基因型分布在混合捕获2积极15至64岁的女性Gurage区,埃塞俄比亚、农村”传染性病原体和癌症,9卷,不。1,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. e .减弱,a . Aseffa m . el-Tayeb et al .,“人类乳头瘤病毒基因分型颈石蜡包埋组织样本中女性在埃塞俄比亚和苏丹,”医学病毒学杂志,卷85,不。2、282 - 287年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. e . Hadgu d . Seifu w . Tigneh et al .,“乳腺癌在埃塞俄比亚:依据地理差异分子亚型的分布在非洲,”BMC女性健康,18卷,不。1,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. e . Hadgu d . Seifu w . Tigneh et al .,“雄激素受体(AR)的分布和特征在乳腺癌女性在亚的斯亚贝巴,埃塞俄比亚:横断面研究,“《公共科学图书馆•综合》,15卷,不。5篇文章e0232519 2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. j·s·劳森,w·k·格伦·n·j·惠特克,“人类乳头状瘤病毒和乳房cancer-assessment因果关系。”在肿瘤领域》第六卷,207页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j . j . Li叮,k .翟,“人类乳头状瘤病毒DNA检测乳腺肿瘤患者在中国,“《公共科学图书馆•综合》,10卷,不。8篇文章e0136050 2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. h . j .彭t . Wang朱et al .,“多重PCR /质谱筛选生物致癌剂在人类乳腺肿瘤,”临床病毒学杂志,卷61,不。2、255 - 259年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. o . m .甘农A . Antonsson i c·班尼特和n·A·桑德斯”病毒感染和乳腺癌——当前的角度来看,“癌症的信卷,420年,第189 - 182页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. a . e . Grulich m . t . van Leeuwen m . o . Falster和c m . Vajdic“艾滋病毒/艾滋病的人癌症发病率与免疫抑制移植受者:一个荟萃分析,“《柳叶刀》,卷370,不。9581年,59 - 67年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. j·s·劳森,b .鲑鱼和w·k·格伦,“致癌病毒和乳腺癌:鼠乳腺瘤病毒(MMTV),牛白血病病毒(BLV)加载,人类乳头状瘤病毒(HPV),与eb病毒(EBV)”在肿瘤领域,8卷,p。2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. n . A .萨尔曼·g·戴维斯,f . Majidy et al .,“高危人乳头瘤病毒协会和乳腺癌:英国的一项研究中,“科学报告,7卷,不。1,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. e·h·Gebregzabher d . Seifu w . Tigneh et al .,归档的高和低风险的人乳头状瘤病毒DNA检测乳腺癌组织从埃塞俄比亚妇女研究广场,2020年,预印(版本1)。视图:出版商的网站

版权

版权©2021 Endale Gebregzabher等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。