一致性之间的免疫组织化学和微阵列基因表达分析雌激素受体,孕激素受体,HER2受体状态在黎巴嫩的乳腺癌患者

文摘

介绍。准确评价雌激素和孕激素受体和HER2是至关重要的在诊断侵袭性乳腺癌的最佳治疗。当前的评价方法是通过免疫组织化学(包含IHC)。在本文中,我们比较的结果,公关,从微阵列基因表达HER2包含IHC 81年乳腺癌新鲜标本。方法。人类基因组基因表达分析都使用了GeneChip U133 + 2.0数组(Affymetrix公司)。免疫组织化学染色对雌激素受体、孕激素受体和HER2状态进行CAP-accredited病理学实验室使用标准的方法。一致性,协议措施,kappa评分计算两种方法。结果。呃,Kappa评分为0.918 (95% CI, 0.77.3-1.000)和和合率为97.5%(95%可信区间,91.4% -99.7%)。公关,Kappa评分为0.652 (95% CI, 0.405 - -0.849)和和合率为86.4%(95%可信区间,77% -93%)。HER2, Kappa评分为0.709 (95% CI, 0.428 - -0.916)和和合率为97.5%(95%可信区间,91.4% -99.7%)。结论。我们的结果与现有证据和合率是最低的孕激素受体。一般来说,微阵列基因表达和包含IHC和谐率高。几个因素可以增加冲突率等不同的样品处理。

1。介绍

乳腺癌是女性最常见的癌症。一些肿瘤特征发挥重要作用在确定优化管理的肿瘤。雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR),并采用已成为重要的预后和治疗的诊断标志物和治疗(1- - - - - -5]。最佳治疗,乳房癌都是检测这三个标记。当前的护理标准测试是通过免疫组织化学(包含IHC)和荧光原位杂交(FISH)对HER2模棱两可。然而,几项研究已经揭示冲突率和interobserver协议得分相关激素受体状态,大多是固定的影响,选择的抗体,和得分的解释6- - - - - -13]。一篇文章的作者(14)发现,20%的IHC检测结果的ER和PR状态可能是不准确的,而其他的文章发现,假阴性和假阳性率可以达到数量远高于20% (15,16]。解决冲突包含IHC设定的利率和其他限制,一些研究已经进行准确地确定激素受体状态使用基因分析。因为信息激素受体状态确定资格不同的治疗方法,更多的数据被新兴的使用微阵列基因检测的准确性进一步提高公关,呃,HER2检测结果。大多数研究显示高一致性之间包含IHC呃,公关,HER2结果和微阵列基因表达分析铺平了道路的使用后者只乳房癌的分类(17- - - - - -21]。在这项研究中,我们比较的结果,公关,并通过微阵列分析HER2基因表达的包含IHC 81年新的乳腺癌组织样本。

2。材料和方法

2.1。主题和样品

这个研究机构审查委员会批准(IRB)和所有科目提供书面知情同意。这项研究是依照戒律进行赫尔辛基宣言。81年建立的,新鲜组织标本收集的女性我是新诊断阶段,II或III乳腺癌2012年9月至2014年5月。肿瘤细胞浸润性导管癌的组织学检查证实诊断评估和/或浸润性小叶癌,确保足够的肿瘤细胞的存在。

2.2。微阵列基因表达

提取独特的mRNA指纹进行使用RNeasy®+迷你包(试剂盒)。RNA样本存储在−80°C。评估他们的质量和产量一个_260年/一个_280年和一个_260年/一个_230年和比率分析Experion™自动电泳系统(Biorad)。RNA浓度测定吸收波长260纳米的nd - 1000光谱仪(Nanodrop技术)。

人类基因组基因表达分析都使用了GeneChip U133 + 2.0数组(Affymetrix Inc .)。100 ng RNA的放大,标签,支离破碎,杂化使用GeneChip 3′溶表达工具。洗,染色进行了使用GeneChip流体站450年和3000年数组使用GeneChip扫描仪进行扫描7 g。了Affymetrix GeneChip命令控制台(显示)软件(v3.2)生成的数据单元文件(DTC)。对RNA扩增的过程中,标签,和杂交,细节可从Affymetrix网站(https://www.affymetrix.com)。微阵列分数为ER、PR和HER2被视为积极的如果≥0。

2.3。定量实时聚合酶链反应

确认是由定量实时PCR芯片结果。总RNA reverse-transcribed使用RevertAid逆转录酶(热科学)和100 - 1000 ng输入RNA和随机引物(热科学)。定量实时PCR反应96 -孔板进行了使用特定引物(TIB的MOLBIOL)和iQTM SYBR®绿色Supermix (BioRad)作为荧光检测染料,在CFX96TM实时PCR (BioRad),最后一个体积为12.5μl。描述生成的扩增子和控制污染的不具体的副产品,melt-curve分析应用。每一个反应是在重复执行。所有结果规范化使用ΔΔCt PGK1 mRNA水平和计算方法。PCR的特异性是由melt-curve为每个反应分析。

2.4。免疫组织化学染色

新鲜肿瘤组织部分与福尔马林固定石蜡和嵌入。免疫组织化学染色的ER、PR和HER2标记在执行美国病理学家——(帽)认可的学院病理部门。用于抗原检索柠檬酸缓冲(pH值6)被用于ER抗体和EDTA (pH值8)是用于公关抗体。使用聚合物检测系统进行了应用。ER和PR分数决定基于肿瘤细胞的百分比显示积极核染色和被认为是积极的,如果核染色出现在≥1%的细胞根据ASCO /帽指南(22]。HER2状态,得分如下:0没有染色,或膜染色在不到10%的肿瘤细胞,1 +一个微弱的膜在≥10%的肿瘤细胞染色,弱到中度膜染色的2 +≥10%的肿瘤细胞,和3 +强大的膜染色在≥10%的肿瘤细胞。ER和PR被认为是积极的如果有膜染色在1%以上的肿瘤细胞。HER2过度被认为是消极如果HER2的分数是0或1 +,和积极的如果HER2得分是3 +。肿瘤细胞的HER2得分2 +进一步评估使用荧光原位杂交(鱼)。上述过程是食品和药物管理局(FDA)批准。

2.5。雌激素受体和孕激素受体

ER染色进行使用表达载体1 d5克隆和公关染色进行使用表达载体PR-2C5克隆。积极的和消极的控制被包含在每个幻灯片运行和所有控件显示适当的反应。

2.6。HER2状态

HER2免疫染色是使用Dako执行多克隆。积极的和消极的控制,包括在每个幻灯片运行,显示适当的反应。测定HER2过度使用HercepTest评分系统状态进行。在需要时,鱼都使用Pathvysion HER2 DNA探针设备,与探测特定HER2 / neu基因位点(17 q11.2-q12)和17号染色体的着丝粒区域的另一个调查特定(CEP17) (17 p11.1-q11.1)。样品评价HER2使用鱼HER2 / CEP17 > 1.80时被认为是积极的。

2.7。临床Covariables

除了ER、PR和HER2状态获得通过包含IHC和微阵列,其他临床covariables获得和使用分析和诊断包括年龄、组织学类型、组织学分级、大小、和舞台。

2.8。统计分析

使用SPSS v24执行统计分析。之间的相关性的ER、PR和HER2微阵列分析和免疫组织化学测定使用措施的协议。这些措施包括整体和谐、积极的协议(定义为样本分类的数量正微阵列和免疫组织化学的数量除以阳性样品使用免疫组织化学),消极的协议,阳性预测值(PPV),阴性预测值(NPV),科恩Kappa系数得分 。阳性预测值(PPV)计算样本数量正包含IHC和芯片的数量除以样本正通过微阵列分析。另一方面,阴性预测值(NPV)计算样本的数量-包含IHC和芯片的数量除以样本-通过微阵列。所有测量都与95%的可信区间(CI)和所有统计测试时被认为是重要的值< 0.05。

3所示。结果

的临床和病理特征,总结了81年乳腺癌组织样本表1。

结果ER、PR和HER2状态从免疫组织化学和基因表达分析得到了使用微阵列技术和比较。与免疫组织化学相比,微阵列结果显示97.5%的一致性,HER2公关,为86.4%和97.5%。见表2和3。

呃,Kappa评分为0.918 (95% CI, 0.773 - -1.000),积极的协议是100%,和消极的协议是87.5%。所有65个样本取得积极通过微阵列分析包含IHC也为ER阳性而只有2的16(12.5%)样品-通过微阵列分析包含IHC是积极的。PPV和ER的NPV是97%和100%,分别。呃不一致率为2.5%。

公关,Kappa评分为0.652 (95% CI, 0.405 - -0.849),积极的协议是93.1%,和消极的协议是69.6%。只有4的58例(6.8%)阳性样品,包含IHC -通过微阵列分析。的23个样本由包含IHC - 7是积极通过微阵列分析(30.4%)。PPV和NPV是88.5%和80%,分别不一致率为13.6%。

HER2, Kappa评分为0.861 (95% CI, 0.428 - -0.916),积极的协议是77.8%,和消极的协议是100%。只有2的9正由包含IHC负样本通过微阵列(22.2%)而所有样本正包含IHC也积极通过微阵列分析(100%)。PPV和NPV是100%和97.2%,分别和HER2的不一致率为2.5%。

没有明确的相关性被发现之间的协议措施和病人临床或组织学特征,很可能由于小样本大小。

4所示。讨论

越来越需要精确定义受体状态在浸润性乳腺癌患者最有可能受益于激素治疗。尽可能多的方法产生的状态,公关,和HER2除了长期以来传统的免疫组织化学,假阳性和假阴性也被报道。一些研究调查方法的准确性对这些受体在寻找可靠和准确的结果。

在我们的研究中,我们发现,总体结果符合可用的数据。许多研究人员使用类似的方法比较这些受体标准包含IHC的状态。龚et al。23)使用Affymetrix U133A基因表达分析和比较两个包含IHC ER和HER2状态。他们为HER2 ER和合率92%和90%,他们认为是可再生的和可靠的。使用相同的方法在我们的研究中,我们报告更高的一致性。

Viale等人相比TargetPrint微阵列读数包含IHC中部,结果显示和合率为98%,92%,公关和HER2为75%,其次是二次分析不和谐的情况下,和总体结论是DCIS的存在或瘤内异质性不支持不一致率的原因他们之前报道24,25]。Viale还得出结论,TargetPrint可以改善激素受体的可靠性评价尤其是中心一致率较低。韦塞尔et al。20.)也使用相同的TargetPrint形态,试图比较呃,公关,和HER2状态包含IHC和报道95%的一致性,HER2公关,为81%和94%。另一方面,Roepman et al。19]使用Mammaprint (mRNA表达)形态和比较的结果,公关,和HER2与包含IHC及其一致性报告为93%利率,HER2公关,为83%和96%。

Badve et al。26]OncotypeDx相比(rt - pcr)对地方政府和中央包含IHC ER和HER2受体。对比中央包含IHC和rt - pcr显示ER和PR为90%的和合率为93%,他们认为OncotypeDx和包含IHC之间的一致性程度,这两个地方和中央,高。另一个大的病例对照研究铅Baehner et al。27]报道HER2和合率OncotypeDx与包含IHC高达97%。

在我们的研究中,ER地位的和合率最高(97.5%),最低为公关激素状态(86.4%)与其他研究在文献中报道。的原因不整合公关状态还不清楚,可能与变化IHC检测方法。我们报道,interobserver可变性是公关(包含IHC染色最高19,20.]。

确定在包含IHC ER和PR的积极状态,切断某些作者而其他人把它设置为10%至1% (15]。在我们的研究中,我们使用了1%截止这生成一定数量的积极的ER和PR将改变截止增加到10%。这样,冲突率的差异可以解释为不同的阈值用于不同的受体积极研究。因此,最终决定哪个方法依赖,哪个方法更准确和可靠的仍有待决定未来的前瞻性研究,包括治疗类型和反应。其他作者报道的差异主要是由于评价过程中,染色过程、样品处理不佳,长期固定,瘤内异质性(28,29日]。

我们研究的一个限制是,不和谐的情况下并非由第二病理学家或重新评估在不同的中心实验室评估评分者间信度。需要前瞻性研究项目也会比较ER和PR从邻近正常乳房特别是乳腺癌已经贴上ER和/或公关负面。这可以添加微阵列基因表达的准确性和可靠性。此外,值得注意的是,包含IHC依赖蛋白表达,而微阵列读数依靠mRNA表达,因此,它们之间的差异本质上是预期。也有不确定性包含IHC和基因表达模式,因为他们都依赖蛋白质或信使rna的存在,但这些方法真正确定这些蛋白质功能在自己或他们的信使rna是否会产生功能蛋白质(19,30.),打开门未来潜在的研究在这一领域。可能占差异提到另一个区别在早期的文学作品通常是微阵列读数进行新鲜冷冻组织同时包含IHC进行石蜡包埋组织。这倒不是个大问题这些天因为微阵列分析可以做FFPE (28,29日]。

5。结论

总之,微阵列读数和包含IHC和合率高按我们的结果和上述研究。考虑到包含IHC更广泛使用,容易做,成本更低,最合理的使用包含IHC在日常测试的乳腺癌标本。微阵列测试仍然是一个合理的备份测试形态质量控制等研究目的。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关这篇文章的出版。

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