CDK9表达式显示作为一个潜在的预后标志物的乳腺癌患者新辅助化疗后未能实现病理完全缓解

文摘

未能实现病理完全缓解与预后不良相关新辅助化疗后乳腺癌患者(NACT)。然而,预后生物标志物的临床结果尚不清楚这个病人的人口。细胞周期蛋白依赖性激酶9 (CDK9)通常在乳腺癌特异表达,及其不足导致基因组不稳定性。我们回顾了84名乳腺癌患者的记录从埃默里大学的Winship癌症研究所NACT后经历了手术切除,组织可以组织微阵列分析(TMA)。数据记录包括疾病表现、治疗、病理反应,总生存期(OS),局部区域复发自由生存(LRRFS) distant-failure自由生存(DFFS) recurrence-free生存(RFS)和风平浪静生存(EFS)。免疫组织化学进行患者样本以确定CDK9 NACT后表达水平。蛋白表达与临床数据来确定意义。Cox比例风险模型,使用时间组间协变量来评估死亡的风险超出3年,高CDK9表达式能显著的增加操作系统(人力资源:0.26,95%置信区间CI: 0.07 - -0.98, p = 0.046)。然而,kaplan meier曲线操作系统、LRRFS DFFS, RFS, EFS没有达到统计学意义。这项研究的结果表明,CDK9可能有潜在作用作为NACT后乳腺癌患者预后的生物标志物。 However, further validation studies with increased sample sizes are needed to help elucidate the prognostic role for CDK9 in the management of these patients.

1。介绍

乳腺癌患者高风险特性,比如三阴乳腺癌(TNBC),通常是接受新辅助化疗前(NACT)手术切除(1]。NACT可以减少乳腺肿瘤的大小,随后让乳房保留手术否则可能需要一个完整的乳房切除术的患者由于大型肿瘤大小(2]。此外,NACT生存结果显著影响反应。后残余浸润性乳腺癌患者NACT据报道,高复发风险的(3),然而,其中一些患者获得长期生存,没有复发。因此,有必要确定患者残留病生物标志物NACT后能提供预后信息结果和预测信息来识别更激进的疾病患者可能受益于额外的治疗。

细胞周期蛋白依赖性激酶9 (CDK9)是一个组件的积极转录延长因子(P-TEFb)复杂,磷酸化的羧基末端域(CTD)促进转录的RNA聚合酶II伸长(4]。我们和其他人也报道,CDK9 transcription-independent函数在促进基因组完整性(5- - - - - -11]。CDK9压力和促进康复复制与ATR和几个细胞周期检查点蛋白质。此外,其压力损失导致自发的复制和遗传不稳定(10]。CDK9也促进DNA双链断裂(双边带)通过同源重组修复(人力资源)通过促进招聘BRCA1乳房肿瘤抑制蛋白的DNA损伤网站(6与Ku70)和同事,由异源端加入参与双边带修复(NHEJ) [5]。CDK9的角色在促进基因组完整性是监管通过脱乙酰作用至少部分由SIRT2 sirtuin蛋白脱乙酰酶和乳房肿瘤抑制蛋白,促进其激酶活性(11),反过来磷酸化UBE2A和指导H2Bub1和PCNA ubiquitinylation [12]。

CDK9是肿瘤的蛋白潜在的临床意义,因为它的角色在促进基因组完整性以应对代理诱导复制压力和DNA损伤。它已被证明在许多恶性肿瘤特异表达,包括乳腺癌[13,14]。CDK9抑制剂也已被证明能够抑制乳腺癌细胞的生长和肿瘤(15- - - - - -18]。在这项研究中,我们评估CDK9表达post-NACT乳腺肿瘤。

2。材料和方法

2.1。病人的选择

病人从保持前瞻性队列被选中,IRB批准乳腺癌病人手术切除的数据库之间的2001年和2011年埃默里大学Winship癌症研究所。共有84名患者接受手术切除前NACT没有实现完整病理反应组织的外科切除术用于分析。这些病人选择包含在这项研究。病人的人口统计,病理信息,从电子医疗记录和治疗结果被获得。分期是基于与第七版。完整的病理反应被定义为没有侵入性癌症乳腺癌或腋窝。允许用于本研究的患者信息来自埃默里的机构审查委员会和病人的隐私是依法维护健康保险携带和责任法案1996。

2.2。组织微阵列(TMA)开发

蓝玉被用于这项研究从多个病人为了分析组织在一个幻灯片,从而减少时间和成本进行分析。为了构建蓝玉,formalin-fixed石蜡包埋组织块(FFPE)为每一个病人。这些块包含肿瘤标本每个病人的主要手术切除。执照病理学家进行苏木精和伊红())部分从每个FFPE组织块识别代表地区的浸润性导管和小叶癌。)幻灯片上的识别区域被用来指导删除相应的核心从FFPE组织块。删除核心从每个块被放置到TMA块在一个特定的行和列。行和列的位置为每个核心是仔细记录,以确保染色数据和临床数据将会适当地联系在一起。两个核心的正常组织被用作控制在每一个TMA构造。这些核心的正常组织被用来评估疗效对比染色以及允许的核心在相同或不同载质量保证。对TMA建设更详细的信息,请参阅本文由Rimm et al。19]。

2.3。TMA染色

载后,他们切成部分染色。兔多克隆抗体从Abcam CDK9 1:1600稀释是免疫组织化学中使用(包含IHC)染色过程。TMA部分接受抗原检索使用目标检索解决方案(TRS)或三部曲系统。组织被3%过氧化氢5分钟然后孵化的主要抗体40分钟。Dako想象+双链接System-horseradish过氧化物酶合用于检测antibody-antigen交互。

2.4。包含IHC得分

TMA部分分析了在有执照的病理学家失明患者的结果。TMA幻灯片包含每个样本84名患者的研究。每个核心样品强度和染色的程度进行了分析。之前验证评分系统被用来结合染色强度(得分从1到3)和范围(1 - 100%)为一个包含IHC分数(20.]。染色程度然后转化成1和3之间的数字,1 = 0 - 50%,2 = 51 - 80%,3 = 81 - 100%。包含IHC当时按照下列公式计算:包含IHC =((1 +强度)/ 3)x程度。高表达的CDK9被定义为包含IHC分数大于3,而低表达被定义为包含IHC分数小于或等于3。

2.5。统计数据

本研究的主要目的是确定是否有任何差异之间的总生存期(OS)高肿瘤CDK9表达式和低肿瘤CDK9表达NACT后残余肿瘤。次要结果分析包括局部区域recurrence-free生存(探测器),遥远的正常生存(DFFS) recurrence-free生存(RFS)和风平浪静生存(EFS)。操作系统计算日期的手术病人死亡。局部区域复发被定义为一个活检证实的原发性乳腺癌复发在同侧乳房或胸壁,或在腋窝、内乳或锁骨上淋巴结。遥远的失败是定义为一个活检证实复发在任何其他位置。RFS计算时间从第一次复发手术日期。事件被定义为任何类型的患者复发或死亡。EFS计算时间从手术日期最早的事件。生存是使用kaplan meier方法估计,log-rank假定值被报道为生存曲线。单变量cox比例风险模型是适合操作系统,探测器,DFFS, RFS和EFS。 Additionally, time-dependent coefficient models were explored in cases where the hazards were not proportional over time. Chi-squared or Fisher’s Exact tests were used to compare pathologic response across expression groups, as well as CDK9 expression across subtype and receptor groups. Complete pathologic response was defined as no residual tumor in the breast and nodes following neoadjuvant chemotherapy.

3所示。结果

共有84名患者的肿瘤表达水平进行了分析使用TMA染色CDK9协议。在这一群人,6例(7.1%)表现出局部复发而23例(27.4%)表现出遥远的复发(表1)。附加的描述性信息包括病人生存在表是可用的1。组的84名患者,67名患者的样本分析CDK9表达式。不排除样本分析,因为他们没有在染色过程中保持不变,因此无法解释的病理学家。CDK9染色显示,36例(53.7%)有高表达的肿瘤,因此被列为CDK9积极而31例(46.3%)低表达肿瘤并列为CDK9负面的。平均随访时间为8.2年,范围是0.6 - 12.4年。

CDK9高表达与增加操作系统从第三年开始后第一次做手术的病人的。一个依赖于时间的协变量是适合Cox比例风险模型,以评估团体之间死亡的风险超出3年,这产生了一个统计上显著的风险比(人力资源):0.26,95%置信区间CI: 0.07 - -0.98, p = 0.046表所示2。然而,kaplan meier分析操作系统没有显示显著改善高CDK9水平(图1,p = 0.127)。

CDK9表达式是没有显示在DFFS产生重大影响,远程雷达,RFS和EFS(图2,p = 0.2854,图3p = 0.8518,图4p = 0.5369和图5分别为p = 0.4566)。CDK9表达没有明显与年龄有关,舞台,受体状态或乳腺癌亚型(表3)。

4所示。讨论

我们的研究旨在确定CDK9表达式后剩余乳房肿瘤NACT与临床结果的使用。我们发现高CDK9表达式能显著改善操作系统超过3年,这表明高CDK9表达式是一个长期的临床结果的良好的预后因素。我们还观察到一个趋势改善DFFS但不是探测器CDK9高表达与低CDK9表达式,表明CDK9表达式可能更遥远的衰竭的预后。有趣的是,我们没有观察到任何重要的分离操作系统的曲线在3年之前,这表明CDK9表达不是一个好的代理短期对治疗的反应。鉴于低CDK9表达导致自发的DNA损伤和遗传不稳定性增加,我们推测剩余乳房肿瘤患者低CDK9表达式可能更激进的疾病,从而预测较差。这个矛盾的观察与另一项研究调查CDK9新创胰腺腺癌患者肿瘤中表达,这表明高CDK9表达式更糟糕的临床结果(21),以及当前的调查作为癌症治疗的治疗目标(22- - - - - -25]。

此外,在高表达的观察CKD9少TNBC然后ER + / PR + / Her2neu -肿瘤,这不是统计学意义。由于低事件数据,无法进行多变量分析。未来的研究使用增加样本量可能产生更强大和更显著的结果。

研究的困难之一是肿瘤丧失核心TMA染色过程中样品。在染色过程中,一些样品成为脱离TMA幻灯片或折叠。这些特定的样本成为不可读的病理学家,不得不被排除在分析之外。这导致明显降低研究的样本量。未来的研究使用TMA染色过程应该尝试将多个核心样品每个病人。失去多个样本的概率较低,将使更多的病人数据进行分析。此外,可用的事件数量分析是很小的。尽管多变量分析是可取的,这不是可行的考虑到每个时间点低的事件数量。更长的随访期间可能需要获得一个合适的样本和示范意义的事件在我们的数据。增加病人队列也可以提供必要的额外的数据达到统计学意义。 Ultimately an independent cohort, as well as a randomized clinical trial, may validate the prognostic significance of CDK9 expression following neoadjuvant chemotherapy. One potential benefit of this work is that, with further validation, patients with low CDK9 expression in residual breast tumors following NACT may benefit from more aggressive adjuvant therapies, including enrollment in clinical trials of novel therapies.

5。结论

这项研究的结果没有显示出显著CDK9表达式之间的关系后剩余乳房肿瘤NACT和改善病人的远程雷达,RFS和EFS。改善生存的然而,我们的研究结果表明,3年之后,进一步验证,CDK9表达式可以有一个未来角色作为乳腺癌患者预后的生物标志物NACT后未能实现病理完全缓解。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

论文的内容完全是作者的责任,并不一定代表美国国立卫生研究院的官方观点。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

阿什利·j . Schlafstein艾莉森·e·威瑟斯,Soumon楼陀罗的贡献同样这个手稿,co-first作者。

确认

多个贡献者辅助设计和完成研究的各个方面。博士Shahrzad Ehdaivand从FFPE读取样品部分的侵入性肿瘤组织块识别区域TMA建设。TMA的发展实现了女士的帮助下Dianne亚历克西斯Winship病理学核心实验室。亚历克西斯女士也协助包含IHC协议开发和TMA幻灯片染色。TMA幻灯片CDK9被埃默里解释病理的家伙,扫罗博士哈拉尔族人。统计分析是由杰夫Switchenko博士。数据使用统计软件r .创建在这个出版研究报告支持部分由生物统计学和生物信息学共享资源Winship癌症研究所的埃默里大学和NIH / NCI P30CA138292 jC和NIH / NCI R01CA178999、R01CA178999S1和组织的布伦达Nease David s .于53237年。

引用

1. s . s . Mougalian p . r . Soulos基b . k . et al .,“使用新辅助化疗阶段我三世乳腺癌患者在美国,“癌症,卷121,不。15日,第2552 - 2544页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. t·布赫兹k·k·亨特,g·j·惠特曼,a . a,和g . n . Hortobagyi”对乳腺癌新辅助化疗:多学科的益处和风险的考虑,“癌症,卷98,不。6,1150 - 1160年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. p . Cortazar,张l, m . Untch et al .,“乳腺癌病理完全缓解和长期的临床受益:CTNeoBC汇集分析,“《柳叶刀》,卷384,不。9938年,第172 - 164页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. n . f . d . s . Paparidis m . c . Durvale和f . Canduri“新兴的照片CDK9 / P-TEFb: PITALRE以来20多年的发展,“分子生物系统,13卷,不。2、246 - 276年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. h·刘,c·h·赫尔曼,k蒋介石et al .,“55 k CDK9 associates的同种型Ku70和参与DNA修复,”生物化学和生物物理研究通信,卷397,不。2、245 - 250年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. t . c . Nepomuceno v c·费尔南德斯·t·t·戈梅斯et al .,“BRCA1网站招聘受损DNA依赖CDK9,”细胞周期,16卷,不。7,665 - 672年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. s . k . Radhakrishnan和a . l . Gartel CDK9在丝氨酸残基磷酸化p53 33岁,315年和392年,“细胞周期,5卷,不。5,519 - 521年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. k·斯托奇和n Cordes CDK9在辐射敏感度的影响,HNSCC癌细胞的DNA损伤修复和细胞循环,”国际肿瘤学杂志,48卷,不。1,第198 - 191页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. d . s . Yu和d·科尔特斯cdk9-cyclin k在维持基因组完整性的作用”细胞周期,10卷,不。1,28-32,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. d s, r·赵e . l .许et al .,“细胞周期蛋白依赖性激酶9-cyclin K函数复制应激反应,”EMBO报告,11卷,不。11日,第882 - 876页,2010年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. h·张,工程学系。公园,b . g . Pantazides et al .,“SIRT2指导复制应激反应通过CDK9脱乙酰作用,”美国国家科学与美利坚合众国,卷110,不。33岁,13546 - 13551年,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. a . Shchebet o . Karpiuk e . Kremmer d . Eick和s . a·约翰森”磷酸化通过细胞周期蛋白依赖性kinase-9控件ubiquitin-conjugating enzyme-2A函数”细胞周期,11卷,不。11日,第2127 - 2122页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. e·赛拉米j .高,美国Dogrusoz et al .,“门户cBio癌症基因组学:一个开放的平台,探索多维癌症基因组数据,”癌症的发现,卷2,不。5,401 - 404年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. j .高,b . a . Aksoy Dogrusoz,“综合分析复杂的使用cBioPortal癌症基因组学和临床资料,”科学的信号》第六卷,没有。269,p . l1 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. y李郭,c . Zhang et al .,“发现一个高度有效的选择性和小说CDK9抑制剂作为一种抗癌药物候选人,”生物有机和药物化学字母,27卷,不。15日,第3237 - 3231页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. p . Mitra R.-M。杨,j·萨顿、r·g·拉姆齐和t . j . Gonda”CDK9抑制剂选择性的目标通过结合雌激素受体阳性乳腺癌细胞抑制MYB mcl1的表情,“Oncotarget,7卷,不。8,9069 - 9083年,2016页。视图:谷歌学术搜索
17. 拉其普特人,n . Khera z郭,j .这位李,和c x妈,“抑制细胞周期蛋白依赖激酶9 dinaciclib抑制细胞周期蛋白B1表达和肿瘤生长在三阴性乳腺癌,”Oncotarget,7卷,不。35岁,56864 - 56875年,2016页。视图:谷歌学术搜索
18. 美国森古普塔,m . c . Biarnes诉c·乔丹,“细胞周期素依赖kinase-9介导转录放松管制的cMYC在乳腺癌内分泌治疗抵抗的关键决定因素,”乳腺癌研究和治疗,卷143,不。1,第124 - 113页,2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. d . l . Rimm r . l .营地,l . a . Charette d·a·奥尔森和大肠教务长,“组织建设的组织微阵列的放大,”实验和分子病理学,卷70,不。3、255 - 264年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. s . k . Maithel Coban, p . j . Kneuertz et al .,“微分表达式ERCC1在胰腺腺癌:高表达与肿瘤切除后复发和缩短生存,早些时候”《肿瘤外科,18卷,不。9日,第2705 - 2699页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. A.-L。Kretz m . Schaum j·里克特et al .,“CDK9是胰腺癌的预后标志物和治疗目标,“肿瘤生物学,39卷,不。2、2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. f·莫拉莱斯和a .佐丹奴的概述CDK9作为目标在癌症研究中,“细胞周期,15卷,不。4、519 - 527年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 开心的大笑,a . Damato l .阿尔法诺,a .佐丹奴”CDK9抑制剂在急性髓系白血病”,实验和临床癌症研究杂志》上,37卷,不。1,2018。视图:谷歌学术搜索
24. m·h·Rahaman m . Kumarasiri l . b . Mekonnen et al .,“针对CDK9:一个有前途的治疗前列腺癌的机会,“Endocrine-Related癌症,23卷,不。12日,T211-T226, 2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. y . a . Sonawane m·a·泰勒,j . v .拿破仑,s . Rana j . i孔特雷拉斯,a . Natarajan”为癌症治疗9细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂医药化学杂志卷,59号19日,8667 - 8684年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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