文摘

Fulvestrant (ICI 182780;ICI)被批准用于治疗晚期转移性乳腺癌,对其他内分泌疗法。浆果经常食用抗氧化剂,抗炎、抗癌潜力。在这项研究中,我们测试了两个浆果提取物的功效(Jamun-EJAE和红raspberry-RRE)及其生物活性化合物(Delphinidin-Del和鞣花acid-EA)抑制细胞增殖有或没有一次致死量ICI在各种乳腺癌细胞系。ICI-sensitive (LCC1 ZR75-1, BT474)和防(LCC9 ZR75-1R)细胞受到浆果提取物治疗(0.1 -100μg / mL)或次致命剂量的ICI (< IC₅₀剂量;1纳米敏感;1μ耐药细胞的M)。提取和德尔增强ICI的影响在敏感ZR75-1 BT474细胞主要添加剂的方式(以相对指数(RI) ~ 1)。在ZR75-1R细胞,EJAE和RRE协同增强ICI的影响(15 - 50%;;)。EA,剂量测试,没有任何重大影响的细胞系。最后,我们发现提取更有效地降低,生理相关实验剂量浓度比更高。

1。介绍

据估计,28%的新癌症病例是乳腺癌发病率(1]。这些新诊断的乳腺肿瘤,65 - 70%将表达雌激素受体α(ERα)[2]。雌激素的激活ER乳腺健康发展的需要。然而,它也可以参与发展的初级和二级由于改变乳腺癌ER信号(3,4]。ER的激活雌激素(E)促进细胞生长和存活的肿瘤细胞(5]。主要的呃α可以有效地接受抗雌激素阳性乳腺癌(AE)。AE药物可用于转移性,佐剂和chemopreventive设置和响应通常出现在ER + 70%的患者选择这种治疗(4,6]。目前,三苯氧胺(TAM)是使用最广泛的AE ER +乳腺癌。谭是一个选择性雌激素受体调节剂(SERM)作为拮抗剂ERα在乳房,导致减少在肿瘤细胞的增殖6]。然而大约1/3的肿瘤治疗TAM拥有新创或获得抵抗TAM,导致乳腺癌复发(7]。此外,TAM作为子宫内膜ER受体激动剂,在某些情况下在乳腺上皮细胞4,8,9]。

Fulvestrant (Faslodex,这里182,780;ICI)是一种甾族的AE设计没有受体激动剂与ER(活动10]。这里有辱人格的行为,和ER表达下调α在肿瘤细胞(10,11]。目前,ICI用于晚期乳腺癌的治疗,对其他内分泌疗法。它是有效的抗肿瘤和细胞系TAM但仍然表达ER (12]。然而,在诊所的时间响应(金龟子)和时间(TTP)进展ICI只有19岁,5.5个月,分别为(13]。发现策略提高乳腺癌细胞的敏感性ICI可能导致增加药物治疗的疗效。

有证据表明,健康饮食的变化可以防止40%的乳腺癌[14]。此外,数据开始显示,增加水果和蔬菜的摄入量最近被诊断出患有乳腺癌的病人可能降低乳腺癌复发的风险(15- - - - - -17]。这种预防效果很大程度上可以归因于不同的植物化学物质存在于水果和蔬菜。这些生物活性化合物已经被证明能够影响初级和二级乳腺癌的发展,影响细胞增殖、生存和死亡(3,18]。

红莓(RRB)是一种现成的水果,是我们的饮食的一部分,富含植物化学物质。它由化合物抑制多种癌细胞的增殖,包括乳腺癌[19- - - - - -21]。RRB cyanidin-3-sophoroside等含有高水平的花青素,cyanidin-3-glucoside, pelargonidin-3-glucoside,鞣花酸3,22]。在活的有机体内对老鼠的研究显示,红莓饮食增加DNA修复酶,减少氧化DNA损伤。鞣花酸、酚醛RRB组件,也显示了类似的效果23]。此外,茶多酚在RRB核受体可以抑制,生长因子,和激酶信号导致细胞循环逮捕、细胞凋亡、autophagy-associated细胞死亡(3]。覆盆子提取物(RRE)研究中使用之前已经标准化,抑制一些癌症细胞系的生长,包括乳腺癌、剂量依赖性的方式(22]。

Java李子,也称为Jamun水果,水果尤金尼亚jambolana林树,可以发现在佛罗里达和夏威夷在美国和世界上其他各种热带地区。Jamun水果提取物(EJAE)用于本研究之前已经标准化(24]。EJAE富含花青素包括矮牵牛配基二甲花翠素,飞燕草色素,花青色素,peonidin [24,25]。EJAE减少MCF7-aro(芳香化酶和ER的扩散α积极的)和mda - mb - 231 (ERα消极的)乳腺癌细胞系(24]。无论是EJAE还是RRE以前一直在ER +测试的,ICI-resistant细胞系。

克拉克和同事开发了一系列细胞系作为在体外AE模型电阻(6]。这些细胞系已广泛用于研究AE抵抗的机制。LCC系列最初来源于MCF7细胞,由LCC1 (E独立,E刺激和TAM和ICI敏感)和LCC9 (E独立,E刺激和TAM和耐ICI) (26,27]。最近我们有派生的另一个ICI-resistant变体ZR75-1细胞(ZR75-1R),这是由培养ZR75-1顺序增加浓度的ICI超过一年(a .兹瓦特和R克拉克,未发表的数据)。这些细胞系作为在体外模型代表一些ICI-resistant乳腺癌的表型。

在这项研究中,我们测试的影响Jamun (EJAE)和红莓(RRE)提取和个人酚醛树脂鞣花酸(EA)和飞燕草色素(Del) ICI-sensitive (LCC1、ZR75-1 BT474)和耐药(LCC9 ZR75-1R)细胞。我们假设在敏感细胞,浆果提取物及其化合物会ICI的协同效应,增加细胞增殖的抑制ICI的次致死量(< IC₅₀),在耐药细胞,提取resensitize细胞抑制ICI使他们更容易受到ICI-induced增长。细胞增殖测定在提取/化合物有或没有ICI。此外,分子标记的细胞凋亡、自噬和ER信号也分析理解的机制EJAE, RRE,和他们的化合物减少了这些细胞的生长。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

LCC1和LCC9细胞培养在修改IMEM(无酚红)含5% charcoal-stripped牛血清(E级< 10⁻¹²m .)ZR75-1, ZR75-1R, BT474细胞培养在修改IMEM含5%胎牛血清(E ~ 10水平⁻⁸m .)建立LCC1细胞已被先前描述(27]。LCC9 ZR75-1R细胞所派生的长期选择LCC1和ZR75-1细胞,分别按顺序增加浓度的ICI(描述26]。所有的细胞都是生长在湿润孵化器在37°C公司为5%₂。细胞融合然后收获70%用于细胞增殖和生物标志物分析。所有的细胞系检测为阴性支原体sp。污染。

2.2。浆果提取物和化合物

浆果提取物是从Navindra博士获得p Seeram(罗德岛大学,国际扶轮)和之前描述的24]。短暂,EJAE获得的顺序提取冻干Jamun水果在寒冷的己烷,乙酸乙酯,酸化甲醇(24]。它含有3.6%的花青素测量cyanidin-3-glucoside等价物。EJAE是相同的酸化甲醇提取称为Jamun水果提取(JFE),在之前的出版物(24]。RRE从红莓使用酸化甲醇作为提取描述(22]。鞣花酸从西格玛化学品购买(密苏里州圣路易斯和飞燕草色素Chromadex Inc .(欧文,CA)。

2.3。细胞增殖实验

细胞被镀在48-well板(5000个细胞LCC1 LCC9;10000 ZR75-1、ZR75-1R BT474)和孵化隔夜的附件。RRE EJAE, EA,德尔溶解在DMSO和ICI溶解在乙醇。DMSO溶液(0.1%)和乙醇(0.01%)作为适当的车辆控制单独或组合。所有细胞都接受1 - 100μ0.1 g / mL RRE, -100μ-10 g / mL EJAE,或0.1μM EA或Del有或没有ICI(1纳米和1μ米)。为敏感细胞株(LCC1、ZR75-1 BT474),细胞治疗1 nm ICI,是次致死量,远低于IC₅₀LCC1 ICI。耐药细胞系(LCC9 ZR75-1R),这里使用的浓度1 nM和1μm .所有组治疗24小时后第一次和反复治疗72 h 6 d时间点。细胞被沾25%甲醇、0.5%的结晶紫干,污渍溶解在100毫米柠檬酸钠在50%乙醇。吸光度测量在550海里。

2.4。治疗细胞和免疫印迹

细胞被镀在6-well板块(200000细胞)和孵化隔夜的附件。一个集中的每个植物化学的用于生物标志物分析。的浓度植物化学的最显著减少,各自的细胞株细胞增殖是用于治疗的细胞分子标记分析。使用相同的车辆控制如上所述。3 d后,细胞悬浮在radioimmunoprecipitation化验(里帕)缓冲区(50更易与L Tris-HCl, pH值7.4;150更易与L氯化钠;NP40 1%;Na-deoxycholate 0.25%;1毫米phenylmethylsulfonyl氟化物(PMSF);1毫米原钒酸钠; 1X Roche complete miniprotease inhibitor cocktail). Twenty–forty μg蛋白的分离使用sds - page凝胶,转移到硝化纤维膜,阻止TBS-T 5%的牛奶。这些膜与初级孵化(1:1000)其次是一个适当的HRP-conjugated二级抗体(1:5000)在室温下1 h。由化学发光反应产品可视化(Thermoscientific,罗克福德,IL)和量化微使用一个软件数量(Bio-Rad大力神,CA)。膜被剥夺,reprobedβ肌动蛋白(1:1000)的加载控制。治疗三次独立进行统计分析。

2.5。统计数据

数据表示为的意思标准误差。细胞增殖的数据来源于三到四个独立的实验中执行每个细胞株的一式三份。所有治疗都是归一化车辆控制和褶皱变化进行了计算。一个以及用于计算的差异意味着使用Microsoft Excel和值≤0.05被认为是显著的。相对指数(RI)也使用公式计算RI =(预期)/(观察)=,在那里和分别提取/化合物和ICI, (28]。RI = 1被认为是添加剂,< 1合作对抗与否,> 1存在的合作。

3所示。结果

3.1。响应的敏感和耐药细胞系的ICI治疗

在这项研究中,我们使用了三种模式的内分泌电阻测试浆果提取物和化合物的影响。LCC1细胞,最初源自MCF7细胞ER +,独立,和敏感的TAM和ICI。这也可以被认为是一个模型的芳香化酶抑制剂电阻(6]。进一步培养LCC1 LCC9细胞衍生的顺序增加剂量的ICI (26]。这些细胞ER + E独立和TAM和ICI cross-resistant。先前的研究显示的效果RRE和德尔MCF7细胞(22,29日]。我们还利用ZR75-1细胞,最初源自一个肿瘤对TAM (30.]。这些细胞ER +, prg +, TAM, ICI敏感和p53的表达低水平(31日,32]。ZR75-1R细胞来自ZR75-1细胞对LCC9细胞通过一个类似的过程。他们也cross-resistant TAM和ICI(数据没有显示)。bt - 474细胞属于腔内B分子分类以及ZR75-1细胞(33]。这些细胞ER +, prg +和她2过表达(32,33]。据我们所知,这是第一个研究来评估在LCC1浆果提取物的影响,LCC9 ZR75-1, ZR75-1R, bt - 474细胞。这也是第一个研究来评估浆果提取物和植物化学物质的影响ICI-resistant细胞系。

所有ICI-sensitive细胞略有增长抑制1 nM ICI (10 - 30%)。6 d后这种效应是最突出的。LCC1细胞,6 d ICI治疗导致细胞增殖减少30%相比,车辆治疗(0.705;值= 0.0003)。ZR75-1细胞1 nM ICI没有造成显著减少细胞增殖在3 d(褶皱变化= 0.91),但造成减少20%在6 d ()。BT474细胞,ICI治疗(1纳米)造成了13%和25% ()在细胞增殖减少3和6 d,分别。自增长的抑制作用(< IC不到50%₅₀),我们认为1 nM ICI次致死量敏感细胞。另一方面,耐药细胞没有增长抑制ICI浓度高达1μm .因此,我们测试了提取的影响,化合物resensitize LCC9和ZR75-1R两种不同浓度的ICI(1纳米和1μ米)。

3.2。浆果提取物和化合物对ICI-Sensitive细胞的影响

3.2.1之上。在LCC1细胞雌激素效应

LCC1细胞ER +和响应增加雌激素的刺激增长。我们发现所有的浆果提取物和化合物有雌激素影响LCC1细胞显示中度显著,存在剂量依赖的相关性,增加细胞增殖6 d治疗后(数字1(一)-1(d))。此外,这种效应被发现以来ER-mediated cotreatment LCC1细胞与ICI废除提取/化合物(数据的影响1(一)-1(d))。这些影响是6 d后更加突出而不是3 d治疗。值得注意的是,德尔显著增殖影响LCC1为0.1μM, 1μ10 M,μ1.26米的褶皱变化(),1.33 (),2.04 (车辆价值相比),分别为(1.00)(图1(c))。6 d治疗后,浓度为0.1μ米和1μEA的M显示无意义的增殖作用,但10μEA的M细胞增殖(图显示没有变化1(d))。这表明有一个特定范围的浓度在EA可能雌激素的特性。

3.2.2。在ZR75-1和BT474细胞生长的抑制作用

而浆果提取物和化合物有显著增长促进影响E-independent LCC1细胞,他们表现出剂量依赖性ZR75-1但适度增长的抑制效应和BT474细胞生长在E-sufficient介质(数字1(e) -1(左))。EJAE,剂量依赖性抑制ZR75-1细胞的增殖(图6 d后治疗1(e))。这种效应被cotreatment ICI但显著增强只在100年μ克/毫升EJAE (;国际扶轮= 0.90)。在BT474细胞,观察变量响应EJAE治疗(图1(我))。没有协同或添加剂影响后添加1 nM ICI(图1(我))。然而,必须指出的是,低剂量时效果更好结合ICI建议剂量在生理上可实现的范围可达到一个添加剂和药物治疗效果。

低剂量RRE (1μg / mL;22%)比高剂量更有效(100μg / mL;3 d后13%)ZR75-1细胞。然而,6 d,只有100人μg / mL RRE显示细胞增殖减少20%(图1(f))。这种效应略修改为26%的1 nM ICI。在1和100年BT474细胞μg / mL RRE显示细胞增殖没有ICI(减少≥15%)3 d治疗后。然而,6 d后,RRE仅显示剂量依赖性减少15 - 28% (10点μg / mL)(图1(j))。的ICI稍微增强这种效果(图1(j))。然而,RI ZR75-1 0.86和0.89在BT474表明高剂量(≥100μg / mL) RRE和ICI可能得罪对方的作用的趋势。

在ZR75-1细胞中,我们观察到只有28%和20%抗增殖效果在最高剂量的德尔(10μ米),分别在3和6 d (NS;图1(g))。然而,一个线性剂量反应和协同效应观察当ICI添加(RI≥1.0) (NS;图1(g))。BT474细胞,3 d后,德尔的最低剂量是最有效的抑制增殖(减少15%;为0.1μ1和10 M和≤5%μ米)。一个累加效应也明显1 nM ICI (RI = 1.0;减少22% 0.1μ米德尔+ ICI和ICI单独或其他≤13%剂量的Del + ICI)。6 d后,所有剂量的德尔(0.1μ打光最后一μ米)实现%减少ICI的存在显示RI。= 1.0,这表明添加剂(图1(k))。EA治疗没有明显改变要么细胞系的增殖剂测试有或没有ICI(图6 d后治疗1(h)和1(m))。

3.3。浆果提取物和化合物对ICI-Resistant细胞株的影响

3.3.1。提取/化合物LCC9细胞的影响

在LCC9细胞,独自EJAE (1μg / mL)引起了温和,但意义重大,减少细胞增殖在3 d (19%;)。然而这种效果并不是出席6 d(图2(a))。EJAE没有明显resensitize LCC9细胞要么1纳米(图2(一))或1μM ICI在任何浓度测试(数据没有显示)。在6 d, RRE (10μg / mL)增加LCC9细胞的抑制反应1 nM ICI (33%;NS。国际扶轮= 1.34)(图2(b))。然而,我们没有观察到这种协同效应在1μM ICI(数据未显示),这表明特定的细胞反应了在特定剂量的药物(ICI)和提取(RRE)。德尔就没有在3或6 d对细胞增殖的影响。在1纳米ICI和0.1μ米德尔,诱导细胞增殖(35%在3 d)。然而,并没有观察到这种效应在6 d(图2(c))。独自RRE (100μ无意义的g / mL)造成28%和18%减少3和6 d,分别。这种效应并不改变后,ICI(1纳米)3 d(27%)或6 d (11%)。EA也有显著增长抑制影响LCC9细胞后3 d(数据未显示)或6 d治疗,也不显示的能力resensitize LCC9细胞1 nM ICI(图2(d))。

3.3.2。提取/化合物ZR75-1R细胞的影响

ZR75-1R细胞整体更容易比LCC9 EJAE和RRE细胞的影响。3 d后,EJAE独自住在100年μ和0.01克/毫升μg / mL显示细胞增殖减少20%和35%,分别。这表明两相的反应与最高和最低剂量引起类似的效果。然而,6 d后治疗,减少持续只有在最高剂量(图2(e))。在1纳米ICI, EJAE (100μg / mL)显示,细胞增殖减少(35%;国际扶轮= 1.23)。这种效应是EJAE略大于看到(图2(e))。然而,在1的存在μM ICI,我们观察到一个线性剂量反应,10,100μ克/毫升EJAE细胞增殖减少15%,15%,和40%,分别为每个治疗(RI≥1.2)(图3(一个))。

一个有趣的RRE剂量反应在ZR75-1R倒u曲线观察细胞。在6 d,低剂量(1μg / mL和10μg / mL)显示增殖效果,而高剂量(100μg / mL)显示细胞增殖减少22%(图2(f))。添加1 nm ICI不会改变这种效果(图2(f))。然而,在1的存在μM ICI, RRE显著和剂量依赖性抑制ZR75-1R增长25 - 50% (在100μg / mL;国际扶轮≥1.4)(图3 (b))。两个1μg / mL和10μg / mL RRE有高度协同效应的存在1μM ICI RI值为1.98和1.71,分别(图3 (b))。

德尔治疗ZR75-1R没有任何明显的变化3或6 d治疗后细胞增殖有或没有1 nM ICI(图2(g))。EA治疗ZR75-1R没有显示细胞增殖的变化(图2(h))。然而,EA 1 nM ICI显示协同治疗剂量反应后3 d为1μ米和10μ显示15% (RI。= 1.443)和20% (RI。分别为= 1.555)减少细胞增殖。这表明EA可以在3 d resensitize细胞ICI。然而,这种反应是没有看到(图6 d EA后治疗2(h))。

3.4。浆果提取物对雌激素,孕激素受体和细胞死亡标记

为了了解浆果提取物和它的组分的分子机制导致LCC1和LCC9细胞观察到的效应,我们评估了这些细胞治疗后的各种分子标记水平与浆果提取物/复合单独或在这里。从化合物的抗增殖效果明显在3 d,我们选择这个时间点来研究分子机制。同时,我们特别选择了那些提取/化合物的浓度产生最大的减少细胞增殖6 d(数字1(一)-1(h))。像预期的那样在LCC1细胞,EJAE Del单独显示,雌激素反应的观察增加3 - 2.5倍,分别在孕激素受体(PGR)表达(图4(a))。RRE PGR表达式和EA也增加大于2倍。这种增长是完全逆转cotreatment ICI(图4(a))。有趣的是,EA和德尔也提高了ERα水平(图4(b))。我们也评估分子标记的细胞死亡(PARP劈理),自噬(p62 Beclin 1光chain-3 (LC3)),和水平的凋亡b细胞淋巴瘤(BCL)家庭成员(BCL2, BCLw, BCLxl)。之前它已经表明,结合击倒BCL2和BCLw导致resensitization LCC9细胞TAM和ICI (34]。BCL2也与Beclin 1抑制自噬[35]。

虽然我们观察到明显增加PARP表达式仅靠EA和减少水平ICI治疗后各提取物,我们没有看到乳沟PARP的治疗(图4(c))。EJAE、RRE和德尔造成2倍LC3II水平感应,逆转的ICI,除了EJAE(图4(f))。EJAE + ICI造成3.3倍的感应LC3II LCC1细胞(图所示4(f))。另一方面,EJAE、德尔和EA p62的水平不同程度地增加(1.4到2.5倍;图4(d))。正如预期的那样,这里治疗p62水平降低了60%,表明积极的自噬。EJAE没有改变这个响应;然而,RRE、EA和德尔逆转减少。RRE和EA治疗显著增加的水平Beclin-1(图4(e))。EJAE诱导Beclin-1水平在ICI的存在(图5倍4(e))。提取的影响/化合物BCL2-family成员既不统一也不重要(数字4(g) -4(j))。EA bcl - 2的表达增加>没有或ICI(图1.5倍4(g))。BCLw BCLxL表达式是由EA和德尔和EJAE + ICI(数字4(h)和4(j))。

在LCC9细胞,EJAE诱导PGR水平在不改变ERα水平(图5(一个))。EJAE也诱导Beclin-1水平,存在和缺乏ICI。EJAE + ICI治疗LC3II水平增加了13.7倍/车辆或ICI-only治疗,表明EJAE可能会增加在LCC9细胞自噬小体的形成。然而,我们没有看到一个基线增加LC3II ICI-only治疗。我们没有观察到PARP解理或BCL2水平的显著变化。另一方面,RRE + ICI,德尔,和德尔+ ICI显示全面增加所有BCL2-family蛋白质的表达(BCL2、BCLw BCLxl),以及Beclin-1。RRE + ICI治疗和德尔增加p62表达式2 - 2.5折表明自噬的抑制。

4所示。讨论

在这项研究中,我们测试是否浆果提取物/化合物协同亚致死的剂量的ICI ICI-sensitive细胞系和增加药物反应。我们还测试了是否cotreatment ICI-resistant浆果提取物逆转耐药表型的细胞,从而导致细胞死亡的存在增加了ICI。

我们使用多个细胞系具有不同的分子特征,代表ER +肿瘤患者人群中常见。ICI-sensitive细胞可分为腔的使用(HER2 - ER +, prg +;LCC1)和B (ER +, prg +, HER2 +;ZR75-1和bt - 474)亚型(33)和耐药细胞来源于同一亚型(LCC9 LCC1和ZR75-1R ZR75-1)。进一步,这些细胞也培养在不同的媒体与LCC1 LCC9 E-deficient介质(< 10⁻¹²M E)和所有其他细胞系E-sufficient介质(~ 10⁻⁸M E)。此外,我们测试了两个浆果提取物(EJAE和RRE)和他们的代表的化合物(Del和EA)。这个复杂的设计是故意选择模仿乳腺癌的复杂性,因为它在诊所。在诊所里,我们可能会看到病人,pre - E(足够的)和绝经后不足(E), ER +肿瘤的亚型(腔的A和B)将接受ICI。此外,饮食建议将涉及整个水果而不是纯粹的组件。所以我们选择整个浆果提取物两种不同品种的浆果。最后,我们从每个浆果提取物包括单个组件来确定食物的贡献矩阵。

细胞增殖的研究结果非常简单,回答这些问题。浆果提取物和化合物协同亚致死的剂量的ICI(1纳米)导致ICI-sensitive细胞株细胞增殖的抑制作用。浆果提取物/ bt - 474细胞化合物是最有效和最有效的LCC1细胞。提取的影响/化合物单独改变很大程度上使用的剂量和细胞系的类型。我们观察到,提取和化合物有雌激素影响LCC1细胞生长在一个E-deficient介质(数字1(一)-1(d))。这种效应是显著的和剂量依赖EJAE和德尔(数据1(一)和1(c))。然而,同样的提取/化合物显示剂量依赖性抑制ZR75-1和bt - 474细胞增殖的细胞生长在E-sufficient介质(数字1(e) -1(左))。这种效应类似于观察TAM,刺激下E-deficient MCF-7细胞生长,抑制增殖E-sufficient条件下(Aiyer,未发表的结果)。TAM的SERM活动报道文献也表明这种效应(6,36]。许多的多酚类化合物包括那些存在于浆果已报告显示SERM-like效应(3]。此外,它们也显示选择招聘辅活化因子和抑制因子的存在剂量依赖的相关性,规定这些化合物是否会作为雌激素或抗雌激素(3,37]。有迹象显示这种效应在我们的研究中。例如,RRE显示了轻微的雌激素效应(增加细胞生长)1μ10 g / mL,而抑制增长和100年μ克/毫升(图1(g))。不管他们的单独影响,所有提取/测试的化合物显示不同程度的添加剂或协同响应ICI在敏感细胞。

选择的细胞系的另一个重要区别是HER2状态。bt - 474和zr - 75细胞是HER2 +,但LCC1细胞没有6,33]。尽管所有的细胞系具有呃,这个受体的本构水平差别很大在这些细胞系在基线(Aiyer,未发表的结果)。因此,浆果提取物/化合物的微分效应出现在各种细胞系可以部分解释这些差异。许多贝瑞化合物已被证明取消激活酪氨酸激酶信号,可以抑制HER2-mediated对细胞增殖的影响(了3])。很明显,在LCC1细胞,增殖反应看到ERα介导的。有一个extract-induced PGR水平增加(图4(一)),这表明一个经典的基因组反应由于ER激活(38]。此外,提取物治疗似乎稳定ERα水平与ER的ICI-mediated退化α在LCC1细胞(图4(b))。这种影响长期ICI-treatment和阻力的影响进一步发展必须探索。

ICI-resistant细胞,提取和纯化合物的细胞低剂量resensitized ICI(1海里)(数据2(一)-2(h))。耐药细胞继续生长在这里的存在为1μM和因此可能对许多chemopreventive代理测试在低剂量。然而,EJAE和RRE浓度测试协同1μM ICI导致显著减少耐药细胞生长(图(ZR75-1R)3)。本研究的一个限制是缺乏明确的机械细节如何浆果提取物和化合物减少细胞生长。我们研究了诱导自噬使用p62 LC3II, Beclin 1替代标记。许多化合物存在于浆果可以诱导autophagy-associated细胞死亡(3,39- - - - - -41]。然而,内分泌方面的阻力,自噬可能是一种生存机制,抑制自噬,或结合BCL2 + BCLw coinhibition, resensitizes AEs的耐药细胞34]。有一些证据表明RRE,德尔,EA可能干扰LCC1细胞自噬。他们扭转ICI-induced p62退化不同程度上(图4(d))。然而,变化在LC3II Beclin - 1水平反驳这一观点。很明显,EJAE±ICI持续增加LCC1和LCC9细胞自噬。因为我们没有直接计算LC3 punctae形成,数据是不确定是否浆果提取物/化合物抑制自噬和确切的机制。然而,我们只分析了这些标记LCC1和LCC9细胞,提取的影响/化合物最小。标记在其他细胞系的评估正在进行中,应该提供一个清晰的理解的各种机制浆果提取物/化合物增加对ICI细胞系的响应能力。

其它浆果提取物和化合物的研究也得出类似的结果,但具体机制有所不同。先前的研究表明,该集成电路₅₀的RRE MCF7细胞生长在E-sufficient介质是190μg / mL 48 h (22]。这是类似效果的ZR75-1和BT474细胞,生长在类似的情况下,在这项研究中。EJAE已经检测在乳腺癌细胞系如MCF7-aro和mda - mb - 231集成电路₅₀27岁,40μ在72 h (g / mL,分别24]。Aqil et al。25)表明,水解提取的Jamun果肉是有效减少非小细胞肺癌细胞株的生长A549 IC₅₀59岁μ在72 h g / mL。这些研究通常报道提取/化合物的细胞毒性效应在72 h。相比之下,我们的数据介绍了影响72 h (3 d)和6 d。看到许多3 d效果的不抬在6 d。这可能是由于克隆细胞扩张的细胞最初对chemopreventive代理。因为饮食生物活性化合物对肿瘤细胞的影响是一个长期过程,2或3 d细胞增殖的研究中,通常表现为大多数这些代理,可能导致这些化合物的有效性的群体。

总之,使用单独的分析,我们已经表明,浆果提取物和化合物可以增加的细胞死亡反应ICI-sensitive乳腺癌行次致死量的ICI(1纳米,< IC₅₀剂量)。进一步,我们还表明,该反应主要是添加剂,而非协同。此外,浆果提取物resensitize ICI-resistant细胞ICI治疗显示协同反应,尤其是在高剂量(1μ米)。最后,我们发现,提取更有效地降低,生理相关剂量比更高一些细胞系实验剂量。这些结果表明,浆果提取物和化合物可以与ICI在乳腺上皮细胞改变药物反应。进一步在活的有机体内研究是必要的对于这种food-drug交互响应ICI的影响治疗和耐药的发展。

作者的贡献

d . r . Woode和h s Aiyer贡献同样这项工作。d . r . Woode负责执行实验过程、数据分析和写作。h . s . Aiyer负责最初的想法,研究的总体规划和监督,分析数据,撰写和编辑。

确认

d . r . Woode是由美国国立卫生研究院的教育组成部分奖CA149147 r·克拉克。h . s . Aiyer资助的博士后奖学金奖09 a123来自美国癌症研究所,华盛顿特区,在部分由美国国立卫生研究院奖CA149147 r·克拉克。