MRP8 / ABCC11表达式是由地塞米松在乳腺癌细胞和孕激素受体状态在乳腺肿瘤有关

文摘

磷酸腺苷磁带多药耐药性蛋白8 (MRP8 / ABCC11)介导抗癌药物的排泄。ABCC11信使rna和蛋白质水平增强敏捷(地塞米松)和食物(孕激素)MCF7(孕激素受体(PR)积极)而不是mda - mb - 231 (PR阴性)乳腺癌细胞。这表明PR-signaling通路参与ABCC11监管。然而,pregnenolone-16α腈(GR拮抗剂)和克霉唑强烈和适度降低ABCC11 Glucocortocoid受体表达水平——(GR)和孕烷X受体(PXR)阳性MCF7细胞而不是mda - mb - 231细胞(GR -和PXR-positive)。因此,GR-signaling通路参与不能排除在ABCC11监管MCF7细胞。此外,ABCC11水平呈正相关的公关状态绝经后患者乳房肿瘤从两个独立的群体。因此,在乳腺肿瘤的子类(雌激素受体(ER)负面/ pr阳性),ABCC11的表达水平升高可能改变ABCC11抗癌基质的敏感性,特别是在治疗组合与敏捷。

1。介绍

磷酸腺苷的成员中盒(ABC)运输机总科,MRP8 / ABCC11蛋白质多药耐药性(8)是一个完整的ABC转运蛋白与抗甲氨蝶呤和fluoropyrimidines,两类代理广泛用于乳腺癌治疗(1,2]。ABCC11成绩单是在雌激素受体(ER)阳性乳腺癌[3]。水表示,ABCC11蛋白质可能发挥重要作用吸收、分布和消除它的基板(4]。ABCC11-mediated运输抗癌药物,加上其表达水平hormonally-regulated乳腺组织,表明泵表达式可能受外源性物质。地塞米松(DEX),一个强有力的抗炎因子,已经发现治疗临床应用十分广泛的多样化的条件下,从癌症治疗相关的疾病和哮喘(5]。敏捷是一个著名的激活许多信号转导分子基因调控通路。它经常涉及核受体,包括孕烷X受体(PXR),糖皮质激素受体(GR)和孕激素受体(PR) (6]。这项工作的目的是确定是否DEX治疗可能导致ABCC11蛋白的表达水平变化在乳腺癌MCF7细胞,一个endocrine-related细胞模型。

2。材料和方法

2.1。化学品和细胞系

敏捷、掠夺、克霉唑和孕烯醇酮16α腈(PCN)购买的西格玛奥德里奇(法国)。试剂盒RNA提取设备,小鼠moloney白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT) Taq DNA聚合酶,完成high-glucose杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM), L生产的谷氨酰胺和penicillin-streptomycin Gibco(法国),胎牛血清,潘生物技术GmbH (Aidenbach,德国)。为了避免干扰类固醇出现在古典媒体,细胞系首先清除DMEM无酚红的4天,补充3% steroid-depleted, dextran-coated charcoal-treated,胎牛血清(DCC介质)。文化媒体要么被用于各种分子的存在与否中描述Honorat et al。(2008)3]。我们使用(pr阳性,雌激素受体阳性,GR-positive PXR-positive) MCF7和(pr阴性、er阴性GR-positive和PXR-positive) MDA-MB231细胞稳定转染空pBK-CMV和pSG5-plasmids(称为pSG5-MDA-MB231)。最后细胞系来源于mda - mb - 231细胞,显示一个关于公关的类似表型和ER状态。

2.2。乳房肿瘤样本

所有试验程序进行符合法国法律、法规,经伦理委员会批准。六十原发肿瘤病人,没有治疗在手术之前,收集从病理部门的绝经后妇女Val d 'Aurelle癌症中心(法国蒙彼利埃)[7]。浸润癌的恶性肿瘤是根据组织学得分预后Scarff-Bloom-Richardson系统(8]。雌激素受体阳性的状态是在蛋白质水平取决于radio-ligand绑定分析(截止水平积极设定在10 fmol /毫克的蛋白质根据世界卫生组织的打字系统),证实了一个ER定量rt - pcr检测。公关状态被绑定在蛋白质水平测量试验(如前所述)(9]。

同时,规范化数据从245年独立的乳房肿瘤(Bittner_Breast的研究)从地理中提取的网站。ABCC11表达水平进行了分析在乳腺肿瘤的公关和ER临床状态显示(主要是由免疫组织化学(包含IHC))。

2.3。实时定量rt - pcr(存在)

总信使rna提取和存在进行所述Honorat et al。(2008)3]。

2.4。免疫印迹和量化

通过免疫印迹分析蛋白表达分析如前所述在[3]。使用ImageJ微执行软件。

2.5。统计分析

数据分析统计意义使用曼惠特尼的测试或学生的以及。差异与值被视为具有统计学意义。

3所示。结果与讨论

ABC转运蛋白的表达水平受到外源性物质的高度管制,包括雌激素、掠夺和敏捷2]。这些规定可能控制许多材料的可用性,包括抗癌药物,通过增加或减少他们从细胞消除。他们可以影响细胞对基质。因此,我们敏捷调控通路的特点ABCC11在pr阳性MCF7细胞。第一次ABCC11表达水平显示时间的方式增加了5μM敏捷,24小时曝光后ABCC11更高水平的趋势,和最大显著诱导后48 - 72 h(图1(一))DEX-treated细胞相比vehicle-treated细胞。此外,敏捷强烈增强ABCC11 mRNA水平剂量依赖性的方式(图1 (b))。ABCC11信使rna含量略调节后48小时接触敏捷很低浓度(0.001μ米,图1 (b));更高的浓度(0.05μ米)然而被要求达到最大,显著的感应。的分子机制ABCC11规定被证明进一步探讨,在MCF7细胞生理公关配体学监监管ABCC11表达式一样敏捷,敏捷和食物没有修改ABCC11表达在PR阴性psg5 - mda - mb - 231乳腺癌细胞。食物在15μ米诱导ABCC11MCF7细胞基因表达,而没有规定在pr阴性psg5 - mda - mb - 231细胞(图2(一个))。在协议,通过免疫印迹,敏捷和掠夺ABCC11蛋白表达增加,至少2倍,相比汽车控制(图2 (b))。额外的乐队,观察到低于116 kDa,可能是由于蛋白水解降解ABCC11所描述的Bortfeld et al。4]。敏捷可以激活PR-signaling通路(6,10]。因为ABCC11监管由敏捷和掠夺只发生在pr阳性MCF7细胞而不是在pr阴性psg5 - mda - mb - 231细胞,我们假设的影响敏捷和掠夺ABCC11表达式可以部分PR-signaling通路有关。有趣的是,由在网上分析人类的ABCC11启动子区域(5000−,chr16: 38685979 -),我们发现两个progesterone-response元素(前)。

基于敏捷的观察,ABCC11表达水平调节,我们下一个评估ABCC11表达式是否也受其他配体的GR和PXR。(PCN称为弱hPXR活化剂以及基督教民主党作为一个潜在的GR拮抗剂(11- - - - - -13]。PCN下午5μ米和10μM强烈ABCC11 MCF7细胞中表达下降,mda - mb - 231细胞没有影响(图3)。尽管mda - mb - 231细胞GR表达,不影响敏捷或掠夺ABCC11表达式(图上观察2(一个))。PCN的违约,敏捷和掠夺效应通过mda - mb - 231细胞GR可能直接关系到“细胞上下文”。事实上,GR可能通过各种机制调节基因的转录:协同活动DNA转录因子结合在其他网站配合ligand-activated GR glucocorticoid-response元素绑定到一个共识(GRE);干扰其他转录因子的行为(例如,AP-1和NF -κB)通过蛋白质-蛋白质之间的关系,不需要GR结合DNA;通过必要的交互和压迫或刺激GR与其他转录因子都束缚在所谓的复合格蕾丝(14- - - - - -16]。敏捷已经证明,增加c-fms乳腺细胞的转录和蛋白质水平(SKBR3和BT20),但不是在别人(MCF7) [17]。因此,MCF7细胞,GR-signaling的参与途径不能完全排除,是建议的GRE考试的主题显示在网上分析人类的ABCC11启动子区域(5000−)使用Genomatix软件。

最后,我们使用克霉唑,一个强大的人类探索PXR信号通路PXR配体。在5 - 10克霉唑μ没有产生重大影响ABCC11表达MCF7细胞并没有影响ABCC11表达MDA-MB231细胞(图3)。此外,对掠夺与PXR-signaling通路直接交互,PCN和敏捷相对较弱的人类与克霉唑相比PXR的活化剂。尽管PCN弱减少ABCC11表达PXR-positive MCF7细胞,没有监管效应观察PXR-positive mda - mb - 231细胞。我们可能会建议PXR-signaling途径可能不是直接参与ABCC11监管由敏捷和掠夺。ABCC11表达的总体结果表明,监管通过掠夺和敏捷至少部分与公关相关信号通路。

目前,pr阳性乳腺癌肿瘤被认为是地位的一个重要指标反应的可能性内分泌制剂(18]。大约三分之二的乳腺癌表达雌激素受体α(ERα),其中一些被pr阴性。公关没有显著相关,那么乳房肿瘤的分化表型(18]。基于我们的在体外观察,我们评估是否有相关性ABCC11表达式和公关在60乳腺癌的绝经后妇女的地位(完全描述3,7])。在这个地方的病人,公关和ER地位被绑定在蛋白质水平评估分析(7]。明显高于ABCC11 mRNA水平观察pr阳性肿瘤比pr阴性样本(ABCC11水平高出约6倍比pr阴性组pr阳性组;曼Withney的测试(表1))。确认这些观测,我们提取并分析ABCC11表达式的规范化数据245年乳腺癌肿瘤从一个独立队列(Bittner_Breast的研究从地理网站)。我们只保留乳房肿瘤的公关和ER的临床状态,主要由免疫组织化学(包含IHC)表示。我们验证了一个积极的公关状态和ABCC11表达水平之间的联系在这大群乳腺肿瘤(表1;)。

我们以前观察到显著高ABCC11信使rna水平在乳腺癌肿瘤具有高水平的ERα相比具有低水平(3]。我们验证积极联系ABCC11 ER表达水平和状态Bittner乳腺癌组(;er阴性肿瘤;;雌激素受体阳性肿瘤;曼惠特尼的测试)。我们决定开展肿瘤显示ER地位的子类。在我们的肿瘤组中,ABCC11 mRNA水平区别乳腺肿瘤根据公关状况才发现er阴性患者的重要地位。ABCC11表达水平高,“碳足迹”约11倍ER比ER−−/公关+子群/公关−病人群(;曼惠特尼的测试)。虽然没有达到显著差异(),一个趋势在Bittner er阴性组的发现乳房队列。中值比率公关−/公关+大约是(表9倍1)。这可能是直接关系到小数量的ER−/ PR +肿瘤()。因为这个再分配是代表的临床情况(雌激素受体阳性状态经常与PR阳性状态),这充分证明有限数量的观察ER−/公关+肿瘤临床研究队列中。

相比之下,在这两个军团,与雌激素受体阳性肿瘤状态没有任何ABCC11表达水平之间的相关性和公关状态(表1)。这表明在雌激素受体阳性乳腺癌肿瘤,ER地位主要是相关的ABCC11信使rna水平,而在er阴性乳腺癌肿瘤ABCC11表达水平与公关状况相关联。

4所示。结论

目前,乳腺癌化疗常常包括研究者用(5 fdump代谢的细胞,这是一个ABCC11衬底)。有趣的是,公园等人研究了ABC转运蛋白基因表达之间的关系和化疗反应在早期乳腺癌病人连续每周紫杉醇/选举委员会(研究者用、表柔比星和环磷酰胺)新辅助治疗。几个ABC转运蛋白包括ABCC5和ABCC11显示显著增加表达残留病(19]。完全,公关和ABCC11之间的协会,在乳腺肿瘤的一组中较低的ER的表达,强调ABCC11如何构成一个假定的研究者用抗癌抵抗的标志。

此外,通过改变ABCC11表达水平、敏捷、佐剂的抗癌药物,可能大大有助于chemo-resistance ABCC11基质的机制。ABCC11表达水平高pr阳性乳腺癌肿瘤中表达较低的ERα可能导致减少对化疗的敏感性组合包含研究者用。未来的工作是需要调查这一点。

确认

这项工作得到了INSERM大学(590年UMR)和里昂1,和由该协会de la矫揉造作的靠联赛le癌症(弧4007)和国家靠le癌症(运动队labellisee联赛2009年和2010年的资助拉西de la德龙)。m . h .收件人的博士奖学金法国联赛国家靠le癌症。作者感谢Val d 'Aurelle医院提供乳房肿瘤样本。作者感谢同事Catherine Grenot Drs安妮Nies,迪特里希开普勒(德国海德堡):有益的合作。

引用

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