玉米烯酮的合成免疫原和抗体特征进行比较分析

文摘

背景。本研究旨在探讨玉米烯酮(禅宗)免疫原的合成方法,免疫原性,抗体特征和免疫测定方法的建立奠定基础禅宗单残留和禅总残留及其类似物。方法。基于分子结构和活跃的禅宗,肟活性酯(探索),冷凝混合酸酐(CMA)、甲醛(FA)、较大影响,缩水甘油醚方法(12)被设计并用于免疫原(ZEN-BSA)合成。免疫原是由红外(IR)、紫外光谱(UV)和凝胶电泳(sds - page),然后使用免疫Balb / c小鼠准备禅宗多克隆抗体(禅宗帕布)。禅宗帕布的滴度和灵敏度是由间接的非竞争性ELISA (inELISA)和间接竞争ELISA (icELISA),分别评估了其特异性交叉反应试验(CR)。结果。ZEN-BSA成功合成,禅宗对BSA的分子绑定比例17.2:1(探索),14.6:1 (CMA), 9.7: 1 (FA)和8.3:1(12),分别。禅宗的滴度最高inELISA帕布的每组1:(6.4×10³)(探索),1:(3.2×10³)(CMA), 1: (1.6×10³)(FA)和1:(1.6×10³分别)(12)。50%抑制浓度(IC50) icELISA禅宗的每组是11.67μ16.29 g / L(探索)μ20.92 g / L (CMA)μ和24.36 g / L (FA)μ分别g / L (12)。禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA(探索)和ZEN-BSA (CMA)类广泛的特异性禅宗及其类似物。禅宗的CRs帕布α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL ZON分别为36.53%,16.98%,64.33%,20.16%,和10.66%,分别。禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA(12)对禅宗抱有很高的特异性。禅宗的CRs帕布及其类似物都不到1.0%。结论。本研究证明了禅宗的类broad-specificity抗体的制备及其类似物可以通过免疫动物免疫原ZEN-BSA准备的探索方法,虽然非常具体的制备抗体可以通过免疫动物免疫原ZEN-BSA准备的FA方法。这些发现为免疫测定奠定物质和技术基础的禅宗单残留和禅总残留及其类似物。

1。介绍

玉米烯酮(禅宗)是一种有毒次生代谢物生产属的成员镰刀菌素和禅宗的主要污染谷物,包括玉米、小麦、大麦、大米、燕麦或含有这些谷物的食物,和它的化学名称是(E) - (S) 2, 4-dihydroxy-7-methyl-7, 8, 9, 10, 13日14-hexahydro-12h-6-oxa-benzocyclotetradecene-5 11-dine,也称为f - 2毒素。在自然条件下产生的禅宗类似物主要包括α-zearalanol (α-ZAL),β-zearalanol (β-ZAL),α-zearalenol (α-ZOL),β-zearalenol (β-ZOL)和zearalanone(佐恩(图)1)[1,2]。由于生殖毒性、基因毒性、免疫毒性、内分泌毒性和致癌毒性禅宗对身体的3,4),全球大部分国家和地区已经实现了最大残留限量(MRLs)食品和饲料中禅。欧盟规定,禅宗在谷物和谷物产品的推广是2毫克/公斤;禅宗的推广玉米副产品3毫克/公斤;禅宗的推广复合饲料仔猪和青年母猪0.1毫克/公斤(5]。例如,意大利规定,禅宗在谷物和谷物产品的推广是0.1毫克/公斤(6];澳大利亚规定,禅宗在谷物的推广是0.05毫克/公斤(7]。当前禅宗推广标准的食品和农产品在中国“GB 2761 - 2017食品霉菌毒素限制”的严格规定,禅宗的推广小麦、小麦面粉、玉米和玉米面粉0.06毫克/公斤(8]。然而,随着人们越来越关注食品安全问题,研究人员广泛探索禅宗的发生和毒性及其类似物。报告显示,禅,α-ZOL,β-ZOL常常同时存在于谷物感染镰刀菌素。值得注意的是,禅宗可以代谢成α-ZOL,β-ZOL,佐恩。α-ZAL是减少禅宗的产物和代谢β-ZAL和佐恩。因此,禅宗及其类似物是相似的,有毒对人体的影响。然而,α-ZOL毒性最强,这是禅[10 - 20倍9,10]。因此,单一的禅宗检测不能满足食品和饲料工业的需求,这促使巨大的探测研究禅宗的总量及其类似物。

目前,主要有两种方法检测禅宗残留,包括理化分析和免疫测定。主要的理化分析方法用于所有国家都薄层色谱法(TLC) [11),高效液相色谱法(HPLC) [12),气相色谱分析-质谱法(gc - ms) [13)和液相色谱/串联质谱(质/ MS) (14),等等。然而,这些技术是昂贵的和冗长而复杂的样品预处理过程,需要昂贵的仪器,和熟练的技术人员。因此,他们并不足以满足实际检测的需要(15]。基于抗原抗体反应的免疫测定方法有很强的选择性和灵敏度高的共同特征,已经成为一个热门话题在禅宗检测研究中,如柔性压力传感器(FPS) [16),自供电的温度传感器(spt) [17),nano-hybrid-mediated光电化学免疫测定(NMPECIA) [18),和量子基于光电化学免疫测定(QDPECIA) [19]。此外,建立免疫分析方法,如酶联免疫吸附试验(ELISA) [20.),黄金检测试纸测定(GICA) [21),时间分辨fluoroimmunoassay (TRFIA) [22),也有快的优势,低成本,和现场检测15),荧光偏振免疫法(FPIA) [23),免疫传感器(是)24),而抗体微阵列(AMA) (25)的高通量检测的优势。这些免疫测定技术扮演着重要的角色在禅宗的快速检测。然而,有相关的缺点如穷特异性单一禅宗免疫测定和禅宗的广谱总共检测及其类似物,而不能满足检测的实际需要。这样的挑战可能归因于低制备抗体的质量。值得注意的是,高质量的抗体是核心试剂建立免疫分析方法,和生产高度特定的抗体和类broad-specificity抗体取决于半抗原分子的设计和合成免疫原26]。

目前,已经有许多报道的研究禅宗抗原合成、抗体制备、免疫测定方法建立,但没有报告关于禅宗的研究比较和分析不同抗原合成和抗体的特点。针对这一点,通过分子设计禅半抗原,免疫原的合成及鉴定、准备和特点的比较,分析多克隆抗体(帕布),我们选择最好的免疫原的合成方法,它奠定了基础为禅宗的特定单残留免疫分析和剩余总量禅宗的免疫测定及其类似物(图1)。

2。材料和方法

2.1。化学药品和试剂

禅宗标准(无溶剂),α-zearalanol (α-ZAL),β-zearalanol (β-ZAL),α-zearalenol (α-ZOL),β-zearalenol (β-ZOL)和zearalanone(佐恩)在甲醇标准解决方案,carboxymethoxylamine hemihydrochloride (CMO) N-hydroxysuccinimide (NHS), N - (3-dimethylaminopropyl) - N′-ethyl-carbodiimide (EDC)、盐酸羟胺、丁二酸酐,1,较大影响缩水甘油醚(12)、非那西汀,3,3,5,5-tetra-methylbenzidine(三甲)、过氧化脲,Tween-20从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA),弗氏完全佐剂(FCA),弗氏不完全佐剂(FIA),和山羊anti-mouse免疫球蛋白结合与辣根过氧化物酶(GaMIgG-HRP)从皮尔斯(美国罗克福德,IL)。二氧六环,异丁基氯甲酸酯(IBCF)、二甲基甲酰胺(DMF)和甲醛(FA)从北京化工厂(中国,北京)。与此同时,乙二胺(EDA)和tri-n-butylamine (TNBA)来自J&K化学品(上海,中国)。所有其他溶剂,试剂,化学分析级或更好的标准商业产品。

2.2。标准解决方案和缓冲区

所使用的标准解决方案如下:(1)股票禅宗的解决方案,α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL,佐恩1000 ng / mL的浓度是准备在甲醇和稀释标准溶液与0.01 mol / L PBS;(2)阳离子化载体蛋白溶液,200毫克(0.003更易)BSA(0.003或135毫克,更易与卵子),溶解在10毫升PBS和7.2毫克(0.12更易)EDA和11.5毫克(0.06更易)EDC顺序添加。的解决方案是在室温下磁搅拌2 h。反应的解决方案是在4°C与PBS透析三天,透析液是一天一次改为获得阳离子化BSA (cBSA)或cOVA,储存在4°C供后续使用。

所使用的缓冲区包括以下几点:(1)磷酸缓冲盐(0.01 PBS, pH值7.4),由氯化钠(137更易),Na₂HPO₄h·12₂O(10更易),氯化钾(2.68更易),和KH₂阿宝₄(1.47更易);(2)涂层的缓冲区,碳酸盐缓冲(0.05 M CBS, pH值9.6)组成的Na₂有限公司₃(15更易)和NaHCO₃(35更易);(3)清洗PBS缓冲组成,含有0.05% Tween-20 (PBST);(4)阻断缓冲区包含猪血清PBST (5%, v / v);(5)底物的混合物制成的缓冲部分(500毫升)和B部分(500毫升)的解决方案。部分包含(每1 L水)3.15 g柠檬酸、无水醋酸钠6.966克,0.08 g非那西汀和0.05 g过氧化脲调整与HCl pH值5.0。相比之下,B部分包含1.27克三甲溶解在500毫升甲醇和丙三醇500毫升。(6)我们使用2 M H₂所以₄停止的解决方案。

2.3。设备和仪器

光度微量滴定读者(Multiskan MK3,热有限公司上海、中国)被用来测量吸光度。红外(IR)光谱得到使用力量27张量谱仪(力量、德国),而紫外线(UV)可见光谱得到du - 800紫外可见分光光度计(美国beckman coulter富勒顿,CA)。JY300C电泳仪、凝胶成像系统从北京购买捐赠东方电泳设备有限公司有限公司(中国,北京)。此外,303 a - 1电热恒温培养箱是购自北京中兴伟业仪器有限公司有限公司(中国,北京)。超过dzg - 303 a超纯水抛光系统从成都康宁购买特殊实验纯水设备厂(中国成都)。LDZX-30KB立式压力蒸汽灭菌器是购自上海Shenan医疗器械厂(上海,中国)。透明的96孔聚苯乙烯微量滴定板来自鄱阳湖实验设备厂(江苏、中国)。

2.4。实验动物

六个雌性Balb / c小鼠和饲料是由郑州大学医学院实验动物中心(郑州,中国)。他们有自来水和饮食随意。房间住房的动物是维持在24±2°C的温度,相对湿度为50%±20%,12 h光/暗周期。

2.5。免疫原的合成

根据分子结构和活性部位的禅,免疫原和包被抗原通过肟合成活性酯(探索)27),冷凝混合酸酐(CMA) [28)、甲醛(FA) [29日较大影响,1,缩水甘油醚(12)技术(30.]。

探索方法的基本原理如下。禅宗分子的羰基C6′位置被选为活动网站,和禅肟(芝诺)是由与CMO肟化反应合成的。芝诺的羧基和氨基的BSA加上monoamide债券EDC的作用下合成人工免疫原ZEN-BSA。短暂,禅宗和BSA的初始摩尔比(50:1),5毫克(0.0157更易)禅宗是溶解在2毫升吡啶,紧随其后的是添加10毫克(0.09117更易)首席营销官。密封后,反应进行而使用磁棒搅拌室温24 h得到黄色的产品解决方案。产品是使用氮干的,然后,我们添加了3.0 mL去离子水,调整pH值8.0使用0.1 mol / L氢氧化钠,并与同等体积的乙酸乙酯萃取三次。水相被丢弃。有机相的收集和使用干氮获得半抗原,芝诺淡黄色油。芝诺是溶解在2毫升二氧六环,之后2.5毫克NHS和5毫克EDC补充说,在4°C和搅拌4小时半抗原激活的解决方案做准备。半抗原激活的解决方案,1毫升cBSA激活的解决方案是添加在一滴一滴地20毫克/毫升的浓度。 The reaction solution was stirred at 4°C for 4 h and then dialyzed with PBS at 4°C for three days. The dialysate was changed once a day and stored at 4°C for subsequent applications. The synthetic route of ZEN-BSA (OAE) is shown in Figure2。的包被抗原ZEN-OVA(探索)通过相同的方法制备。

CMA的基本原理方法如下。禅宗分子的羰基C6′位置被选为活性部位,并介绍了羟基通过与盐酸羟胺缩合。的羟基与琥珀酸酐反应,引入活性基团羧基。羧基组和异丁基氯甲酸酯反应的三倍n丁胺生成活性中间混合酸酐,然后与主要氨基酸组蛋白载体释放反应的免疫原monoamide耦合。简而言之,据禅宗的初始摩尔比和BSA(50: 1), 5毫克(0.0157更易)禅宗是溶解在吡啶2毫升、和5.5毫克(0.0785更易)盐酸羟胺的补充道。是在室温下搅拌反应24 h,在吡啶和未反应的盐酸羟胺通过旋转蒸发去除获得的主要产品。最初的产品是溶解在0.5毫升吡啶,和7.8毫克(0.785更易)琥珀酸酐是补充说,其次是1毫升四氢呋喃。是在室温下搅拌反应24小时。通过旋转蒸发溶剂被获得半抗原的产品,这是溶解在2毫升的二氧六环,然后,15μL tri-n-butylamine和45μL(异丁基氯甲酸酯是补充道。的反应是搅拌0.5 h在冰浴0°C。最终形成的半抗原激活的解决方案是,增加一滴一滴地1毫升cBSA激活20毫克/毫升的浓度的解决方案。反应了在4°C 4 h。我们用PBS透析反应在4°C三天。透析液是改变一天一次。结果ZEN-BSA共轭是储存在4°C供后续使用。的合成路线ZEN-BSA (CMA)如图3。值得注意的是,包被抗原ZEN-OVA (CMA)通过相同的方法制备。

英足总方法的基本原理如下:人工免疫原被曼尼希半抗原之间的缩合反应合成含活性氢和蛋白质的氨基由甲醛引起的。我们使用的活性氢C7′禅宗的活性部位的位置。简单,实验设计根据50的初始摩尔比:1(禅宗BSA)。5毫克(0.0157更易)禅宗是溶解在1毫升的二甲基甲酰胺(DMF),然后将一滴一滴地加入1毫升的浓度20毫克/毫升cBSA激活的解决方案。60μL 37%的甲醛水溶液(含甲醛0.8更易)补充道,和反应是磁搅拌室温24 h。反应的解决方案是在4°C与PBS透析三天,PBS是改变一天一次。透析液收集和储存在4°C供后续使用。的合成路线ZEN-BSA (FA)如图4。的包被抗原ZEN-OVA (FA)是通过相同的方法准备的。

12法的基本原理如下:使用的活性部位C2位置禅宗分子上羟基,较大影响,缩水甘油醚包含一个环氧乙烷组两端。环氧乙烷的一端集团与半抗原的羟基反应生成的醚键。环氧乙烷集团另一端与载体蛋白的氨基反应形成一个二级胺,这是通过12耦合合成人工免疫原长链键。简单,实验设计的初始摩尔比50:1(禅宗BSA);5毫克(0.0157更易)禅宗溶解在0.5毫升二甲基甲酰胺(DMF);31日μ较大影响L(0.157更易)1、缩水甘油醚(12)溶解在0.5毫升的重蒸馏的水,一滴一滴地添加到前面提到的解决方案。然后,pH值调整到10.8,1 mol / L氢氧化钠,和解决方案是室温磁搅拌4 h。这形成了半抗原激活的解决方案。半抗原激活的解决方案是添加一滴一滴地1毫升cBSA激活20毫克/毫升浓度溶液,pH值调整到10.8,1 mol / L氢氧化钠,在4°C和反应是搅拌4 h。反应的解决方案是透析与PBS在4°C三天。透析液是改变一天一次。收集后,透析液储存在−20°C供后续使用。合成路线如图5。的包被抗原ZEN-OVA(12)通过相同的方法制备。

2.6。识别人工免疫原

2.6.1。红外光谱鉴别

正好2毫克的冷冻免疫原是与适量的钾溴化、混合接地均匀,按平板电脑,和测试力量张量27光谱仪(31日]。

2.6.2。UV鉴定

PBS是用作控制空白校准基线。我们准备了1毫克/毫升BSA溶液,稀释ZEN-BSA 1毫克/毫升蛋白质浓度。禅宗的浓度标准是20μ克/毫升。我们做了一个扫描的波长范围内200 - 800纳米,分析了扫描光谱,计算分子绑定禅宗BSA(比32]。

2.6.3。sds - page鉴定

在这里,5%和12%的分离胶浓度凝胶电泳分析选择。浓缩胶的测试电压是100 V,而分离凝胶60 V。此外,10μ样品体积和10 L /洞μg /孔蛋白质含量。考马斯亮蓝染色后,分子结合禅宗的比例和BSA被紫外凝胶成像系统计算分析软件(33]。

2.7。制备禅宗帕布

四种免疫原的ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA(12)被用来接种Balb / c在四组,每组5只老鼠。皮下注射免疫方法注入颈部在多个网站。免疫剂量是50μg /头,根据ZEN-BSA BSA的数量计算。每4周小鼠免疫一次,五次。在第一次免疫,ZEN-BSA溶解在消毒PBS和乳化相同数量的葬礼。在增强后续免疫,ZEN-BSA溶解在消毒PBS和等量的FIA充分乳化,这是管理第一次免疫后4周。最后一次免疫后,21天后,采血的尾巴被切断了。血清分离获得禅帕布。

2.8。识别禅宗帕布

2.8.1发布。浓度测量

禅宗帕布浓度测试通过间接的非竞争性ELISA (inELISA)使用汉等描述的过程。34]。的包被抗原ZEN-OVA是稀释在哥伦比亚广播公司(CBS) 2μ克/毫升和100毫升/添加到96孔酶标和孵化为37.8°C 2 h。与PBST三次洗涤后,释放活性与250年被封锁的网站μ信用证的阻断缓冲区为37.8°C 1 h或一夜之间4°C。对微型板块向另一个洗后,50毫升/禅的帕布添加适当的稀释和孵化15分钟37.8°C。洗涤过程,GaMIgG-HRP (50 mL /)补充说,其次是孵化为30分钟37.8°C。洗6次后,我们添加到微型板块(60μ信用证)刚做好的三甲的解决方案,其次是孵化在室温下10分钟。反应是停止通过添加2摩尔/ L H₂所以₄(100毫升/),然后测量吸光度在450海里。预先免疫血清和PBST作为消极的控制和空白的控制,分别,我们都包含在化验。禅宗帕布滴度被定义为的倒数的稀释导致吸光度值,空白值的两倍。每一个禅宗帕布样本和负样本重复6次,平均价值。四组的小鼠免疫和免疫原四个,每组小鼠滴度最高的被选来评估四个免疫原的免疫效应。

2.8.2。测量灵敏度

我们确定灵敏度为50%抑制浓度(IC50)的禅宗,而IC50值决定通过间接竞争ELISA (icELISA)使用Imtiaz和尤努斯描述的过程35]。icELISA方法一样inELISA除了,阻塞后,竞争一步介绍了通过添加50毫升/的分析物,其次是50毫升/好合适的抗体。不同浓度的抑制率B / B0%禅宗,禅宗帕布被icELISA评估,B表示不同禅宗浓度的吸光度值,和B0禅宗0浓度的吸光度值来表示。抑制曲线绘制使用B / B0%作为纵坐标,不同禅宗的对数浓度为横坐标。然后推导出计算回归方程和禅宗的IC50。每一个禅宗帕布样品重复了三次,平均价值。四组的小鼠四免疫原的免疫,禅宗的IC50值最低的老鼠每组选择评估四禅绝压的敏感性。

2.8.3。专一性测量

我们使用了交叉反应试验(CR)作为描述Ertekin et al。36]。根据CR,禅宗和其结构类似物,包括α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL佐恩,被选为抑制剂。禅宗的IC50值和其他抑制剂icELISA测定。IC50值的百分比禅宗IC50值为每个抑制剂被认为是交叉反应百分比(CR %)。CR %计算使用公式:CR (%) = (IC50(禅宗)/ IC50(禅宗类似物))×100%。禅宗的一个示例帕布IC50值最低的禅宗选择与每个免疫原免疫小鼠的特异性的决心。每一个禅宗样本重复了三次,平均价值。

3所示。结果和分析

3.1。红外光谱鉴别

比较人工免疫原的红外ZEN-BSA合成与BSA通过四种方法,我们发现类似的红外吸收区域2800 - 3200厘米⁻¹和1100 - 1700厘米⁻¹产生的特征峰,组胺和酰胺基在BSA(图6)。值得注意的是,这证明了人工免疫原ZEN-BSA包含BSA合成的四种方法。此外,人工免疫原的红外ZEN-BSA合成了四个策略和禅宗的地区有相似的红外吸收2200 - 2300厘米⁻¹和1100 - 1400厘米⁻¹。相比之下,BSA没有吸收在同一地区。羟基、酯产生的特征峰禅宗表明,人工免疫原ZEN-BSA合成了四种方法包含禅。这些研究结果表明,四种方法成功地合成了人工免疫原ZEN-BSA。

3.2。UV鉴定

紫外线范围220 - 400 nm, BSA有特征吸收峰在278 nm紫外线,紫外线和禅宗特征吸收峰在236海里,274 nm和316 nm,分别(图7)。通过四个人工免疫原ZEN-BSA合成方法(探索、CMA、FA和12)所有显示的特征吸收峰BSA和禅宗,或特征吸收峰发生了变化。因此,前面提到的四种方法可以合成人工免疫原ZEN-BSA。根据Lambert-Beer法,公式一个=εCL(一个表示由仪器读取的吸光度值;ε表示摩尔消光系数,这是一个恒定值;C表示溶液中溶质的浓度;l代表了光程,由仪器)是应用于计算分子结合禅宗的比例和BSA(见表中的结果1)。

3.3。sds - page鉴定

的电泳带人工免疫原ZEN-BSA合成通过四种方法落后于BSA乐队,表明ZEN-BSA大于BSA的分子量。这证明了成功的合成ZEN-BSA(图8)。凝胶成像系统,检测到的BSA的分子量是66446 Da,而ZEN-BSA的分子量(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA (12) 71803 Da, 70994 Da, 69482 Da,和699023 Da,分别。禅宗和BSA的分子绑定比率ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA(12)是17.17:1、14.57:1、9.73:1和8.26:1,分别同意UV鉴定结果。

3.4。禅宗帕布特征分析

3.4.1。浓度测量

免疫接种后,我们选择一个免疫小鼠inELISA最高浓度从每组进行比较分析。免疫小鼠的滴度inELISA ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA (12) 1: (6.4×10³),1:(3.2×10³),1:(1.6×10³)和1:(1.6×10³),所有这些获得超出1:(1×10³)(图9)。前面提到的结果后,四个人工免疫原的合成显示令人满意的免疫原性。根据inELISA滴度,四个免疫原的免疫效果评价的顺序ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA(12)和ZEN-BSA (FA)。

3.4.2。测量灵敏度

icELISA曲线的四个免疫小鼠inELISA最高浓度选择每组表现出良好的线性关系(图10)。回归方程,R²价值,抑制曲线的IC50值如表所示2。禅宗的IC50值由各免疫原icELISA ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA 11.67 (12)μ16.29 g / Lμ20.92 g / Lμ24.36 g / L,μ分别g / L。使用禅宗IC50值,在评估四个人工免疫原的免疫效果,订单已报道如下:ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA (12)。

3.4.3。特异性识别

禅宗帕布由免疫小鼠ZEN-BSA(探索),ZEN-BSA (CMA) ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA(12)可能都知道禅宗100%(表3)。禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA(探索)和ZEN-BSA (CMA)有相似的特征;也就是说,这类广泛的特异性禅宗及其类似物。禅宗的IC50值的icELISA禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA(探索)是11.67μg / L, CR值α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL ZON分别为36.53%,16.98%,64.33%,20.16%,和10.66%,分别。禅宗的IC50值的icELISA禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA (CMA)是16.29μg / L, CR值α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL ZON分别为23.55%,12.18%,51.86%,18.62%,和9.64%,分别。类broad-specificity而言,禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA(探索)更加突出。此外,禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA (FA)和ZEN-BSA(12)表现出相似的特征;也就是说,它有很高的特异性差的禅,但类为禅宗类似物广泛的特异性。禅宗的IC50值的icELISA禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA (FA)是20.92μg / L, CR值α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL,佐恩都不到1%。禅宗的IC50值的icELISA禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA(12)为24.36μg / L,除了提高CR与佐恩(36.57%),和CR的值α-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL不到3%。特异性,禅宗帕布从小鼠免疫ZEN-BSA (FA)是更加突出。这些结果表明,制备的类broad-specificity抗体对禅宗及其类似物可以通过免疫动物免疫原ZEN-BSA由探索方法,同时为禅宗高度特定抗体的制备可以通过免疫动物免疫原ZEN-BSA准备的FA方法。

4所示。讨论

4.1。设计禅宗免疫原的合成方法

禅宗的分子量为318.36达,是一个小分子化合物。它只有不良反应但没有免疫原性。它不能直接诱导人体产生特定抗体。它必须与载体蛋白结合形成一个免疫原诱导人体产生特定抗体。因此,禅宗免疫原的合成方法的设计是非常重要的37]。根据hapten-carrier效应理论,在免疫原的合成方法中,主要的影响因素的特点,产生的抗体免疫原包括半抗原分子结构的复杂性、活性位点的位置的选择,介绍了间隔长度,分子空间结构和分子绑定半抗原与载体蛋白比率(38]。半抗原分子结构的复杂性是指是否半抗原分子结构含有苯环和数字,杂环和数量,和分支结构和数量。一般来说,半抗原与复杂结构容易诱发人体产生抗体,而简单的半抗原结构困难引发人体产生抗体(39]。Szurdoki等人报道的成功率准备半抗原的抗体与苯环分子结构是33.3%,而没有苯环的成功率只有9.1% (40]。关于活动地点的选择,一方面,不同的活跃的站点会引起变化的半抗原分子中电子的分布,从而改变其电化学性能,从而改变其免疫活动,影响抗体的亲和力33]。另一方面,因为不同的活动网站将导致不同的分子空间结构,暴露抗原决定因素也不同,进而影响抗体的特异性41]。因此,我们应该尝试使用不同的网站分别合成免疫原,然后通过比较分析,筛选出最好的免疫原目标抗体制备。间隔臂的选择包括间隔臂的长度和结构。测定间隔臂的长度、Tuomola等人,荣格等人提出的最优间隔臂的长度是三到六个碳原子。急促的间隔臂并不有利于全面曝光半抗原,和太长间隔臂将引起由于疏水烷基链的折叠效果,这将导致半抗原分子载体蛋白,不利于识别的抗原递呈细胞(42,43]。关于垫片的选择结构,Bruun等人,Kolosova等人认为间隔不应包含结构具有高免疫活动如芳香环、共轭双键,或杂环化合物,降低抗体的产生。Overrecognition间隔臂的减少识别目标分子的能力(44,45]。关于分子绑定的决心比,维等人,皮特森等人认为,当分子绑定比例太大,载体蛋白是不利于绑定的载体蛋白和淋巴细胞由于过度报道的半抗原分子,这削弱了载体效应。如果分子绑定比例太小,免疫原并不足以使身体产生免疫反应。最好的分子结合率的半抗原载体蛋白应该5 - 20:1 (46,47]。

在这项研究中,基于禅宗的分子结构特征,并仔细和全面总结的基础上,以前的研究,C6′位置羰基,C7′位置活性氢,和C2位置羟基被选为活跃的网站,并介绍了间隔臂通过不同的化学反应方法实现耦合的禅宗与载体蛋白合成免疫原。

4.2。合成方法的禅禅抗体的免疫原和特点

禅宗属于resorcyclic酸内酯的化合物,其中包含的主要特征结构2,4-dihydroxybenzene环和大环内酯环。禅宗五及其类似物在结构上是相同的除了细微的差别在C6′位置羰基或羟基和C1′c2′位置单键和双键的大环内酯环。因此,禅宗的特殊化学性质打下良好基础禅宗类broad-specificity抗体的制备及其五个类似物但同时也带来困难,禅宗的较高的特异性抗体的制备30.]。取决于识别的特异性抗体的免疫原免疫细胞的决定因素。空间构象和特征结构暴露的半抗原载体蛋白与免疫细胞的免疫识别密切相关。因此,在半抗原的设计,其主要特征结构必须作为免疫原的一部分暴露在最大程度上为了获得期望的目标抗体(29日,48]。因此,半抗原分子设计、合成免疫原和禅宗较高的特异性抗体制备和禅宗类broad-specificity抗体制备的关键实现禅残留免疫测定和禅总残留免疫测定及其类似物。最近的一些报道用免疫原使用的开发探索方法获得禅类broad-specificity抗体和使用FA方法获得禅高度特定的抗体。比较禅宗绝压在这个研究和其他禅绝压或禅马伯报道在最近的文献如表所示4。

探索的方法是一个经典的和常用的bioconjugation方法。近年来,一些学者已经使用这种方法合成免疫原和已经成功地准备禅宗与类广泛的特异性抗体23,27,28,49,51]。董et al。49),Zhang et al。23],Cha et al。27)持有相同的观点。他们认为探索的方法是引入羧基在禅宗的大环内酯物环C6′位置通过羰基肟化反应,然后,活性酯用于夫妇与载体蛋白的氨基与羧基monoamide债券,所以,禅宗的主要特征结构包括2,4-dihydroxybenzene戒指,大环内酯物戒指,羰基和羟基C6′位置,和双键C1′c2′位置可以完全暴露和被免疫细胞,导致强烈的免疫反应。产生的抗体可以识别禅宗及其五个类似物。此外,刘等人。28)和迪克逊et al。53)考虑是否C6′的双键位置和C1′c2′禅宗的位置可以被免疫细胞,和认可的程度决定了禅宗的类广泛的特异性抗体,并没有直接的关系在C6′羟基的位置。

英足总方法也是一个经典的生物耦合方法。伯京et al。52和高et al。29日)已经利用这种方法合成免疫原和已经成功地准备禅宗与高特异性抗体(29日,52]。伯京et al。52]相信足总方法是引入取代基甲酰禅宗的大环内酯物环C7′位置通过甲醛缩合,所以禅宗的主要特征结构包括2、4-dihydroxybenzene戒指,大环内酯物戒指,和羰基C6′位置完全暴露,更容易被免疫细胞,产生的抗体是非常特定于禅宗。然而,CRs禅宗五类似物很小。至于为什么免疫细胞不能识别单键和双键C1′c2′位置和C6′羟基的位置,反应机理仍不清楚。

在这项研究中,禅宗的禅宗与类广泛的特异性抗体及其五个类似物是由探索方法,和禅宗的IC50是11.67μg / L, CRsα-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL ZON分别为36.53%,16.98%,64.33%,20.16%,和10.66%,分别。然而,禅宗帕布有广泛的特异性较低的禅宗马伯6 c2报道董et al。49),禅宗马伯3 d4报道Zhang et al。23],禅宗马伯kk-ZEN报道Cha et al。27]。与探索方法相比,贫穷broad-specificity抗体的CMA方法有缺陷,更多的副反应,降低产品产量。禅宗的禅宗与较高的特异性抗体是由足总方法,和禅宗的IC50是20.92μg / L, CRsα-ZAL,β-ZAL,α-ZOL,β-ZOL和佐恩都不到1%。之前报道的有较高的特异性抗体类似伯京et al。52和高et al。29日),但最好的敏感性。与FA方法相比,所产生的抗体12与ZON过高CR方法,不能满足较高的特异性抗体的制备禅的目的。这些结果奠定了物质和技术基础单残留的免疫测定为禅禅和总残留及其类似物。

此外,李等人认为,特异性和广泛的特异性抗体不仅取决于免疫原的合成方法也密切相关的动物免疫剂量的免疫原。以黄曲霉毒素B1为研究对象,在抗体特异性免疫原剂量的影响和类广泛的特异性进行了讨论。结果表明,低剂量免疫原可以提高抗体的特异性,与大剂量免疫原可以增加的广泛的特异性抗体,并研究结果提供了参考的发展新的抗体(54]。然而,这项研究的结果是否适用于制备抗体禅宗和其他小分子化合物在未来仍有待进一步探讨。

5。结论

在这项研究中,根据分子结构和活跃的禅宗,四种人工免疫原的合成方法被设计出来,他们发现通过红外,紫外,sds - page,比较分析禅宗帕布的特点所产生的免疫动物。结果表明,探索方法是最好的方法,为禅宗准备broad-specificity抗体及其同系物和FA方法是最好的方法准备禅宗较高的特异性抗体,这奠定了物质和技术基础为单一的禅宗残留免疫分析和免疫测定的禅宗总量及其类似物。

数据可用性

没有数据被用来支持本研究。

伦理批准

所有的实验按照“实验动物保健和使用指南”的美国国立卫生研究院和动物伦理委员会批准河南科技学院。批准数量没有问题。是2020 hist047。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

j。j和y . w .负责概念化。y W。,X. W., and H. Z. provided software. X. W. was involved in formal analysis. Y. W. and X. W. were responsible for data curation. Y. W. was responsible for writing and original draft preparation. J. J., H. F., and H. Z. were responsible for writing and review and editing. J. J. was responsible for supervision and funding acquisition. All authors have read and agreed to the published version of the manuscript. Jinqing Jiang and Hanna Fotina equally contributed to this article.

确认

这项研究是由中国国家自然科学基金(31702263),13日五年国家重点研究和发展计划食品安全技术研究和开发的主要项目(2019 yfc1605705),和创新研究团队项目(科技)河南大学(20 irtsthn025)。

引用

1. 勃,r . Anggriawan m . Auliyati et al .,“豆豉发酵玉米烯酮代谢产物的形成,”分子(瑞士巴塞尔),24卷,不。15日,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a . Rogowska p . Pomastowski g . Sagandykova, b . Buszewski“玉米烯酮及其代谢产物:影响人类健康,新陈代谢和中和的方法,”Toxicon卷。162年,46-56,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. t . Kuiper-Goodman p . m . Scott和h .渡边,“风险评估的真菌毒素玉米烯酮,”监管毒理学和药理学,7卷,不。3、253 - 306年,1987页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. 答:上周六,j . m .索里亚诺j . c .甚和j·摩尼,”回顾毒性,发生,新陈代谢,排毒,法规和玉米烯酮的摄入量:一个动情的真菌毒素,”食品和化学毒物学,45卷,不。1队,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. EC,设置最大水平对某些食品中污染物。1881号(2006),欧盟官方杂志,5-24,2006年。
6. t . Bertuzzi m . Camardo Leggieri, p . Battilani和A·利”同现A和B型单端孢霉烯和玉米烯酮在小麦生长在意大利北部2009 - 2011多年来,“食品添加剂和污染物:B部分,7卷,不。4、273 - 281年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. d . c . Tan g . r . Flematti e . l . Ghisalberti et al .,“真菌毒素由镰刀菌素物种与年度豆类牧场和“羊饲料拒绝障碍“在澳大利亚西部,”真菌毒素的研究,27卷,不。2、123 - 135年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. z Jun-Nan”,公众提出的建议国家卫生和计划生育委员会在2017年,“中国医学图书馆和信息科学杂志》上,27卷,不。6日,59 - 65年,2018页。视图:谷歌学术搜索
9. a . Rai m . Das, a . Tripathi”发生和霉菌毒素毒性的镰刀菌素、玉米烯酮,”食品科学与营养的关键评论,60卷,不。16,2710 - 2729年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. C.-K。杨,中州。程,W.-T。蔡et al .,“流行饲料和饲料中霉菌毒素的成分在台湾在2015年和2017年之间,“环境科学与污染研究,26卷,不。23日,第23806 - 23798页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. m . s . Klarićz Cvetnić,s . Pepeljnjak和i Kosalec”同现的黄曲霉毒素、赭曲霉毒素A fumonisins,谷类食品和饲料中玉米烯酮,由直接竞争酶联免疫吸附试验和薄层色谱法,“Arhiv咱Higijenu Rada我Toksikologiju,60卷,不。4、427 - 434年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. p . Thongprapai w . Cheewasedtham k . f .庄和t . Rujiralai“选择性磁nanographene氧化物固相萃取与高液相色谱法和荧光检测玉米烯酮的测定玉米样本,”分离科学杂志》第41卷。。23日,第4354 - 4348页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. s . Kinani s Bouchonnet s Bourcier j·m·博舍和s . Ait-Aissa”研究玉米烯酮及其代谢产物的化学衍生化气相色谱分析-质谱法分析环境样品,”色谱法杂志》上。一个,卷1190,不。1 - 2、307 - 315年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 美国太阳,k .姚明,s .赵et al .,”测定黄曲霉素和玉米烯酮类似物在食用和药用草药使用一个与immunoaffinity列耦合的终极高性能液相色谱串联质谱,”色谱法B杂志卷,1092年,第236 - 228页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. l . j . n .一位y . Wang周et al .,“最近霉菌毒素调查数据和先进的真菌毒素检测技术来自中国的报道:复习一下,”食品添加剂和污染物:部分,32卷,不。4、440 - 452年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. g . z Yu Cai、刘x和d·唐”Pressure-based生物传感器与灵活的集成压力传感器和一个视觉检测、电致变色的装置”分析化学,卷93,不。5,2916 - 2925年,2021页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. z l .黄j . Chen Yu, d .唐”自供电的温度传感器和塞贝克效应传导photothermal-thermoelectric耦合免疫测定,“分析化学,卷92,不。3、2809 - 2814年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. z罗气,l .张曾r, l . Su和d·唐”分支polyethylenimine-modified上转换nanohybrid-mediated光电化学免疫测定两用的铜离子的协同效应,”分析化学,卷91,不。6,4149 - 4156年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. j .蜀、d .唐“当前进展quantum-dots-based光电化学分析,“Chemistry-An亚洲杂志,12卷,不。21日,第2789 - 2780页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. a . Gutzwiller j·l·Gafner, p . Silacci“尿玉米烯酮与ELISA测定玉米烯酮暴露的生物标志物猪,”真菌毒素的研究,30卷,不。4、187 - 190年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. x张,k .他,方y . et al .,“双重流检测试纸测定快速、同时定量检测赭曲霉毒素A和玉米烯酮的玉米、小麦、和饲料样品,”浙江大学科学期刊投递杂志B,19卷,不。11日,第883 - 871页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. l . j .张高,b .周l .朱张y, b .黄,“同时检测deoxynivalenol和玉米烯酮dual-label时间分辨荧光免疫测定,“粮食和农业的科学杂志》上,卷91,不。2、193 - 197年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. 张x, s . a . Eremin k温et al .,“荧光偏振免疫分析基于一种新的单克隆抗体的检测玉米烯酮类的真菌毒素玉米,“农业与食品化学杂志》上,卷65,不。10日,2240 - 2247年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. a . Foubert n . v . Beloglazova m . Hedstrom和s . De Saeger”抗体固定电容免疫传感器检测玉米烯酮的发展战略,“Talanta卷,191年,第208 - 202页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. 张x, z . Wang y方et al .,“抗体微阵列同时量化多种真菌毒素的免疫测定玉米样本,”毒素,10卷,不。10日,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. 哈提卜t . Gefen j . Vaya s . et al .,“在protein-carrier半抗原免疫原性的影响,”免疫学,卷144,不。1,第126 - 116页,2015。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. 工程学系。Cha,工程学系。金、k比肖夫,周宏儒。金,S.-W。儿子,H.-G。康”,生产高度对玉米烯酮类属特异性的单克隆抗体及其应用酶联免疫吸附试验,”兽医科学杂志》,13卷,不。2、119 - 125年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. b . p . m . t . Liu Ram, l·p·哈特和j·j . Pestka“间接酶联免疫吸附试验对真菌毒素玉米烯酮,”应用与环境微生物学,50卷,不。2、332 - 336年,1985页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. y高,m .杨c .彭李x r . Cai和y气,“准备非常具体anti-zearalenone抗体通过使用阳离子蛋白质共轭和间接竞争酶联免疫吸附试验的发展,“分析师,卷137,不。1,第236 - 229页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. y太阳,x, y . Zhang et al .,“开发检测试纸条的测试在玉米、玉米烯酮的快速检测”农业与食品化学杂志》上,卷62,不。46岁,11116 - 11121年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. y . Wang c·h·h·郑,他和h·B·张”的描述和比较fumonisin B(1)蛋白质由六个方法,配合”国际分子科学杂志》上,13卷,不。1,第96 - 84页,2012。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. J.-q。江,H.-t。, h。张,Z.-l。王,x。杨,G.-y。粉丝,“发展clopidol残留的酶联免疫吸附试验检测鸡组织,”粮食和农业的科学杂志》上,卷94,不。11日,第2300 - 2295页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. m·k·皮德森n·s·索伦森,p . m . Heegaard n . h·拜尔和l . Bruun”效应的不同hapten-carrier接合率和分子取向对肽抗原,抗体亲和力”《免疫学方法,卷311,不。1 - 2、198 - 206年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. j·l·汉y Li江et al .,“对deoxynivalenol单克隆抗体的制备和描述,“意大利动物科学杂志》上,19卷,不。1,第568 - 560页,2020。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. Imtiaz和a·w·n·尤努斯,”比较的ELISA试剂盒对黄曲霉素M1量化”采用AOAC公认的国际期刊,卷102,不。2、677 - 679年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. O。Ertekin, t . KaymakŞ。Ş。Pirincci,大肠Akcael, s . Ozturk“Aflatoxin-specific单克隆抗体选择immunoaffinity列发展”生物学技术,卷66,不。6,261 - 268年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. f . a . Esteve-Turrillas j . Parra a . Abad-Fuentes c . Agullo a . Abad-Somovilla j . v .梅,“半抗原合成、单克隆抗体生成和发展的竞争力分析为分析picoxystrobin的啤酒,”分析Chimica学报,卷682,不。1 - 2、93 - 103年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. n·奥利弗,p . Chappey g . SandoukJean-Michel et al .,“半抗原的单克隆抗体免疫测定,“医药研究9卷,第1379 - 1375页,1992年。视图:谷歌学术搜索
39. a . Josten m . Meusel, f .口头的“微生物transglutaminase-mediated合成hapten-protein配合分析,“分析生物化学,卷258,不。2、202 - 208年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. f . Szurdoki h . k . m . Bekheit m·p·马可·m·h·Goodrow b . d .吊床,“半抗原的合成和轭合物的酶免疫分析法分析除草剂除草定,”农业与食品化学杂志》上,40卷,不。8,1459 - 1465年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. Z.-L。徐,G.-M。谢,y。李et al .,“生产和表征的broad-specificity多克隆抗体为O, O-diethyl有机磷杀虫剂和定量构效关系研究的抗体识别,”分析Chimica学报,卷647,不。1,第96 - 90页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. f·荣格,s . j .哎呀,r·o·哈里森”使用杀虫剂的分析,免疫化学技术”农药科学,26卷,不。3、303 - 317年,1989页。视图:谷歌学术搜索
43. m . Tuomola r . Harpio h . Mikola et al .,“生产和描述针对一个很小的半抗原的单克隆抗体,3-methylindole,”《免疫学方法,卷240,不。1 - 2、111 - 124年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. l . Bruun c·科赫彼得森b m·h·雅各布森和j . Aamand”定量检测的酶联免疫测定2,6-dichlorobenzamide (BAM),降解产物的除草剂敌草腈,”《免疫学方法,卷240,不。1 - 2、133 - 142年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. a . y . Kolosova黄永发。公园,s . a . Eremin S.-J。康,D.-H。钟”,荧光偏振免疫分析法基于单克隆抗体的检测有机磷农药parathion-methyl,”农业与食品化学杂志》上,51卷,不。5,1107 - 1114年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. e·c·彼得森m . d . Hambuchen r . l .茶色et al .,“简单的辐射度方法准确地量化中抗原决定基的密度hapten-protein轭合物与含巯基的联系,“Bioconjugate化学,25卷,不。12日,第2115 - 2112页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. k . v .辛格·卡纳c . r .苏瑞和m . l . Garg”结构和多个半抗原负载在载体蛋白免疫原性的影响,“采用AOAC公认的国际期刊,卷93,不。1,59 - 65年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. r . Lopez-Moreno j . v .梅c . Agullo a . Abad-Somovilla和a . Abad-Fuentes trifloxystrobin分析分析。第一部分设计合理regioisomeric半抗原的单克隆抗体的生产,”食品化学卷,152年,第236 - 230页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. g .咚,y, y王et al .,“主要广谱anti-zearalenone及其类似物的制备抗体及其应用以间接竞争酶联免疫吸附试验,”食品化学卷。247年,地位,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. d . n . Liu聂,z .赵,孟x,和a .吴”超灵敏的分析基于biotin-streptavidin放大系统的定量测定玉米烯酮,”食品控制57卷,第209 - 202页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. t . Thongrussamee n s Kuzmina W.-B。垫片et al .,“Monoclonal-based酶联免疫吸附试验检测玉米烯酮的谷类食品,”食品添加剂和污染物:部分,25卷,不。8,997 - 1006年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. a·a·伯京g . p . Kononenko, n . a . Soboleva”生产和分析抗体特异性高的玉米烯酮的性质,“Prikl Biokhim Mikrobiol,38卷,不。3、305 - 311年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. d·e·迪克逊,r·l·华纳·l·p·哈特,j . j . Pestka b . p . Ram,“杂种瘤细胞系生产特定单克隆抗体的真菌毒素玉米烯酮和a-zearalenol”农业与食品化学杂志》上,35卷,不。1,第126 - 122页,1987。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. l . j . p . Li Wu Zhang et al .,“剂量的免疫原导致黄曲霉毒素抗体的特异性光谱,”毒素,9卷,不。5,172年,页2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

版权©2021年延安王等。这是一个开放的分布式下文章知识共享归属许可,它允许无限制的使用、分配和复制在任何媒介,提供最初的工作是正确引用。