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国际分析化学杂志》上/2021年/文章

研究文章|开放获取

体积 2021年 |文章的ID 6675436 | https://doi.org/10.1155/2021/6675436

穆罕默德•马Saoudi阿耶Bouajila, Khaled Alouani Rami,压力, ”植物化学的成分、抗氧化、Antiacetylcholinesterase和细胞毒性的活动Rumex管l”,国际分析化学杂志》上, 卷。2021年, 文章的ID6675436, 16 页面, 2021年。 https://doi.org/10.1155/2021/6675436

植物化学的成分、抗氧化、Antiacetylcholinesterase和细胞毒性的活动Rumex管l

默罕默德·马Saoudi,1,2 阿耶Bouajila,2 Rami压力,2,3 和 哈立德Alouani1

1Laboratoire de Chimie Analytique Electrochimie,将des科学de突尼斯,突尼斯大学埃尔玛娜尔,校园大学医疗,突尼斯2092年突尼斯

2Laboratoire de Chimique精灵,大学保罗•Sabatier CNRS INPT, UPS,图卢兹,法国

3团结de矫揉造作的“维持价格des生物分子活性物”,特级生物研究所Appliquee de Medenine路线El Jorf-km 22.5, Medenine 4119年大学•德•加布加布,突尼斯

学术编辑器:安东尼奥诉Herrera-Herrera
收到了 2020年12月28日
修改后的 2021年6月14日
接受 2021年6月22日
发表 2021年7月3日

文摘

Rumex管l . (r .管)被认为是一种芳香植物。这是用于传统医学的优秀的生物学性质。天线部分被浸渍提取先后有三个溶剂极性增加(环己烷(CYH)、二氯甲烷(DCM)和甲醇(甲醇))来评估他们的化学成分和生物活性。提取是富含酚类化合物(13.0到249.8毫克GAE的干重/ g (dw))。甲醇提取提供了卓越的集成电路50= 6.2μanti-DPPH和31.6 g / mLμanti-AChE g / mL。然而,DCM提取物对两种癌细胞的细胞毒性最高的活动(hct - 116和MCF-7)抑制在50岁(69.2和77.2%μ分别为g / mL)。有趣的是,gc - ms分析能够识别三个新化合物r .管提取,如L -(−)阿糖醇(5),D - (−) fructopyranose(7)只发现在甲醇提取,和2,5-dihydroxyacetophenone(3)在所有提取检测。高效液相色谱色谱,cardamonin (8), 5-hydroxy-3′酸酯(17)和3′-hydroxy-b-naphthoflavone(18)显示最高浓度的74.0,55.5,和50.4毫克/克dw,分别等确定。一些酚类化合物被识别和量化的高效液相色谱法在多个有机提取物,如4′,5-dihydroxy-7-methoxyflavone (13)、4′, 5-dihydroxy-7-methoxyflavone (14), 5-hydroxy-3′酸酯(17)和3′-hydroxy-b-naphthoflavone(18),首次被发现r .管提取物。我们的结果表明,这种植物的生物活性可能与他们的酚类化合物和极性提取物可能被视为新的天然补充剂用于食品和药品。

1。介绍

过度生产自由基和脂质过氧化反应代表一个重要的角色在某些严重的疾病的发病机制,如糖尿病、获得性免疫缺陷综合征,神经退行性疾病、心血管疾病、癌症、肝硬化、缺血、动脉粥样硬化、老化(1,2]。大约95%的疾病在人类发现,年龄在35岁以上的与自由基的生产和积累有关(3]。这些有毒的自由基可以通过生化或生理过程或通过污染和其他内生资源。事实上,他们有能力反应膜脂质、核酸,蛋白质和酶,和某些分子,导致坏细胞的后果(4]。

植物能给几个抗氧化剂类黄酮等化合物,酚酸一个生育酚,帮助人体自由基的协同和交互方式。由于这个原因,这些化合物更视为重要饮食因素(2,5]。事实上,它已经指出,富含抗氧化剂的食物与人类疾病的发病率成反比关系(6]。由于合成抗氧化剂的使用促进负面健康影响,使得研究人员用愿景(天然抗氧化剂7)限价某些植物的原材料通过识别他们的新强大的化合物,可作为某些疾病的草药。突尼斯有各种各样的物种与多个利益,包括流行的治疗实践。有些植物对每个物种没有受到化学研究[8]。大约有200种植物的属Rumex具有食用和药用的美德9]。这些物种包含许多生物活性化合物和复杂的化学结构。不同的植物的天线和根茎部分属于蓼科家族,包括Rumex,已被用来作为自然的传统药物来源几个治疗用途,如抗炎、抗氧化剂、antianalgesic和抗菌活动(10,11]。他们也用于治疗某些疾病,如癌症、肿瘤、肝脏相关疾病和泌尿/肾脏功能(12,13]。有一些报告文学的评价某些种类的Rumex表现出促进健康的影响和被用作传统食品和草药。例如,茎,叶,根的r . abyssinicusl,r . bequaertiil和r . usambarensisl是用于治疗咳嗽、肺炎、脓肿,天花,胃不舒服14]。此外,r . nepalensisl .根显示显著的抗菌活性金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,和大肠杆菌(15]。在最近的一项研究中,从根r . hastatusd .显示有趣的抗菌、细胞毒性和抗肿瘤的活动(16]。此外,在春天,许多物种的天线部分(r .管,r . acetosa,r . pseudonatronatus r .默认和r . acetosella)收集和用作蔬菜17]。

Rumex管名为“卷曲码头”,通常由于波浪和卷曲的叶子,是一个野生的多年生植物(本地)在欧洲的大部分地区,中部和东部,亚洲和北非地区,包括突尼斯(18,19]。它生长在扰动土,路边,海岸线,和森林的边缘,可以达到1.20米高,肉质直根[20.,21]。尽管被认为是入侵植物在几个国家(北美、新西兰和澳大利亚)(22),大码头经常用于传统医学作为一个有用的替代在西伯利亚和土耳其的传统医学。是有用的作为药物用于治疗性病和使用“血液净化器”的同义词18]。此外,年轻的叶子r .管是可食用的,他们可以吃野菜或生蔬菜,特别是在春天,添加到沙拉(21]。然而,生理和化学证据支持索赔的治疗价值r .管我们可以发现在一些地中海国家(突尼斯和23]。

因此,在这项工作中,植物化学的筛选(TPC、高效液相色谱法和gc - ms)和抗氧化评价和生物活动(anti-AChE和细胞毒性)r .管提取。

2。材料和方法

2.1。化学品的使用

使用的所有化学分析试剂级。所有试剂都是购自σ,奥尔德里奇:抗坏血酸,乙酸,乙酰胆碱酯酶(疼痛),acetylthiocholine (ACTHI)乙腈(ACN), N, O-bis(三甲基硅烷基)trifluoroacetamide (BSTFA),环己烷(CYH)、二氯甲烷(DCM),杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)、二甲亚砜(DMSO), 1-1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH), 5、5-dithiobis-2-nitrobenzoic酸(DTNB) Folin-Ciocalteu试剂(2 N),甲醇(甲醇),人类结肠癌细胞(HCT116),人类乳腺癌细胞(MCF-7), 3 - 4 5-dimethylthiazol-2yl 2, 5-diphenyl溴化四唑(MTT),罗斯威尔公园纪念研究所(RPMI),三(tmc),和四氢呋喃(四氢呋喃)。

用于识别和量化的分析标准中的主要酚类化合物的提取:3-amino-4-hydroxybenzoic酸、没食子酸,3,4-dihydroxy-5 methoxybenzoic酸,7-hydroxycoumarin-3-carboxylic酸、芦丁水合物、没食子酸丁酯,4-hydroxytamoxifen, cardamonin, phenoxodiol, pinostilbene水合物,3-benzyloxy-4, 5-dihydroxy-benzoic酸甲酯、乙trans-2-hydroxycinnamate, 4′, 5-dihydroxy-7-methoxyflavone, pinosylvin单甲醚,3、6、3′-trimethoxyflavone,紫草素,5-hydroxy-3′酸酯,和3′-hydroxy-b-naphthoflavone也从σ购买,奥尔德里奇。

2.2。植物材料

地上部分的茎、叶、花)r .管收集当地的Borj-Cedria(突尼斯北部)。工厂于2014年9月收获,对应于它的盛开期。然后,收获植物被发现Borj-Cedria生物技术中心(英国广播公司),和一个凭证标本放置标本的实验室ecoprocesses在同一中心的引用。

2.3。准备不同的提取

植物材料在室温下干燥在树荫下。磨削是获得细粉。代谢物的提取,50克(50克)受到连续的疲劳使用增加极性的溶剂(环己烷(CYH)、二氯甲烷(DCM)和甲醇(甲醇))由浸渍和在室温下搅拌在一卷500毫升和每个溶剂为2小时。过滤后使用绘画纸N°2滤纸(费舍尔,法国),滤液蒸发是使用真空旋转蒸发器35°C(德国IKA)。这个协议使我们获得CYH, DCM和甲醇提取物干燥。这些提取存储在−4°C到进一步分析(植物化学的和生物分析)。萃取率的特征如下: 在哪里米残留:残留的重量(克);米:植物材料的重量(克)。

2.4。总酚含量测定

根据Folin-Ciocalteu比色法,总酚类化合物含量的提取是评估,和做了一些修改24]。简而言之,增加100μL (Folin-Ciocalteu试剂(0.2 N) 20μL(稀释提取(0.5毫克/毫升)/。孵化后5分钟在室温下(20-27°C),增加80μL碳酸钠溶液在水(75 g / L)。混合培养15分钟,765海里的吸光度测定,使用标(Multiskan走,热费希尔科学,万塔、芬兰)。没食子酸被用来校准曲线的标准参考物质(0 - 115 mg / L)。结果表示为毫克的没食子酸dw的等价物(GAE) / g。

2.5。DPPH自由基清除活性

的1-1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH)测试是用来测量抗氧化活性。自由基的清除能力的定量评估是根据描述的方法取决于Yahyaoui et al。24]。这个混合物是均质和孵化25分钟在室温下在黑暗中。然后,所有样品的吸光度测量在524海里。的百分比自由基清除活性的抑制百分比计算每个样本如下: 在哪里一个空白是没有提取负控制反应的吸光度。一个样本的吸光度测试样本。

这个活动也表示为IC50(毫克/升),代表测试材料的浓度需要促进DPPH的初始浓度下降了50%。所有测量进行了一式三份使用抗坏血酸作为参考。

2.6。色谱分析
2.6.1。HPLC-DAD分析

使用的方法Yahyaoui et al。24]C18柱(25厘米×4.6毫米×5μ米),不同的提取r .管分析在分析HPLC-DAD(美国热费希尔科学)。用流动相组成的酸化水(pH = 2.65)(溶剂)和水/乙腈(20:80 ,pH = 2.65) (B)溶剂进行洗脱流速为1.2毫升/分钟。检测极限(LOD)定义的方法从0.01 - -0.1 mg / L。梯度收益如下:从0.1%到30% B在35分钟,从30%到50%在5分钟,从50%到99.9%在5分钟,最后从99.9%到0.1% B在15分钟。检测大多数化合物,所有样品都准备在同一浓度(20毫克/毫升)。注射后20毫升(20μL)每个样本,他们发现在280海里。酚类化合物可以通过比较保留时间确定的未知与已知的保留时间与标准。

2.6.2。gc - ms分析

进行气相色谱分析-质谱法(GC - MS)分析使用瓦里安2000年土星(Les乌里,法国)离子阱GC / MS和GC cp - 3800系统配备了熔融石英毛细管DB-5MS列(5% phenylmethyl Polyoxane, 30×0.25毫米,膜厚度0.25μ米)(25]。色谱条件是60 - 260°C,和温度梯度的增加5°C /分钟,持续了15分钟在等温条件下的260°C。应用第二个梯度达到340°C的速度40°C /分钟。陷阱的温度为250°C和输电线路的温度为270°C。执行质量从40到650 m / z扫描。提取的萃取溶剂溶解的数量5毫克/毫升,和2μL注射。分子被确定通过比较保留指数(RI)获得一个非极性DB-5MS列与C5-C24正烷烃化合物提供的文学和比较他们与NIST质谱08年(国家标准与技术研究院)数据库。

(1)衍生化方法。压力等。25]描述了衍生化方法,做了一些修改。在一个2毫升瓶,150年混合μL 99%的N, O-bis(三甲基硅烷基)trifluoroacetamide (BSTFA) + 1%的三甲基(tmc) 1毫升的提取(5毫克/毫升溶剂四氢呋喃(四氢呋喃))。之后,混合混合30秒增加溶解度。反应混合物保持在40°C 15分钟。然后,十毫升(10μL)的导数解决方案是注入相同的用气设备和分析如前一节所述识别每个提取的分子。

2.7。生物活性
2.7.1。Antiacetylcholinesterase(疼痛)活动

根据Ellman anti-AChE活动确定方法(25]。简而言之,25μ每个提取混合50 LμL钠磷酸盐缓冲剂(0.1米;pH = 8), 25岁μ和125 L疼痛的解决方案μL 5, 5-dithiobis-2-nitrobenzoic酸(DTNB)(3毫米,pH = 7)。混合物加入96孔酶标和孵化25°C 15分钟。在那之后,25μL ACTHI碘溶液(15毫米)添加最后一个混合物又孵化了25°C 10分钟。黄色的复杂的吸光度(5-thio-2-nitrobenzoate阴离子)读412海里。提取,造成50%的浓度抑制疼痛活动(IC50)是由非线性回归分析计算。抑制的百分比计算如下: 在哪里一个样本和一个控制是样品的吸光度测试材料和样品没有酶,分别。加兰他敏被用作参考。

2.7.2。细胞毒性的活动

的在体外细胞毒性的活动不同提取物对两种不同人类细胞系,MCF-7(人类乳腺癌细胞)和hct - 116(人类结肠癌细胞),是根据评估方法所描述的压力等。25]。这个活动被MTT比色试验估计。细胞分布在96孔板在3×104细胞/在100µL和增加了100µL相应的培养基(美国西格玛奥德里奇DMEM) MCF-7或rpmi - 1640(西格玛奥德里奇,美国)hct - 116之间,其中包含各种浓度的样品。板培养48 h在37°C。接下来,上层清液被消除,和细胞治疗50μL (MTT方法在40分钟的孵化37°C。消除MTT的解决方案之后,50μL(二甲亚砜(DMSO)添加到溶不溶性甲瓒晶体。吸光度测量605海里。他莫昔芬作为积极的参考。提取的细胞毒性效应估计基于百分比的增长抑制和计算如下:

2.8。统计分析

所有测量进行了一式四份,单向方差分析(方差分析)使用SPSS(20.0版本)意义计算和图基的测试是用来评估的统计差异研究中使用的溶剂。线性相关系数(R2)检查来确定生物活性之间的关系或抗氧化剂(TPC)。最后,主成分分析(PCA)也使用XLSTAT执行(版本5.03)可视化所有参数之间的区别。可靠性限制设置 。

3所示。结果与讨论

3.1。提取收益率和总酚含量(TPC)

在这项研究中,三个与不同极性溶剂,即:CYH, DCM和甲醇用于提取的地上部分r .管。表1显示来自不同提取获得的收益率。甲醇虽然强调了最高收益率有12.2%,CYH和DCM的萃取率不超过1.0%。这些结果是在协议与发现伊德里斯et al。21)报道,最大提取产量r .管收集在南非,得到与甲醇溶剂。这个收益率低于本研究中找到。提取产量的差异从不同提取物可能与可抽出的组件的可用性。
样品 收益率(%) GAE TPC(毫克/ g (dw)
CYH 1。0b 13.0±0.3b
扩张型心肌病 0.3c 21.6±0.5b
甲醇 12.2一个 249.8±9.9一个
CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;甲醇:甲醇。nd:没有检测到。数据是三个重复的平均值±SD。根据图基测试(不同的字母表示显著性差异 )。
表1
收益率和TPC在空中的一部分r .管提取物。

至于TPC的r .管提取,它是介于13.0和249.8毫克之间GAE dw / g。一个显著差异( )不同溶剂使用。TPC注意到不同溶剂之间的差异可能是由于酚类化合物的极性。低了TPC CYH和DCM提取物、显示内容13.0和21.6毫克GAE dw / g,分别。然而,最高的内容得到甲醇提取物(249.8 mg GAE的dw / g)。这个结果是高于测量甲醇提取物(56.3毫克GAE / g (dw)研究Coruh et al。26在处理的地上部分r .管野外生长的土耳其。

3.2。抗氧化活性

DPPH是其中一个最激进分子用来表示食物和提取物的抗氧化活性拥有。的地上部分提取物的抗氧化能力r . crsipusDPPH法测定。结果报告为回收的百分比DPPH自由基和集成电路50(表2)。统计学上有显著性差异( )不同提取物的抗氧化活性。类似于总酚醛塑料,甲醇提取了主要DPPH清除活动。这个提取显示高达93.5%的抗氧化活性的浓度50μg / mL IC50值为6.2μ克/毫升。结果相比商业抗氧化剂(抗坏血酸)(IC50= 3.9μg / mL)。然而,DCM和CYH提取物显示出微弱的中和DPPH自由基的能力,抑制比例不超过30%。这些结果表明,甲醇提取的最高DPPH活动密切相关,酚醛树脂的含量高。这是我们的工作验证TPC之间有高度的相关性和DPPH活动(R2= 0.98)。
样品 抗氧化活性(DPPH)
%抑制(50μg / mL) 集成电路50(μg / mL)
CYH 14.3±2.0c > 50
扩张型心肌病 29.3±1.6b > 50
甲醇 93.5±1.0一个 6.2±3.0
抗坏血酸 - - - - - - 3.9±0.1
CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;甲醇:甲醇。数据是三个重复的平均值±SD。不同的字母表示显著差异根据图基的测试( )。
表2
抗氧化活性的区域的一部分r .管提取物。

与文献相比,目前的结果被Ćebović高于那些et al。27]。他们发现的水提取物r . cripus水果DPPH活性较低,高集成电路50= 46μ克/毫升。然而,研究Elzaawely et al。28),在处理Rumex粳稻地上部分,没有按照我们的发现。他们发现层提取(中等极性溶剂)显示最高的抗氧化活性。

3.3。化学成分的r .管提取
3.3.1。HPLC-DAD分析

酚类化合物在不同的识别提取的地上部分r .管使用HPLC-DAD(图1)。为每个色谱和比较的基础上标准化合物的保留时间和爸爸光谱分析在相同的条件下,许多酚类化合物被确定。,共有18个酚类化合物被确定和量化的提取物通过相对保留时间(表3)。有趣的是,化合物显示最高浓度属于黄酮和cardamonin类。这些化合物是cardamonin (8),5-hydroxy-3′酸酯(17),和3′-hydroxy-b-naphthoflavone (18),在DCM检测提取,浓度为74.0,55.5,和50.4毫克/克dw,分别。此外,中等浓度,我们发现其他化合物属于黄酮和苯甲酸类等4′,5-dihydroxy-7-methoxyflavone (13dw)(25.0毫克/克),3、6、3′-trimethoxyflavone (15)(19毫克/ g (dw)和3,4-dihydroxy-5 methoxybenzoic酸(3dw)(15.3毫克/克)。这些酚类化合物是首次发现的r .管提取物。


图1
高效液相色谱色谱资料,可视化在280 nm,。(CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷和甲醇:甲醇)提取来自空中的部分r .管来自突尼斯。峰:(1)3-amino-4-hydroxybenzoic酸;(2)没食子酸;(3)3,4-dihydroxy-5 methoxybenzoic酸;(4)7-hydroxycoumarin-3-carboxylic酸;(5)芦丁水合物;(6)没食子酸丁酯;(7)4-hydroxytamoxifen;(8)cardamonin;(9)phenoxodiol;(10)pinostilbene水合物;(11)3-benzyloxy-4 5-dihydroxy-benzoic酸甲酯;(12)乙trans-2-hydroxycinnamate;(13)4′,5-dihydroxy-7-methoxyflavone;(14)pinosylvin单甲醚;(15)3、6、3′-trimethoxyflavone;(16)紫草素;(17)5-hydroxy-3′酸酯;(18)3′-hydroxy-b-naphthoflavone。
N° 化合物和化学结构的化合物 Rt(分钟) dw的浓度(毫克/克) 引用
CYH 扩张型心肌病 甲醇
1
3-amino-4-hydroxybenzoic酸		 2。1 nd nd 2。0 铃木et al。29日]
2
没食子酸		 3.5 nd nd 0.9 长子和Asdaq30.]
3
3,4-dihydroxy-5 methoxybenzoic酸		 7.7 nd 15.3 nd Huyut et al。31日]
4
7-hydroxycoumarin-3-carboxylic酸		 19.8 nd nd 7.2 Wahdan et al。32]
5
芦丁水合物		 22.7 nd nd 2。1 Karakas et al。33]
6
没食子酸丁酯		 43.0 nd 1。3 nd 公园等。34]
7
4-hydroxytamoxifen		 43.0 nd 1。1 nd 胫骨和崔35]
8
Cardamonin		 44.2 nd 74.0 nd Goncalves et al。36]
9
Phenoxodiol		 44.3 0.3 nd nd Souza et al。37]
10
Pinostilbene水合物		 44.6 1。2 nd nd 阿姆斯特朗和Gredor [38]
11
3-benzyloxy-4, 5-dihydroxy-benzoic酸甲酯		 45.0 nd 0.6 nd 国际局(39]
12
乙trans-2-hydroxycinnamate		 45.3 nd 0.9 nd Weitkamp et al。40]
13
4′,5-dihydroxy-7-methoxyflavone		 46.3 26.4 25.0 nd Rudrapaul et al。41]
14
Pinosylvin单甲醚		 47.0 0.3 0.5 nd Gabaston et al。42]
15
3、6、3′-trimethoxyflavone		 48.0 nd 19.0 nd Aritomi et al。43]
16
紫草素		 48.0 3.2 nd nd 施等。44]
17
5-hydroxy-3′酸酯		 49.3 3.5 55.5 nd Shafaghat et al。45]
18
3′-hydroxy-b-naphthoflavone		 49.8 7.9 50.4 nd Yahyaoui et al。24]
CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;dw:干重;甲醇:甲醇。RT:保留时间;nd:没有检测到。
表3
酚类化合物中确定各种提取的内容r .管空中HPLC-DAD份数。

高效液相色谱色谱表明,化学成分变化明显的极性溶剂使用。因此,CYH提取包含更多的极性的酚类化合物和洗脱过程结束时发生的收购。DCM的提取、极性和非极性的化合物可以被识别为最大强度等于110 mV。

极地提取(甲醇)有更多的极性化合物筛选了2到20分钟相比其他两个提取最大强度等于650 mV。它可以推断,峰的强度增加的极性溶剂,可以确认TPC(表的结果1)。换句话说,HPLC-DAD结果强烈与比色法测试和确认的结果发现丰富的酚类化合物的提取。通过与文献比较,发现一些酚类化合物的提取r . cripus首次被发现,如4′,5-dihydroxy-7-methoxyflavone (13),5-hydroxy-3′酸酯(17),和3′-hydroxy-b-naphthoflavone (18)。然而,没食子酸等化合物以前检测到,检测到r . acetosa(Kucekova et al。46],cardamonin检测蓼属植物ferrugineum(47]。Cardamonin已经收到了严重的注意力从科研人员由于期望它对人体健康是有益的36]。

总之,这些特性变化之间的化学成分不同的有机提取物可能是由于每个溶剂的提取性和环境因素在酚类成分的影响。

3.3.2。用气相色谱-质谱分析鉴定的挥发性化合物

气相色谱法结合质谱(gc - ms)被用来识别有机提取物中的挥发性化合物r .管地上部分。只有两个化合物(维生素E和α谷甾醇)检测到没有衍生化。而α谷甾醇被发现在CYH和DCM提取物,维生素是只发现在扩张型心肌病。因此,为了确定其他挥发性化合物,gc - ms衍生了屈服derivatized化合物色谱特征和波动。总的来说,这是导致三个10个化合物的识别提取(表4)。这些化合物分布如下:2化合物CYH和DCM提取物,甲醇提取物,和8个化合物。三个化合物中发现多个提取。挥发性化合物的特点从不同提取物显示三个家庭的有机化合物的存在。固醇类、糖类和酚酸。这些化合物被确定为第一次r .管提取,如D - (−) fructopyranose, L -(−)阿糖醇,2,5-dihydroxyacetophenone。有趣的是,甲醇含有多种酚类化合物,这是抗氧化活性[著称59]。这一发现是在协议与抗氧化活性高发现在当前的研究中。此外,一些研究表明,一些酚类化合物对肿瘤细胞的活动,尤其是对MCF-7和hct - 116细胞系(25,60]。此外,β谷甾醇,唯一的复合衍生化和无检测,以其抗氧化活性和药用一(改善人类有机体的胆固醇水平)61年,62年]。
N° Volatil化合物和化学结构 Rt(分钟) 峰面积(×106) 引用
CYH 扩张型心肌病 甲醇
没有衍生化
1
维生素E		 26.95 nd 5.9 nd 淀粉等。48]
2
ß谷甾醇		 29.35 30.6 32.7 nd 森et al。49]
与衍生
3
2,5-dihydroxyacetophenone		 10.87 1。9 4.0 18.9 鲍曼et al。50]
4
β-D-xylopyranose		 13.40 3.6 0.7 nd 黄等。51]
5
L -阿糖醇(−)		 14.58 nd nd 14.6 Shomo et al。52]
6
(D) -−fructofuranose		 15.27 nd nd 78.6 Yu et al。53]
7
(D) -−fructopyranose		 15.33 nd nd 78.6 Yu et al。53]
8
葡萄糖		 15.88 nd nd 36.4 McComsey et al。54]
9
没食子酸		 16.42 nd nd 53.5 阮et al。55]
10
肌醇		 17.17 nd nd 17.3 Maldonado et al。56]
11
蔗糖		 20.36 nd nd 51.1 杜兰et al。57]
12
D - (+) -turanose		 20.51 nd nd 7.4 佩雷拉et al。58]
CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;甲醇:甲醇。RT:保留时间;nd:没有检测到。
表4
用气相色谱-质谱,Volatil化合物识别,在不同的提取r .管天线部分。
3.4。生物活性
3.4.1。疼痛抑制活性

的anti-AChE活动r .管地上部分没有被评估。然而,甲醇提取显示最高的抑制(83.7%)集成电路50= 31.6μg / mL相比,加兰他敏,CYH和DCM(表提取没有疼痛抑制活动5)。本研究表明,甲醇提取的anti-AchE活动高于其他提取获得。事实上,帕蒂尔et al。63年]证明了一些酚类化合物如芦丁水合物的存在(IC50= 1.1×103μg / ml)可能导致疼痛的抑制作用。此外,目前的结果比发现Ahmad et al。62年)在处理r . hastatus提取物。他们发现不同提取物不同极性(极性、中等极性和非极性)提供了一个集成电路50从75年到1420年不等μ克/毫升。最近的研究表明,抗氧化剂有关系属性和胆碱酯酶抑制活性64年]。这可以验证我们的发现,我们发现TPC和anti-AChE活动之间的高相关值(R2= 0.99)。
样品 Anti-acetylcholinesterase活动
%抑制(50μg / mL) 集成电路50(μg / mL)
CYH na > 50
扩张型心肌病 na > 50
甲醇 83.7±2.2一个 31.6±3.7
加兰他敏 − 1.2±0.1
CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;甲醇:甲醇。拿拿淋:不活跃。
表5
Anti-acetylcholinesterase活动r .管提取物。
3.4.2。细胞毒性的活动

在这项研究中,不同的提取的细胞毒性效应r .管对两个癌症细胞系(hct - 116和MCF-7)及其抑制其增长潜力进行评估。所有的精华都发现活性对细胞系,与DCM提取更占主导地位,如图2。当把每个细胞株分别显著差异( )间注意到不同提取物对每个细胞株的作用。CYH提取效果很差对hct - 116少的抑制不超过20%,虽然针对MCF-7细胞系表现出良好的活动。此外,甲醇提取几乎同等的效果对细胞系(hct - 116和MCF-7)抑制57.3%和58.3浓度的50 mg / L,分别。此外,对于这两种细胞系,hct - 116和MCF-7, DCM提取显示最高的细胞毒性潜在的抑制有近77.2%和69.2,分别。这种抑制作用可能是由于一些酚类化合物的存在,这是重要的细胞毒性活动著称,尤其是cardamonin IC50等于8.1和8.6µg / mL,分别对两个细胞系(MCF-7和hct - 116) [65年]。其他研究提出有效的活动与癌症细胞,包括MCF-7和hct - 116细胞株,其中紫草素分子(IC50= 0.83和0.53 (μg / ml)),分别66年),这证实了我们的结果。我们也将我们的研究结果与发现,王et al。67年]。他们显示methanolic提取的r .管收集的物种,Rafha地区,沙特阿拉伯王国,没有细胞毒性活动对MCF-7细胞系(0%)。在先前的研究中,Shaik和拉贾68年)报道,多糖水提物的特点蓼属植物equisetiforme(蓼科)活动MCF-7和hct - 116低,分别为11.3和14.5%。


图2
细胞毒性的r .管提取MCF-7和hct - 116癌症细胞系。(CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;甲醇:甲醇)。数据是三个重复的平均值±SD。根据图基测试(不同的字母表示显著性差异 )。
3.5。主成分分析(PCA)

主成分分析是为了了解测量抗氧化剂之间的关系,生物活性,TPC。PCA的各种结果如图所示3。的主要组件(F1,F2)解释数据方差占总数的93.99%。根据这一分析,惯性轴被保留,如表所示6。PCA的载荷曲线不仅表达的程度的相关因素与初始变量也显示不同的活动之间的相关性(DPPH、疼痛、MCF-7和hct - 116)和TPC。而第一主成分(F1)相关与DPPH、疼痛和TPC载荷0.98,1.0,和0.99,分别,第二主成分(F2)与两个细胞系细胞毒性相关活动(MCF-7和hct - 116)载荷为0.62和0.98,分别(表7)。图3给出了好疼活动之间的相关性,DPPH自由基清除活性,TPC。


图3
主成分分析加载块抗氧化和生物活动r .管提取物。TPC:总酚含量;疼痛:antiacetylcholinesterase活动;DPPH:抗氧化活性;MCF-7:细胞毒性1;hct - 116:细胞毒性2。
F1 F2
总酚含量(TPC) 27.5 0.2
彻底清除活动(DPPH) 26.5 2。9
Anti-acetylcholinesterase活动(疼痛) 27.9 0.1
细胞毒性活动(MCF-7) 17.0 27.8
细胞毒性活动(hct - 116) 1。4 69.1
表6
贡献的变量因素的主成分分析(%)。
F1 F2
总酚含量(TPC) 0.99 0.052
彻底清除活动(DPPH) 0.98 0.19
Anti-acetylcholinesterase活动(疼痛) 1.00 0.02
细胞毒性活动(MCF-7) −0.79 0.62
细胞毒性活动(hct - 116) 0.22 0.98
表7
变量和因素之间的相关性。

使用biplot图(图4),似乎提取相对于TPC和生物活性定位根据其化学成分。最高的甲醇提取TPC靠近DPPH,疼痛的活动。因此,它可能表明多酚化合物有助于抑制这两种活动。同样,靠近MCF-7 DCM提取。这个提取包含几个在中等极性化合物主要化合物:小豆蔻就是根据其细胞毒性特性的文献[69年,70年]。


图4
主成分分析biplot不同提取物的抗氧化和生物活性r .管。(CYH:环己烷;DCM:二氯甲烷;甲醇:甲醇)。

4所示。结论

我们的研究结果显示,TPC和抗氧化活性r .管高和其他物种相比,和不同极性的溶剂提取。而温和的TPC之间的相关性被发现,anti-AChE,和细胞毒性活动,有很强的相关性之间的TPC和不同提取物抗氧化的结果。由于HPLC-DAD进行分析r .管提取物,我们的研究结果表明,主要属于cardamonin和黄酮类化合物。此外,gc - ms分析表明,甲醇提取物含有挥发性化合物的大多数属于糖类。

证据的基础上显著的疼痛抑制和自由基清除各种样品r .管,我们可以推断,人类可能是最好的抗氧化剂和抗胆碱酯酶的化合物的来源。表明,这些重要的生物活动r .管可能是一个潜在来源的活性分子用于制药工业。进一步的工作需要建立识别其他分子负责此类活动使用例如flash色谱法。

数据可用性

我们相信,确保数据底层的一篇论文的结果公开的地方可能在必要时尽可能的打开和关闭。

的利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突的有关描述的工作在这个手稿。

作者的贡献

实验和手稿写由穆罕默德•马Saoudi合著者的指导下。哈立德Alouani Bouajila阿耶验证实验,校对,精制准备出版的手稿。Rami压力进行了统计分析。

确认

这项工作已经由突尼斯部长财务支持高等教育和科学研究,提供学生默罕默德·马Saoudi博士奖学金。

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