一个快速和验证的高效液相色谱法同时分析五5₃受体拮抗剂通过多组分定量分析的一个标志

文摘

在这项研究中,一个新的策略同时量化五羟色胺的5 -羟色胺受体antagonists-ondansetron azasetron, ramosetron, granisetron, tropisetron-either注入样品或注射剂型首次建立了基于高性能液相色谱结合定量分析的多个组件由一个标记。多组分的定量分析一个标记方法进行联合作为一个内部参考物质和执行使用相对保留时间和紫外光谱相似性作为双指标。5的定量分析₃受体拮抗剂是基于相对校正因子计算和研究。色谱分离是通过使用一个C₁₈列(150毫米×4.6毫米,5.0μ米),流动相是由乙腈- 0.05摩尔·L⁻¹磷酸二氢钾(pH值4.0)(25:75)流量为1.0毫升·分钟⁻¹和检测波长307 nm(联合、azasetron ramosetron), 302海里(granisetron),和285海里(tropisetron)。此外,多组分的定量分析的准确性由单个标记方法与外部标准方法相比,两种方法之间的观察和无显著差异。所建立的方法快速、简单,不需要很多参考物质,它可以被成功的应用作为质量控制的一部分,5个5₃受体拮抗剂的注射剂型和注入样品药物在医院。

1。介绍

化疗的影响,辐射,肠易激综合症,阿片类镇痛药物,麻醉,postoperative-induced恶心和呕吐是最不幸的副作用的病人。这些副作用的恶心和呕吐可以极大地引起食欲不振,体重损失,降低社会技能,和更严重的临床后果,如脱水、电解质失衡,和长时间住院1]。5 -羟色胺(5 -₃)受体拮抗剂,非正式地称为“setrons”,是一种止吐剂药物抑制释放5 -和迷走神经的5 -受体在中枢神经系统。血清素5 -₃受体拮抗剂,包括联合(ODT) granisetron(因),tropisetron (TPT), azasetron (AZT)和ramosetron (RMT),特别有效的治疗和预防的恶心和呕吐2- - - - - -6]。五个五的化学结构₃受体拮抗剂在图所示1。

目前,快速检测的药物主要包括红外光谱。然而,近红外光谱技术只适用于药物的初步筛选,和一个定量模型是更为复杂和罕见的,导致药品快速检测的定量要求没有得到满足。高效液相色谱法通常用于验证快速检测系统由于其诱人的特性,如峰值效率高,伟大的分辨率、灵敏度高,可重复性好,和广泛的应用范围。高效液相色谱分析方法检测5₃受体拮抗剂如ODT、因知识、TPT AZT,和RMT已经成熟,大部分使用保留数据的定性分析,而外部标准方法(ESM)是适用于定量分析7- - - - - -24]。然而,其中有些方法可能需要很长时间,和特定的药物测试必须对应参考物质,不能满足快速药物检测的要求。

解决上面的问题,一个独特的多组分定量分析由单一标记(QAMS)分析方法被采用。QAMS方法能够同时识别和量化本身和其他分析物由一个参考标准,大大降低了实验的成本和分析时间(25- - - - - -32]。到目前为止,还没有报道集中QAMS或ESM ODT同时量化的方法,因,TPT, AZT, RMT在注入样品和注射剂型。因此,本研究的目的是建立一个快速HPLC-QAMS方法检测5 5₃受体拮抗剂通过使用两个指标的相对保留时间和紫外光谱相似性为定性分析和定量分析的相对校正因子。该方法被成功地用于5的常规质量控制₃受体拮抗剂注入,注入产品,在医院里未知的药物的初步筛选。

2。实验的程序

2.1。化学药品和试剂

六个参考物质(ODT、因知识、TPT AZT, RMT,和尿嘧啶)购买的国家控制药品和生物制品研究所(中国,北京)。每六个参考物质的纯度超过99.5%。HPLC-grade乙腈和AR-grade磷酸二氢钾、磷酸、三乙胺和提供的化学试剂国药控股有限公司有限公司(中国,北京)。超纯水从微孔Milli-Q获得系统(美国微孔)。

2.2。制药配方

以下剂型进行了分析:商业注入盐酸ODT齐鲁制药有限公司(山东、中国)声称包含2毫克每毫升。商业注入盐酸因Cinkate制药(苏州、中国)声称含有1毫克每毫升。因商业注入盐酸TPT齐鲁制药(山东、中国)声称包含5毫克每毫升TPT。商业注入盐酸AZT浙江万马为国内制药(浙江、中国)标记包含5毫克每毫升AZT。商业注入盐酸RMT Cisen制药(山东、中国)标签含有0.3毫克每毫升RMT。

2.3。仪器及色谱条件

色谱分析是一个高效液相色谱系统上执行(Dionex、德国)组成的一个终极®3000四元泵,autosampler, column-heating隔间,紫外检测器(爸爸)。色谱数据收集和分析使用Chromeleon®7.2软件。同时五5 -分离₃受体拮抗剂进行使用InertSustain C₁₈列(4.6毫米×150毫米,5μ米)由岛津制作所(中国)有限公司有限公司的流动相由乙腈- 0.05摩尔·L⁻¹磷酸二氢钾(0.1%磷酸、pH值4.0)(25:75,v / v)流量为1.0毫升·分钟⁻¹15分钟。所有的决定都是在环境温度30°C。ODT检测器波长,因知识、TPT AZT, RMT 307, 302, 285, 307,和307海里。

2.4。制备的标准解决方案

股票的解决方案被称量准确和准备解散五5₃受体拮抗剂的标准参考5.0毫克每沉浸在超纯水在10毫升容量瓶大约0.5毫克/毫升的浓度作为参考标准。尿嘧啶的标准储备溶液(20μg / mL)是由溶解2.0毫克的尿嘧啶在100毫升容量瓶超纯水。混合5 -₃受体拮抗剂工作标准的解决方案是由适当的稀释股票的解决方案与超纯水为绘制校准曲线所需的浓度。标准的解决方案都是储存在−20°C到使用和注射用10分钟。

2.5。方法验证

该方法验证根据国际协调会议(我)指南33]。以下参数进行调查:线性、精度、稳定性、准确性、检测极限,和鲁棒性。每个5的检测极限₃确定受体拮抗剂的信噪比(S / N) 3。量化的限制,比率被认为是10:1,RSD %值小于10% (34]。

2.5.1。建设校准图表

校准图表的方法评估了一系列不同浓度的工作标准(所有5个5的混合物₃受体拮抗剂)。浓度范围选择在6个不同浓度,即5、10、20、50、75和100μODT g / mL,因知识、课程和AZT和0.5,3、6,20、30、50μ英国伦敦铁路、海运及g / mL。一个20μL整除的工作解决方案一式三份注入色谱系统(n= 3)。的峰值区域五5₃受体拮抗剂策划反对每个药物获得的相应浓度的校准曲线。

2.5.2。精度

方法精度,三个浓度水平的混合标准解决方案(10.0、20.0和50.0μODT g / mL,因知识、TPT AZT;1.0、3.0和6.0μRMT g / mL)评估在一天一式三份,连续三天。百分比相对标准偏差(%相对标准偏差)的五个分析物的峰面积计算每个组件在一天之内和在不同的日子里得到盘中精度和interday精度。

2.5.3。稳定

示例解决方案的五5₃受体拮抗剂与超纯水准备储存在室温和注入高效液相色谱(0,1,2,4,6,8 h后准备。示例解决方案的稳定性研究了RSD的五个分析物的峰面积的变化。

2.5.4。精度

方法的准确性决定复苏的已知添加大量的五5₃受体拮抗剂参考物质注射到先前分析商业使用三个浓度水平一式三份。

2.5.5。健壮性测试

鲁棒性测试是由四个故意变化等一些色谱参数列温度、乙腈比例、流动相的流速,pH值。乙腈的比例、流速和pH值的±2,改变了流动相的±0.02,分别和±0.2。列温度改变±1°C(从29到31°C)。的分离程度和RSD % 5 5₃受体拮抗剂。

2.6。定性调查

2.6.1。紫外光谱相似

五5 -混合标准工作的解决方案₃受体拮抗剂被注入到高效液相色谱系统根据色谱条件的部分2.3。然后,光谱和1日UV光谱被记录了下来。向量夹角的余弦值计算之间的紫外光谱相似性评价五个5₃受体拮抗剂。夹角余弦公式表达在方程(1)中,X_ki和X_kj峰值点的参考和测试样品的吸光度,分别。相似度值可以定量反映不同的紫外光谱的相似度。相似性值接近1时,不同的紫外光谱的相似度很高。此外,相似性值接近于0时,紫外光谱之间的差异很大。

2.6.2。相对保留时间

相同的混合标准溶液的五个分析物和尿嘧啶节中描述的色谱条件下进行测试2.3确定相对保留时间(RRT)和RSD %。计算rrt由以下方程: 在哪里t₀,t_我,t_x位于安大略省代表尿嘧啶的保留时间,和分析物。

2.7。使用QAMS方法计算的相对校正因子

在这项研究中,由于价格低廉,可用性、化学稳定性、良好的分离,色谱峰与其他5没有干扰₃受体拮抗剂,ODT QAMS被选为内标物质的方法。之间的相对校正因子(RCF, f) ODT,另5₃受体拮抗剂计算使用方程(3)。每个5 -的浓度₃受体拮抗剂在示例解决方案可以通过方程计算(4)[25- - - - - -32]。 在哪里一个_我是一个内部参考物质的峰面积(ODT)测试,然后呢C_我是内部参考被测物质的浓度。一个_x是其他的峰面积调查组件和C_x其他研究组件的浓度的样品溶液。

2.8。样品分析

2.8.1发布。分析五5₃受体拮抗剂在注入样品

所有注入样品的五5₃受体拮抗剂层流罩是准备在无菌条件下由授权中央静脉注射添加剂服务在医院。最常见的输液ODT准备提交,因,TPT, AZT, RMT分别为80.0,30.0,50.0,100,3.0μ克/毫升0.9%氯化钠注射液稀释。准确的每5卷₃受体拮抗剂的输液制剂转移成一组10毫升容量的玻璃瓶,然后用超纯水稀释至体积保持药物的浓度在线性范围内。

2.8.2。分析五5₃注射受体拮抗剂在商业

商用的注射5 5₃受体拮抗剂是准备用超纯水和注入高效液相色谱在上述色谱条件。随后,每个色谱峰面积的五5₃受体拮抗剂被记录。然后,五5的内容₃受体拮抗剂被ESM和QAMS方法计算。

3所示。结果与讨论

3.1。色谱条件的优化

根据文献[7- - - - - -24),选择乙腈和酸性水媒体优化流动相组成。一系列浓度、pH值、磷酸二氢钾水溶液的比例,不同的色谱柱类型进行了研究,以确保良好的分辨率和适当的保留时间五5₃受体拮抗剂。高效液相色谱的色谱图所示2和3。最好的结果是通过比较研究药物的峰形状和决议的pH值4.0和KH acetonitrile-50毫米₂阿宝₄缓冲(25:75;v / v)在1.0毫升/分钟的流量。

3.2。校准曲线,精度、稳定性和准确性

线性范围、精度、稳定性和恢复如表所示1和2。高系数的测定值(r²> 0.999)显示所有五5 -良好的线性₃受体拮抗剂。盘中的rsd为interday变化范围从0.4到1.9%,显示良好的仪表精度。ODT、峰值的RSD为因,TPT, AZT, RMT分别为0.8%,0.6%,0.9%,1.8%,和1.2% (RSD %≤2.0%),这表明五个5₃受体拮抗剂测试样品溶液稳定在8小时内(分析)的平均时间,可以评估正常的实验室环境下没有任何重大损失。复苏的范围从98.3%到101.8%,相对标准偏差< 2.0%,说明该方法是准确的。

3.3。紫外光谱相似性和相对保留时间

紫外光谱的差异是基于结构的差异不同的5₃受体拮抗剂(图1)。原件和1日UV光谱相似的结果如表所示3和4。结果显示,有一些差异的原始紫外光谱五5₃受体拮抗剂。特别是第一紫外线光谱相似性有效放大原始紫外光谱(数据的差异4和5)。因此,定性识别使用1号5 -紫外光谱相似度能有效区分不同₃受体拮抗剂。

定性的高效液相色谱方法通常是与对照品的保留时间。保留时间是受几个因素的影响如列包装、流动相,乐器。5 - 5是很困难的₃受体拮抗剂相似的物理性质和结构来识别准确只使用保留时间。在这项研究中,相对保留时间定性(RRT)被用来确定不同的5₃受体拮抗剂。数据的再现性可以改善纠正死体积。在这个实验中,不同的LC仪器的影响(最终3000,安捷伦1260,日本岛津公司LC-20A),品牌列(安捷伦Zorbax C扩展₁₈InertSustain C₁₈列,Kromasil C₁₈)、温度(±1°C), pH值(±0.2)和流动相的流速(±0.02)rrt进行调查。结果如表所示5。结果表明,rrt的五5₃受体拮抗剂明显不同,但流动相的pH值的变化和色谱柱有一些对rrt的影响。rrt之间的差异主要是由于不同的制造商与包装材料的特性和制备。为此,我们在此限制条件参数和执行光谱相似性作为一个双指标符合定性分析。

3.4。鲁棒性测试QAMS

评估相对离心力的健壮性,不同的LC仪器的影响(最终3000,安捷伦1260,日本岛津公司LC-20A),品牌列(安捷伦Zorbax C扩展₁₈InertSustain C₁₈列,Kromasil C₁₈)、温度(±1°C), pH值(±0.2)和流动相的流速(±0.02)在rcf公司调查。的rcf五5₃受体拮抗剂如表所示6。实验结果表明,RCF有良好的重复性的值(rsd为从0.3%到4.2%)在不同实验条件下。这些结果确保HPLC-QAMS方法可用于常规分析。

3.5。样品分析

发达HPLC-based QAMS方法和ESM分析方法应用于确定五5₃受体拮抗剂在注入样品和注射剂型。大量的个人5₃受体拮抗剂在注射剂型和注入样本计算和结果表中列出7。从比较分析的结果,我们可以得出结论,没有显著区别这两种分析方法(使用T以及, ),和RSD值< 2.5%。与此同时,五个人的内容₃受体拮抗剂也由高效液相色谱方法中所描述的中国药典(2015年版),结果表明上述方法之间无显著差异。

4所示。结论

发达HPLC-based QAMS和外部标准分析方法快速、有选择性地方便,和敏感的同时测定ODT,因,TPT, AZT, RMT在注射剂型和注入样品。比较分析结果显示没有明显的区分这两种方法的测定结果。QAMS分析方法可以提供可靠的结果,保存资料,缩短分析时间。该方法具有巨大的潜力,可以起到增强的作用在医院质量控制和质量保证程序。

数据可用性

大多数的数据用于支持本研究的结果包括在本文中。其他数据可从相应的作者。

的利益冲突

作者没有利益冲突的声明。

作者的贡献

Fuchao陈和方则贡献了同样应该考虑这个工作和并列第一作者。

确认

这项工作是财务支持的十堰的科技研究项目,中国(18 y73数量)。

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