发展快速、简单的方法去除多酚植物提取物

文摘

多酚类物质是植物的次生代谢产物,负责预防许多疾病。Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)对多酚具有高度的亲和力。这种方法涉及使用PVPP列在离心力去除多酚。标准的没食子酸,儿茶素提取香兰素,茶(茶树)被用于这项研究。PVPP粉是用一个注射器与不同的数量。测试样本在PVPP列和受到离心分层。浮在表面的总酚含量进行了测试。酚类化合物的存在和咖啡因被筛选高效液相色谱法测量吸光度,享年280岁。标准和茶提取物的抗氧化能力与多酚清除分数用DPPH清除试验。没有发现茶多酚标准或多酚提取PVPP治疗后。本研究中描述的方法去除多酚很简单,便宜,快速,高效,可以用来研究多酚类物质的贡献出现在天然产物生物活性。

1。介绍

多酚类物质在自然食物来源丰富。清除活性氧的能力,同事多酚类物质对人类健康的有益作用(1]。最近的天然食品和草药的研究显示,越来越科学兴趣对多酚对健康的作用。

Polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)是一种水不溶性聚合物吸附茶多酚通过氢键等弱力(2]。PVPP有高容量约束的多酚类化合物如儿茶素、表儿茶素、槲皮素(3,4]。进一步PVPP已经被用于去除多酚从饮料到提高转基因的质量浮萍属小提取表达马伯[5]。最近的研究由Hernandez-Bolioa et al。6)四种不同方法相比去除多酚l . latisiliquum研究影响PVPP吸附的生物活性,液-液分区氯化钠溶液,polyamide-SPE提取和使用交联葡聚糖凝胶渗透色谱法LH-20。类似的方法研究了量化使用PVPP预处理盒咖啡因的茶。本研究采用SPE真空歧管这是一个昂贵的附件(7]。

多项研究表明,有一个协会之间的抗氧化活性和多酚含量8- - - - - -10]。多酚的去除试验前将确认是否归因于生物活性多酚,这是缺乏大多数研究报道。PVPP列是本研究中使用的吸附茶多酚和剩余的解决方案通过列收集研究茶多酚的生物活性天然产物的贡献。本协议中描述的技术是进一步改善和优化方法的发展在我们实验室的使用红茶提取物多酚从天然产物(茶树)该模型系统(11,12]。本研究采用单步去除多酚高效、迅速。

2。材料和方法

2.1。化学品和设备

polyvinylpolypyrrolidone (PVPP) Folin-Ciocalteu试剂、没食子酸(GA),β羟乙基茶碱、咖啡因、表儿茶素(EC),(−)儿茶素没食子酸盐(EGCG),和1,1 - diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)从西格玛化学品购买、美国。乙腈(高效液相色谱级)从BDH购买的化学物质。高效液相色谱法进行了日本岛津公司信用证10溶剂输送系统配备UV / VIS探测器日本岛津公司10社民党和积分器日本岛津公司C-R8A(日本岛津公司公司、日本)。Betasil苯液相色谱柱( 毫米)(热科学)是用于单独的儿茶素和咖啡因。使用BioFuge-Pico离心进行d - 37520离心机(德国贺利氏仪器)。

2.2。制备茶提取物

商用红茶和冻干的新鲜茶冲(芽和相邻的两片嫩叶)被用于这项研究。红茶叶子(10克)煮400毫升的去离子水。提取是透过棉花塞到容量瓶和由500毫升。新鲜茶冲从Akuranekande收集房地产Ehaliyagoda,斯里兰卡。干茶冲(1 g)是用去离子水(8毫升)2小时,在9000转离心20分钟。上层清液是通过绘画纸1滤纸过滤。刚做好的茶提取物用于高效液相色谱分析和确定总酚含量。

2.3。优化PVPP从茶多酚提取物的清除

棉花塞被放置在底部的注射器(5 cc)删除后柱塞和针。不同数量的PVPP被用来优化提取过程在室温下。PVPP粉(0.9 g、0.7 g和0.5 g)的顶部添加了药棉塞和注射器被放在一个离心管。茶提取物(2毫克/毫升;3毫升)分层PVPP列如图1。列满载茶叶提取离心机在2000年10分钟和上层清液收集(分数)。第一部分是丢弃(分数1)。这个过程被重复1毫升的茶提取物为6倍和每个部分收集到单独的管。粗茶提取和每个分数收集分析了总多酚和茶叶成分的存在(咖啡因和儿茶素)。实验进行了复制( )。GA的标准解决方案相同的步骤之后,EGCG,香兰素( )。

2.4。总多酚的测定(TPC)

TPC茶提取物和多酚自由分数收集在每个周期被Folin-Ciocalteu量化(fc)方法(13]。吸光度的标准没食子酸、儿茶素(EGCG)和香兰素(100μg / mL)也在760海里后执行fc PVPP (PVPPT)治疗前后测定样品。

2.5。紫外吸光度测定

吸光度的标准(100μg / mL)没食子酸、儿茶素(EGCG)和香兰素前后样品中多酚类物质的去除是使用分光光度计测量280海里以去离子水为空白( )。样品的新鲜茶叶冲(1毫克/毫升)也同时进行。

2.6。分析没食子酸、咖啡因、EC和EGCG新鲜的茶与PVPP冲洗治疗前后

反相高效液相色谱法(rp)进行了检测没食子酸,咖啡因,EC, EGCG标准(每个8μg / mL)茶叶中提取和PVPPT茶提取物如前所述14]。茶成分分离使用8%的乙腈1%冰醋酸作为流动相的流速0.5 mL / min苯基柱。β羟乙基茶碱(10μg / mL)被用来作为内部标准。茶叶提取物和PVPPT茶提取物和标准(100μL)涨跌互现β羟乙基茶碱(100μL)其次是离心和上层清液(25μL)注射到列。标准由没食子酸、咖啡因、EC, EGCG是同时运行与测试样本。山峰被确定保留时间和真实样品飙升。峰值检测到280海里。

2.7。分析标准的没食子酸,香兰素,EGCG PVPP之前和之后的治疗

没食子酸的存在,香兰素,EGCG (100μg / mL) PVPP治疗后进行了分析并与他们的标准(100μg / mL)使用高效液相色谱如上所述在缺乏内部标准。

2.8。抗氧化活性测定

抗氧化活性是由1,1 - diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)自由基清除实验被布洛瓦(15),用细微的修改。茶冲水提取物( )用去离子水稀释获得DPPH实验所需浓度。PVPPT标准和茶提取物受到DPPH实验。测试样品(15μL)与DPPH混合试剂(285μL;100年μ米绝对乙醇)。混合物被允许站在室温下30分钟在黑暗。控制是通过添加DPPH试剂(100准备的μM;285年μ去离子水(15 L)μL)。吸光度()测量使用板读者在540 nm和与控制。抑制的结果表示为百分数(%)使用以下方程:

2.9。数据分析

所有实验进行了至少一式三份。所需的测试样本的有效浓度(EC清除DPPH自由基50%₅₀)是由线性回归分析获得的剂量反应曲线的抑制百分比与浓度之间的关系。统计分析与学生的表现以及。的价值 被认为是重要的。Microsoft Excel是用于所有数学和统计计算。

3所示。结果与讨论

多酚在天然产物负责疾病的预防和治疗1,16]。除了多酚,其他类别的活性次生代谢产物是萜烯,氮和含硫化合物(17]。为了避免误解的结果关于生物活性的多酚类物质,是至关重要的建立一个有效的方法来分离多酚与其他类型的生物活性的次生代谢产物进行进一步分析。

PVPP是稳定的工业吸附剂使用的啤酒,酒,果汁和删除不合适的颜色2,18,19]。此外,PVPP用于净化的多酚氧化酶,从啤酒厂废水生物活性化合物,基因组DNA从polyphenol-rich椰子20.- - - - - -22]。侯和coinvestigators雇佣PVPP悬挂与无水硫酸钠去除茶多酚,消除基体效应的测定杀虫剂存在于茶叶(23]。多酚类物质的特性榄仁树属阿诸那树皮提取物已经被报道后,剧烈的摇晃PVPP的植物提取物(24]。最近的一项研究表明,多酚提取的最有效的方法是PVPP氯化钠溶液吸附和液-液分区,相比polyamide-SPE提取和使用交联葡聚糖凝胶渗透色谱法LH-20 [6]。大多数方法描述了PVPP悬浊液的参与;然而目前的研究只需要一个注射器挤满了PVPP粉。整个过程可以在20分钟内进行。

芽和相邻两片摘树叶和加工制造红茶和绿茶。茶叶(茶树)含有大量的多酚(25]。在目前的研究中我们采用红茶和新鲜的茶冲洗去除多酚10.8 - -12.5和20.3 - -25.6 w / w %没食子酸当量,分别。深棕色残渣出现在顶部的部分列红茶如图1。fc测定的吸光度发现是小于0.05在760 nm治疗后PVPP的浓度2毫克/毫升的红茶( ),所有分数调查与大量的PVPP(图使用2(一个))。吸光度保持常数约0.008到6日分数获得列挤满了PVPP的0.9 g。增加的红茶提取物在治疗后观察TPC PVPP的第六部分采用0.3 g,反映出绑定多酚的能力已经超过了。PVPP列挤满了0.7 g为0.3 g显示类似的结果。比较不同数量的所有分数的吸光度值,进行了进一步的实验与第三部分收集了PVPP的0.9 g。没食子酸、儿茶素、香兰素的标准,和新鲜的茶叶受到多酚清除进一步验证再现性。无酚类化合物也观察到用新鲜茶冲PVPPT样本(图和标准2 (b))除了红茶。去除多酚后获得的值小于fc的分光光度计测定的灵敏度极限证明茶多酚的缺失。结果是可再生的,独立于茶提取物从不同的来源获得或标准酚类化合物。PVPPT标准获得的紫外吸光度或新鲜茶叶提取物在280 nm进一步证明吸附浓度达到100 100%μ克/毫升的没食子酸、儿茶素和香兰素和冲洗(图1毫克/毫升的茶2 (c)),这表明高绑定能力为酚类化合物。对TPC fc试验显示0.51 200的浓度的吸光度μ克/毫升新鲜茶冲提取相比,平均0.008相同的吸光度PVVP的第三部分0.9 g。

图3显示的标准化合物的高效液相色谱色谱茶儿茶素没食子酸、咖啡因(图3(一个)提取(图),茶3 (b)提取(图),PVPPT茶3 (c))。没有峰值出现在色谱相关PVPPT儿茶素,确认没有滤液中的儿茶素。然而,咖啡因,甲基黄嘌呤,检测滤液的PVPPT茶提取物(图3 (c))。此外高效液相色谱色谱图没有显示中存在酚标准PVPPT样品(图4)。

百分比DPPH清除能力标准的使用和新鲜的茶冲提取前后PVPP治疗是描绘在图5。结果表明,DPPH自由基清除活性的比例非常高EGCG, GA,茶提取物浓度依赖方式(数字5(一个),5 (b),5 (d))。百分比DPPH清除活动是可以忽略不计的标准和茶提取物与PVPPT样品除了香兰素没有表现出对DPPH抗氧化活性。欧共体₅₀EGCG和没食子酸值分别为3.6和2.4μ分别g / mL。本研究进一步表明,香兰素是酚醛并没有显示出较高的抗氧化能力与GA相比,EGCG(图5 (c))。欧共体₅₀新鲜茶冲提取是15.5μ克/毫升的干重。

上面描述的技术是应用在我们的实验室将从茶多酚产品和药用植物广泛的实验来评估生物活性。

4所示。结论

Folin-Ciocalteu测定总多酚,高效液相色谱的结果,和吸光度值在280 nm证明没有的多酚类化合物存在于PVPP滤液处理标准的酚类化合物或茶提取物。本文中描述的萃取技术可以应用于有效地消除多酚。此外,材料便宜,没有使用昂贵的附件。但是应该注意,PVPP的数量取决于使用的内容多酚测试样品和之前的实验中应通过改变PVPP的数量。

缩写

PVPP:	Polyvinylpolypyrrolidone
电子商务:	表儿茶素
EGCG:	(−)儿茶素没食子酸盐
DPPH:	1,1 - diphenyl-2-picrylhydrazyl
PVPPT:	PVPP治疗。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Preethi Soysa设计研究,分析结果,并编辑了手稿。Imali Ranatunge执行新鲜茶冲连同标准的高效液相色谱分析酚类化合物治疗前后和评估他们的抗氧化活性。Subshini Adikary优化方法从茶叶中提取多酚清除。Chamira Dilanka费尔南多和Piumi Dasanayake进行了高效液相色谱与茶提取工作。所有作者写的手稿。

确认

作者承认Dananjaya佩雷拉先生对他的支持。

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